1、培養(yǎng)基模擬 灌裝試驗(yàn),1,無菌的概念,什么是無菌? 理論上：無菌沒有任何活的微生物 實(shí)際上：我們無法證明產(chǎn)品中沒有活微生物存在,2,無菌的概念,“無菌”的實(shí)際定義: 經(jīng)生長和繁殖證明無生物 實(shí)際為概率上的無菌，普遍接受的標(biāo)準(zhǔn)是： 最終滅菌無菌制劑：微生物存活的概率達(dá)到10-6，即保證一百萬個(gè)已滅菌物品或制劑中存活的微生物數(shù)低于一。 非最終滅菌無菌制劑：目標(biāo)是零生長，但在污染率低于0.1%，可信度在95%時(shí)是可以接受的。,3,什么是污染率低于0.1%？,計(jì)算公式：實(shí)際污染率 = (95%置信限值)/(灌封容器數(shù)) 100% 培養(yǎng)基灌裝試驗(yàn)的批量與判斷合格的標(biāo)準(zhǔn),4,無菌檢查的局限性,試驗(yàn)?zāi)康模翰?/p>

2、合格的可能性(%) 試驗(yàn)批量：60,000支 試驗(yàn)方法：按無菌測試方法,5,風(fēng)險(xiǎn)：結(jié)合了發(fā)生危害的可能性和危害的嚴(yán)重性,嚴(yán)重性,可能性,高,中,低,探測能力,評估風(fēng)險(xiǎn)的參數(shù),6,風(fēng)險(xiǎn)評估,7,非最終滅菌制劑的風(fēng)險(xiǎn)大不大？,8,我們?nèi)绾巫龅缴鲜龅臒o菌保障水平 無菌生產(chǎn)工藝,9,什么是無菌生產(chǎn)工藝？,無菌生產(chǎn)工藝 產(chǎn)品、容器和密封件分別進(jìn)行滅菌，然后進(jìn)行灌封 在極高潔凈環(huán)境下進(jìn)行灌裝和密封 產(chǎn)品在最終容器中不再做進(jìn)一步的滅菌處理 對各個(gè)組成部分的滅菌工藝需要進(jìn)行嚴(yán)格驗(yàn)證和監(jiān)控 在灌封前和灌封過程中的操作會帶來污染風(fēng)險(xiǎn),10,什么是無菌生產(chǎn)工藝？,生產(chǎn)環(huán)境 潔凈區(qū) 人員 藥液制備和過濾 藥液除菌過濾

3、前的微生物負(fù)荷 過濾器完整性測試和驗(yàn)證 生產(chǎn)設(shè)備和內(nèi)包裝材料的準(zhǔn)備和滅菌 灌裝過程 轉(zhuǎn)運(yùn)凍干軋蓋 無菌工藝過程驗(yàn)證,11,什么是無菌生產(chǎn)工藝？,Personnel,Environment,工藝驗(yàn)證,人員,原料,環(huán)境,無菌檢驗(yàn),12,作業(yè)環(huán)節(jié)與風(fēng)險(xiǎn),13,無菌操作最重要的部分,個(gè)人認(rèn)為是 所有操作人員的無菌保障意識,14,為什么需要進(jìn)行培養(yǎng)基灌封試驗(yàn)？,無菌生產(chǎn)工藝是制藥領(lǐng)域中最難的工藝之一，確保產(chǎn)品無菌是該工藝最大的難點(diǎn)。 減少無菌工藝藥品污染風(fēng)險(xiǎn)的兩項(xiàng)重要措施。 .人員培訓(xùn) .無菌工藝驗(yàn)證,15,定義,使用培養(yǎng)基模擬藥品進(jìn)行無菌灌封，對無菌工藝進(jìn)行驗(yàn)證。又稱為“工藝模擬試驗(yàn)”. 目的 證明生

4、產(chǎn)線采用無菌工藝生產(chǎn)無菌產(chǎn)品的能力 對人員進(jìn)行資格確認(rèn) 符合GMP的要求,16,試驗(yàn)前的準(zhǔn)備工作,設(shè)備確認(rèn) 通風(fēng)系統(tǒng)（HVAC）、水系統(tǒng)的驗(yàn)證 設(shè)備的清洗和消毒CIP,SIP 滅菌工藝驗(yàn)證 濕熱、干熱滅菌工藝 除菌過濾的驗(yàn)證 空氣過濾器的完好性檢測 容器/膠塞密閉性測試 人員培訓(xùn) 潔凈室環(huán)境達(dá)到設(shè)計(jì)要求,17,培養(yǎng)基灌裝的原則,通常情況下，應(yīng)該包括產(chǎn)品實(shí)際操作過程中可能發(fā)生的“最差條件” 必須考慮可能采取那些干預(yù)措施 ? 最差條件 高于或低于正常范圍的條件限度，與正常生產(chǎn)條件相比最有可能造成工藝或生產(chǎn)失敗的條件。 注意 如果某些做法會帶來污染的風(fēng)險(xiǎn)，則不允許用培養(yǎng)基灌封的結(jié)果為它的不合理的進(jìn)行

5、辯護(hù)。,18,培養(yǎng)基灌裝方案,需要考慮的關(guān)鍵因素 : 起始步驟 試驗(yàn)的次數(shù)和頻率 培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件 灌裝數(shù)量 容器體積 灌裝體積 灌裝速度,19,培養(yǎng)基灌裝方案,灌裝過程的持續(xù)時(shí)間 人員和工作班次 環(huán)境監(jiān)測措施 干預(yù)措施 容器的檢查 培養(yǎng)方法 可接受標(biāo)準(zhǔn) 污染調(diào)查,20,關(guān)鍵因素一:起始步驟,新版GMP第四十八條：。應(yīng)盡可能模擬常規(guī)的無菌生產(chǎn)工藝，并包括所有對結(jié)果有影響的關(guān)鍵生產(chǎn)工序。 1、從配制開始：凍干制劑從液體配料開始，需要更多量的培養(yǎng)基，考察的最全面。（如工藝要求配好的液體需要在配制罐中蒸汽滅菌的應(yīng)從配制開始） 2、從除菌過濾前開始：考察的內(nèi)容包括除菌過濾系統(tǒng)，考察較全面，培養(yǎng)基不需要

6、滅菌，需要考慮生物負(fù)荷。 3、從除菌過濾后面開始：只考察灌封等操作過程，培養(yǎng)基需要事先滅菌。,21,關(guān)鍵因素二: 試驗(yàn)的次數(shù)和頻率,培養(yǎng)基模擬試驗(yàn)的初始驗(yàn)證，至少需要成功的連續(xù)進(jìn)行 3 次獨(dú)立的模擬試驗(yàn)（建議在不同的工作日進(jìn)行試驗(yàn)）。 首次驗(yàn)證后，培養(yǎng)基模擬試驗(yàn)通常每年進(jìn)行2次，每次進(jìn)行1批即可。 當(dāng)生產(chǎn)線發(fā)生變更，并且經(jīng)過評估可能對無菌生產(chǎn)工藝有潛在危險(xiǎn)時(shí)，應(yīng)當(dāng)進(jìn)行額外的培養(yǎng)基灌裝試驗(yàn)。,22,關(guān)鍵因素三: 培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件 (1/3),培養(yǎng)基必須適應(yīng)廣譜微生物的生長，包括需氧菌、酵母菌和霉菌（非選擇性培養(yǎng)基）。 較好的澄明度，較小的粘度，易于除菌過濾。 推薦使用大豆消化酪素瓊脂培養(yǎng)基(SC

7、D) ，以及大豆胰蛋白胨肉湯(TSB)。 如果產(chǎn)品在缺氧條件、通常在氮?dú)獗Ｗo(hù)下灌裝時(shí)，或在環(huán)境中分離出厭氧菌時(shí)，可能需要使用厭氧培養(yǎng)基:液體硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基(FTM)。,23,關(guān)鍵因素三: 培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件 (2/3),培養(yǎng)基必須做促生長試驗(yàn)，按藥典方法（10版藥典新規(guī)定）進(jìn)行評價(jià)。有條件的推薦使用12種最常見的環(huán)境分離菌。 促生長試驗(yàn)可以同步或14天培養(yǎng)后進(jìn)行。用于促生長試驗(yàn)的培養(yǎng)基培養(yǎng)前需經(jīng)過同樣的工藝步驟（例如清洗、滅菌、充氮、灌裝、凍干等） 通常情況，在培養(yǎng)結(jié)束后，一些玻璃瓶（從生產(chǎn)開始、中間、結(jié)束時(shí)取樣）進(jìn)行微生物接種。,24,關(guān)鍵因素三: 培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件 (3/3),培養(yǎng)溫度 全

8、部樣品應(yīng)在20-35(2.5)下培養(yǎng)14天。通常在 20-25下 培養(yǎng) 7 天，然后在30-35下培養(yǎng) 7 天；或者在30-35培養(yǎng) 7 天后，再轉(zhuǎn)移到 20-25培養(yǎng) 7 天。 原則：選擇的溫度適宜那些從環(huán)境中分離的微生物或生物負(fù)荷中的微生物的培養(yǎng)。 關(guān)于培養(yǎng)條件的選擇，補(bǔ)充一個(gè)沒有形成共識的建議，在培養(yǎng)過程的前半個(gè)周期，將所有產(chǎn)品進(jìn)行倒置后培養(yǎng)；然后在剩余時(shí)間內(nèi)，將產(chǎn)品恢復(fù)直立位置后進(jìn)行培養(yǎng)。,25,關(guān)鍵因素四: 灌裝數(shù)量,灌裝的數(shù)量應(yīng)該能夠真實(shí)的反應(yīng)批量；但允許根據(jù)需要，采取最低灌裝數(shù)量，前提是應(yīng)足以反應(yīng)操作員工疲勞時(shí)對產(chǎn)品質(zhì)量潛在的影響 ，并且足以體現(xiàn)了盡可能發(fā)生的干預(yù)措施。 一般生產(chǎn)

9、量小于5000，培養(yǎng)基灌裝數(shù)量應(yīng)等同批量；生產(chǎn)量大于5000時(shí)，培養(yǎng)基最小灌裝數(shù)量不少于5000。 一些法規(guī)中建議應(yīng)該根據(jù)批量確定灌裝的數(shù)量。,26,關(guān)鍵因素五: 容器體積(1/2),應(yīng)該考慮到灌裝容器的極端尺寸。 最大的容器（通常由于充填體積較大而導(dǎo)致最小的充填速度）通常開口較大，所以從環(huán)境中微生物侵入的潛在風(fēng)險(xiǎn)是最大的。 最小的容器（通常由于充填體積較小而導(dǎo)致最大的充填速度）體現(xiàn)了最大的操作難度；小的容器更容易破碎，穩(wěn)定性差，在設(shè)備中更容易破裂或堵塞。,27,關(guān)鍵因素五: 容器體積(2/2),在最初的驗(yàn)證中，可以二次選用最大的容器（配合一次最慢、一次最快的灌裝速度），第三次選用最小的容器（

10、配合最快的灌裝速度）。 在每年2次的再驗(yàn)證中，用其它規(guī)格尺寸的容器輪轉(zhuǎn)試驗(yàn)。 不能使用琥珀色的容器，而應(yīng)該使用透明的容器，保證可以目視檢測到微生物的生長。,28,關(guān)鍵因素六: 灌裝體積,培養(yǎng)基灌裝體積不需要與現(xiàn)實(shí)中常規(guī)的灌裝體積一致。（可能因?yàn)槟M裝量調(diào)節(jié)過程，使有包含不一致的培養(yǎng)基裝量） 應(yīng)確定足夠的灌裝體積，保證可以充分接觸到容器和密封部位的表面(當(dāng)它倒置和旋轉(zhuǎn)時(shí))，并且足以目視檢測到微生物在培養(yǎng)后的生長情況。 較小的容器不能灌裝的太滿，因?yàn)槿萜魃喜康目臻g中應(yīng)保持足夠的空氣，以支持需氧微生物的生長（通常應(yīng)該保留25%的空間）。,29,關(guān)鍵因素七: 灌裝速度,培養(yǎng)基灌裝的速度，應(yīng)符合實(shí)際生產(chǎn)

11、的灌裝速度范圍。如果超過了限度，應(yīng)該進(jìn)行評估。 每次模擬試驗(yàn)中確定的速度應(yīng)該是符合要求的。 較高的生產(chǎn)速度，可以適用于生產(chǎn)過程中經(jīng)常受到干擾或手工操作較多的生產(chǎn)工藝。 較低的生產(chǎn)速度，可以應(yīng)用于在無菌區(qū)域中無菌部件長時(shí)間暴露的生產(chǎn)工藝。 在灌裝生產(chǎn)線的起始驗(yàn)證中，一次可以選用最低速度，另外二次可以選用最高速度。 在生產(chǎn)線的每年2次的再驗(yàn)證中，模擬試驗(yàn)的速度應(yīng)該進(jìn)行變換。,30,關(guān)鍵因素八:灌裝的持續(xù)時(shí)間,通常情況，培養(yǎng)基灌裝的時(shí)間應(yīng)該足夠長，能夠包括所有的必需的干擾、生產(chǎn)中斷，包括正常的無菌操作如開始前的安裝、重量或體積的調(diào)整、改變設(shè)備或手動維修等，還包括更衣、暫停、換班等，持續(xù)時(shí)間還應(yīng)能反映

12、出潛在的人員疲勞。 對于非常大的批量或較長的生產(chǎn)過程，通常使用一些空白樣品（空的或者灌水）以維持模擬試驗(yàn)的動態(tài)環(huán)境。這些技術(shù)可以應(yīng)用于持續(xù)多個(gè)工作日的工藝驗(yàn)證，用于驗(yàn)證可以批準(zhǔn)的最長的生產(chǎn)周期。,31,關(guān)鍵因素九: 人員和工作班次,需要進(jìn)行無菌工藝操作的每個(gè)操作員工包括設(shè)備工程師和環(huán)境取樣人員應(yīng)該每年參加不少于一次成功的模擬試驗(yàn)。 僅僅參加（看）是不夠的，操作人員（包括設(shè)備安裝人員）必須執(zhí)行他們在正常生產(chǎn)中會進(jìn)行到的操作 。 應(yīng)該確定無菌操作間可以最多容納的操作人員數(shù)量（n+1）。 當(dāng)一個(gè)企業(yè)有多個(gè)班次工作時(shí)，第二個(gè)班次、第三個(gè)班次也應(yīng)該包括在培養(yǎng)基灌裝試驗(yàn)的計(jì)劃中。包括班次的更換、暫停和必要

13、的更衣。,32,關(guān)鍵因素十: 環(huán)境監(jiān)測措施,在培養(yǎng)灌裝過程中，微生物監(jiān)測（主動或被動的空氣采樣、設(shè)備表面、人員）以及懸浮粒子監(jiān)測應(yīng)該按照日常的操作程序進(jìn)行。包括間隔期間和不同的人員。 微生物監(jiān)測程序的詳細(xì)原則，包括取樣點(diǎn)的選擇、行動限和警戒線、方法學(xué)等可以參考PDA技術(shù)報(bào)告N0. 13。 工藝模擬實(shí)驗(yàn)中收集到的環(huán)境監(jiān)測數(shù)據(jù)有利于建立和支持正常無菌操作區(qū)域的環(huán)境監(jiān)測的行動限。,33,關(guān)鍵因素十一: 干預(yù)措施,干預(yù)措施應(yīng)該模擬實(shí)際運(yùn)行時(shí)可能發(fā)生的情況；培養(yǎng)基灌裝記錄中應(yīng)該記錄所有發(fā)生的干預(yù)措施，以及被移走產(chǎn)品的數(shù)量。 常規(guī)的干預(yù)措施：對于無菌生產(chǎn)線的安裝、拆卸和連接，如果已經(jīng)滅菌的部件脫離保護(hù)措施

14、而被安裝的話，是一個(gè)潛在危險(xiǎn)。因此，開始灌裝的容器更容易反映出無菌設(shè)備裝配的潛在問題（注：如果正常生產(chǎn)過程中開始會有部分產(chǎn)品丟棄的話，可以不進(jìn)入培養(yǎng)計(jì)數(shù)，但是也可以進(jìn)行培養(yǎng)，能提供額外的信息）。 其它的常規(guī)干預(yù)措施：膠塞供給， 移走掉落的玻璃瓶, 移走堵塞的膠塞，人員的停頓，換手套，環(huán)境的監(jiān)測。 非常規(guī)的干預(yù)措施（意外發(fā)生）：玻璃瓶破裂，灌裝針頭的更換或重新安裝，裝量調(diào)整的干預(yù)，傳感器故障，傳輸帶的調(diào)整等。,34,關(guān)鍵因素十二:容器的檢查,任何灌裝的產(chǎn)品都應(yīng)該在培養(yǎng)前進(jìn)行檢查，發(fā)現(xiàn)任何不合格品（如容器密封性存在問題或完整性不好）時(shí)，都應(yīng)該被剔除并記錄。（還包括檢查后被損壞的如向培養(yǎng)箱中轉(zhuǎn)移的過

15、程中） 模擬過程最好有全程錄像，瓶子或托盤應(yīng)編號，陽性樣品可追溯。每個(gè)瓶子都要目視檢查，陽性的樣品應(yīng)別標(biāo)記并移出培養(yǎng)箱。 破損的樣品不應(yīng)包括在對無菌工藝能力的評價(jià)中。但破損的來源應(yīng)被調(diào)查和糾正。,35,關(guān)鍵因素十三: 可接受標(biāo)準(zhǔn),新版GMP第四十八條：培養(yǎng)基模擬試驗(yàn)的目標(biāo)是不出現(xiàn)長菌，且遵循以下原則： 灌裝少于5000支時(shí)，不應(yīng)檢出污染品； 灌裝在5000至10000時(shí)： 有1支污染需進(jìn)行調(diào)查，并考慮重復(fù)培養(yǎng)基灌裝試驗(yàn) 2支污染需進(jìn)行調(diào)查，并可即視作再驗(yàn)證的理由 灌裝超過10000支時(shí)： 1支污染需進(jìn)行調(diào)查 2支污染需進(jìn)行調(diào)查，并可即視作再驗(yàn)證的理由 發(fā)生任何微生物污染時(shí)，均應(yīng)進(jìn)行調(diào)查。,36

16、,關(guān)鍵因素十四:污染調(diào)查（1/9）,調(diào)查的范圍應(yīng)包括 環(huán)境微生物監(jiān)測數(shù)據(jù)，空氣懸浮粒子監(jiān)測數(shù)據(jù) CIP設(shè)備，清潔、消毒程序的執(zhí)行情況 培養(yǎng)基、設(shè)備和零件的滅菌工藝，滅菌釜的校正情況 高效過濾器檢測(空氣懸浮粒子水平，過濾器檢漏，風(fēng)速測量，密封系統(tǒng)檢查，使用年限等) 除菌過濾器完好性 房間氣流形式與壓差 人員操作技術(shù)培訓(xùn)情況,37,關(guān)鍵因素十四:污染調(diào)查（2/9）,調(diào)查的范圍還應(yīng)包括 以往產(chǎn)品無菌檢查實(shí)驗(yàn)結(jié)果 人員衛(wèi)生狀況監(jiān)測數(shù)據(jù) 培養(yǎng)基灌裝實(shí)驗(yàn)中的干預(yù)方式分析 該區(qū)域近期是否有過維修活動，生產(chǎn)線的改造情況 該生產(chǎn)線培養(yǎng)基灌封實(shí)驗(yàn)歷史數(shù)據(jù) 已滅菌物品的儲存條件 培養(yǎng)基灌封過程中的異常事件 陽性污

17、染菌與環(huán)境監(jiān)測污染菌的鑒別,38,關(guān)鍵因素十四:污染調(diào)查（3/9）,調(diào)查結(jié)論與風(fēng)險(xiǎn)評估 一、培養(yǎng)基灌封實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效 暫停生產(chǎn)，直至確定污染來源并采取有效的糾偏措施。 再驗(yàn)證合格后，產(chǎn)品方可放行。 對培養(yǎng)基灌封試驗(yàn)后和此前所生產(chǎn)的產(chǎn)品，進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)評估，包括對已經(jīng)放行批次的影響 二、培養(yǎng)基灌封實(shí)驗(yàn)結(jié)果無效實(shí)施適當(dāng)?shù)募m偏措施和預(yù)防措施后重新進(jìn)行培養(yǎng)基灌封實(shí)驗(yàn) 條件1無菌灌裝區(qū)的物理?xiàng)l件不滿足要求 條件2人員未按照正常生產(chǎn)程序操作,39,關(guān)鍵因素十四:污染調(diào)查（4/9）,不管試驗(yàn)的數(shù)量，被污染的產(chǎn)品數(shù)量都應(yīng)該是零。 調(diào)查前的準(zhǔn)備工作：錄像資料、瓶子或托盤的編號等。 發(fā)生失敗 (污染)時(shí)，必須確定最根本的

18、原因，或者至少是最可能的原因。 如有能力應(yīng)對微生物進(jìn)行分離和鑒別（鑒定到種）。,40,關(guān)鍵因素十四:污染調(diào)查（5/9）,污染 率,灌裝過程(時(shí)間或灌裝量),在灌裝過程中污染率上升,這表明污染可能來源于液體培養(yǎng)基 (如與培養(yǎng)基貯罐非無菌連接，在循環(huán)管路中受到污染)。很重要的是，在灌裝結(jié)束后，保持培養(yǎng)基貯罐處于無菌狀態(tài)，當(dāng)?shù)鹊脚囵B(yǎng)基灌裝結(jié)束時(shí)，可以核實(shí)這樣的假設(shè)。,41,關(guān)鍵因素十四:污染調(diào)查（6/9）,污染率,灌裝過程(時(shí)間或灌裝量),在灌裝過程中污染率下降,這表明污染發(fā)生于生產(chǎn)設(shè)備中（ 膠塞容器/ 軌道, 計(jì)量泵 / 針頭)，在灌裝過程中污染被部分或全部“清洗掉”。,42,關(guān)鍵因素十四:污染調(diào)

19、查（7/9）,污染率,灌裝過程(時(shí)間或灌裝量),在灌裝過程中污染率出現(xiàn)尖峰,一個(gè)尖峰（在短時(shí)段的一些產(chǎn)品被污染）可能與在灌裝過程中不正確操作導(dǎo)致的關(guān)鍵失誤有關(guān)。 對于這個(gè)原因，很關(guān)鍵的是必須知道被污染產(chǎn)品灌裝的準(zhǔn)確時(shí)間，以及當(dāng)時(shí)實(shí)施的干預(yù)措施（灌裝操作過程的錄像是非常有用的）,43,關(guān)鍵因素十四:污染調(diào)查（8/9）,污染率,灌裝過程(時(shí)間或灌裝量),污染率出現(xiàn)尖峰后，呈上升趨勢,與前面的例子相同，但如果錯(cuò)誤的干預(yù)措施能夠影響到液體的管路/回路時(shí)（如培養(yǎng)基貯罐的變化，泵或針的替換）,44,關(guān)鍵因素十四:污染調(diào)查（9/9）,污染率,灌裝過程(時(shí)間或灌裝量),孤立事件(試驗(yàn)中少數(shù)污染),不幸的是，這

20、些現(xiàn)象是最普通的，也是最難調(diào)查的。如果這種現(xiàn)象在多次試驗(yàn)中反復(fù)出現(xiàn)，可能說明這個(gè)工藝存在“環(huán)境噪聲”，所以需要根本的措施（如 更衣/著裝、消毒劑和氣流模式的改變),45,凍干制劑對培養(yǎng)基灌封的要求,一般從藥液除菌過濾或滅菌開始，到完成無菌灌裝，進(jìn)行部分凍干程序，然后軋蓋。 培養(yǎng)基灌封凍干模擬步驟： 容器內(nèi)灌封好培養(yǎng)基，以半壓塞狀態(tài)裝入凍干機(jī) 凍干機(jī)內(nèi)部分抽真空，在室溫放置一定的時(shí)間，不得冷凍。 用無菌空氣破空（不使用惰性氣體，除非在日常監(jiān)測甚至產(chǎn)品中發(fā)現(xiàn)了厭氧菌時(shí)，可以使用惰性氣體和厭氧培養(yǎng)基），全壓塞，軋蓋。 注意，應(yīng)采用透明容器，如果所使用的容器透明度不高，應(yīng)將內(nèi)容物倒出進(jìn)行檢查。,46,

21、粉針劑對培養(yǎng)基灌封的要求（1/3）,第一種方法 在灌裝線上直接灌裝液體培養(yǎng)基，灌裝后壓塞-軋蓋或熔封。 優(yōu)點(diǎn)：不需要增加液體灌裝頭，不需要增加額外的對照培養(yǎng)基。 缺點(diǎn)：有些灌裝設(shè)備無法做到； 灌裝速度與實(shí)際不同。,47,粉針劑對培養(yǎng)基灌封的要求（2/3）,第二種方法 先粉末灌裝（干粉培養(yǎng)基或惰性粉末），然后在線或離線液體（注射用水或液體培養(yǎng)基）灌裝。（或者順序顛倒過來） 優(yōu)點(diǎn)：沒有 缺點(diǎn) ：額外的灌裝需驗(yàn)證和做一定數(shù)量的液體陰性對照 注：所用惰性劑、干粉培養(yǎng)基和注射用水需無菌。干粉培養(yǎng)基的流動性是的難問題。,48,粉針劑對培養(yǎng)基灌封的要求（3/3）,第三種方法 非無菌液體灌裝（注射用水或液體培養(yǎng)基） ，滅菌，在線的粉末灌裝（干粉培養(yǎng)基或惰性粉末）。 優(yōu)點(diǎn)：不受設(shè)備的限制 缺點(diǎn)：滅菌后敞口的瓶子的轉(zhuǎn)移存在被污染的風(fēng)險(xiǎn)；需做一定數(shù)量的液體陰性對照。 注：常用惰性粉末有聚乙二醇8000、羧甲基纖維素、乳糖。惰性粉末的抑菌性問題。,49,方案的執(zhí)行與記錄（1/2）,培養(yǎng)基灌封的日期和時(shí)間 使用的房間和設(shè)備 容器膠塞的型號和