1、激光共聚焦顯微鏡FV1000(倒置顯微鏡IX81) 簡易使用說明書開啟系統(tǒng)1.打開計算機(jī).2.打開激光器.(打開鑰匙開關(guān).)2-1.多線氬離子 (458 nm, 488 nm, 514 nm) ON2-2氦氖綠 (543 nm) ON2-3氦氖紅 (633 nm) ON52313.打開汞燈電源開關(guān).4.登陸 Windows XP系統(tǒng).User ID:AdministratorPassword: fluoview5.雙擊快捷方式：打開 FV10-ASW應(yīng)用軟件.User ID: Administrator Password: Administrator* 系統(tǒng)軟件的啟動需要等待一定時間.*DIC

2、 元件1324手控面板用此旋鈕進(jìn)行微分干涉法對比度的調(diào)節(jié).顯微鏡鏡下觀察微分干涉差觀察1.使用手控面板選擇物鏡. (參照Memo.)2.插入起偏鏡.3.插入微分干涉滑塊.4.點擊FV10-ASW軟件中的圖標(biāo).Note1:使用TD滑塊控制鹵素?zé)舻墓鈴?qiáng)；Note2:檢查濾色片轉(zhuǎn)盤的位置是否為“6.DICT”，如果不是，用手柄按下DICT圖標(biāo)5.標(biāo)本聚焦Memo按照7-1的操作轉(zhuǎn)換物鏡的倍率之后，對：物鏡各物鏡對應(yīng)的DIC元件*進(jìn)行操作.顯微鏡鏡下觀察熒光觀察123Hand switchNote 2Notes 1 & 3Memo關(guān)于熒光濾色片NIBA：藍(lán)色激發(fā)/綠色熒光（例：FITC、EGFP等）W

3、IG ：綠色激發(fā)/紅色熒光（例：Rhodamine、DsRed等）1.使用手控面板選擇物鏡.2.點擊FV10-ASW軟件中的圖標(biāo).3.使用手控面板選擇熒光濾色片.(參照Memo.)4.標(biāo)本聚焦.激光輸出的調(diào)節(jié)明場觀察(顯微鏡鏡下觀察) 熒光觀察(顯微鏡鏡下觀察) 掃描的按鈕選擇XYZ,XYT或XYL每個通道的調(diào)節(jié)共聚焦的孔徑大小鹵素?zé)舻墓鈴?qiáng)調(diào)節(jié)Kalman方式染料選擇光路圖取圖條件的保存調(diào)出取圖條件TwinScanner 設(shè)定圖像的拇指索引圖像顯示窗口內(nèi)存中所顯示的文件Lambda掃描的設(shè)定物鏡聚焦時間間隔和時間計數(shù)(用于XYT或XT掃描)掃描帶寬選擇掃描模式掃描速獲取單張圖像（XY平面）（熒

4、光圖像）123染料選擇后的顯示界面 例：綠色熒光染色（FITC）1.點擊FV10-ASW軟件中的 按鈕關(guān)閉汞燈快門 . 同時, 點擊按鈕關(guān)閉鹵素?zé)艨扉T.2.點擊染料選擇按鈕. 在染料列表中, 雙擊用于觀察的熒光染料.*取消當(dāng)前熒光染料，選擇另外熒光染料，要雙擊已指定的熒光染料，并重復(fù)步驟2.3.點擊Apply按鈕.(關(guān)閉染料選擇面板可以用Close按鈕.)Memo掃描控制面板:連續(xù)掃描:停止掃描:快速掃描(隔行掃描)4564.點擊XY Repeat按鈕開始掃描.5.調(diào)節(jié)綠色FITC)(圖像.(圖像調(diào)節(jié)的略述如下. 更多的信息,參照附錄1.)6.點擊Stop按鈕停止掃描. (參照Memo.)1探

5、測器的靈敏度調(diào)節(jié)HV()2共聚焦的孔徑大小調(diào)節(jié)(C.A.)3激光輸出的調(diào)節(jié)(Laser)123調(diào)節(jié)方法(例: HV調(diào)節(jié)):點擊滑塊, HV直接提高(或降低) 到指定的位置.點擊此按鈕或者使用鼠標(biāo)轉(zhuǎn)輪進(jìn)行微調(diào).圖像調(diào)節(jié)略述789107.選擇AutoHV, 并選擇掃描速度.* 隨著掃描速度變慢, 在保持同等亮度的前提下, 背景噪音就會消除.(也可以使用Kalman accumulation方式. 更多的信息，參照附錄2.)8.點擊XY按鈕取得一幅圖像.9.點擊SeriesDone按鈕, “2D View-LiveImage(x)” 2D界面就出現(xiàn).10.保存該幅圖像:右擊圖像管理器中顯示的圖像圖標(biāo)

6、，選擇另存為保存該幅圖像.MemoFV10-ASW專用的圖形格式OIF格式:創(chuàng)建“一個含(16-bit TIFF)的圖像”和“一個附屬文件,”不能單獨分割.OIB格式:創(chuàng)建單個的OIF格式的文件, 方便進(jìn)行移動和進(jìn)行其它的操作.(保存為“xml”類型是 FV10-ASW軟件專用的圖像格式.) 同步掃描123染料選擇后的顯示界面1. 點擊FV10-ASW軟件中的按鈕關(guān)閉汞燈快門 . 同時, 點擊按鈕關(guān)閉鹵素?zé)艨扉T.2.點擊染料選擇按鈕. 在染料列表中, 雙擊用于觀察的熒光染料.*取消當(dāng)前熒光染料，選擇另外熒光染料，要雙擊已指定的熒光染料，并重復(fù)步驟2.3.點擊Apply按鈕.(關(guān)閉染料選擇面板可

7、以用Close按鈕.)44.點擊XY Repeat按鈕開始掃描.5.調(diào)節(jié)綠色Alexa(Fluor488)圖像和紅色(Alexa Fluor546)圖像.(圖像調(diào)節(jié)的略述如下. 更多的信息,參照附錄1.)6.點擊Stop按鈕停止掃描. (參照Memo.)56Memo掃描控制面板:連續(xù)掃描:停止掃描:快速掃描(隔行掃描)1探測器的靈敏度調(diào)節(jié)(HV)2共聚焦的孔徑大小調(diào)節(jié))(C.A.3激光輸出的調(diào)節(jié)(Laser) 123調(diào)節(jié)方法(例: HV調(diào)節(jié)):點擊滑塊, HV直接提高(或降低) 到指定的位置.點擊此按鈕或者使用鼠標(biāo)轉(zhuǎn)輪進(jìn)行微調(diào).圖像調(diào)節(jié)略述789107.選擇AutoHV, 并選擇掃描速度.*

8、隨著掃描速度變慢, 在保持同等亮度的前提下, 背景噪音就會消除.(也可以使用Kalman accumulation方式. 更多的信息，參照附錄2.)8.點擊XY按鈕取得一幅圖像.9.點擊SeriesDone按鈕, “2D View-LiveImage(x)” 2D界面就出現(xiàn).10.保存該幅圖像:右擊圖像管理器中顯示的圖像圖標(biāo)，選擇另存為保存該幅圖像.(保存為“xml”類型是 FV10-ASW軟件專用的圖像格式.)MemoFV10-ASW專用的圖形格式OIF格式:創(chuàng)建“一個含(16-bit TIFF)的圖像”和“一個附屬文件,”不能單獨分割.OIB格式:創(chuàng)建單個的OIF格式的文件, 方便進(jìn)行移動

9、和進(jìn)行其它的操作.獲取單張圖像（XY平面）（熒光圖像）123染料選擇后的顯示界面例：綠色熒光（ Alexa 488 ）紅色熒光（ Alexa 546 ）二重染色序列掃描 (這里介紹線序列掃描.)1.點擊FV10-ASW軟件中的按鈕關(guān)閉汞燈快門 . 同時, 點擊按鈕關(guān)閉鹵素?zé)艨扉T.2.點擊染料選擇按鈕. 在染料列表中, 雙擊用于觀察的熒光染料.*取消當(dāng)前熒光染料，選擇另外熒光染料，要雙擊已指定的熒光染料，并重復(fù)步驟2.3.點擊Apply按鈕.(關(guān)閉染料選擇面板可以用Close按鈕.)45674.點擊序列掃描,并選擇線序列方式.5.點擊XY Repeat按鈕開始掃描.6.調(diào)節(jié)綠色(AlexaFlu

10、or488)圖像和紅色(AlexaFluor546)圖像.(圖像調(diào)節(jié)的略述如下. 更多的信息,參照附錄1.)7.點擊Stop按鈕停止掃描. (參照Memo.)1探測器的靈敏度調(diào)節(jié)(HV)2共聚焦的孔徑大小調(diào)節(jié))(C.A.3激光輸出的調(diào)節(jié)Laser) (123調(diào)節(jié)方法(例: HV調(diào)節(jié)):點擊滑塊, HV直接提高(或降低) 到指定的位置.點擊此按鈕或者使用鼠標(biāo)轉(zhuǎn)輪進(jìn)行微調(diào).圖像調(diào)節(jié)略述8910118.選擇AutoHV, 并選擇掃描速度.* 隨著掃描速度變慢, 在保持同等亮度的前提下, 背景噪音就會消除.(也可以使用Kalman accumulation方式. 更多的信息，參照附錄2.)9.點擊XY

11、按鈕取得一幅圖像.10點擊SeriesDone按鈕, “2D View-LiveImage(x)” 2D界面就出現(xiàn).11.保存該幅圖像:右擊圖像管理器中顯示的圖像圖標(biāo)，選擇另存為保存該幅圖像.MemoFV10-ASW專用的圖形格式OIF格式:創(chuàng)建“一個含(16-bit TIFF)的圖像”和“一個附屬文件,”不能單獨分割.OIB格式:創(chuàng)建單個的OIF格式的文件, 方便進(jìn)行移動和進(jìn)行其它的操作.(保存為“xml”類型是 FV10-ASW軟件專用的圖像格式.)(XY平面-單標(biāo)+微分干涉差)1234染料選擇后的顯示界面1. 點擊FV10-ASW軟件中的按鈕關(guān)閉汞燈快門 . 同時, 點擊按鈕關(guān)閉鹵素?zé)艨?/p>

12、門.2.點擊染料選擇按鈕. 在染料列表中, 雙擊用于觀察的熒光染料.*取消當(dāng)前熒光染料，選擇另外熒光染料，要雙擊已指定的熒光染料，并重復(fù)步驟2.3.點擊Apply按鈕.(關(guān)閉染料選擇面板可以用Close按鈕.)4.選擇TD1.(XY平面-單標(biāo)+微分干涉差) 55.點擊XY Repeat按鈕開始掃描.6.調(diào)節(jié)綠色()FITC圖像和微分干涉差的圖像.(圖像調(diào)節(jié)的略述如下. 更多的信息,參照附錄1.)7.點擊Stop按鈕停止掃描. (參照Memo.)67Memo掃描控制面板:連續(xù)掃描:停止掃描:快速掃描(隔行掃描)1探測器的靈敏度調(diào)節(jié)(HV)2共聚焦的孔徑大小調(diào)節(jié)C.A.)(3激光輸出的調(diào)節(jié)(Las

13、er) 123調(diào)節(jié)方法(例: HV調(diào)節(jié)):點擊滑塊, HV直接提高(或降低) 到指定的位置.點擊此按鈕或者使用鼠標(biāo)轉(zhuǎn)輪進(jìn)行微調(diào).圖像調(diào)節(jié)略述891011(XY平面-單標(biāo)+微分干涉差) 8. 選擇AutoHV, 并選擇掃描速度.* 隨著掃描速度變慢, 在保持同等亮度的前提下, 背景噪音就會消除.(也可以使用Kalman accumulation方式. 更多的信息，參照附錄2.)9.點擊XY按鈕取得一幅圖像.10.點擊SeriesDone按鈕, “2D View-LiveImage(x)” 2D界面就出現(xiàn).11.保存該幅圖像:右擊圖像管理器中顯示的圖像圖標(biāo)，選擇另存為保存該幅圖像.(保存為“xml

14、”類型是 FV10-ASW軟件專用的圖像格式.)MemoFV10-ASW專用的圖形格式OIF格式:創(chuàng)建“一個含(16-bit TIFF)的圖像”和“一個附屬文件,”不能單獨分割.OIB格式:創(chuàng)建單個的OIF格式的文件, 方便進(jìn)行移動和進(jìn)行其它的操作.(XYZ掃描-雙標(biāo))1456728Memo和按鈕 :點擊移動1.0m.: 點擊移動0.1m.1.采用13和14頁步驟1到7.確定Z軸的上限和下限如下.2.輸入StepSize大小(點擊OP按鈕可以使用推薦的值), 并選擇 .3.點擊XY Repeat按鈕開始掃描.4.點擊和 按鈕上移焦點位置.(參照Memo.)5.當(dāng)圖像顯示到達(dá)上限時, 點擊Set

15、 按鈕確定.6.點擊和 按鈕下移焦點位置.(參照Memo.)7.當(dāng)圖像顯示到達(dá)下限時, 點擊Set 按鈕確定.8.點擊Stop按鈕停止掃描.910111213(XYZ掃描-雙標(biāo)) 9.選擇AutoHV, 并選擇掃描速度.* 隨著掃描速度變慢, 在保持同等亮度的前提下, 背景噪音就會消除.(也可以使用Kalman accumulation方式. 更多的信息，參照附錄2.)10.選擇Depth按鈕.11.點擊XYZ按鈕取得圖像.12.點擊SeriesDone按鈕, “2D View-LiveImage(x)” 2D界面就出現(xiàn).13.保存該幅圖像:右擊圖像管理器中顯示的圖像圖標(biāo)，選擇另存為保存該幅圖

16、像.MemoFV10-ASW專用的圖形格式OIF格式:創(chuàng)建“一個含(16-bit TIFF)的圖像”和“一個附屬文件,”不能單獨分割.OIB格式:創(chuàng)建單個的OIF格式的文件, 方便進(jìn)行移動和進(jìn)行其它的操作.(保存為“xml”類型是 FV10-ASW軟件專用的圖像格式.)綠色熒光-1)YOYO(雙標(biāo)1231.點擊FV10-ASW軟件中的按鈕關(guān)閉汞燈快門.同時, 點擊按鈕關(guān)閉鹵素?zé)艨扉T.2.點擊按鈕檢查光路.3.做如下設(shè)置.選擇BS20/80 或DM405/488.選擇488nm作為激發(fā)光源.選擇Mirror.只選擇CHS1.*可以通過調(diào)用掃描狀態(tài)來實現(xiàn)該設(shè)置. 更多的信息, 參照附錄5.4567

17、94.點擊按鈕 , 出現(xiàn)光譜設(shè)置窗口.5.設(shè)置CHS1光譜帶寬為10 nm, 以此為例.(參照附錄4關(guān)于改變光譜帶寬的方法.)6.點擊XY Repeat按鈕開始掃描.7.在觀察圖像的同時, 移動光譜帶到圖像最亮的位置狀態(tài).(參照附錄4關(guān)于改變光譜帶寬的方法.)注: 移動光譜帶位置要保持光譜帶寬為10 nm不變.8.調(diào)節(jié)圖像.(參照附錄1.)9.點擊Stop按鈕停止掃描.10111213151410選擇AutoHV, 并選擇掃描速度.* 隨著掃描速度變慢, 在保持同等亮度的前提下, 背景噪音就會消除.(也可以使用Kalman accumulation方式. 更多的信息，參照附錄2.)11設(shè)定要掃

18、描的波長范圍, 光譜帶寬和步距.Start = 開始波長End = 結(jié)束波長Resolution = 光譜帶寬StepSize = 步距12選擇Lambda按鈕.13點擊XYL按鈕取得圖像.14點擊SeriesDone按鈕, “2D ViewLiveImage(x)” 2D界面就出現(xiàn).15.保存該幅圖像:右擊圖像管理器中顯示的圖像圖標(biāo)，選擇另存為保存該幅圖像.(保存為“oib” 和oif類型是 FV10-ASW軟件專用的圖像格式.)顯示狀態(tài)的切換1:1顯示幀的播放選擇結(jié)束幀投影的切換3D重建放大調(diào)整窗口的大小動畫播放速度選擇開始幀文本不同形狀的ROI區(qū)域Ch1 displayCh2 displ

19、ay點擊按鈕轉(zhuǎn)換顯示模式 1. 雙擊資源管理器中要選擇打開的文件.121.點擊按鈕 并選擇.2.要保存此圖像, 右擊此圖像, 選擇Save Display并命名.(比例尺的使用) 123451.點擊按鈕 .2.點擊圖像的同時, 拖放此比例尺到一個特定的位置.3.點擊手柄的左端或右端, 移動鼠標(biāo). 改變比例尺的大小4.選擇比例尺并右擊選擇屬性的設(shè)置.5.設(shè)置具體的比例尺屬性.改變文本, 顏色, 字體等.1345(3D圖像的重建)以一定的角度觀察3D圖像1.點擊按鈕 .2.創(chuàng)建3D圖像.3.拖動鼠標(biāo)以一定的角度觀察圖像. 要保存此圖像, 進(jìn)行下一頁第6步的操作. 觀察3D圖像的某個橫截面4.點擊按

20、鈕并選定 .5.拖動鼠標(biāo)觀察某個垂直橫斷面. 要保存此圖像, 進(jìn)行下一頁第6步的操作.(3D圖像的重建68保存上一頁中第3、5選項的圖像6.點擊按鈕 .7.會創(chuàng)建一個2D圖像 (帶文件名).8.保存該幅圖像:右擊圖像管理器中顯示的圖像圖標(biāo)，選擇另存為保存該幅圖像.MemoFV10-ASW專用的圖形格式OIF格式:創(chuàng)建“一個含(16-bit TIFF)的圖像”和“一個附屬文件,”不能單獨分割.OIB格式:創(chuàng)建單個的OIF格式的文件, 方便進(jìn)行移動和進(jìn)行其它的操作.(保存為“xml”類型是 FV10-ASW軟件專用的圖1341.點擊按鈕 .2.創(chuàng)建3D圖像.3.拖動鼠標(biāo)以一定的角度觀察圖像.動畫的

21、播放4.點擊并控制按鈕實現(xiàn)圖像圍繞著 X-軸旋轉(zhuǎn).再次點擊停止旋轉(zhuǎn).點擊并控制按鈕實現(xiàn)圖像圍繞著 Y-軸旋轉(zhuǎn).再次點擊停止旋轉(zhuǎn).點擊并控制按鈕實現(xiàn)圖像圍繞著 Z-軸旋轉(zhuǎn).再次點擊停止旋轉(zhuǎn).234例:綠色熒光Alexa Fluor(488)和綠色熒光-1)(YOYO雙標(biāo)56Unmixed image此處顯示分解光譜的通道分配1.打開一幅Alexa Fluor488和YOYO1雙標(biāo)的XYL圖像.2.分別為Alexa Fluor488和YOYO1選定一個封閉的區(qū)域.3.從Processing下拉菜單中選擇Spectral Deconvolution圖標(biāo).4.雙擊ROI1和ROI2區(qū)域.5.檢查處理類

22、型設(shè)置為“Normal”并且點擊Execute按鈕.6.獲得圖像.例:綠色熒光(Alexa Fluor 488)和綠色熒光 (YOYO-1)雙標(biāo)24356記載的熒光光譜在此顯示.1. 打開一幅 Alexa Fluor 488單標(biāo)取樣的XYL圖像.2. 為 Alexa Fluor 488選定一個封閉的區(qū)域.3. 從Processing下拉菜單中選擇Spectral Deconvolution圖標(biāo).4. 雙擊ROI1區(qū)域.5. 點擊Save Profile圖標(biāo).6. 輸入保存的名字并且點擊OK按鈕將Alexa Fluor 488的光譜記載到數(shù)據(jù)庫中.7. 對于YOYO1單標(biāo), 重復(fù)1-6步.891

23、011Unmixed image12此處顯示分解光譜的通道分配8.打開一幅 Alexa Fluor 488和 YOYO1 雙標(biāo)的XYL圖像.9.從Processing下拉菜單中選擇Spectral Deconvolution圖標(biāo).10.雙擊數(shù)據(jù)庫中記載的 Alexa Fluor 488 和 YOYO1圖標(biāo).11.檢查處理類型設(shè)置為 “Normal”并且點擊Execute按鈕.12獲得圖像.2345例 :兩種類型熒光標(biāo)記的樣品Unmixed image此處顯示分解光譜的通道分配1.打開一幅具有兩種類型熒光標(biāo)記的XYL圖像.2.從Processing下拉菜單中選擇SpectralDeconvolution圖標(biāo).3.選中兩個檢查框用于計算.(具有三種類型熒光標(biāo)記時要選中三個檢查框.)4.檢查處理類型設(shè)置為“Blind”并且點擊Execute按鈕.5.獲得圖像. XY或者XYZ圖像的每個通道存為TIFF格式的文件XY或者XYZ通道合并的圖像存為TIFF格式的文件帶有比例尺的圖像存為BMP格式的文件動態(tài)圖像存為AVI格式的文件123121.右擊圖像管理器中顯示的圖像圖標(biāo), 選擇另存為保存該幅圖像.2.設(shè)置Save as類型為 TIFF并保存.* 存為BMP 和