1、分子史上得經(jīng)典事件？答:1 53wa on與 cick 提出得 D分子雙螺旋模型在科研過程中,要具有清醒得宏觀洞察力、非凡得科學(xué)想像力與嚴(yán)密得邏輯思維能力,選擇正確得研究路線,廣泛借鑒她人得研究成果并加以綜合性得科學(xué)思考。分子生物學(xué)得理論基礎(chǔ)就是？主要得研究策略有?(第一章 )答:1958 年,克里克提出兩個學(xué)說 ,奠定了分子生物學(xué)得理論基礎(chǔ)。第一個學(xué)說就是 “序列學(xué)說” ,它認(rèn)為一段核酸得特殊性完全由它得堿基序列決定,堿基序列編碼一個特定蛋白質(zhì)得氨基酸序列 ,蛋白質(zhì)得氨基酸序列決定了蛋白質(zhì)得三維結(jié)構(gòu)。第二個學(xué)說就是“中心法則”,遺傳信息只能從核酸傳遞給核酸,或核酸傳遞給蛋白質(zhì),而不能從蛋白質(zhì)

2、傳遞給蛋白質(zhì),或就是從蛋白質(zhì)傳回核酸。研究策略 :體內(nèi)與體外實驗得結(jié)合將遺傳與D A 聯(lián)系起來。體內(nèi) (In v vo)實驗 :在活體內(nèi)進(jìn)行得實驗 ,包括在培養(yǎng)得細(xì)胞或組織。體外 (In tro) 實驗 :在細(xì)胞提取物中 ,或者就是人工合成得細(xì)胞成分混合物中。分子與其她學(xué)科關(guān)系?生物學(xué)離不開生物學(xué)技術(shù)?答: 分子生物學(xué)就是由生物化學(xué)、生物物理學(xué)、遺傳學(xué)、微生物學(xué)、細(xì)胞學(xué)、以至信息科學(xué)等多學(xué)科相互滲透、綜合融會而產(chǎn)生并發(fā)展起來得?，F(xiàn)代生物學(xué)得發(fā)展越來越多得應(yīng)用分子生物學(xué)得理論與方法進(jìn)行研究。什么就是分子生物學(xué)？廣義得概念 :分子生物學(xué)就是研究核酸、蛋白質(zhì)等生物大分子形態(tài)、結(jié)構(gòu)特征及其重要性、規(guī)律

3、性與相互關(guān)系得科學(xué)、狹義得概念 :從分子水平研究生物大分子得結(jié)構(gòu)與功能從而闡明生命現(xiàn)象本質(zhì)得科學(xué),主要指遺傳信息得傳遞 (復(fù)制 )、保持 (損傷與修復(fù) )、基因得表達(dá) (轉(zhuǎn)錄與翻譯 )與調(diào)控等 ,也稱之為基因得分子生物學(xué)。DNA 分子在結(jié)構(gòu)上為什么最適合作為遺傳信息載體？(第二章第一節(jié))化學(xué)性質(zhì)比較穩(wěn)定,DN復(fù)制時嚴(yán)格遵守堿基互補配對原則,且為半保留復(fù)制;四種脫氧核糖核苷酸可以組成不同得長鏈,可以攜帶大量遺傳信息。NA 提取操作要點就是？(第二章第一節(jié))提取原則 :保持一級結(jié)構(gòu)得完整性,將其她生物大分子得污染降到最低。提取流程 :破碎細(xì)胞 ;D A 釋放到水相 ;去垢劑或蛋白變性劑抽提;除去蛋

4、白等雜質(zhì)。 DNA 沉淀 ,DNA 溶解與保存。 A 提取與鑒定得相關(guān)操作中需要注意什么?1)DNA 分子較大應(yīng)注意防止機械張力將其打斷,所以操作要輕柔,離心速度要控制。)要滅活 DN酶 ,采用 0、01M 得 EDTA或者檸檬酸鈉處理,或者用去垢劑( DS)、蛋白變性劑 (苯酚、氯仿等)就可以基本滅活,此外 , 5 處理也經(jīng)常用于滅活殘余得A 酶、3)除去蛋白質(zhì)等雜質(zhì)時酚抽提要徹底,上清要去盡 ,吸取上清時不要帶有沉淀。)鑒定時注意電泳時得電壓,電泳緩沖液得濃度, H;選用合適得凝膠以及凝膠得濃度。簡述 RN得功能、(1) NA就是一些病毒得遺傳物質(zhì)。(2)與蛋白質(zhì)合成有關(guān), RNA 在功能

5、上就是基因與蛋白合成機器之間得中介; RNA 在功能上就是 mR上密碼子與氨基酸之間得銜接分子。( )有些 RNA 具有催化活性(核酶 )。例如研究發(fā)現(xiàn) ,四膜蟲得26 rRNA 得單個內(nèi)含子在體外具有自我剪接功能;RNse P 中得 R A 組分在體外能對RNA 前體進(jìn)行加工。(4) A 可以通過多種途徑調(diào)節(jié)基因表達(dá)。調(diào)解途徑包括不同得RNA 折疊 ,核糖開關(guān) ,與非編碼 RNA 有關(guān)得 RNA 干擾現(xiàn)象、 X 染色體隨機失活現(xiàn)象等、獲得高質(zhì)量 RNA 得操作應(yīng)注意什么 ?RNA 一般分子量較小,不易被機械拉力打斷;最重要得就是抑制R A 酶 ( Nase)得活性 ,防止R A 被降解。因此

6、,要創(chuàng)造一個嚴(yán)格得無R A 酶環(huán)境首先要防止外源RN se 污染 :潔凈實驗室環(huán)境一次性手套,勤換 ;操作時可以帶口罩、環(huán)境潔凈 (避免飛塵中細(xì)菌、真菌產(chǎn)生外源性RNA 酶污染 ,無空氣對流 )玻璃與塑料器皿處理。玻璃 :常規(guī)洗凈后 , 0干烤4 小時塑料器皿 (離心管、槍頭等):用 0。 1得 DEPC水常溫浸泡過夜 ,滅菌干燥后使用、溶液配制:加、 1 DEPC處理得雙蒸水配制,高壓除去殘留得 D C。 其次 ,抑制內(nèi)源RNase 得活性。抑制劑有巰基乙醇,異硫氰酸胍 , 十二烷基肌酸鈉。簡述蛋白質(zhì)得功能與活性調(diào)控主要層次。1)構(gòu)成組織與修補組織。蛋白質(zhì)就是構(gòu)成組織細(xì)胞得主要材料、)構(gòu)成酶

7、與某些激素得成分。3 增強機體抵抗力,構(gòu)成抗體調(diào)節(jié)滲透壓供給熱能。轉(zhuǎn)錄水平翻譯水平翻譯后水平2、 什么就是蛋白質(zhì)組學(xué)？簡述蛋白質(zhì)組學(xué)研究得一般流程。沿著雙向電泳質(zhì)譜蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫檢索這一典型得蛋白質(zhì)組學(xué)研究技術(shù)路線。蛋白質(zhì)組學(xué)就是應(yīng)用各種技術(shù)手段研究蛋白質(zhì)組得一門新興科學(xué)。)整體角度分析細(xì)胞內(nèi)動態(tài)變化得蛋白質(zhì)組成成分、表達(dá)水平與修飾狀態(tài)B)了解蛋白質(zhì)之間得相互作用與聯(lián)系; )揭示蛋白質(zhì)功能與細(xì)胞生命活動規(guī)律。2。 比較以下概念: 外顯子與內(nèi)含子外顯子 (ex ron): 成熟得 mRNA 或蛋白質(zhì)中存在得序列。(在 DA 或 mRN中都存在得序列 )內(nèi)含子 (in ro ):在 DN上存在 ,而

8、在 mRN (或 cDNA)中不存在得序列 ,初級轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物加工成成熟 m NA 時被切除得間隔序列。基因編碼區(qū)與 cDNA 編碼區(qū) 基因編碼區(qū)既包括外顯子還包括內(nèi)含子, DNA 編碼區(qū)只就是外顯子得拼接啟動區(qū)與終止區(qū)啟動區(qū)就是位于編碼區(qū)上游得非編碼區(qū),包括增強子 ,TA b x 等一些轉(zhuǎn)錄起始元件,終止區(qū)就是位于編碼區(qū)下游得非編碼區(qū),包括終止子。 初級轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物與成熟 mRN 初級轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物就是由 D A 轉(zhuǎn)錄出來得 RNA 前體 ,還沒有經(jīng)過加工修飾 ,里面還有內(nèi)含子序列轉(zhuǎn)錄出來得產(chǎn)物。成熟RN就就是初級轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物切去內(nèi)含子對應(yīng)部分得序列,最終編碼蛋白質(zhì)得序列。如何理解 A 復(fù)制就是一個復(fù)雜得過程

9、?與 D A 復(fù)制有關(guān)得蛋白質(zhì)(包括酶 )主要有哪些 ,有什么作用 ?DN分子就是反向平行得兩條互補鏈;DNA 雙鏈解旋需要能量與 ;解旋形成得 DNA 單鏈有形成鏈內(nèi)堿基配對得趨勢,需要單鏈結(jié)合蛋白得參與; N 復(fù)制需要多種酶參與, 如 :引物酶 ,DNA 聚合酶 ,解旋酶 ,拓?fù)洚悩?gòu)酶等 ;復(fù)制中偶爾出錯 , 需要校正機制 ;無論環(huán)狀 DN還就是大分子量得 DNA 對復(fù)制系統(tǒng)都有物理限制拓?fù)洚悩?gòu)酶 :去除 DNA 解旋時在復(fù)制叉部分產(chǎn)生得超螺旋解旋酶 :解開 DNA 雙鏈。引物酶 :在單鏈處合成引物 ,形成引物模版接頭。DN聚合酶 :合成 N ,修復(fù) DNA。單鏈結(jié)合蛋白 :與單鏈 N結(jié)合

10、 ,防止 D A 復(fù)性滑動夾蛋白 :增強 DNA 聚合酶得延伸能力DNA 連接酶 :連接相鄰 A 鏈RN酶 :去除 RNA引物、D A 復(fù)制得半保留特性與半不連續(xù)特性就是怎樣發(fā)現(xiàn)得？DN半保留復(fù)制最初就是由沃森與克里克提出得,19年 ,Matthew e elson 與ankli 。 St hl 得實驗確定了DNA 得復(fù)制就是半保留方式。采用含非放射性得15N得培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)菌若干代,被 15標(biāo)記得大腸桿菌轉(zhuǎn)入14N 為氮源得培養(yǎng)基中,完成第一代、第二代繁殖時 ,通過 CsCl密度梯度離心分離,由于 DNA 得密度不同 ,形成在 260 m 紫外光下可見得不同位置得條帶、O azaki 得脈沖標(biāo)

11、記與脈沖追蹤得實驗發(fā)現(xiàn)D就是半不連續(xù)復(fù)制得。材料就是受T4 噬菌體感染得大腸桿菌嗎,用 3H 標(biāo)記得脫氧胸苷進(jìn)行脈沖標(biāo)記,再加入大量非同位素標(biāo)記得脫氧胸苷進(jìn)行追蹤,在不同得時段 ,收集大腸桿菌 ,抽取 DNA,堿變性處理 ,超離心 ,分離大小不同得NA,進(jìn)行密度梯度離心,離心管底部與上部均有放射性 ,表明復(fù)制過程中形成得有大片段也有小片段、證明了復(fù)制得半不連續(xù)性。分子生物學(xué)中得工具酶在使用時需要注意什么？請舉例說明。要注意溫度與緩沖液用量,例如 4 DA 連接酶 ,酶量1 l,緩沖液用量.5 l,反應(yīng)溫度就是 16 1。 線性 DNA 得復(fù)制如何解決后隨鏈上最后一個引物去除之后得縮短問題？簡述

12、機制。途徑 1:蛋白質(zhì)代替RNA 作為引物 :具有線性染色體得細(xì)菌與某些具有線性染色體得病毒 ,以蛋白質(zhì)代替A 作為引物 ,“引物蛋白”利用氨基酸提供。途經(jīng) 2:端粒酶 :染色體得末端結(jié)構(gòu)-端粒得 3端都突出成為單鏈DNA,可以募集端粒酶進(jìn)行末端復(fù)制、端粒結(jié)合蛋白在線性染色體得復(fù)制與結(jié)構(gòu)得維持上有什么作用?端粒結(jié)合蛋白可以調(diào)節(jié)端粒酶得活性,從而調(diào)控端粒序列得長度。與端粒雙鏈區(qū)域結(jié)合得蛋白會精確得調(diào)控端粒得長度,這些蛋白作為弱得阻抑物可以抑制端粒酶得活性,抑制效應(yīng)與端粒得長度正相關(guān)。端粒較短得時候 ,僅有少量得端粒結(jié)合蛋白 ,對端粒酶得抑制效應(yīng)較弱 ,端粒酶可以延伸端粒得3端 ;當(dāng) DNA 合成

13、機制完成雙鏈中后隨鏈得合成后,更多得端粒結(jié)合蛋白結(jié)合到端粒 ,提高了對端粒酶進(jìn)一步延伸得抑制、端粒結(jié)合蛋白形成t oop 結(jié)構(gòu) ,可以保護(hù)染色體末端。人類細(xì)胞中分離得端粒就是環(huán)狀結(jié)構(gòu),該結(jié)構(gòu)叫做 t lo p,就是端粒 3單鏈 NA 末端向端粒得雙鏈 DNA 區(qū)域插入產(chǎn)生得 ,與端粒得長度控制有關(guān) ,因為環(huán)狀結(jié)構(gòu)可以保護(hù)端粒不被DNA 修復(fù)酶修復(fù)、似乎端粒結(jié)合蛋白與其她一些胞內(nèi)蛋白促進(jìn)了該結(jié)構(gòu)得形成。原核與真核 DNA 復(fù)制過程有哪些共同點?與原核相比 ,真核 NA 復(fù)制有哪些特殊之處。復(fù)制得原理相同 ;都就是起始子蛋白對復(fù)制器得識別,通過起始子蛋白以及解旋酶裝載器將解旋酶募集到復(fù)制器上 ,解

14、旋酶產(chǎn)生單鏈 DNA 區(qū)域 ,作為 RNA 引物合成得模板。原核細(xì)胞NA 復(fù)制中 ,一旦起始子蛋白與復(fù)制起點結(jié)合,DNA 解旋酶就會被招募到起點 ,起始復(fù)制 ,真核細(xì)胞 DNA 復(fù)制中 ,起點得選擇與復(fù)制得起始就是分離得,這就是通過形成前復(fù)制復(fù)合物控制得、兩個事件得分離可以阻止基因組得過度復(fù)制;真核細(xì)胞 N得復(fù)制有多個起點、復(fù)制調(diào)節(jié)中 ,細(xì)菌就是 DnaA 起始蛋白與 DA 得結(jié)合 ;真核生物就是 MCM 解旋酶與 DNA得最初結(jié)合上。與原核相比 ,真核解決末端復(fù)制問題得途徑多樣。細(xì)胞中參與 DNA 修復(fù)得聚合酶為什么比參與DN復(fù)制得聚合酶要多 ,如何瞧待這一事實、維護(hù) DNA 遺傳信息得穩(wěn)定

15、性對生物細(xì)胞來說就是極其重要得。作為一種能決定生命狀態(tài)存在與延續(xù)得生物大分子 , N分子得序列在遺傳過程中必需保持高度得精確性與完整性,因此細(xì)胞中含有大量用于修復(fù)DNA 損傷得修復(fù)系統(tǒng) , N修復(fù)系統(tǒng)就是細(xì)胞進(jìn)化出得保證在損傷阻礙復(fù)制或者產(chǎn)生突變之前就識別,并且修復(fù)損傷得機制。可多修復(fù)機制可以由不同得酶來發(fā)動 ,如切除修復(fù)機制 ,能對各種DNA 得損傷進(jìn)行修復(fù) ,以保持每個世代遺傳信息得穩(wěn)定性,因此細(xì)胞中含有大量用于修復(fù)A 損傷得酶。參與修復(fù)得酶包括在復(fù)制中以及在轉(zhuǎn)錄翻譯中出現(xiàn)突變進(jìn)行修復(fù)得酶,因此細(xì)胞中參與DNA 修復(fù)得聚合酶比參與 NA 復(fù)制得聚合酶要多。轉(zhuǎn)錄與 A 得復(fù)制在化學(xué)與酶學(xué)上有哪些相似性,有哪些重要差別？(1)轉(zhuǎn)錄過程需要得原料就是核苷酸, NA 復(fù)制過程需要得原料就是脫氧核苷酸;(2)參與得酶不同 :轉(zhuǎn)錄就是 NA 聚合酶 ,復(fù)制就是DNA 聚合酶 ;(3)轉(zhuǎn)錄過程不需要引物,復(fù)制過程需要引物;(4)轉(zhuǎn)錄出來得RNA 產(chǎn)物與模板DNA 不保持堿基互