1、,淋巴瘤基因克隆性重排和IGHV體細(xì)胞超突變檢測(cè),輔助診斷,預(yù)后分析,指導(dǎo)用藥,MRD檢測(cè),血液腫瘤（常規(guī)腫瘤）檢測(cè)方案-MICM綜合分子檢測(cè)(旌準(zhǔn)方案),Moffitt, A. B. and S. S. Dave (2017). J Clin Oncol 35(9): 955-962.,分子檢測(cè)-淋巴瘤,最豐富的陽(yáng)性對(duì)照,5,BIOMED-2唯一授權(quán)的商品化試劑,1,全面涵蓋各種TB細(xì)胞重排類型,可疑淋巴組織增生性疾病克隆性分析的“金標(biāo)準(zhǔn)”,超過400例的臨床樣本驗(yàn)證，反應(yīng)體系穩(wěn)定，結(jié)果可靠,3,2,4,淋巴細(xì)胞克隆性基因重排檢測(cè)產(chǎn)品特點(diǎn),B-Cell Receptors (BCR) /Im

2、munoglobulins (Ig),T-Cell Receptor (TCR),淋巴細(xì)胞克隆性基因重排檢測(cè)的目標(biāo)分子Ig和TCR-單一基因重排，即惡性淋巴細(xì)胞,IGH, TRB & TRD: V, D, and J IGK, IGL, and TRG: V and J regions,正常淋巴細(xì)胞成熟過程/良性病變,多克隆性,多種形式的基因重排,惡性淋巴瘤發(fā)生的過程,單克隆性,突出單一形式的基因重排,多樣性與克隆性,鑒別診斷：明確是淋巴組織反應(yīng)性還是淋巴細(xì)胞惡性增殖 輔助診斷：少見類型淋巴瘤，如肝脾T細(xì)胞淋巴瘤 亞類分析：明確是B淋巴惡性增殖還是T細(xì)胞惡性增殖 區(qū)分同一患者兩種淋巴細(xì)胞惡性腫

3、瘤，包括復(fù)發(fā)與繼發(fā)淋巴瘤 微小殘留病灶監(jiān)測(cè)，評(píng)估治療效果或復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)（NGS方法） 細(xì)胞免疫治療監(jiān)測(cè)，監(jiān)測(cè)回輸T細(xì)胞增殖狀況和淋巴組織來(lái)源腫瘤細(xì)胞清除效果（NGS）,5%15%的病例表現(xiàn)復(fù)雜，即使做了大量的免疫標(biāo)志也可能難以鑒別其良惡性，需要進(jìn)一步的手段區(qū)分。 利用分子生物學(xué)手段分析Ig和TCR基因的克隆性重排被WHO公認(rèn)為該疾病診斷手段的重要補(bǔ)充。,淋巴細(xì)胞克隆性基因重排檢測(cè)的臨床意義,基于PCR檢測(cè)技術(shù)，簡(jiǎn)便、快速、成本較低，所需DNA量少，對(duì)DNA質(zhì)量要求不高。靈敏度高于10%，需配制膠，安全清潔性較差。,基于PCR-毛細(xì)管電泳檢測(cè)技術(shù)，敏感性高，檢測(cè)周期較長(zhǎng)，結(jié)果更加直觀可靠 目前市場(chǎng)最

4、被接受的檢測(cè)方法。靈敏度無(wú)法滿足MRD要求，難以定量和得到序列。,新興技術(shù)，更高靈敏度（10-6），更高分辨率，更高的通量，更廣泛的應(yīng)用。但成本高，儀器貴，操作復(fù)雜，時(shí)間長(zhǎng)。,（IGH, IGK,）（IGL）（TRB ,TRD,）（ TRG）BIOMED-2方案，唯一授權(quán)） IGHV（依據(jù)ERIC指南）,IGH, IGK, TRB , TRG IGHV,基于不同方法的產(chǎn)品系列-Invivoscribe公司,Invivoscribe公司的IdentiCloneTM系列產(chǎn)品是基于PCR的克隆性檢測(cè)產(chǎn)品，是BIOMED-2唯一授權(quán)的商品化試劑，獲得CE認(rèn)證，以其高度的靈敏性和特異性，成為可疑淋巴組織

5、增生性疾病克隆性分析的“金標(biāo)準(zhǔn)”。 IdentiCloneTM系列產(chǎn)品具有精心優(yōu)化的標(biāo)準(zhǔn)化試劑組成，具有最豐富的陽(yáng)性對(duì)照，涵蓋各種TB細(xì)胞重排類型，經(jīng)過了超過400例的臨床樣本驗(yàn)證，按照臨床產(chǎn)品的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行質(zhì)檢和質(zhì)控，反應(yīng)體系穩(wěn)定，結(jié)果可靠。,從Biomed-2到Invivoscribe-唯一授權(quán),Biomed-2研究項(xiàng)目,Biomed-2研究項(xiàng)目（IGH為例）,van Dongen, J. J. M., et al. (2003). Leukemia 17: 2257.,Biomed-2研究項(xiàng)目（IGH為例）,van Dongen, J. J. M., et al. (2003). Leuke

6、mia 17: 2257.,結(jié)果分析,（單）克隆性：擴(kuò)增產(chǎn)物電泳在預(yù)期大小范圍內(nèi)一或雙條帶（峰） 送檢組織中，淋巴細(xì)胞抗原受體基因的重排方式為單一性。表明組織中存在單克隆性增生的細(xì)胞群。 多克隆性：擴(kuò)增產(chǎn)物電泳呈彌散涂抹狀(smear)或階梯狀(高斯分布） 送檢組織中，淋巴細(xì)胞抗原受體基因的重排方式為多樣性。表明組織中不存在單克隆性增生的細(xì)胞群。 無(wú)擴(kuò)增產(chǎn)物：PCR擴(kuò)增后電泳未見產(chǎn)物 送檢組織中的細(xì)胞，抗原受體基因無(wú)重排（NK，非淋巴細(xì)胞）或DNA質(zhì)量過差。,淋巴瘤應(yīng)用基因重排檢測(cè)進(jìn)行輔助/鑒別診斷的方案,檢測(cè)到克隆性重排未必一定發(fā)生惡性病變 某些良性增生也可呈克隆性重排，如CD8+T細(xì)胞淋巴

7、增生性病變、良性單克隆性丙種球蛋白病、皮膚淋巴瘤樣丘疹病、免疫缺陷患者嚴(yán)重的EB病毒感染等； 檢測(cè)不到克隆性重排也不能排除惡性病變 某些明確惡性病變的免疫缺陷患者中偶爾檢測(cè)不到克隆性重排，NK/T細(xì)胞淋巴瘤中IG和TCR基因呈胚系結(jié)構(gòu)，即也無(wú)克隆性重排。 IG或TCR基因的重排不一定是譜系的標(biāo)志 特別是大多數(shù)前驅(qū)淋巴細(xì)胞性腫瘤中存在譜系交叉，如血管免疫母細(xì)胞學(xué)淋巴瘤（AITL）。單一發(fā)生可反映譜系，同時(shí)陽(yáng)性只表示克隆性增生，不能判斷譜系來(lái)源。 假陽(yáng)性和假陰性 技術(shù)，引物，反應(yīng)條件 分子克隆性結(jié)果分析，應(yīng)結(jié)合臨床、形態(tài)學(xué)和免疫表型特征，方可做出淋巴瘤的最終診斷和分類。,注意事項(xiàng),對(duì)以下疾病提供重

8、要預(yù)后信息:慢性淋巴細(xì)胞白血病(CLL) 前提： IGH克隆性重排為單克隆 例外： V3-21重排區(qū)表達(dá)與預(yù)后不良相關(guān)，與IGHV突變狀態(tài)無(wú)關(guān)。,SHM 判斷標(biāo)準(zhǔn)：,IGH V區(qū)的SHM狀態(tài)檢測(cè)被推薦為新診斷CLL患者預(yù)后分析的生物標(biāo)志物。,PFS：無(wú)進(jìn)展生存期（Progression free survival） OS：總生存期（Overall survival）,中國(guó)CLL/SLL的診斷與治療指南（2018版）,IGH V區(qū)體細(xì)胞超突變檢測(cè)的臨床意義,基于PCR檢測(cè)技術(shù)，簡(jiǎn)便、快速、成本較低，所需DNA量少，對(duì)DNA質(zhì)量要求不高。靈敏度高于10%，需配制膠，安全清潔性較差。,基于PCR-毛

9、細(xì)管電泳檢測(cè)技術(shù)，敏感性高，檢測(cè)周期較長(zhǎng)，結(jié)果更加直觀可靠 目前市場(chǎng)最被接受的檢測(cè)方法。靈敏度無(wú)法滿足MRD要求，難以定量和得到序列。,新興技術(shù)，更高靈敏度（10-6），更高分辨率，更高的通量，更廣泛的應(yīng)用。但成本高，儀器貴，操作復(fù)雜，時(shí)間長(zhǎng)。,IGH, IGK, IGL, TRB ,TRD, TRG（BIOMED-2方案，唯一授權(quán)） IGHV（依據(jù)ERIC指南）,IGH, IGK, TRB , TRG IGHV,基于不同方法的產(chǎn)品系列-Invivoscribe,結(jié)合 Leader 和 FR1 區(qū)域的引物在 5端連接有通用的測(cè)序片段，這種設(shè)計(jì)，配合 JH 反向測(cè)序引物，能夠?qū)崿F(xiàn) PCR 擴(kuò)增產(chǎn)

10、物的雙向測(cè)序。目前，歐洲慢性淋巴細(xì)胞性白血病研究機(jī)構(gòu)（European Research Initiative on CLL，ERIC）的指南即使用雙向測(cè)序判斷 IGH V區(qū)體細(xì)胞超突變（Somatic Hypermutation， SHM）狀態(tài)。,IGHV SHM的檢測(cè),淋巴瘤51基因突變NGS檢測(cè),淋巴瘤51基因突變NGS檢測(cè),A,C,D,B,產(chǎn)品特點(diǎn),謝謝大家！,9、 人的價(jià)值，在招收誘惑的一瞬間被決定。20.9.2820.9.28Monday, September 28, 2020 10、低頭要有勇氣，抬頭要有低氣。00:54:5700:54:5700:549/28/2020 12:54:57 AM 11、人總是珍惜為得到。20.9.2800:54:5700:54Sep-2028-Sep-20 12、人亂于心，不寬余請(qǐng)。00:54:5700:54:5700:54Monday, September 28, 2020 13、生氣是拿別人做錯(cuò)的事來(lái)懲罰自己。20.9.2820.9.2800:54:5700:54:57September 28, 2020 14、抱最大的希望，作最大的努力。2020年9月28日星期一上午12時(shí)54分57秒00:54:5720.9.28 15、一個(gè)人炫耀什么，說(shuō)明他內(nèi)心缺少什么。20