1、t細胞免疫功能檢測平臺的建立與臨床應用,t細胞免疫功能與感染,t細胞免疫功能的抗感染作用 正常人的免疫功能 t細胞免疫的抗感染作用 t細胞免疫功能的測定 t細胞亞群 t細胞功能 t細胞免疫功能測定的臨床意義,機體的免疫系統(tǒng),非特異免疫 皮膚粘膜，吞噬細胞，nk細胞， 補體，正常菌群 特異性免疫 細胞免疫：cd4+ 細胞，cd8+ 細胞 體液免疫：b細胞,機體的免疫系統(tǒng),cd4+細胞的免疫中樞指揮功能,cd4+細胞的免疫中樞指揮功能,cd4+細胞的產(chǎn)生和分群,純真,純真和記憶/效應4細胞亞群的產(chǎn)生,記憶,效應,凋亡,胸腺,效應,效應,效應,純真 cd4和記憶cd4細胞,細胞免疫功能的抗感染作用,

2、感染發(fā)生的兩個基本要素：病原體和機體免疫功能 免疫功能對疾病轉(zhuǎn)歸的影響： 對免疫功能正常的人不起致病作用的病原體，在免疫功能低下的人身上可發(fā)生致命性的感染； 免疫功能正常的人發(fā)生某種感染后可很快恢復，而在免疫功能紊亂的人則成為慢性狀態(tài)； 對同樣的病原體所導致的感染，給予同樣的抗感染治療，轉(zhuǎn)歸完全不一樣,細胞免疫功能的抗感染作用,為什么？ 乙肝病毒感染：有人為乙肝病毒攜帶者, 也有人成為慢性乙肝病人？ hpv感染：多數(shù)人表現(xiàn)為無癥狀的hpv潛伏感染者，少數(shù)人表現(xiàn)為復發(fā)性hpv cmv感染: 90%的正常人隱性感染終生帶病毒，但免疫功能低下時可致死？,hiv感染的自然史,cd4細胞 (cell/m

3、m3） 800 400,急性感染期,無癥狀期,艾滋病前期和艾滋病期,cd4,病毒載量,抗hiv 的ctl,hiv抗體,hiv感染者的三種臨床轉(zhuǎn)歸,virus,cd4,cd8 ahiv,cd4,cd4,cd8,cd8 ahiv,virus,virus,standard 8 y,fast : 4-5 y : (2%) (ccr genes, hla b35,slow : 10 y : (2%), ccr genes, hla b57,免疫功能與機會性感染相關(guān)性,years,200,cd4 counts,白念菌,zona,卡波濟肉瘤,淋巴瘤,pcp,弓型體,cmv,maic,4,8,艾滋病期,hiv

4、 load,2,10,細胞免疫功能的抗感染作用不重視機體免疫功能的后果,化療藥物的濫用 耐藥菌的產(chǎn)生 二重感染的發(fā)生 進一步損害免疫功能,細胞免疫功能與感染,細胞免疫功能的抗感染作用 正常人的免疫功能 細胞免疫的抗感染作用 t細胞免疫功能的測定 t細胞亞群 t細胞功能 細胞免疫功能測定的臨床意義,細胞免疫功能與感染免疫功能測定方法,體內(nèi)： ppd試驗？ 體外： 體液免疫：b細胞數(shù)量，免疫球蛋白定量 細胞免疫：t細胞亞群的數(shù)量和功能 （流式細胞儀，elisa，elispot）,t細胞免疫功能的測定,a cytometer looks like an easy-to-use machine, bu

5、t look inside: its a complex laser machine!,pmt,pmt,pmt,pmt 4,dichroic,filters,bandpass,filters,flow cytometry principle,laser,1,2,3,4,flow cell,t細胞免疫功能的測定,淋巴細胞免疫表型檢測指標,不同年齡組正常細胞亞群的建立,細胞免疫功能測定方法t細胞功能的測定,t細胞增殖功能 同位素h3摻入試驗 brdu ，ki67 cfsu t細胞毒試驗（ctl）和細胞介素測定 同位素cr51 四聯(lián)體 elisa 流式細胞儀 elispot,elispot 方法,e

6、lispot方法是目前國際上廣泛應用的較新的體外測定特異性抗體分 泌細胞和細胞因子分泌細胞的方法。該方法可在單細胞水平檢測淋 巴細胞對特異性抗原的反應能力及計數(shù)特異性抗原刺激下細胞因子 分泌細胞的頻數(shù)。 優(yōu)點：敏感-能檢測產(chǎn)生細胞因子頻率極低的細胞，靈敏度高達 1/1000000。 特異 直觀-可直接在顯微鏡下人工計數(shù)斑點或通過elispot分 析系統(tǒng)對斑點進行計數(shù)， 1 個斑點代表 1 個特異性 抗體分泌細胞或細胞因子分泌細胞。,elispot 原理,- pbmc,-刺激原,孵育16 18h或4048h,elispot 結(jié)果,陰性對照,陽性對照,樣本孔,樣本孔,圖中的每個斑點代表一個能分泌i

7、fn- 的抗原特異性cd4+t細胞或ctl,t細胞免疫功能與感染,t細胞免疫功能的抗感染作用 正常人的免疫功能 t細胞免疫的抗感染作用 t細胞免疫功能的測定 t細胞亞群 t細胞功能 t細胞免疫功能測定的臨床意義,t細胞免疫功能與感染細胞免疫功能測定的臨床意義,hiv感染和艾滋病 其它各種感染性疾病 -病毒感染：sars, hbv，hcv，ebv， cmv，hfrs, hfmd -結(jié)核病，真菌感染。 腫瘤和化療病人的免疫功能監(jiān)測 器官移植病人的免疫監(jiān)測 自身免疫病和過敏性疾病,細胞免疫功能與感染細胞免疫功能測定的臨床意義,中國hiv/aids的免疫病理 改變和免疫重建,艾滋病的主要免疫病理改變,

8、cd4+ t 細胞數(shù)的減少； cd4+ t 功能的減低; 異常的細胞免疫激活。,hiv感染的自然史,cd4細胞 (cell/mm3） 800 400,急性感染期,無癥狀期,艾滋病前期和艾滋病期,cd4,病毒載量,抗hiv 的ctl,hiv抗體,hiv/aids 患者淋巴細胞亞群與正常對照比較,（計數(shù)：個/mm3，比例：%，數(shù)值以中位數(shù)（上四分位數(shù)，下四分位數(shù)）表示） *與正常對照組相比存在顯著差異p0.001。 與正常對照組相比存在顯著差異p=0.021。,早中晚3組患者淋巴細胞亞群的比較,組與、組相比p0.001, 組與組相比p0.001。 *組與、兩組均存在顯著差異p0.001, 、組兩組

9、無顯著差異。 （計數(shù)：個/mm3，比例：%，數(shù)值以中位數(shù)（上四分位數(shù)，下四分位數(shù)）表示）,hiv/aids的免疫病理改變選擇性純真t4細胞的減少,正常人,hiv感染者,aids病人,hiv/aids的免疫病理改變t4細胞輔刺激信號受體的表達減少,正常人,hiv感染者,aids病人,cd28t細胞輔刺激信號受體,hiv/aids的免疫病理改變異常的t細胞免疫激活,aids病人,hiv感染者,正常人,中國艾滋病病人的免疫改變特點,艾滋病病人有選擇性的純真 t4細胞減少; cd4+cd28+ 是細胞免疫功能的標記指標; cd8+cd38+ 亞群是疾病進展和病毒復制的預測指標。. hiv感染當cd4+t細胞計數(shù)低于200個/mm3時: cd28表達下降較感染早中期更為嚴重 純真cd4+t細胞減少的速率較感染早中期明顯加快 異常的免疫激活更為嚴重,t細胞免疫功能檢測在sars診治中的應用,t細胞檢測對sars診斷的意義,sars病人cd4+細胞(98%)和 cd8+(80%)細胞同時減少； 發(fā)生在發(fā)病一周內(nèi)（有些發(fā)生在胸片改變之前） t細胞檢測有助于sars的早期診斷,細胞免疫功能與感染細胞免疫功能測定的臨