1、高效毛細管電泳及其在農(nóng)藥分析中的應用,徐娟 理學院 030360002,一、問題的提出,我國現(xiàn)有中藥種類已達12807種，其中藥用植物11146種，藥用動物1581種，藥用礦物80種中草藥在保護人民群眾健康方面起著重要作用由于需求量大，野生中草藥遠遠不能滿足市場的需求，目前大部分中草藥都依賴人工栽培全國藥材種植面積超過580萬畝，藥材生產(chǎn)基地600多個，常年栽培的藥材達200余種為了保障種植藥材的產(chǎn)量，藥農(nóng)不得不頻繁地使用各種農(nóng)藥農(nóng)藥殘留不僅影響群眾的健康，還影響我國名貴藥材的出口創(chuàng)匯如80年代末云南省出口日本的三七大量退貨，目前我國人參在海外市場日益受韓國高麗參的排擠等，都有農(nóng)藥殘留超標的原

2、因,二、CE的裝置及基本原理,毛細管電泳儀在實驗室中,三、CE的特點,高質(zhì)量靈敏度：常用紫外檢測器的檢測限可達10-1310-15mol，激光誘導熒光檢測器(LIF)則達10-19-10-21。 高分辨率：每米理論塔板數(shù)為幾十萬，高者可達幾百萬乃至幾千萬。 高速度：許多分析可在10分鐘內(nèi)完成，有的可在60秒內(nèi)完成。 所需樣品少：只需納升(10-9升)的進樣量。 成本低：只需少量(幾毫升)的流動相和低廉的毛細管。 應用范圍廣：除分離生物大分子（肽、蛋白、DNA和糖等）外，還可用于小分子(氨基酸、藥物等)及離子(無機及有機離子等)，甚至可分離各種顆粒(如硅膠顆粒等)。,：三高二少一廣,四、CE的分

3、離模式,1 毛細管區(qū)帶電泳(capilary zone electrophoresis,CZE) CZE的分離機理是基于各被分離物質(zhì)的凈電荷與質(zhì)量比(荷質(zhì)比)間的差異。應用范圍包括氨基酸、肽、蛋白、離子分析、對映體拆分和很多其它離子態(tài)物質(zhì)的分析。 2 膠束電動色譜(micellar electrokinetic capillary chromatography，MECC) MECC是唯一既能分離中性溶質(zhì)又能分離帶電組分的CE模式。采用表面活性劑(如十二烷基硫酸鈉，SDS)在操作緩沖液內(nèi)形成有一疏水內(nèi)核、外部帶負電的膠束相。利用溶質(zhì)具有不同的疏水性，在水相和膠束相(準固定相)間分配的差異得以分離

4、。主要用于小分子、中性化合物，手性對映體、各種藥物等。,3毛細管凝膠電泳(capillary gel electrophoresis，CGE) CGE是將凝膠移到毛細管中作支持物進行的電泳。不同體積的溶質(zhì)分子在起“分子篩”作用的凝膠中電泳分離。常用于蛋白質(zhì)、寡聚核苷酸、RNA、DNA片斷分離和測序及PCR產(chǎn)物分析?，F(xiàn)在還有采用無膠篩分方法，同樣可達分離目的。 4毛細管等電聚焦(capillary isoelectric focusing，CIEF) CIEF是用兩性電解質(zhì)在毛細管內(nèi)建立pH梯度，使各種具有不同等電點的蛋白質(zhì)在電場作用下遷移到等電點的位置，形成一非常窄的聚焦區(qū)帶。已成功用于測定蛋

5、白質(zhì)等電點，分離異構(gòu)體或用其它方法難于分離的蛋白質(zhì)。,5毛細管等速電泳(capillary isotachophoresis ，CITP) CITP采用先導電解質(zhì)和尾隨電解質(zhì)，使溶質(zhì)按其電泳淌度不同得以分離，是一種較老的方式?，F(xiàn)在可作為柱前濃縮方法用于富集樣品。 6毛細管電色譜(capillary electrochromatography，CEC) CEC是將HPLC中眾多的固定相微粒填充到毛細管中，以樣品與固定相之間的相互作用為分離機制，以電滲流為流動相驅(qū)動力的色譜過程。雖然柱效有所下降，但增加了選擇性，是一種有發(fā)展前景的模式。,五、 在農(nóng)藥分析中的應用,1. 定量分析研究 2. 在農(nóng)藥制

6、劑和原藥中有效成分的測定 3. 在農(nóng)藥中雜質(zhì)的分離和測定 4. 手性農(nóng)藥分析,六、應用實例 毛細管電泳法研究提取劑對黃連黃柏共煎劑中生物堿含量的影響,樣品制備 粉碎過篩浸泡回流用水提取提取劑提取 2. 電泳分析 穩(wěn)定儀器確定檢測波長選擇緩沖溶液電泳檢測,3、結(jié)果與分析,成分分析,按照圖1b中所示得試驗條件，采用加入法測定小檗堿等得溶液電泳圖，結(jié)果見圖2。1至6峰對應的化合物分別為黃連堿、小菜堿、麥小菜堿、巴馬汀、藥根堿、小菜紅堿。與圖1b的結(jié)果相比較，黃連。黃柏配伍后共煎浸膏中的主要成分為黃連堿、小果堿、麥小菜堿、巴馬汀和藥根堿。,線性關系,配制一系列小菜堿和巴馬汀的標準混合镕液，在同一條件下測定電泳圖，以峰面積對濃度作圖，結(jié)果小菜堿和巴馬汀分別在15.065.0mgL，12.550.0mg/L之間有良好的線性關系，回歸方程為： 小檗堿：y1455.3C2134 r09984 (1) 巴馬?。簓79763C十34622 r09995 (2),八、結(jié)束語,CE作為一種新的分離手段，在農(nóng)藥分析中有廣泛的應用前景。它的微量，解決了中藥提取的困難。它的高效，使中藥多種成分的同時分離成為可能，它的快捷提高了分析效率。與MS聯(lián)用，在定量的同時對每種成分的結(jié)構(gòu)進行了解析。另外，CE