1、ICS11.220B 41DB37山東省地方標(biāo)準(zhǔn)DB37/T 40032020中和試驗(yàn)和ELISA試驗(yàn)比對實(shí)驗(yàn)室評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)2020 - 06 - 08發(fā)布2020 - 07 - 08實(shí)施山東省市場監(jiān)督管理局發(fā)布DB37/T 40032020前言本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T 1.12009給出的規(guī)則起草。本標(biāo)準(zhǔn)由青島海關(guān)提出、歸口并組織實(shí)施。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：青島海關(guān)技術(shù)中心。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：鄭小龍、王群、姜帆、徐彪、朱來華。2中和試驗(yàn)和ELISA試驗(yàn)比對實(shí)驗(yàn)室評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)1 范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了中和試驗(yàn)和ELISA試驗(yàn)比對實(shí)驗(yàn)室評價(jià)工作應(yīng)遵循的基本技術(shù)要求。本標(biāo)準(zhǔn)適用于動物檢疫、獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室以ELISA試驗(yàn)替代中和

2、試驗(yàn)進(jìn)行抗體滴度的測定。2 規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。OIE陸生動物診斷試驗(yàn)與疫苗手冊3 試劑3.1 培養(yǎng)液：根據(jù)不同細(xì)胞選擇適合的培養(yǎng)液。3.2 胎牛血清。3.3 標(biāo)準(zhǔn)毒株、陽性血清、陰性血清。3.4 敏感細(xì)胞系：根據(jù)不同病毒選擇適合的細(xì)胞。3.5 青霉素。3.6 鏈霉素。3.7 ELISA試劑盒。4 器材和設(shè)備4.1 96孔細(xì)胞培養(yǎng)板。4.2 二氧化碳培養(yǎng)箱。4.3 普通冰箱和超低溫冰箱。4.4 可調(diào)移液器。4.5 細(xì)胞培養(yǎng)瓶。4.6 酶標(biāo)儀。4

3、.7 洗板機(jī)。5 評價(jià)總則5.1 應(yīng)在最佳條件下進(jìn)行比對試驗(yàn)，即在同一實(shí)驗(yàn)室，由同一批檢測人員嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)方法和試劑盒操作要求進(jìn)行評價(jià)。5.2 對已知陽性血清同時(shí)用中和試驗(yàn)和ELISA試驗(yàn)進(jìn)行檢測，對檢測結(jié)果進(jìn)行比對，確定不同抗體滴度對應(yīng)的ELISA數(shù)值范圍。6 實(shí)驗(yàn)室評價(jià)6.1 取已知陽性血清樣品進(jìn)行中和試驗(yàn)，測定其抗體滴度。具體操作按照OIE陸生動物診斷試驗(yàn)與疫苗手冊進(jìn)行。6.2 對已知陽性血清進(jìn)行稀釋，以獲得抗體滴度分別為1:2，1:4，1:8，1:16，1:32，1:64的血清樣品。6.3 將每個(gè)滴度的已知陽性血清樣品按照ELISA試劑盒說明書進(jìn)行檢測，測定其OD值，并根據(jù)說明書計(jì)算最終數(shù)值。6.4 將已知陽性血清的抗體滴度與ELISA結(jié)果進(jìn)行比對，確定各滴度的已知陽性血清對應(yīng)的ELISA數(shù)值的范圍，并標(biāo)定陽性對照血清的抗體滴度。6.5 根據(jù)ELISA陽性對照血清的數(shù)值及每個(gè)滴