1、常用試劑配方常用試劑儲存注意事項(xiàng)：儲存于陰涼、通風(fēng)的地方；遠(yuǎn)離火種、熱源。避免光照。室溫不超過30，相對濕度不超過80。包裝必須密封，切勿受潮。應(yīng)與易（可）燃物、還原劑、堿類、醇類、食用化學(xué)品分開存放，切忌混儲，儲區(qū)應(yīng)備有合適的材料收容泄漏物。操作注意事項(xiàng)：盡量在通風(fēng)櫥操作，加強(qiáng)通風(fēng)，避免粉塵擴(kuò)散。遠(yuǎn)離易燃、可燃物，避免與還原劑、堿類、醇類接觸，防止包裝及容器損壞。使用后應(yīng)留意剩余量，注意及時(shí)訂購。 8M Urea（尿素）組份濃度： 8mol/L Urea（MW：60.07）配制量： 1L 配制方法： 1.稱取尿素480g，置于1L的藍(lán)蓋瓶中。 2. 加水至1L，置于磁力攪拌器上充分?jǐn)嚢琛?.

2、 于棕色瓶中，4保存。 4.使用前，先在常溫放置，使析出的尿素溶解。0.25AgNO3 （硝酸銀）組份濃度：0.25（W/V）AgNO3（MW：169.87）配制量： 500ml配制方法: 1.準(zhǔn)確稱取硝酸銀1.25g。 2.加入500ml的去離子水，充分溶解。 3.于棕色瓶中,常溫保存。0.5M EDTA（PH 8.0）組分濃度: 0.5 mol/L EDTA（MW：372.24）配制量: 500ml配制方法: 1稱取93g Na2EDTA2H2O置于500ml藍(lán)蓋瓶中。2加入400ml的去離子水，置于磁力攪拌器上充分?jǐn)嚢琛?用NaOH調(diào)節(jié)調(diào)節(jié)pH值至8.0（約需加入20g固體NaOH），當(dāng)

3、pH接近8.0時(shí)， EDTA方可完全溶解，加入去離子水定容至1L。4高溫高壓滅菌后，室溫保存半年。5M NaCl組份濃度： 5mol/L NaCl (MW：58.5)配制量： 1L 配制方法： 1.準(zhǔn)確稱取氯化鈉292.5g，置于1L的藍(lán)蓋瓶中。 2.用去離子水溶解并稀釋至1L。3.高溫高壓滅菌后，常溫保存。50% 甘油組分濃度： 50%(V/V) glycerol配制量： 100ml配制方法: 1. 量取下列試劑，置于250ml藍(lán)蓋瓶 中：100% glycerol 50ml 2.加入50ml去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?.高溫高壓滅菌，4保存。 4.使用時(shí)，到超凈臺分裝。2M CaCl2 組份

4、濃度：2mol/L CaCl2 (MW：110.98)配制量： 50ml 配制方法: 1.準(zhǔn)確稱取氯化鈣4.4g于50ml的conical tube中。 2.用去離子水溶解并稀釋至500ml，用0.22m濾膜過濾除菌濾膜過濾除菌到進(jìn)口的conical tube。3.貯存于4。2M MgSO4組份濃度： 2mol/L MgSO4 (MW：120.37)配制量： 50ml 配制方法： 1.準(zhǔn)確稱取硫酸鎂 4.8g于50ml的conical tube中。 2.用去離子水溶解并稀釋至50ml，用0.22m濾膜過濾除菌到進(jìn)口的conical tube。 3.貯存于43 M NaOAc（pH5.2） 組份

5、濃度: 3mol/L CH3COONa（MW:136）配制量: 100mL 配制方法： 1.稱取40.8g NaOAc3H2O置于200mL藍(lán)蓋瓶中，2.加入約40mL 的去離子水?dāng)嚢枞芙?.加入冰乙酸調(diào)節(jié)pH值至5.2。 4.加入去離子水將溶液定容至100mL。 5.高溫高壓滅菌后，室溫保存。3 M KOAc組份濃度: 3mol/L CH3COOK（MW:98）配制量: 100mL 配制方法：在60ml5mol/L乙酸鉀溶液中加入11.5ml冰乙酸和28.5ml;水，即成鉀濃度為3mol/L而乙酸根濃度為5mol/L的溶液。1M Na2SO4組份濃度: 1mol/L （MW: 142.04）

6、配制量: 500mL 配制方法： 1.稱取71.02g置于500mL藍(lán)蓋瓶中，2.加入去離子水將溶液定容至500mL。 3.室溫保存。HEPES1M HEPES：配制量: 100mL 配制方法：1、將23.8gHEPES溶于約90ml的水中，用NaOH調(diào)pH（6.8-8.2），然后用水定容至100ml。2、如不想加入OH- ，可以配200ml HEPES和200ml HEPES sodium salt ，將HEPES sodium salt加入200ml HEPES調(diào)至所需PH。注意：一般長晶體用的HEPES需用后一種方法配制，配一般buffer則可用第一種方法配。50% PEG（聚乙二醇）有

7、分子量400，1000，2000，4000，6000，10000配制量: 500mL 配制方法：稱取250g PEG加入500ml藍(lán)蓋瓶，加水至500ml，置于磁力攪拌器上充分?jǐn)嚢?，完全溶解后，用NALGENE過濾器抽濾，抽濾后用50ml滅菌離心管分裝，存放在-20底層。20% Glucose（葡萄糖）組份濃度：20% (W/V) Glucose配制量：100 ml配制方法：1. 稱取20g Glucose置于150ml的廣口試劑杯中，加入去離子水到100ml后，攪拌溶解。2. 高溫高壓滅菌后，4C保存。100 mM ATP組份濃度：100 mM ATP配制量：20 ml配制方法：1. 稱取1

8、21 mg Na2ATP3H2O，加入到50 ml塑料離心管內(nèi)。2. 加20 ml的25 mM Tris-HCl（pH8.0)，攪拌溶解。3. 適量分成小份后，-20保存。培養(yǎng)基2YT 液體培養(yǎng)基放置：NaCl、蛋白胨、酵母粉置于放電子天平的實(shí)驗(yàn)桌上層或在試劑柜底層配方及配法： 500ml 1L 2LNaCl 2.5g 5g 10g蛋白胨（TRYPTONE） 8g 16g 32g酵母粉（YEAST EXTRACT） 5g 10g 20g注意：在通風(fēng)櫥內(nèi)稱量，防止粉末飛起一般用2L三角瓶配2L培養(yǎng)基搖勻溶解后分裝成每瓶500ml。裝好瓶的液體培養(yǎng)基加塞并用錫箔紙包好，121C高溫高壓滅菌。配50

9、ml或100ml 2YT 液體培養(yǎng)基時(shí)，先用2L瓶配好所需總量，完全溶解后分裝。2YT 固體培養(yǎng)基放置：Agar置于放電子天平的實(shí)驗(yàn)桌上層配方及配法：取三個(gè)500ml 三角瓶，各加5g Agar（鷺?。?，將配好的1L 2YT 液體培養(yǎng)基均分成三分加到三個(gè)500ml 三角瓶中，用錫箔紙包好，121C高溫高壓滅菌。（不需加塞，因?yàn)榧尤蠓挪贿M(jìn)微波爐）抗生素Amp-氨芐青霉素（鈉鹽）放置：置于4C冰箱配方及配法：配成200mg/ml的1000*溶液儲存(40g溶于200ml蒸餾水中)，溶解后在超凈臺用注射器過濾滅菌分裝，置于-20C冰箱第二層，以1*的終濃度（200ug/ml）加入培養(yǎng)基。Kan-卡

10、那霉素（硫酸根）放置：置于試劑柜配方及配法：配成20mg/ml的1000*溶液儲存(4g溶于200ml蒸餾水中)，溶解后在超凈臺用注射器過濾滅菌分裝，置于-20C冰箱第二層，以1*的終濃度（20ug/ml）加入培養(yǎng)基。Chl-氯霉素放置：置于試劑柜配方及配法：配成34mg/ml的1000*溶液儲存(6.8g溶于200ml 100%乙醇中)，溶解后在超凈臺用注射器過濾滅菌分裝，置于-20C冰箱第二層，以1*的終濃度（34ug/ml）加入培養(yǎng)基,注意：如接種到5ml培養(yǎng)基搖不起來，可將Chl用量減半蛋白表達(dá)純化相關(guān)：IPTG（異丙基硫代-D-半乳糖苷）放置：置于-20C冰箱頂層配方及配法：1M I

11、PTG的配制：溶解23.8g IPTG 溶于水中，定容至100 mL溶解后在超凈臺用注射器過濾滅菌分裝，置于-20C冰箱第二層，一般使用濃度為0.25uM,即500ml培養(yǎng)基加125ul，注意：個(gè)別蛋白表達(dá)提高IPTG濃度能提高表達(dá)量DTT（二硫蘇糖醇）放置：置于-20C冰箱頂層配方及配法：1M DTT的配制：溶解7.7g IPTG 于50 mL水中，溶解后分裝成1。5ml管，置于-20C冰箱第二層使用濃度為1-10mMPepstantin（胃蛋白酶抑制劑）放置：置于-20C冰箱頂層，25mg1mg/mL pepstantin的配制(1000X)：分子量 685.89配制 直接加25ml 異丙

12、醇，蓋緊蓋搖勻，分裝成小份貯存于20工作濃度 1ug/mLLeupeptin（亮抑酶肽）放置：置于-20C冰箱頂層，25mg1mg/mL leupeptin的配制(1000X)：分子量 475.60配制： 直接加20 ml水，蓋緊蓋搖勻，分裝成小份貯存于20工作濃度: 1ug/mLL-glutathione reduced（還原型谷胱甘肽）放置：置于4C冰箱200 mM glutathione reduced：分子量 307.33配制:稱取3.07g glutathione reduced溶解于50 ml的水中，分裝成小份貯存于20。工作濃度: 10 mM-OG放置：置于-20C冰箱Stock

13、濃度： 100mM使用濃度： 12mMThrombin放置：置于-20C冰箱配制溶液： 50 mM sodium citrate, pH 6.5, 200 mM NaCl, 0.1% PEG-10000, 50% glycerol單位：0.51mlSpermidine（亞精胺）100 mM Spermidine的配制：分子量 254.6配制 稱取0.077g Spermidine溶解于3 ml的水中，分裝成300ul貯存于20。Spermine（精胺）100 mM Spermine的配制：分子量 348.2配制 稱取0.105g Spermine溶解于3 ml的水中，分裝成300ul貯存于20

14、。Imidazole（咪唑）放置：試劑柜1M Imidazole 配制：分子量:68.08配制：稱取34.04g Imidazole溶解于450 ml的水中，用HCl調(diào)PH至7.5，補(bǔ)足水至500mlPMSF（苯甲基磺酰氟）放置：試劑柜0.1M PMSF的配制：分子量 174.19保存 室溫保存，配成PMSF溶液后需-20保存。配制 溶解0.87g的PMSF于足量的異丙醇中，定容到50ml。分成小份貯存于20。 工作濃度 1mM注意：有毒，對呼吸道粘膜、眼睛和皮膚有很強(qiáng)的危害性，配制時(shí)請?jiān)谕L(fēng)櫥進(jìn)行，并穿實(shí)驗(yàn)服及戴一次性手套。GST lysis buffer: 50 mM Tris (pH8.

15、0) 500 mM NaCl 10% Glycerol 5 mM EDTA 5 mM -ME/DTT protease inhibitors(1 mM PMSF, 1000xpepstantin, 1000xleupeptin)1L配方：1M Tris (pH8.0) 50ml5M NaCl 100ml100% Glycerol 100ml0.5M EDTA 10ml14.4M -ME 357ul加水至1L 保存 4保存 注意 protease inhibitors及DTT須現(xiàn)用現(xiàn)加。GST Elution Buffer： 保存 現(xiàn)配現(xiàn)用配制 取一定體積的 200 mM glutathione

16、 reduced，在GST lysis buffer中稀釋20倍，此時(shí)濃度即為（10 mM glutathione reduced） GST Elution Buffer。注意：protease inhibitors及DTT須現(xiàn)用現(xiàn)加。His-tag lysis buffer: 50 mM Tris (pH8.0) 500 mM NaCl 10% Glycerol 20mM Imidazole 5 mM -ME protease inhibitors(1 mM PMSF, 1000xpepstantin, 1000xleupeptin)1L配方：1M Tris (pH8.0) 50ml5M N

17、aCl 100ml100% Glycerol 100ml1M Imidazole 20ml14.4M -ME 357ul加水至1L 保存 4保存 注意 protease inhibitors須現(xiàn)用現(xiàn)加。His-tag Elution Buffer：保存：4冰箱配制方法：分4種，Imidazole 濃度分別為50mM，100mM，200mM，500mM，50ml Elution Buffer加入1M Imidazole量分別為：2.5ml，5ml，10ml，25ml，其他成分與His-tag lysis buffer一樣，50ml配方：1M Tris (pH8.0) 2.5ml5M NaCl 5

18、ml100% Glycerol 5ml14.4M -ME 17.85ul注意 ：protease inhibitors須現(xiàn)用現(xiàn)加。HiTrapTM SP/Q FF （Q 使用Tris； S 使用HEPES）Buffer A 20mM Tris 8.0 2mM EDTA 2mM -MEBuffer B 20mM Tris 8.0 2mM EDTA 2mM -ME 1.5M NaCl1L配方：Buffer A1M Tris (pH8.0) 20ml0.5M EDTA 4ml14.4M -ME 142.85ul加水至1LBuffer B1M Tris (pH8.0) 20ml0.5M EDTA 4m

19、l14.4M -ME 142.85ul5M NaCl 333ml 加水至1L保存：貯存于4層析柜 滅菌方式：超濾滅菌，滅菌后抽氣處理HIC Buffer A 40mM Tris 8.0 3mM -ME1.5M ammonium sulfate Buffer B 40mM Tris 8.0 3mM -ME500ml配方：Buffer A1M Tris (pH8.0) 20ml14.4M -ME 107.14ul ammonium sulfate 99.1g 加水至500mlBuffer B1M Tris (pH8.0) 20ml14.4M -ME 107.14ul 加水至500mlGel Fil

20、tration20 mM Tris (pH8.0) 100 mM NaCl 300 mM ammonium acetate 1 mM EDTA 2 mM -ME1L配方：1M Tris (pH8.0) 20ml5M NaCl 20mlammonium acetate 23.12g0.5M EDTA 2ml14.4M -ME 142.86ul加水至1L10TE Buffer（pH 8.0）組份濃度: 100 mM Tris-HCl，10 mM EDTA 配制量: 1L 配置方法 1. 量取下列溶液，置于1L藍(lán)蓋瓶中。 1.0M Tris-HCl Buffer（pH8.0） 100mL 0.5M

21、EDTA（pH8.0） 20mL 2. 向藍(lán)蓋瓶中加入約800mL的去離子水，均勻混合。 3. 將溶液定容至1L，高溫高壓滅菌。 4. 室溫保存半年。注意：此為貯存液，使用時(shí)稀釋100倍，用于PCR純化和質(zhì)粒提取后產(chǎn)物保存。高效感受態(tài)轉(zhuǎn)化緩沖液組分濃度：55 mM MnCl2 15 mM CaCl2 250 mM KCl 10 mM PIPE（PH6.7）1L配方：MnCl2-4H2O 10.88gCaCl2-H2O 2.2gKCl 18.65g0.5M PIPES（PH6.7） 10ml加水至1L0.5M PIPES （PH 6.7）配制量：10 ml（MW:302.4）配制方法：1. 稱取

22、1.5g，加入到15 ml塑料離心管內(nèi)。2. 加8 ml的水，攪拌溶解。3. 用5M KOH 調(diào)PH至6.74. 0.22um濾膜過濾，-20 保存。電泳相關(guān)1.5M Tris-HCl（pH8.8）組份濃度: 1.5 mol/L Tris-HCl 配制量: 1L 配制方法: 1.稱取181.7g的Tris-base（MW：121.14）置于1L藍(lán)蓋瓶中。 2. 加入約800mL的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?3. 用濃鹽酸調(diào)pH值至8.8。 4. 將溶液定容至1L。 5. 高溫高壓滅菌后，室溫保存半年。1.0M Tris-HCl（pH8.0）組分濃度: 1.0 mol/L Tris-HCL配制量:

23、 1L配制方法: 1.稱取121g的Tris-base（MW：121.14）于1L藍(lán)蓋瓶中，2.加入900ml的去離子水，充分?jǐn)嚢杈鶆颍?. 用濃鹽酸調(diào)pH值至8.0，每升約需40-50ml濃鹽酸，用水調(diào)整終體積至1L。如需其他PH的Tris，根據(jù)所要求的pH（25下）加一定量的濃鹽酸。4.高溫高壓滅菌后，室溫保存半年。注意：測PH時(shí)需使用溫度補(bǔ)償電極，因?yàn)闇囟茸兓瘜ris的PH有很大影響。濃鹽酸的體積（ml）pH8.6142128.53846566671.3769.08.88.68.48.28.07.87.67.47.2 10SDS組份濃度: 10（W/V）SDS 配制量： 500mL 配

24、置方法 1.稱量50g高純度的SDS置于500mL藍(lán)蓋瓶中，加入約400mL的去離子水，68加熱溶解。 2.滴加數(shù)滴濃鹽酸調(diào)節(jié)pH值至7.2。 3.將溶液定容至500mL后，室溫保存。注意： SDS為固體粉末狀，吸入會對肺造成損害，應(yīng)在通風(fēng)櫥中稱取SDS。溶解時(shí)，SDS易產(chǎn)生氣泡，不要劇烈攪拌。30APS （過硫酸銨）組份濃度： 30（W/V）APS配制量： 1mL 配制方法： 1.準(zhǔn)確稱取0.3g APS。 2.加入0.8mL的去離子水溶解。 3.貯存于4。 注意：30的過硫酸胺溶液在4保存時(shí)間可使用2周左右，超過期限會失去催化作用。10SDS-PAGE Running Buffer配制量：

25、 1L配制方法：1稱量下列試劑,置于1L藍(lán)蓋瓶中。Tris 20gGlycine 144 g10% SDS 100 ml2加入約700 ml的去離子水?dāng)嚢枞芙狻?定容至1L，混勻，室溫保存。10NATIVE-PAGE Running Buffer（PH8.5）配制量： 1L配制方法：1稱量下列試劑,置于1L藍(lán)蓋瓶中。Tris 30gGlycine 142.7 gEDTA 3.92g2加入約800 ml的去離子水?dāng)嚢枞芙狻?定容至1L，混勻，室溫保存。10Tricine SDS-PAGE Running Buffer 10Anode (Lower) buffer 外層緩沖液 (2M Tris/c

26、l, PH8.9)Tris 121.1gWater make up to 500mlPH to 8.9 with HCL10Cathode (Upper) buffer 內(nèi)層緩沖液 (1M Tris/cl, 1M Tricine, 1% SDS, PH 8.25)Tris 60.6gTricine 89.6gSDS 5gWater make up to 500ml注:不用調(diào)PH值使用時(shí)稀釋至1X1Tricine SDS-PAGE Gel Buffer（3.0 M Tris, pH 8.45/0.3% SDS）Tris 181.7g10%SDS 15mlWater make up to 500m

27、lPH to 8.45 with HCL15% Tricine分離膠 2 ml separating acrylamide 2 ml gel buffer 2 ml 50% glycerol 50 ul 10% APS5 ul TEMED10% Tricine分離膠1.22 ml separating acrylamide 2 ml gel buffer 2 ml 50% glycerol 0.78 ml water50 ul 10% APS 5 ul TEMED Tricine濃縮膠0.25 ml stacking acrylamide 0.75 ml gel buffer 2.0 ml water 20 ul 10% APS 2 ul TEMED50X TAE Buffer （pH8.5）組分濃度：2M