1、實(shí)驗(yàn)6 -淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的檢測(cè),學(xué)前思考： 1、蛋白質(zhì)初步水解，徹底水解，氧化分解的產(chǎn)物分別是什么？,2、淀粉在-淀粉酶催化下初步水解的產(chǎn)物？寫出淀粉逐步水解的酶和相關(guān)產(chǎn)物。,3、實(shí)驗(yàn)室導(dǎo)師讓某同學(xué)通過淀粉和-淀粉酶溶液，每天制備一些純凈的糊精，會(huì)遇到什么問題？,一、基礎(chǔ)知識(shí),固定化酶：是將酶用物理或化學(xué)的方法固定在某種介質(zhì)上，使之成為不溶于水而又有酶活性的制劑。,優(yōu)點(diǎn)：固定化酶固定在一定的空間范圍內(nèi)，可以重復(fù)使用，且能及時(shí)與產(chǎn)物分離。,酶固定化的常用方法,吸附法 (1)物理吸附法 (2)離子交換法,包埋法 將酶蛋白包埋在凝膠交聯(lián)后的“格子”中。,交聯(lián)法 酶蛋白的氨基以戊二醛與載

2、體相連。,共價(jià)偶聯(lián)法 酶蛋白的一些基團(tuán)與載體共價(jià)結(jié)合。,1. 吸附法 (1)物理吸附法：將酶蛋白分子吸附在惰性載體上。惰性載體指對(duì)蛋白質(zhì)有高度吸附能力的活性炭、石英砂等。 (2)離子交換法：酶蛋白帶有電荷的基團(tuán)與離子交換劑形成離子鍵。,二、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容 1、用吸附法將-淀粉酶固定在石英砂上。,三、設(shè)備及用品 塑料注射器、燒杯、滴管、自行車用氣門心和夾子、注射器架、試管或微量離心管等。,四、實(shí)驗(yàn)材料 1、 -淀粉酶，石英砂， 2、可溶性淀粉溶液 3、5mmol/LKI-I2溶液,五、實(shí)驗(yàn)原理,一定濃度的淀粉溶液經(jīng)過固定酶柱后，可使淀粉水解成糊精。用淀粉指示劑溶液測(cè)試，流出物呈紅色，表明水解產(chǎn)物糊精生

3、成。,淀粉,糊精,麥芽糖,葡萄糖,遇碘顯藍(lán)色,遇碘顯紅色,遇碘不顯色,-淀粉酶,-淀粉酶,糖化淀粉酶,六、實(shí)驗(yàn)步驟,5mg -淀粉酶+4mL蒸餾水+5g石英砂（攪拌30min）,裝入下端接有氣門心并用夾子封住的注射器中,10倍體積蒸餾水洗滌注射器以除去未吸附的淀粉酶，流速1mL/min,用滴管滴加淀粉溶液，以0.3mL/min流速過柱,流出5mL溶液后接收0.5mL流出液，加12滴過柱KI-I2溶液，觀察顏色,10倍體積蒸餾水洗滌注射器4保存,為什么要控制流速？,1 2 3 4,1、2mL水+12滴KI-I2溶液 、2mL淀粉液+12滴KI-I2溶液 、2mL淀粉濾液+12滴KI-I2溶液 、2mL淀粉濾液+12滴KI-I2溶液+稀釋1倍,七、實(shí)驗(yàn)結(jié)果,2.冰箱保存后的固定化酶柱，重復(fù)實(shí)驗(yàn)，是否有相同結(jié)果？,1.如何證明洗滌固定化酶柱的流出液中沒有淀粉酶？,八、問題討論,將洗滌流出液滴加到一定量的可溶性淀粉溶液中，用手握住試管增加溫度，幾分鐘后滴加碘液，如果仍顯藍(lán)色，說明通過洗滌已經(jīng)除去未吸附