1、第十三章 基因功能的驗證,一是通過增強其表達，取得表達產(chǎn)物進行研究， 增強其表達因為不能反映基因產(chǎn)物的真實表達情況，而逐漸被拋棄 二是減弱或者終止其表達，觀察整體功能的變化，進而推測相應(yīng)的基因功能,1 RNA干擾技術(shù),它是指外源性與內(nèi)源性雙鏈RNA觸發(fā)編碼區(qū)同源mRNA 特異性的降解，而導(dǎo)致基因表達沉默的現(xiàn)象，這種現(xiàn)象發(fā)生在轉(zhuǎn)錄后水平，又稱為轉(zhuǎn)錄后基因沉默(post-transcriptionalgenesilencing)。,當(dāng)dsRNA導(dǎo)入細胞后，被一種dsRNA特異的核酸內(nèi)切酶識別，切割成21-23核苷酸長的小片段，這些片段可與該核酸酶的dsRNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域結(jié)合，并且作為模板識別目的mR

2、NA。,RNAi 技術(shù)的應(yīng)用,在功能基因組研究中，需要對特定基因進行功能喪失或降低突變，以確定其功能。 由于RNAi具有高度的序列專一性，可以特異地使特定基因沉默，獲得功能喪失或降低突變，因此RNAi可以作為一種強有力的研究工具，用于功能基因組的研究。,在功能基因組中的應(yīng)用,基因敲除（knock out of gene）：利用基因打靶技術(shù)，用無功能的外源基因轉(zhuǎn)入細胞與基因組中同源序列進行同源重組，把具有功能的同源序列置換出來，造成功能基因的缺失或失活，這一技術(shù)叫基因敲除。,基因敲除技術(shù),構(gòu)建重組載體 重組DNA轉(zhuǎn)入受體 細胞核內(nèi) 篩選目的細胞 轉(zhuǎn)基因動物模型的建立,DNA-Binding Do

3、main,Bait Protein,Prey Protein,Transcription Activating Region,Reporter Gene,DNA-Binding Site,酵母雙雜交技術(shù),反式作用因子中的兩個功能結(jié)構(gòu)域 DNA結(jié)合域 轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域,鑒定新的蛋白與蛋白相互作用 鑒定蛋白級聯(lián)底物 鑒定突變對蛋白與蛋白結(jié)合的影響 在已知的相互作用中鑒定干擾蛋白質(zhì) (反向雙雜交系統(tǒng)),酵母雙雜交系統(tǒng)應(yīng)用,利用酵母作為真核蛋白相互作用的模型,是一種在體外研究兩種或多種蛋白質(zhì)之間物理相互作用的方法,拉下實驗,基因組是指一個細胞單倍型所含的全部遺傳信息，即DNA或RNA編碼的遺傳信息 蛋白

4、質(zhì)組則是指一個細胞一生中表達的蛋白質(zhì)總和,蛋白組學(xué)研究,蛋白質(zhì)組學(xué)是研究蛋白質(zhì)組的一個新的領(lǐng)域，主要研究蛋白質(zhì)的特性，包括蛋白質(zhì)表達水平、氨基酸序列、翻譯后加工和蛋白質(zhì)相互作用，在蛋白質(zhì)水平上了解細胞的各項功能、各種生理生化過程及疾病的病理過程等,人體內(nèi)肝癌細胞的轉(zhuǎn)移與細胞中第號染色體短臂的缺失密切相關(guān),蛋白質(zhì)雙向電泳(two-dimensional eleclrophoresis，2-DE)是一種方便、靈敏的蛋白質(zhì)分離方法,第一相電泳根據(jù)蛋白質(zhì)的不同等電點分離各種蛋白質(zhì)，即等電聚焦法(isoelectrie focusing IEF) 第二向電泳根據(jù)蛋白質(zhì)的不同分子量進一步分離等電點相同的蛋白質(zhì)，即SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE),雙向凝膠電泳技術(shù)是目前蛋白質(zhì)組研究的主要技術(shù)之一, 雙向電泳根據(jù)等電點和分子量可一次性分離數(shù)千種蛋白質(zhì)，經(jīng)染色后蛋白質(zhì)再PAGE上可形成密度不同、分布不均的復(fù)雜點圖譜。 如何有效的對雙向凝膠電泳圖像分析，如何對圖譜上的蛋白質(zhì)點進行檢測、定量、比較、分析和歸類，挖掘有價值的蛋白質(zhì)點的信息是雙向電泳分析軟件所要解決的問題。,差