1、藥物分析,主講：胡承波 MobileE-mail: 重慶文理學(xué)院材料與化工學(xué)院化工制藥系,第十章 巴比妥及苯并二氮雜卓類鎮(zhèn)靜催眠藥物的分析,本 章 主 要 內(nèi) 容,第一節(jié) 巴比妥類藥物的分析 第二節(jié) 苯并二氮雜卓類的分析,第十章 巴比妥及苯并二氮雜卓類鎮(zhèn)靜催眠藥物的分析,第十章 巴比妥及苯并二氮雜卓類鎮(zhèn)靜催眠藥物的分析,學(xué) 習(xí) 要 求 一、掌握巴比妥及苯并二氮雜卓類鎮(zhèn)靜催眠藥及主要的理化性質(zhì)；鑒別試驗(yàn)及含量測(cè)定的原理。 二、熟悉 本類藥物鑒別試驗(yàn)及含量測(cè)定的常用方法，特殊雜質(zhì)與檢查方法。,第十章 巴比妥及苯并二氮雜卓類鎮(zhèn)靜催眠藥物的分析,巴比妥及苯并二氮雜卓類藥物均為

2、臨床上廣泛應(yīng)用的鎮(zhèn)靜催眠藥。 第一節(jié) 巴比妥類藥物的分析 一、巴比妥類藥物的結(jié)構(gòu)與性質(zhì) 巴比妥類藥物均為巴比妥酸的衍生物，為環(huán)狀酰脲類鎮(zhèn)靜催眠藥，結(jié)構(gòu)通式如下：,環(huán)狀丙二酰脲類化合物：,第十章 巴比妥及苯并二氮雜卓類鎮(zhèn)靜催眠藥物的分析,本類藥物的結(jié)構(gòu)可大致分為兩個(gè)部分： 1. 環(huán)狀丙二酰脲、1,3二酰亞胺基團(tuán) 決定巴比妥類藥物的特性。 2. 取代基部分 區(qū)別各種巴比妥類藥物。 巴比妥類藥物是環(huán)狀酰脲類的鎮(zhèn)靜催眠藥； 巴比妥類藥物劑量由小到大，中樞抑制作用相繼表現(xiàn)為 鎮(zhèn)靜、催眠、抗驚厥和麻醉作用； 其中苯巴比妥還具有抗癲癇的作用。,第十章 巴比妥及苯并二氮雜卓類鎮(zhèn)靜催眠藥物的分析,典型藥物,(P

3、henylbarbital),(barbital),第十章 巴比妥及苯并二氮雜卓類鎮(zhèn)靜催眠藥物的分析,(Secobarbital),戊巴比妥,(Pentobarbital),第十章 巴比妥及苯并二氮雜卓類鎮(zhèn)靜催眠藥物的分析,第十章 巴比妥及苯并二氮雜卓類鎮(zhèn)靜催眠藥物的分析,(二)主要性質(zhì) 性狀白色結(jié)晶或結(jié)晶性粉末。 熔點(diǎn)具有一定的熔點(diǎn)。 溶解度微溶或極微溶于水，易溶于乙醇等有機(jī)溶劑， 鈉鹽易溶于水，難溶于有機(jī)溶劑。 穩(wěn)定性在空氣中穩(wěn)定，一般加熱易升華。六元環(huán)結(jié)構(gòu)比較穩(wěn)定，遇酸、氧化劑、還原劑時(shí)，環(huán)一般不會(huì)斷裂，與堿液共沸時(shí)則水解開環(huán)，并產(chǎn)生氨氣。,第十章 巴比妥及苯并二氮雜卓類鎮(zhèn)靜催眠藥物的分

4、析,1、弱酸性 該類藥物的母核結(jié)構(gòu)環(huán)狀結(jié)構(gòu)中含有1,3-二酰亞胺基團(tuán)，可發(fā)生酮式-烯醇式互變異構(gòu)，在水溶液中發(fā)生二級(jí)電離。,一 級(jí) 電 離,二級(jí)電離,烯醇互變,第十章 巴比妥及苯并二氮雜卓類鎮(zhèn)靜催眠藥物的分析,由于該類藥物具有弱酸性(pKa:7.38.4) ，可與強(qiáng)堿反應(yīng)生成水溶性的鈉鹽。反之，鈉鹽加酸后成游離的巴比妥類藥物，可提取分離出來。,第十章 巴比妥及苯并二氮雜卓類鎮(zhèn)靜催眠藥物的分析,2.水解反應(yīng),異戊巴比妥,巴比妥,第十章 巴比妥及苯并二氮雜卓類鎮(zhèn)靜催眠藥物的分析,巴比妥鈉注射液不能預(yù)先配制進(jìn)行加熱滅菌，須制成粉針劑，臨用時(shí)溶解。,苯巴比妥鈉的水解,第十章 巴比妥及苯并二氮雜卓類鎮(zhèn)靜

5、催眠藥物的分析,3.與金屬離子反應(yīng) 由于含有丙二酰脲或酰亞胺基團(tuán)，在核實(shí)的pH值溶液中，可與銀、銅、鈷、汞等離子反應(yīng)顯色或產(chǎn)生有色沉淀，可用于本類藥物的鑒別和含量測(cè)定。,a.與銀鹽的反應(yīng),第十章 巴比妥及苯并二氮雜卓類鎮(zhèn)靜催眠藥物的分析,b.與銅鹽的反應(yīng)：,巴比妥類 銅吡啶,顯色,巴比妥類紫色或紫色沉淀,硫巴比妥類綠色,第十章 巴比妥及苯并二氮雜卓類鎮(zhèn)靜催眠藥物的分析,本類藥物與銅吡啶試液的反應(yīng)機(jī)制為：,第十章 巴比妥及苯并二氮雜卓類鎮(zhèn)靜催眠藥物的分析,c.與鈷鹽的反應(yīng),Co(NO3)2、CoO、Co(Ac)2,異丙胺,無水甲醇或乙醇,第十章 巴比妥及苯并二氮雜卓類鎮(zhèn)靜催眠藥物的分析,d.與汞

6、鹽的反應(yīng) 巴比妥類藥物+汞鹽白色（可溶于氨試液）,第十章 巴比妥及苯并二氮雜卓類鎮(zhèn)靜催眠藥物的分析,4.與香草醛(Vanillin)的反應(yīng) 丙二酰脲中的氫比較活潑，與香草醛的濃硫酸作用下發(fā)生縮合反應(yīng)，生成有色的產(chǎn)物。,戊巴比妥鑒別： 取戊巴比妥10mg，加香草醛約10mg和硫酸2ml，混合后在水浴上加熱2min，顯棕紅色。放冷，小心加入乙醇5ml，即顯紫色并變成藍(lán)色。,有色物質(zhì),香草醛,巴比妥類藥物,濃硫酸,+,第十章 巴比妥及苯并二氮雜卓類鎮(zhèn)靜催眠藥物的分析,5.紫外吸收光譜特征,240nm,255nm,A.H2SO4液(0.05mol/L,未電離) B.pH9.9緩沖液(一級(jí)電離) C.p

7、H13NaOH液(1mol/L,二級(jí)電離),1,5,5-三取代巴比妥類藥物不存在二級(jí)電離，最大吸收波長(zhǎng)不變。,5,5-二取代和1,5,5-三取代巴比妥,第十章 巴比妥及苯并二氮雜卓類鎮(zhèn)靜催眠藥物的分析,A.HCl液(0.1mol/L)B.NaOH液(0.1mol/L),硫代巴比妥的紫外吸收光譜,第十章 巴比妥及苯并二氮雜卓類鎮(zhèn)靜催眠藥物的分析,6.薄層色譜行為特征 供試品主斑點(diǎn)的大小與對(duì)照品溶液斑點(diǎn)進(jìn)行比較。 7.顯微結(jié)晶鑒別,藥物本身晶形,反應(yīng)產(chǎn)物晶形,第十章 巴比妥及苯并二氮雜卓類鎮(zhèn)靜催眠藥物的分析,二、鑒別試驗(yàn) (一)丙二酰脲類的鑒別試驗(yàn) 該反應(yīng)為巴比妥類藥物母核的反應(yīng)，是本類藥物的共性

8、?？勺鳛樵擃愃幬锏囊话汨b別項(xiàng)。 1、銀鹽反應(yīng) 取供試品約0.1g，加碳酸鈉試液1ml與水10ml，振搖2min，濾過，濾液中逐滴加入硝酸銀試液，即生成白色沉淀，振搖，沉淀即溶解；繼續(xù)滴加過量的硝酸銀試液，沉淀不再溶解。 2、銅鹽反應(yīng) 取供試品約50mg，加吡啶溶液(110)5 ml，溶解后，加銅吡啶試液1ml，即顯紫色或生成紫色沉淀。,第十章 巴比妥及苯并二氮雜卓類鎮(zhèn)靜催眠藥物的分析,(二)特征基團(tuán)反應(yīng) 1、利用硫元素的鑒別試驗(yàn) 如硫代巴比妥類的鑒別,硫代巴比妥類與巴比妥類的區(qū)別,第十章 巴比妥及苯并二氮雜卓類鎮(zhèn)靜催眠藥物的分析,2、利用不飽和取代基的鑒別試驗(yàn) 如含有不飽和取代基的司可巴比妥鈉

9、的鑒別試驗(yàn)。,I2,褪色,Br2,KMnO4,第十章 巴比妥及苯并二氮雜卓類鎮(zhèn)靜催眠藥物的分析,3、利用芳香取代基的鑒別試驗(yàn) 具有芳香取代基的巴比妥類藥物，如苯巴比妥及其鈉鹽的鑒別： a.硝化反應(yīng),苯巴比妥與NaNO2-H2SO4反應(yīng)生成橙黃色橙紅色,區(qū)分苯巴比妥與不含芳環(huán)取代的巴比妥類藥物。,b.硫酸-亞硝酸鈉反應(yīng),第十章 巴比妥及苯并二氮雜卓類鎮(zhèn)靜催眠藥物的分析,(三)特征熔點(diǎn)進(jìn)行鑒別試驗(yàn) 如司可巴比妥鈉的熔點(diǎn)為97；苯巴比妥鈉的熔點(diǎn)為174-178 . (四)吸收光譜特征 藥物與標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行比較。,第十章 巴比妥及苯并二氮雜卓類鎮(zhèn)靜催眠藥物的分析,三、特殊雜質(zhì)檢查 (一)苯巴比妥的特殊雜質(zhì)

10、檢查 苯巴比妥的合成工藝：,第十章 巴比妥及苯并二氮雜卓類鎮(zhèn)靜催眠藥物的分析,第十章 巴比妥及苯并二氮雜卓類鎮(zhèn)靜催眠藥物的分析,1.酸度的檢查,中間體乙?；煌耆珪r(shí)，與尿素縮合產(chǎn)生的雜質(zhì),苯基丙二酰脲,酸性較強(qiáng),檢查方法 取本品0.20g，加水10ml，煮沸攪拌1min，放冷，濾過后，取濾液5ml，加甲基橙指示液1滴，不得顯紅色。,第十章 巴比妥及苯并二氮雜卓類鎮(zhèn)靜催眠藥物的分析,2.乙醇溶液澄清度 檢查中間體I雜質(zhì)的量，利用其在乙醇中溶解度小的性質(zhì)進(jìn)行檢查。 方法：取本品1.0g，加乙醇5ml，加熱回流3min，溶液應(yīng)澄清。,第十章 巴比妥及苯并二氮雜卓類鎮(zhèn)靜催眠藥物的分析,3.中性或堿性物

11、質(zhì) 主要指中間體I的副產(chǎn)物： 2-苯基丁酰胺（脲）或分解產(chǎn)物等雜質(zhì)。這些雜質(zhì)不溶于NaOH 試液而溶于乙醚。 而苯巴比妥具有酸性，溶于氫氧化鈉溶液。 提取重量法測(cè)定雜質(zhì)含量：,第十章 巴比妥及苯并二氮雜卓類鎮(zhèn)靜催眠藥物的分析,四、含量測(cè)定 銀量法 溴量法 巴比妥類藥物的含 酸堿滴定法 量測(cè)定方法 紫外分光光度 提取重量法 HPLC法、GC法,第十章 巴比妥及苯并二氮雜卓類鎮(zhèn)靜催眠藥物的分析,（一）銀量法 基于巴比妥類藥物在合適的堿性溶液中，可與銀離子定量成鹽，可采用銀量法測(cè)定本類藥物及其制劑的含量。如苯巴比妥及其鈉鹽、異戊巴比妥及其鈉鹽以及它們的制劑，中國(guó)藥典均采用銀量法測(cè)定其含量。 優(yōu)點(diǎn)：操

12、作簡(jiǎn)便，專屬性較強(qiáng)。其他的雜質(zhì)不與硝酸銀反應(yīng)。 缺點(diǎn)：受溫度影響較大；接近滴定終點(diǎn)時(shí)反應(yīng)較慢。 滴定終點(diǎn)以溶液出現(xiàn)渾濁為終點(diǎn)指示難以觀察。,為了克服這些缺點(diǎn)： 溶劑系統(tǒng)：甲醇3無水碳酸鈉 終點(diǎn)指示：電位法指示（Ag玻璃電極系統(tǒng)）,第十章 巴比妥及苯并二氮雜卓類鎮(zhèn)靜催眠藥物的分析,測(cè)定方法與計(jì)算 例如:異戊巴比妥及其鈉鹽的測(cè)定： 取本品約0.2g，加甲醇40ml使溶解，新鮮配制的3%無水碳酸鈉溶液15ml，照電位法，用硝酸銀滴定液（0.1mol/L）滴定，即得。每1ml硝酸銀滴定液（0.1mol/L）相當(dāng)于22.63mg的C11H18N2O3（或24.83mg的C11H17N2NaO3）。 原料

13、藥：直接滴定法（容量分析法）,第十章 巴比妥及苯并二氮雜卓類鎮(zhèn)靜催眠藥物的分析,注意事項(xiàng) （1）無水碳酸鈉應(yīng)新鮮配制 （2）硝酸銀滴定液應(yīng)新鮮配制,第十章 巴比妥及苯并二氮雜卓類鎮(zhèn)靜催眠藥物的分析,（二）溴量法 凡在5位取代基含有不飽和鍵的巴比妥類藥物，其不飽和鍵能與溴定量地發(fā)生加成反應(yīng)，故可采用溴量法測(cè)定其含量。中國(guó)藥典收載的司可巴比妥鈉采用本法測(cè)定。其測(cè)定原理可用下列反應(yīng)式表示：,（定量過量）,Br2 + 2KI 2KBr + I2,（剩余）,I2 + 2Na2S2O3 2NaI + Na2S4O6,第十章 巴比妥及苯并二氮雜卓類鎮(zhèn)靜催眠藥物的分析,司可巴比妥鈉測(cè)定 取本品約0.1g，精密

14、稱定，置250ml碘瓶中，加水10ml，振搖使溶解，精密加溴滴定液（0.05mol/L）25ml，再加鹽酸5ml，立即密塞并振搖1min，在暗處?kù)o置15min后，注意微開瓶塞，加碘化鉀試液10ml，立即密塞，搖勻后，用硫代硫酸鈉滴定液（0.1mol/L）滴定，至近終點(diǎn)時(shí)，加淀粉指示液，繼續(xù)滴定至藍(lán)色消失，并將滴定結(jié)果用空白試驗(yàn)校正。每1ml溴滴定液（0.05mo1/L）相當(dāng)于13.01mg的C12H17N2NaO3。,第十章 巴比妥及苯并二氮雜卓類鎮(zhèn)靜催眠藥物的分析,(三) 酸堿滴定法 巴比妥類藥物呈弱酸性，可作為一元酸以標(biāo)準(zhǔn)堿液直接滴定，或在非水溶液中用強(qiáng)堿溶液直接滴定。常用的方法如下： 1

15、. 在水乙醇混合溶劑中滴定 基于本類藥物在水中的溶解度較小，滴定時(shí)多在醇溶液或含水的醇溶液中進(jìn)行，這樣可避免反應(yīng)中產(chǎn)生的弱酸鹽易于水解而影響滴定終點(diǎn)。常以麝香草酚酞為指示劑，滴定至淡藍(lán)色為終點(diǎn)。,第十章 巴比妥及苯并二氮雜卓類鎮(zhèn)靜催眠藥物的分析,異戊巴比妥,水醇,溶解,麝香草酚酞,NaOH,淡藍(lán)色,第十章 巴比妥及苯并二氮雜卓類鎮(zhèn)靜催眠藥物的分析,如異戊巴比妥醇溶液的滴定測(cè)定法： 取本品0.5g,精密稱定，加乙醇20ml溶解后，加麝香草酚酞指示劑8滴，用氫氧化鈉滴定液（0.1mol/L ）滴定，并將滴定結(jié)果用空白試驗(yàn)校正，即得。每1ml氫氧化鈉滴定液（0.1mol/L）相當(dāng)于22.63mg的C

16、11H18N2O3。,終點(diǎn)指示：電位法,原因：操作過程中易于吸收二氧化碳，而使得終點(diǎn)的 淡藍(lán)色褪去，采用空白對(duì)照也難以得到滿意的效果。,第十章 巴比妥及苯并二氮雜卓類鎮(zhèn)靜催眠藥物的分析,2. 非水滴定法 巴比妥類藥物在非水溶液中的酸性增強(qiáng)，用堿性標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定時(shí)，終點(diǎn)較為明顯，可獲得比較滿意的結(jié)果。 測(cè)定時(shí)常用的有機(jī)溶劑有二甲基甲酰胺、甲醇、氯仿、丙酮、無水乙醇、苯、吡啶、甲醇-苯（15:85）、乙醇-氯仿（1:10）等；常用的滴定劑有甲醇鉀（鈉）的甲醇（或乙醇）溶液、氫氧化四丁基銨的氯苯溶液等； 常用的指示劑為麝香草酚藍(lán)等，也可用玻璃-甘汞電極系統(tǒng)，以電位法指示終點(diǎn)。 如巴比妥、司可巴比妥以及

17、戊巴比妥的非水溶液的含量測(cè)定。（P275-286）,第十章 巴比妥及苯并二氮雜卓類鎮(zhèn)靜催眠藥物的分析,（四）紫外分光光度法 巴比妥類藥物在酸性介質(zhì)中幾乎不電離，無明顯的紫外吸收。 但在堿性介質(zhì)中電離為具有紫外吸收特征的結(jié)構(gòu)，因而可采用紫外分光光度法測(cè)定其含量。 本法靈敏度高，專屬性強(qiáng)，廣泛應(yīng)用于巴比妥類藥物的原料及其制劑的含量測(cè)定，以及固體制劑的溶出度和含量均勻度檢查，也常用于體內(nèi)巴比妥類藥物的檢測(cè)。,第十章 巴比妥及苯并二氮雜卓類鎮(zhèn)靜催眠藥物的分析,藥名,max(nm),E,巴比妥,240,538,苯巴比妥,253,320,戊巴比妥,240,310,異戊巴比妥,238,440,司可巴比妥,2

18、40,330,硫噴妥,305,930,NaOH,溶液,(0.1mol/L),溶劑,pH9.4,硼酸鹽緩沖液,pH9.4,硼酸鹽緩沖液,第十章 巴比妥及苯并二氮雜卓類鎮(zhèn)靜催眠藥物的分析,1. 直接測(cè)定的紫外分光光度法 本法是將供試品溶解后，根據(jù)溶液的pH，在最大吸收波長(zhǎng)（max）處，直接測(cè)定對(duì)照品溶液和供試品溶液的吸收度，再計(jì)算藥物的含量。 單組分定量的方法： 1）. 吸收系數(shù)法（絕對(duì)法）,第十章 巴比妥及苯并二氮雜卓類鎮(zhèn)靜催眠藥物的分析,2）. 標(biāo)準(zhǔn)曲線法 3）. 對(duì)照法,第十章 巴比妥及苯并二氮雜卓類鎮(zhèn)靜催眠藥物的分析,2. 提取分離后的紫外分光光度法 提取分離的主要目的是消除干擾物質(zhì)對(duì)測(cè)定的影響。根據(jù)巴比妥類藥物具有弱酸性，在氯