1、飼料中的霉菌毒素,周勃 博士 香港英杰生命科技有限公司,什么是霉菌毒素？,霉菌毒素是由真菌( 霉菌) 產(chǎn)生的具有毒性的次級(jí)代謝產(chǎn)物。主要的產(chǎn)毒素霉菌為曲霉屬（Aspergillus）、鐮刀菌屬（Fusarium）和青霉菌屬（Penicillium） 已知的霉菌毒素有數(shù)百種，其分子量在200-500道爾頓，多數(shù)沒(méi)有得到充分研究。 霉菌毒素在動(dòng)物體內(nèi)可產(chǎn)生多種生理作用: 肝毒、 腎毒、 對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)的作用以及類(lèi)似雌激素效應(yīng)， 等等。,主要的霉菌毒素,黃曲霉毒素(aflatoxin) 玉米赤霉烯酮(zearalenone) 單端抱霉烯族毒素( trichothecenes ) 煙曲霉毒素(fumo

2、nisin) 赫曲毒素A (ochratoxin A) 麥角生物堿(ergotalkaloid),黃曲霉毒素 T-2毒素 赫曲毒素A,黃曲霉毒素的化學(xué)結(jié)構(gòu)式,黃曲霉毒素B1,黃曲霉毒素B2,黃曲霉毒素G1,黃曲霉毒素M1,黃曲霉毒素 G2,黃曲霉毒素M2,霉菌毒素的產(chǎn)生,在谷物收割前或貯存、運(yùn)輸、加工和飼喂過(guò)程中,霉菌都可在其中生長(zhǎng)并產(chǎn)生霉菌毒素。霉菌的生長(zhǎng)和霉菌毒素的產(chǎn)生與極端氣候造成的植物應(yīng)激有關(guān),還與蟲(chóng)害、不當(dāng)?shù)馁A存和不良的飼喂條件有關(guān)?？傊?環(huán)境條件,比如熱、水和蟲(chóng)害,都會(huì)造成植物應(yīng)激,使植物在農(nóng)田中易受到霉菌毒素的污染。 在收割后,溫度、含水量和昆蟲(chóng)活動(dòng)情況是影響霉菌毒素污染飼料和食

3、品的主要因素(Coulumbe , 1993) 。,植物應(yīng)激,霉菌毒素的產(chǎn)生,每年霉菌毒素的產(chǎn)生情況和濃度均不相同。 每年的氣候條件、植物的應(yīng)激情況均不相同。 預(yù)測(cè)田間玉米黃曲霉毒素濃度的數(shù)學(xué)模型就是以溫度、降水量和蟲(chóng)害為條件的（Dowd,2004),霉菌毒素的毒害作用,霉菌毒素對(duì)動(dòng)物造成的危害,霉菌毒素對(duì)飼料養(yǎng)分的破壞,菌可以使飼料產(chǎn)生有毒的代謝物，即霉菌毒素，改變飼料的營(yíng)養(yǎng)成分；降低動(dòng)物對(duì)養(yǎng)分的利用（下降10%）。 貯存期間發(fā)霉的玉米，其脂肪含量明顯減少，由3.8%降低為2.4%，胡蘿卜素含量由3.1mg/kg 降低為2.3mg/kg，VE含量由此22.1mg/kg降低為20.6mg/kg

4、。（Bartov等，1982）,霉菌毒素的特點(diǎn),隱蔽性 除了急性霉菌毒素感染，多數(shù)情況下屬于慢性霉菌毒素污染造成臨床癥狀。同時(shí)，由于污染濃度不高，檢測(cè)有難度。 復(fù)雜性 霉菌毒素具有相互協(xié)同作用。受霉菌毒素的自然污染的飼料，其毒性高于人工添加相同濃度霉菌毒素的制成的飼料。 發(fā)生霉菌毒素中毒的動(dòng)物并不常常呈現(xiàn)出典型癥狀，而是消化功能紊亂、采食量降低、健康程度下降、被毛粗亂、飼料效率降低、增重減緩，繁殖性能變差等非特異癥狀。 物種特異性 不同霉菌毒素對(duì)于不同動(dòng)物造成的危害不一樣。例如，豬對(duì)DON非常敏感（1ppm），但是18ppm的DON并不影響來(lái)航雞的增重。蛋雞對(duì)DON的耐受程度更高。,霉菌毒素

5、的協(xié)同效應(yīng),霉菌毒素 的協(xié)同效應(yīng),幾種霉菌毒素協(xié)同作用對(duì)動(dòng)物健康和生產(chǎn)性能的副作用比一種霉菌毒素單獨(dú)作用的副作用要大，即實(shí)際生產(chǎn)條件下引起動(dòng)物生產(chǎn)性能下降和中毒癥的單一霉菌毒素的含量低于試驗(yàn)控制條件下引起同樣毒性效應(yīng)的劑量(Swamy，2003)。 實(shí)際生產(chǎn)條件下動(dòng)物生產(chǎn)性能下降和某些不可預(yù)期的中毒現(xiàn)象，可能是由于不同霉菌毒素間的相互作用造成的。霉菌毒素問(wèn)的互作可改變中毒的臨床癥狀，導(dǎo)致一系列診斷特征不同于單獨(dú)作用的癥狀之和。,霉菌毒素危害的作用機(jī)制,降低采食量； 影響?zhàn)B分消化吸收； 影響動(dòng)物內(nèi)分泌和外分泌系統(tǒng)； 誘發(fā)細(xì)胞死亡； 抑制免疫系統(tǒng)；,霉菌毒素引起的免疫抑制，從而導(dǎo)致條件性病原菌或者

6、病毒引發(fā)疾病在臨床上越來(lái)越常見(jiàn),霉菌毒素對(duì)仔豬免疫系統(tǒng)的危害,隨處可見(jiàn)的霉菌毒素,配合飼料和飼料原料中霉菌毒素,配合飼料和飼料原料中霉菌毒素,配合飼料和飼料原料中霉菌毒素,配合飼料和飼料原料中霉菌毒素,配合飼料和飼料原料中霉菌毒素,飼料和飼料原料中的霉菌毒素,2008年飼料以及原料的霉菌毒素,342份樣品，包括配合飼料、玉米、玉米加工副產(chǎn)品、小麥、麩皮、蛋白原料（豆粕、魚(yú)粉其他蛋白原料）。 僅有20份樣品完全沒(méi)有檢測(cè)到已知的霉菌毒素。,-張丞等 飼料廣角2009.5,霉菌毒素調(diào)查結(jié)果,霉菌毒素調(diào)查結(jié)論,原料中主要關(guān)注玉米和玉米加工副產(chǎn)物（DDG/DDGS、玉米蛋白粉、玉米胚芽粕、酒精糟），這些

7、原料是飼料中霉菌毒素的主要來(lái)源。玉米加工副產(chǎn)品霉菌毒素污染程度比玉米本身更嚴(yán)重。 各種原料及飼料中霉菌毒素主要為FUMB1、DON 及ZON。 多種霉菌毒素共存的現(xiàn)象很普遍，80%以上樣品中存在兩種或者更多的霉菌毒素污染。,霉菌毒素對(duì)仔豬的危害,仔豬的耐受力低，極易中毒，中毒的仔豬常呈急性發(fā)作，出現(xiàn)中樞神經(jīng)癥狀，頭彎向一側(cè)，頭頂豬欄，數(shù)天內(nèi)死亡。,玉米赤霉烯酮對(duì)母豬繁殖系統(tǒng)危害,嘔吐毒素對(duì)豬的危害,赭曲霉毒素對(duì)豬的危害,霉菌毒素對(duì)家禽的危害,禽類(lèi)嘔吐毒素中毒,霉菌毒素對(duì)家禽影響,霉菌毒素對(duì)家禽影響,霉菌毒素對(duì)家禽影響,霉菌毒素對(duì)家禽影響,豬飼料中霉菌毒素的最大允許量,- By Dr. Jowa

8、man Khajarern AF=黃曲霉毒素； ZON=玉米赤霉烯酮； T2=T-2毒素； OTA=赭曲霉毒素； FUM=煙曲霉毒素； DON=嘔吐毒素,禽飼料中霉菌毒素的最大允許量,- By Dr. Jowaman Khajarern AF=黃曲霉毒素； ZON=玉米赤霉烯酮； T2=T-2毒素； OTA=赭曲霉毒素； FUM=煙曲霉毒素； DON=嘔吐毒素,奶牛飼料中霉菌毒素的最大允許量,- By Dr. Jowaman Khajarern AF=黃曲霉毒素； ZON=玉米赤霉烯酮； T2=T-2毒素； OTA=赭曲霉毒素； FUM=煙曲霉毒素； DON=嘔吐毒素,霉菌毒素的檢測(cè)方法以及解

9、決方案,霉菌毒素檢測(cè)方法,飼料中霉菌及霉菌毒素的檢測(cè)方法主要有目測(cè)法、 薄層色譜法(T LC) 、 高效液相色譜法(HP LC) 、 酶聯(lián)免疫法(E LISA) 、 放射免疫法(KIA)及氣相色譜法等。 快速試紙檢測(cè)法,薄層層析法(T LC),T LC法是我國(guó)測(cè)定食品及飼料中霉菌毒素的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)方法之一 ,其原理是針對(duì)不同的樣品 ,用適宜的提取溶劑將霉菌毒素從樣品中提取出來(lái) ,經(jīng)柱層析凈化 ,再在薄層板上層析展開(kāi)、 分離 ,利用霉菌毒素的熒光性 ,根據(jù)熒光斑點(diǎn)的強(qiáng)弱與標(biāo)準(zhǔn)比較測(cè)定其最低含量。 T LC法由于設(shè)備簡(jiǎn)單 ,易于普及 ,所以國(guó)內(nèi)外仍在使用 ,但該法樣品前處理繁瑣 ,且提取和凈化效果不夠

10、理想 ,提取液中雜質(zhì)較多 ,在展開(kāi)時(shí)影響斑點(diǎn)的熒光強(qiáng)度 ,而雙向展開(kāi)雖避免了雜質(zhì)干擾，但增加了操作步驟和時(shí)間(葉雪珠 ,2003) 。,液相色譜法(HP LC),HP LC法是近幾年發(fā)展起來(lái)的檢測(cè)霉菌毒素的方法 ,主要是用熒光檢測(cè)器檢測(cè) ,在適宜的流動(dòng)相條件下 ,采用反相C18柱 ,使霉菌毒素同時(shí)分離。用 HP LC 法檢測(cè) ,最低檢出量0. 08 ng ,回收率為 92. 87 % 。該法快速而準(zhǔn)確 ,但需要昂貴的儀器設(shè)備 。,酶聯(lián)免疫法(E LISA),E LISA 法是1971年提出的?；驹硎窃诤线m的載體上 ,酶標(biāo)記抗體或抗原與相應(yīng)的抗原或抗體形成酶標(biāo)記的抗原抗體復(fù)合物 ,在酶底物參

11、與下 ,復(fù)合物上的酶催化底物使其水解 ,氧化或還原成為另一種帶色物質(zhì)。可用分光光度計(jì)進(jìn)行測(cè)定 ,從而可計(jì)算出參與反應(yīng)的抗原和抗體的含量(楊利國(guó) ,1998) 。該免疫學(xué)方法更實(shí)際 ,其靈敏度與 T LC 或 HP LC 法相當(dāng)或更高 ,因而具有更廣闊的應(yīng)用前景。,酶聯(lián)免疫法(E LISA),該法由于快速、 靈敏、 準(zhǔn)確、 可定量、 操作簡(jiǎn)便、 無(wú)需貴重儀器設(shè)備 ,且對(duì)樣品純度要求不高等特性 ,特別適用于大批量樣品的檢測(cè)。,金標(biāo)快速試紙條檢測(cè)原理,試劑含有被事先固定于膜上測(cè)試區(qū)（T）的AFB1-BSA偶聯(lián)物和被膠體金標(biāo)記的抗AFB1特異性抗體。 測(cè)試時(shí)，樣品滴入試劑盒孔內(nèi)，如AFB1在樣品中濃度

12、低于5ng/ml時(shí)，膠體金抗體不能與AFB1全部結(jié)合。這樣，膠體金抗體在層析過(guò)程中會(huì)被固定在膜上的AFB1-BSA偶聯(lián)物結(jié)合，在測(cè)試區(qū)（T）內(nèi)會(huì)出現(xiàn)一條紫紅色條帶。如果AFB1在樣品中濃度高于5ng/ml時(shí)，膠體金抗體與AFB1全部結(jié)合，從而在測(cè)試區(qū)（T）內(nèi)因?yàn)楦?jìng)爭(zhēng)反應(yīng)不會(huì)與AFB1-BSA偶聯(lián)物結(jié)合而不出現(xiàn)紫紅色條帶。陰性樣品在檢測(cè)過(guò)程中由于缺少抗體抗原競(jìng)爭(zhēng)反應(yīng)，將會(huì)在測(cè)試區(qū)（T）內(nèi)出現(xiàn)紫紅色條帶。,檢測(cè)時(shí)間短，從樣品處理到檢測(cè)不到半小時(shí)。 采用無(wú)毒無(wú)害的乙酸乙酯為霉毒素提取劑，提取時(shí)短、溶劑易于去除，改變了傳統(tǒng)脫溶劑長(zhǎng)且污染環(huán)境和危害操作人員的健康等缺點(diǎn)。 不需紫外光源、專(zhuān)用檢測(cè)儀和專(zhuān)業(yè)人

13、員，適用于現(xiàn)場(chǎng)和基層單位。 操作簡(jiǎn)單、結(jié)果準(zhǔn)確，可逐份檢測(cè)，故成本低。 試劑穩(wěn)定，室溫保存，有效期長(zhǎng)（至少一年半）。,金標(biāo)試紙法快速檢測(cè)AFB1方法的優(yōu)勢(shì),如何解決霉菌毒素的危害？,霉菌毒素的預(yù)防,控制飼料原料的質(zhì)量。關(guān)鍵在于嚴(yán)格控制原料的含水量，一般要求玉米、高粱、稻谷等的含水量應(yīng)不超過(guò)14%；大豆及其餅粕、麥類(lèi)、糠麩類(lèi)、甘薯干、木薯干等的含水量應(yīng)不超過(guò)13%；棉籽餅粕、菜籽餅粕、向日葵餅粕、亞麻仁餅粕、花生仁餅粕、魚(yú)粉、骨粉及肉骨粉等的含水量應(yīng)不超過(guò)12%。,霉菌毒素的防治,預(yù)防： 使用優(yōu)質(zhì)防霉劑，預(yù)防原料或成品飼料霉變。飼料防霉劑種類(lèi)很多，目前使用最廣泛的是丙酸及其鹽類(lèi)（包括丙酸鈉、丙酸鈣、丙酸銨和二丙酸銨）、山梨醇及其鹽類(lèi)、雙乙酸鈉等是常用的防霉劑。飼料一旦污染應(yīng)使用有效去霉劑。,霉菌毒素的脫毒,物理化學(xué)方法？ 方便性如何？ 適口性如何？,吸附劑法,為了減少損失， 很多學(xué)者采用一些物質(zhì)作為霉菌毒素的吸附劑來(lái)處理霉變飼料， 即在飼料中添加可以吸附霉菌毒素物質(zhì)， 使毒素在經(jīng)過(guò)動(dòng)物腸道時(shí)不被動(dòng)物所吸收， 直接排出體外。例如：甘露低聚糖，水合鋁硅酸鹽類(lèi)，膨潤(rùn)土，蒙脫石等。,吸附劑法的缺陷,生物轉(zhuǎn)化法,乳酸菌對(duì)于霉菌毒素的作用,乳酸菌對(duì)于霉菌毒素的去除的作用是目前在食品和人類(lèi)營(yíng)養(yǎng)方面一個(gè)嶄新的課題。目前主要集中在黃曲霉