1、脂質(zhì)和脂蛋白代謝紊亂的生物化學(xué)檢驗(yàn),臨床檢驗(yàn)教研室 龔曉華,1,1、掌握脂及脂蛋白代謝；脂代謝紊亂常用生化檢驗(yàn)項(xiàng)目（TC、TG、HDL-C、LDL-C、LP（a）、apoA-I、aPOB）的檢測方法、參考區(qū)間及臨床意義,2、熟悉血漿脂蛋白的分類、高脂蛋白血癥的分型,3、了解血漿脂代謝相關(guān)酶的測定；臨床生化檢驗(yàn)項(xiàng)目在脂代謝紊亂診治中的應(yīng)用,本章教學(xué)要求：,2,第一節(jié) 概述,一、脂及脂蛋白相關(guān)的概念,3,（一）血漿脂蛋白的組成與結(jié)構(gòu),組成：,主要由蛋白質(zhì)、三酰甘油、磷脂（PL）、游離膽固醇（FC）、膽固醇酯（CE）、游離脂肪酸（FFA）等成分組成。但其組成比例及含量卻相差很大。,相同點(diǎn)：蛋白質(zhì)+脂

2、類(TG、PL、FC+CE),不同點(diǎn)：(1) 蛋白質(zhì)和脂類的含量不同 (2) 蛋白質(zhì)(Apo)的種類及其含量不同,4,結(jié)構(gòu)：,大致為球形顆粒，由兩大部分組成，即疏水性的核心和親水性的表層。核心由不溶于水CE與TG組成，表層由載脂蛋白、PL及FC組成，F(xiàn)C及PL的極性基團(tuán)向外露在血漿中，載脂蛋白是兼性化合物，它的疏水部分在脂蛋白中，而親水部分突出于脂蛋白顆粒的表面。,5,6,1、超速離心法：,乳糜微粒（CM）,極低密度脂蛋白（VLDL）,中間密度脂蛋白（IDL）,低密度脂蛋白（LDL）,高密度脂蛋白（HDL）,脂蛋白（a）（Lp(a)）,（二）血漿脂蛋白的分類,7,8,各類脂蛋白顆粒的密度及體積

3、,8,依據(jù)血漿脂蛋白分子中蛋白質(zhì)表面電荷多少的不同而分離。通常可分成： CM、pre-LP、-LP 、-LP 四條區(qū)帶分別相當(dāng)于CM、VLDL 、LDL、HDL IDL也有移動(dòng)度，在IDL異常時(shí)可顯現(xiàn)寬帶,2、電泳：,（一）血漿脂蛋白的分類,9,10,血漿脂蛋白的主要功能,1. CM 運(yùn)輸外源性TG至外周組織 2. VLDL 運(yùn)輸內(nèi)源性TG至外周組織 3. LDL 運(yùn)輸膽固醇至外周組織，與冠心病成正相關(guān) 4. HDL 從外周組織逆轉(zhuǎn)運(yùn)膽固醇至肝臟或其他組織再分布，與冠心病成負(fù)相關(guān),11,（三）載脂蛋白,脂蛋白中的蛋白部分稱為載脂蛋白(Apo)，具有結(jié)合與轉(zhuǎn)運(yùn)脂質(zhì)及穩(wěn)定脂蛋白結(jié)構(gòu)等功能，在脂蛋白

4、代謝中具有重要的生理功能。,定義：,1. 載脂蛋白的種類與功能：,按1972年的命名方法，用英文字母順序編碼，分為ApoA、ApoB、ApoC、ApoD、ApoE等。,12,Apo種類多，類-亞類亞亞類。 ApoA ： ApoAI、ApoAII 和 ApoAIV ApoB ： ApoB100 和 ApoB48 ApoC ： CI、CII、CIII ApoD 及 ApoE、Apo(a)、 ApoH 、ApoJ,13,分 類,（三）載脂蛋白,13,14,14,功 能,與脂質(zhì)的親和作用而使脂質(zhì)溶于水性介質(zhì)中。 運(yùn)轉(zhuǎn)膽固醇和三酰甘油。 作為脂蛋白外殼的結(jié)構(gòu)成分，與脂蛋白外生物信息相聯(lián)系。 以配體的形式

5、作為脂蛋白與特異受體的連接物。 激活某些與血漿脂蛋白代謝有關(guān)的酶類,（三）載脂蛋白,15,（四）脂蛋白受體,定義,脂蛋白受體是一類位于細(xì)胞膜上的糖蛋白。 它能以高度的親和方式與相應(yīng)的脂蛋白配體作用，從而介導(dǎo)細(xì)胞對脂蛋白的攝取與代謝，進(jìn)一步調(diào)節(jié)細(xì)胞外脂蛋白的水平。,16,脂蛋白受體的作用：,不僅是運(yùn)送脂蛋白至細(xì)胞所必需，也是從血和外周組織中有效清除具有潛在致動(dòng)脈粥樣硬化的脂蛋白所必需的。,種類：,主要有LDL受體、殘粒受體及清道夫受體。,17,各種脂蛋白受體功能,LDL受體 不僅能識(shí)別ApoB100，也可識(shí)別ApoE，在細(xì)胞結(jié)合、攝取和降解LDL及其它含ApoB100的脂蛋白過程中起中介作用，對

6、維持細(xì)胞和全身膽固醇平衡起重要作用。,18,殘粒受體 能識(shí)別ApoE，是清除血液循環(huán)中CM殘粒和-VLDL殘粒的主要受體，它也能結(jié)合含ApoE的HDL。,清道夫受體 主要存在于巨噬細(xì)胞表面,介導(dǎo)修飾LDL(包括氧化LDL和-VLDL) 從血液循環(huán)中清除。,19,脂蛋白代謝以肝臟為中心,二、脂及脂蛋白的代謝,20,參與脂蛋白代謝主要關(guān)鍵酶有: LPL 、HL(HTGL)、LCAT 、HMGCoAase 特殊蛋白質(zhì)有: CETP、LRP、MTTP、SREBP 均參與脂類代謝的多個(gè)環(huán)節(jié)。,血漿脂蛋白代謝,21,一、外源性脂質(zhì)代謝,22,外源性代謝途徑: CM代謝 (半壽期 1小時(shí)),TG,CE,TG

7、,FC,PL,FFA,腸壁細(xì)胞,HDL,CM,CM殘粒,第 3 步,第 1 步,第 2 步,23,二、內(nèi)源性脂質(zhì)代謝,1.VLDL和LDL代謝,24,SR-A,HDL,肝外細(xì)胞,LDL-R,Step 1,Step 2,Step 3,內(nèi)源性代謝途徑: VLDL、IDL、LDL代謝,巨噬細(xì)胞,25,臨床觀察發(fā)現(xiàn)，有些患者的細(xì)胞表面受體缺 乏或減少，致使血漿LDL含量增多，結(jié)果是血漿 膽固醇和膽固醇酯濃度升高并沉積于血管壁，促 進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生,表現(xiàn)在心臟則引起冠心 病。由于LDL中膽固醇含量升高與冠心病發(fā)病率 呈正相關(guān)，所以LDL中的膽固醇稱為壞膽固醇。,26,肝外絕大多數(shù)組織分解代謝膽固醇的

8、能力有限。 需 將膽固醇運(yùn)回肝臟, 以防在其中過多聚積。,2.HDL逆向轉(zhuǎn)運(yùn)代謝,27,高密度脂蛋白運(yùn)載周圍組織中的膽固醇，再轉(zhuǎn)化為膽汁酸或直接通過膽汁從腸道排出，動(dòng)脈造影證明高密度脂蛋白膽固醇含量與動(dòng)脈管腔狹窄程度呈顯著的負(fù)相關(guān)。所以高密度脂蛋白是一種抗動(dòng)脈粥樣硬化的血漿脂蛋白，是冠心病的保護(hù)因子所以HDL中的膽固醇稱為好膽固醇。,28,脂蛋白代謝示意圖,29,三、脂蛋白代謝紊亂,（一）高脂蛋白血癥 （二）低脂蛋白血癥 （三）脂蛋白代謝紊亂與動(dòng)脈粥樣硬化,30,高脂蛋白血癥是指血漿中CM、VLDL、LDL、HDL等脂蛋白有一種或幾種濃度過高的現(xiàn)象。,高脂蛋白血癥,原發(fā)性高脂蛋白血癥：是遺傳缺

9、陷所致，如家族性高膽固醇血癥。 繼發(fā)性高脂蛋白血癥：指某些原發(fā)病在病理演變過程中造成脂蛋白代謝紊亂，而繼發(fā)出現(xiàn)高脂蛋白血癥。如糖尿病、腎病綜合征、甲狀腺功能減退癥等。,31,高脂蛋白血癥WHO分型及特征,32,黑線峰：正常圖形 藍(lán)色峰：實(shí)際圖形,脂蛋白電泳圖譜,33,血清外觀分析（血清冷置試驗(yàn)）,34,二、甘油三酯,三、游離脂肪酸,一、總膽固醇,七、載脂蛋白A-I,六、脂蛋白(a),十、ApoA-I /ApoB、TCHDL-C、TG/HDL-C、LDL-C/HDL-C比值,四、高密度脂蛋白膽固醇,五、低密度脂蛋白膽固醇,十一、卵磷脂膽固醇轉(zhuǎn)移酶測定,八、載脂蛋白B,九、載脂蛋白E,十二、脂蛋白

10、脂肪酶,第二節(jié) 脂代謝紊亂的生化檢驗(yàn)項(xiàng)目與檢測方法,35,血脂、脂蛋白及載脂蛋白測定,血脂測定項(xiàng)目 TC、TG、HDL-C、LDL-C、Lp（a）、ApoAI、ApoB等。 檢測項(xiàng)目的合理選擇 臨床常規(guī)血脂測定：TC、TG、HDL-C 及LDL-C這四項(xiàng)，有條件的實(shí)驗(yàn)室可測定ApoA、ApoB及Lp(a)。 特殊檢查項(xiàng)目：如Apo（A、C、C、C和E）、FFA、CETP、LPL、LCAT測定等，多用于科研或臨床特殊病例研究。,36,樣本收集與貯存注意事項(xiàng),1、一般要求空腹12小時(shí)以上 2、采血前必須保持安靜坐位至少5min（最好20min以上）；除臥床不起者外，采血時(shí)必須取坐位。 3、止血帶使

11、用時(shí)間必須1min，抽血時(shí)必須松開止血帶，因靜脈阻滯5min，可使TC升高10%-15%。 4、樣本采集后應(yīng)盡快進(jìn)行檢測，放置時(shí)間不得大于3min，24h內(nèi)不能完成測定，可密封置于2-8保存一周。,37,一、總膽固醇（TC）,【參考范圍】 合適：6.22mmol/L,【檢測方法】,臨床常規(guī)方法推薦為酶法（COD-PAP法），衛(wèi)生部推薦的參考方法是HPLC法。,膽固醇是人體重要的脂類成分，具有重要的生理功能，如合成類固醇激素，維生素D3膽汁酸，并構(gòu)成細(xì)胞膜成分，TC包括FC（1/3）和CE（2/3），膽固醇與動(dòng)脈粥樣硬化有密切關(guān)系，故膽固醇測定是最常用的實(shí)驗(yàn)室檢測項(xiàng)目之一。,38,TC除了作為高

12、膽固醇血癥的診斷指標(biāo)之外，不能作為其它任何疾病的診斷指標(biāo)，對于動(dòng)脈粥樣硬化和冠心病而言，TC是一個(gè)明確的危險(xiǎn)因子，與冠心病的發(fā)病率呈正相關(guān)。,【臨床意義】,血清膽固醇升高：動(dòng)脈粥樣硬化、腎病綜合癥、肝細(xì)胞性黃疸、阻塞性黃疸及重癥糖尿病等。 血清膽固醇降低：惡性貧血、溶血性貧血、甲狀腺機(jī)能亢進(jìn)、急性感染，營養(yǎng)不良等。,39,二、甘油三脂（TG）,臨床上所測的甘油三酯是血漿中各脂蛋白所含甘油三酯的總和，甘油三脂受飲食和時(shí)相的影響較大，同一個(gè)體多次測定時(shí)，也可能有較大變異，因此TG生物學(xué)變異最大。,【檢測方法】,臨床常規(guī)方法推薦為酶法，衛(wèi)生部推薦的參考方法是同位素稀釋氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法（ID-GC/

13、MS）,【參考范圍】,在1.7mmol/L（150mg/dl）以下為合適范圍； 1.72.25mmol/L（150199mg/dl）為邊緣升高； 2.26mmol/L（200mg/dl）以上為升高。,40,【臨床意義】,41,1、生理性改變：高脂飲食、肥胖、運(yùn)動(dòng)不足等 2、病理性改變： 輕至中度升高2.26-5.63mmol/l 患冠心病危險(xiǎn)性增加 重度升高5.63mmol/l 可伴發(fā)急性胰腺炎 3、低TG血癥：0.56mmol/l,三、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）,常以測定HDL-C含量代表HDL水平。HDL是血清中顆粒最小密度最大的一組脂蛋白，被視為人體內(nèi)具有抗動(dòng)脈粥樣硬化的脂蛋白，同

14、時(shí)與冠心病呈負(fù)相關(guān)，因而HDL-C被稱為好的膽固醇。,【檢測方法】,臨床常規(guī)方法為勻相法。其原理是利用多聚體和聚陰離子在表面活性劑的作用下，對低密度、極低密度脂蛋白選擇性遮蔽的原理，從而達(dá)到僅血清高密度脂蛋白中的膽固醇參與顯色反應(yīng)的方法。,42,男性：1.16-1.42mmol/L 女性：1.29-1.55mmol/L 合適范圍為：1.55mmol/L（60mg/dl）-1.04mmol/L（40mg/dl） 升高：1.55mmol/L（60mg/dl） 降低：1.04mmol/L（40mg/dl）,【參考范圍】,43,【臨床意義】,HDL-C被證實(shí)是AS和心血管疾病的保護(hù)因子，一般認(rèn)為隨著H

15、DL-C水平降低，缺血性心血管病發(fā)病危險(xiǎn)增加，HDL-C1.04mmol/L的人群與HDL-C1.55mmol/L的人群相比，缺血性心血管病危險(xiǎn)增加50%。,影響血漿（清）HDL-C水平的因素很多，主要有： 年齡和性別 種族 飲食 肥胖 飲酒與吸煙 運(yùn)動(dòng) 藥物 疾病,44,HDL亞類,HDL包括多個(gè)亞類-HDL（HDL2a、HDL2b、HDL3a、HDL3b、HDL3c）和-HDL（前1-HDL、前2-HDL、前3-HDL）。HDL的兩個(gè)主要功能抗炎抗氧化和抗AS，都可能通過某些亞類特別是HDL2和HDL3發(fā)揮作用，而不是全部HDL均發(fā)揮作用。 目前HDL2和HDL3的主要作用包括 （1）作為

16、評估AS的危險(xiǎn)因素，與冠心病密切相關(guān)，較總HDL好 （2）HDL3在抗炎抗氧化方面發(fā)揮重要作用 （3）HDL2在胰島素抵抗和肝硬化中發(fā)揮重要作用,45,四、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）,LDL-C在體內(nèi)主要將內(nèi)源性脂質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)到外周組織利用，其水平更能反映個(gè)體的血脂水平，由于其含量升高與冠心病發(fā)病率呈正相關(guān)，所以LDL-C被稱為壞膽固醇,【檢測方法】,臨床常規(guī)方法為勻相法。,【參考范圍】,合適范圍為：4.14mmol/L（160mg/dl）,46,【臨床意義】,LDL-C是導(dǎo)致AS的主要脂類危險(xiǎn)因素。 與缺血性心血管病發(fā)生相對危險(xiǎn)及絕對危險(xiǎn)上升趨勢及程度與TC相似。 增高見于家族性高膽固醇血癥

17、（TC增高，LDL-C增高，伴有HDL-C減低），a型高脂蛋白血癥（TC增高，LDL-C增高，TG正?；蜉p度增高）。,47,五、脂蛋白（a）Lp（a）,含有特定的載脂蛋白Apo（a）的脂蛋白，合成于肝臟，其脂質(zhì)組成結(jié)構(gòu)與LDL及其相似，密度介于HDL和LDL之間，其生理功能尚不清楚，可能是轉(zhuǎn)運(yùn)脂質(zhì)到組織細(xì)胞。1988年被國際專題會(huì)議公認(rèn)為動(dòng)脈硬化的獨(dú)立危險(xiǎn)因子。,【檢測方法】,免疫比濁法和ELISA,【參考范圍】,300mg/L,48,【臨床意義】,1.生理性改變 一般認(rèn)為Lp（a）對同一個(gè)體相當(dāng)恒定，但個(gè)體間差異很大，波動(dòng)范圍在01.0mg/L。Lp（a）水平高低主要由遺傳因素決定，基本不受

18、性別、年齡、飲食、營養(yǎng)和環(huán)境影響； 2.病理性增高 缺血性心腦血管疾病 、心肌梗死、外科手術(shù) 、急性創(chuàng)傷、急性炎癥 、糖尿病腎病、腎病綜合癥、尿素癥，除肝癌以外的其他惡性腫瘤 3.病理性減低 肝臟疾病（慢性肝炎除外）,49,六、載脂蛋白A-I（apoA-I）,載脂蛋白A主要存在于HDL中，在CM、VLDL、LDL也有少量，主要功能是維持脂蛋白結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定和完整性。已證實(shí)ApoA是通過激活LCAT來催化膽固醇酯化，將多余的CE轉(zhuǎn)運(yùn)至肝臟處理，因此apoA-I具有清除脂質(zhì)和抗AS的作用。,【檢測方法】,免疫透射比濁法,【參考范圍】,1.20-1.60g/L,50,【臨床意義】,血清apoA-I反映血液中HDL的數(shù)量，與HDL-C呈明顯正相關(guān)，與冠心病發(fā)生危險(xiǎn)性呈負(fù)相關(guān)。 冠心病患者、腦血管病患者水平降低 apoA-I缺乏癥患者血清中apoA-I、HDL-C水平極低 糖尿病、慢性肝病、腎病綜合癥等降低 apoA-I升高主要見于妊娠、雌激素療法、飲酒等,51,七、載脂蛋白B（apoB）