1、.,空氣中微生物數(shù)量的檢測(cè),2011.11.21,.,一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?二、實(shí)驗(yàn)原理 三、實(shí)驗(yàn)步驟 四、結(jié)果計(jì)算 五、結(jié)果評(píng)價(jià),.,一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮鸵饬x,掌握檢測(cè)和計(jì)數(shù)空氣中微生物的基本方法 掌握無(wú)菌操作技術(shù)和微生物實(shí)驗(yàn)的基本操作 學(xué)習(xí)對(duì)室內(nèi)空氣進(jìn)行初步的微生物學(xué)評(píng)價(jià),.,實(shí)驗(yàn)意義,空氣中細(xì)菌總數(shù)常作為室內(nèi)空氣質(zhì)量和空氣受到微生物性污染程度的指標(biāo)。 用于醫(yī)院、公共場(chǎng)所等空氣質(zhì)量的評(píng)價(jià),.,二、實(shí)驗(yàn)原理,1：自然沉降法（沉降平板法） 根據(jù)空氣中攜有微生物氣溶膠粒子在地心引力的作用下，以垂直的自然方式沉降到瓊脂培養(yǎng)基上，經(jīng)過(guò)24h，37溫箱培養(yǎng)計(jì)算出菌落數(shù)。 特點(diǎn)：此法簡(jiǎn)單方便，但穩(wěn)定性差，直徑15m的

2、粒子在5min中內(nèi)沉降距離有限，使小粒子采集率較低。,.,2.撞擊法 Anderson采樣器原理：多級(jí)篩孔型采樣器 由6個(gè)帶有微細(xì)針孔的金屬撞擊盤(pán)構(gòu)成，盤(pán)下放置有培養(yǎng)基的平皿，每個(gè)圓盤(pán)上有400個(gè)環(huán)形排列小孔，由上到下孔徑逐漸減小。氣流從頂罩進(jìn)第一級(jí)，較小的粒子會(huì)由于動(dòng)量不足隨氣流繞過(guò)平皿進(jìn)入下一級(jí)。經(jīng)過(guò)6次撞擊后，可把絕大部分微生物采下。,.,Anderson采樣器（FA-1型）,.,各級(jí)撞擊盤(pán)捕獲粒子范圍及孔徑大小,：7m 孔徑1.18 ：4.77m 孔徑0.91 ：3.34.7m 孔徑0.71 ：2.13.3m 孔徑0.53 ：1.12.1m 孔徑0.34 ：0.651.1m 孔徑0.2

3、5,.,各種粒徑大小的菌落易沉降的部位及意義,.,特點(diǎn) a. 采集粒譜范圍廣，一般在0.220m以上； b. 采樣效率高，逃逸少 c. 微生物存活率高,.,3.濾過(guò)法：使一定量的空氣通過(guò)吸附劑（滅菌生理鹽水），然后培養(yǎng)吸附劑中的細(xì)菌，計(jì)算出菌落數(shù)。 4.液體撞擊法：和固體撞擊式采樣器一樣，是利用噴射氣流方式將空氣中的微生物粒子采集在小體積的液體中，適用于高濃度的空氣微生物采樣。,.,三、實(shí)驗(yàn)步驟,1.自然沉降法 配制瓊脂培養(yǎng)基（已做） 培養(yǎng)皿暴露空氣中5min/10min 37溫箱培養(yǎng)24h 計(jì)數(shù)和結(jié)果評(píng)價(jià),.,采樣布點(diǎn)原則 a. 根據(jù)室內(nèi)面積進(jìn)行對(duì)角線或者梅花式均勻布點(diǎn)，小于50m2的房間應(yīng)

4、設(shè)3個(gè)點(diǎn)，50100m2設(shè)35個(gè)；100m2以上至少5個(gè)點(diǎn) b. 采樣高度 和人呼吸高度一致（1.21.5m） c. 采樣點(diǎn)應(yīng)避開(kāi)風(fēng)口，離墻壁距離應(yīng)大于0.5m,采樣時(shí)關(guān)閉門(mén)窗，減少人員走動(dòng),.,2.撞擊法 調(diào)整采樣器高度為呼吸帶高度于1.21.5m 將平皿依次放入圓盤(pán)，固定并做好標(biāo)記 接通電源，開(kāi)打電源開(kāi)關(guān)，調(diào)整流量到28.3L/min 采樣5min/10min后，取出平皿，經(jīng)過(guò)24h，37培養(yǎng)，計(jì)數(shù),.,分組： 4個(gè)同學(xué)一組，分別采用自然沉降法和Anderson采樣器，采樣時(shí)間設(shè)為5min和10min，比較兩種采樣方法的結(jié)果。 注意事項(xiàng)： 整個(gè)過(guò)程注意無(wú)菌操作。,.,四、結(jié)果計(jì)算,1.自然

5、沉降法 根據(jù)奧梅梁斯基建議，面積為100cm2的平板培養(yǎng)基，暴露于空氣中5min，于37溫箱培養(yǎng)24h后所生長(zhǎng)的菌落數(shù)相當(dāng)于10L空氣中的細(xì)菌數(shù) 空氣中細(xì)菌數(shù)（cfu/m 3） =1000(100/A) (5/t) (1/10) N = 50000N/(AT) A-平板面積（cm2） T-暴露時(shí)間（min） N-平均菌落數(shù)（cfu/皿）,.,2.撞擊法 空氣含菌量(cfu/m3)=六級(jí)采樣板的總菌數(shù)（cfu）28.3（L/min）采樣時(shí)間（min） 1000 計(jì)算空氣中微生物大小分布： 各級(jí)微生物粒子數(shù)=該級(jí)菌落數(shù)/六級(jí)總菌落數(shù),.,五、結(jié)果評(píng)價(jià),空氣微生物衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)，是以細(xì)菌作為標(biāo)準(zhǔn) 細(xì)菌選用

6、的指標(biāo)是菌落總數(shù)，表示方法為cfu/皿或者cfu/m3 我國(guó)現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)是根據(jù)空氣中實(shí)測(cè)細(xì)菌數(shù)和流行病學(xué)觀察結(jié)果為主要依據(jù)。,.,室內(nèi)空氣質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn) （GB/T18883-2002） 2500cfu/m3,.,公共場(chǎng)所空氣衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn),圖書(shū)館、閱覽室的空氣衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)：空氣細(xì)菌總數(shù)2500cfu/m3（撞擊式），或30個(gè)/皿（沉降式） 娛樂(lè)場(chǎng)所的衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)：空氣4000cfu/m3 幼托機(jī)構(gòu)室內(nèi)衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)：空氣細(xì)菌菌落數(shù)應(yīng)2500cfu/cm3 （沉降法）,.,醫(yī)院消毒衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)（GB159821995）,.,1.對(duì)兩種方法結(jié)果的比較？ 2.根據(jù)Anderson采樣器的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，計(jì)算空氣中微生物大小分布：以各級(jí)的菌落數(shù)占六級(jí)總菌落數(shù)的百分比表示。,.,兩種方法比較,1. 沉降法測(cè)定的菌落總數(shù)要多，在實(shí)驗(yàn)條件下比撞擊法多24.6。 2. 小顆粒含菌粒子在空氣中穩(wěn)定，不易沉降或者漂浮，撞擊法比沉降法更易采集到小粒子。 3. 沉降法結(jié)果不穩(wěn)定，容易受采樣條件的影響。,.,影響因素,1. 溫度對(duì)細(xì)菌數(shù)量