1、血液一般檢驗(yàn),紅細(xì)胞檢查,血液的組成,紅細(xì)胞外形：正常紅細(xì)胞平均直徑7.2微米，形態(tài)呈雙面微凹圓盤(pán)狀，中央較薄，邊緣較厚，染色后呈淡紅略帶紫色，中央部分淡染，無(wú)核。,主要成份:除水外，血紅蛋白占34%-主要生理功能是作為攜氧或CO2的呼吸載體和維持酸堿平衡等.,常用的紅細(xì)胞檢查項(xiàng)目,紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、血紅蛋白測(cè)定、紅細(xì)胞形態(tài)觀察、紅細(xì)胞平均參數(shù)計(jì)算、網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、嗜堿性點(diǎn)彩紅細(xì)胞計(jì)數(shù)和紅細(xì)胞沉降率測(cè)定等。,一、紅細(xì)胞計(jì)數(shù),紅細(xì)胞計(jì)數(shù)（red blood cell count，RBC）是血液一般檢驗(yàn)的基本項(xiàng)目，常作為診斷貧血及紅細(xì)胞增多的主要指標(biāo)之一。 方法：顯微鏡計(jì)數(shù)法 血液分析儀法,顯微計(jì)數(shù)法,

2、將血液標(biāo)本用等滲稀釋液稀釋后，充入血細(xì)胞計(jì)數(shù)池，在高倍鏡下，計(jì)數(shù)計(jì)數(shù)池中央大方格中4個(gè)角中方格和中央1個(gè)中方格的紅細(xì)胞數(shù)，再換算成每升血液中的紅細(xì)胞數(shù)。,血液分析儀法,多采用電阻抗法，也有采用流式細(xì)胞術(shù)激光檢測(cè)法等,方法評(píng)價(jià),質(zhì)量保證,參考值,成年：男性 （4.095.74）1012/L，女性 （3.685.13）1012/L。 新生兒（5.26.4）1012/L。 嬰兒（4.04.3）1012/L。 兒童（4.04.5）1012/L。 紅細(xì)胞計(jì)數(shù)醫(yī)學(xué)決定水平：高于6.81012/L，應(yīng)采取相應(yīng)治療措施；低于3.51012/L可診斷貧血；低于1.51012/L應(yīng)考慮輸血。,細(xì)胞計(jì)數(shù)的臨床意義,

3、（一）生理性變化：紅細(xì)胞數(shù)量受到許多生理因素影響，但與相同年齡、性別人群的參考值相比，一般在20%以?xún)?nèi)。 （二）病理性變化,生理性變化,增多,機(jī)體缺氧，高山居民、登山運(yùn)動(dòng)員、劇烈運(yùn)動(dòng)和體力勞動(dòng)等； 雄激素增高，成年男性高于女性； 腎上腺皮質(zhì)激素增多如精神因素如情緒波動(dòng)等； 長(zhǎng)期重度吸煙 靜脈壓迫時(shí)間2min（增10%）；等,減少,生長(zhǎng)發(fā)育造血原料相對(duì)不足如6個(gè)月2歲嬰兒、 造血功能減退如老年人、 血容量增加如孕婦（減少達(dá)16%）、 長(zhǎng)期飲酒（減少約5%）。,病理性變化,增多,原發(fā)紅細(xì)胞增多：真性紅細(xì)胞增多癥，良性家族性紅細(xì)胞增多癥等 繼發(fā)性紅細(xì)胞增多：見(jiàn)于各種引起低氧血癥的疾病如各種先心病、肺

4、疾病，藥物如腎上腺素、糖皮質(zhì)激素、雄激素可引起紅細(xì)胞數(shù)的增加 相對(duì)性紅細(xì)胞增多：由于血液水分的丟失如嘔吐、嚴(yán)重腹瀉、多汗、多尿、大面積燒傷、等引起血液濃縮,減少,急性、慢性紅細(xì)胞丟失過(guò)多：如各種原因的出血 紅細(xì)胞破壞過(guò)多：如各種原因的溶血 紅細(xì)胞生成減少：造血干細(xì)胞和造血微環(huán)境損害，DNA、紅細(xì)胞生成素產(chǎn)生、血紅素合、珠蛋白合成障礙等,二、血紅蛋白測(cè)定,血紅蛋白（hemoglobin，Hb或HGB）是紅細(xì)胞的運(yùn)輸?shù)鞍?，其主要功能是吸收肺部大量的氧，并將其輸送到身體各組織。通過(guò)鐵含量可初步估計(jì)血紅蛋白量，0.347g鐵相當(dāng)于100g血紅蛋白。血紅蛋白相對(duì)分子量為64458，單體為16114，毫摩

5、爾消光系數(shù)為11.0。每克血紅蛋白可攜帶1.34ml氧。 血紅蛋白是在人體有核紅細(xì)胞及網(wǎng)織紅細(xì)胞內(nèi)合成的一種含色素輔基的結(jié)合蛋白質(zhì)，Hb的4條珠蛋白肽鏈每條可結(jié)合1個(gè)亞鐵血紅素，形成具有四級(jí)空間結(jié)構(gòu)的四聚體可結(jié)合O2和CO2。生理?xiàng)l件下，99%Hb的鐵呈Fe2+狀態(tài)，稱(chēng)為還原血紅蛋白（deoxyhemoglobin）；亞鐵狀態(tài)的Hb與氧結(jié)合稱(chēng)氧合血紅蛋白（oxyhemoglobin）；1%Hb的鐵呈Fe3+狀態(tài)，稱(chēng)為高鐵血紅蛋白（hemiglobin，Hi）。,血紅蛋白測(cè)定方法及基本原理,血紅蛋白測(cè)定大致分為4類(lèi)。常用的比色法有氰化高鐵血紅蛋白（HiCN）測(cè)定法、十二烷基硫酸鈉血紅蛋白（SDS

6、-Hb）測(cè)定法、堿羥血紅蛋白（AHD575）測(cè)定法、疊氮高鐵血紅蛋白（HiN3）測(cè)定法、溴代十六烷基三甲胺（CTAB）血紅蛋白測(cè)定法等,氰化高鐵血紅蛋白測(cè)定法,HiCN測(cè)定法是WHO和ICSH推薦的參考方法,主要優(yōu)點(diǎn)是參考方法、操作簡(jiǎn)單、反應(yīng)速度快、可檢測(cè)除SHb之外的所有Hb、產(chǎn)物穩(wěn)定便于質(zhì)控。 原理：在溶血液中，血紅蛋白（SHb除外）中的亞鐵離子（Fe2+）被高鐵氰化鉀氧化為高鐵離子（Fe3+），血紅蛋白轉(zhuǎn)化成高鐵血紅蛋白（Hi）。Hi與氰化鉀（KCN）中的氰離子反應(yīng)生成HiCN。HiCN最大吸收波峰為540nm，波谷為504nm。在特定條件下，毫摩爾消光系數(shù)為44L/（mmolcm）。H

7、iCN在540nm處的吸光度與溶液中的濃度成正比，根據(jù)測(cè)得吸光度可求得待測(cè)標(biāo)本的血紅蛋白濃度。反應(yīng)在1825中進(jìn)行，加入非離子表面活性劑可加快紅細(xì)胞的溶解，減少脂蛋白沉淀產(chǎn)生的溶液渾濁。,質(zhì)量保證,1標(biāo)本 血紅蛋白檢測(cè)原理是比色法，引起血清濁度增大的因素常致血紅蛋白濃度假性增高，如高脂血癥、高球蛋白、高白細(xì)胞HbCO增多及高血小板等。 2器材及試劑 定期校準(zhǔn)分光光度計(jì)，選用合格的微量采血管和刻度吸管及比色杯。注意保證試劑質(zhì)量。 3技術(shù)操作 消毒、采血、稀釋、混勻等要求同紅細(xì)胞計(jì)數(shù)。確保HbCO完全轉(zhuǎn)化，可延長(zhǎng)轉(zhuǎn)化時(shí)間或加大試劑中K3Fe（CN）6的用量。 4. 廢棄物 HiCN轉(zhuǎn)化液中氰化鉀是

8、劇毒品，配制轉(zhuǎn)化液時(shí)要按劇毒品管理程序操作。,正常參考值,成年：男性 131172 g/L，女性 113151 g/L。 新生兒180190 g/L。 嬰兒：110120 g/L。 兒童：120140 g/L。 老年（70歲）：男性 94122 g/L，女性 87112 g/L,臨床意義,血紅蛋白測(cè)定的臨床意義與紅細(xì)胞計(jì)數(shù)相似，但判斷貧血程度優(yōu)于紅細(xì)胞計(jì)數(shù)。,三、紅細(xì)胞形態(tài)檢查,1顯微鏡分析法 特別是異常形態(tài)的鑒別，主要采用人工顯微鏡法血涂片染色觀察，是儀器法校準(zhǔn)的參考方法和檢測(cè)的復(fù)核方法。 2計(jì)算機(jī)圖像分析 基于計(jì)算機(jī)圖像處理技術(shù)，可用于與紅細(xì)胞形態(tài)變化相關(guān)疾病的輔助診斷。 3血液分析儀法

9、不能直接提供紅細(xì)胞形態(tài)改變的確切信息，需用鏡檢血涂片核實(shí),正常紅細(xì)胞形態(tài),呈雙凹圓盤(pán)形，細(xì)胞大小均一，平均直徑7.2m（6.77.7m）；瑞氏染色后為淡粉紅色，血紅蛋白充盈良好，呈正常色素性，向心性淡染，中央部位為生理性淡染區(qū)，大小約為直徑的1/3；胞質(zhì)內(nèi)無(wú)異常結(jié)構(gòu)。正常紅細(xì)胞形態(tài)雖見(jiàn)于健康人，但也可見(jiàn)于急性失血性貧血、部分再生障礙性貧血等,異常紅細(xì)胞形態(tài),在排除人為因素后，若血涂片中出現(xiàn)異常形態(tài)紅細(xì)胞且數(shù)量增多，往往提示病理性改變。常見(jiàn)紅細(xì)胞異常形態(tài)傳統(tǒng)上可分為紅細(xì)胞大小、形狀、血紅蛋白含量、結(jié)構(gòu)和排列異常,（一）大小異常,（二） 紅細(xì)胞形狀異常,（三）紅細(xì)胞血紅蛋白含量異常,（四）紅細(xì)胞結(jié)

10、構(gòu)及排列異常,四、血細(xì)胞比容測(cè)定,定義：（HCT）是指一定體積的全血（毛細(xì)血管或靜脈血）中紅細(xì)胞所占體積的相對(duì)比例。HCT的高低與紅細(xì)胞數(shù)量及平均體積、血漿量有關(guān)，主要用于貧血、真性紅細(xì)胞增多癥和紅細(xì)胞增多的診斷、血液稀釋和血液濃縮變化的測(cè)定、計(jì)算紅細(xì)胞平均體積和紅細(xì)胞平均血紅蛋白濃度等。,HCT檢測(cè)方法,1.離心沉淀法 ： 常用微量（microhematocrit）法和溫氏（Wintrobe）法，其檢測(cè)原理基本相同。以不改變紅細(xì)胞體積及血容量的抗凝劑處理全血，注入標(biāo)準(zhǔn)毛細(xì)玻璃管或Wintrobe管，用一定轉(zhuǎn)速離心一定時(shí)間后，讀取紅細(xì)胞層的高度。血液離心后分5層，自上而下分別為血漿層、血小板層

11、、白細(xì)胞和有核紅細(xì)胞層、還原紅細(xì)胞層和氧合紅細(xì)胞層。讀取結(jié)果以還原紅細(xì)胞層為準(zhǔn)，如右圖所示。 2血液分析儀法 由測(cè)定紅細(xì)胞計(jì)數(shù)RBC和紅細(xì)胞平均體積MCV后導(dǎo)出，HCT紅細(xì)胞計(jì)數(shù)紅細(xì)胞平均體積。 【參考值】男性：0.3800.508；女性：0.3350.450。,臨床意義,1臨床補(bǔ)液量的參考 各種原因?qū)е旅撍畷r(shí)，HCT都會(huì)增高，補(bǔ)液時(shí)可監(jiān)測(cè)HCT，HCT 恢復(fù)正常表示血容量得到糾正。 2真性紅細(xì)胞增多癥診斷指標(biāo) 當(dāng)HCT 大于0.7，RBC為（710）1012/L，Hb大于180g/L，即可診斷。 3紅細(xì)胞平均指數(shù)計(jì)算的基礎(chǔ)數(shù)據(jù) 紅細(xì)胞平均值（MCV、MCHC）可用于貧血的形態(tài)學(xué)分類(lèi)。 4血液

12、流變學(xué)指標(biāo) HCT增高表明紅細(xì)胞數(shù)量偏高，可導(dǎo)致全血黏度增加，嚴(yán)重者表現(xiàn)為高黏滯綜合征，易引起微循環(huán)障礙、組織缺氧。HCT與其他血液流變學(xué)指標(biāo)聯(lián)合應(yīng)用，可對(duì)一些血栓前狀態(tài)進(jìn)行監(jiān)測(cè)。,五、紅細(xì)胞平均指數(shù),紅細(xì)胞平均指數(shù)包括紅細(xì)胞平均體積（mean corpuscular volume，MCV）、平均紅細(xì)胞血紅蛋白含量（mean corpuscular hemoglobin，MCH）和平均紅細(xì)胞血紅蛋白濃度（mean corpuscular hemoglobin concentration，MCHC）。紅細(xì)胞平均指數(shù)有助于深入認(rèn)識(shí)紅細(xì)胞特征，為貧血的鑒別診斷提供線索,檢測(cè)原理,1手工法 紅細(xì)胞平均

13、指數(shù)根據(jù)RBC、Hb、HCT測(cè)定結(jié)果計(jì)算出來(lái)。計(jì)算公司如下： 2.血液分析儀法 MCV由血液分析儀直接測(cè)定導(dǎo)出；由儀器測(cè)定HGB、RBC可計(jì)算出MCHHGB/RBC；MCHCHGB/（RBCMCV）。,MCV、MCH、MCHC參考值,臨床意義,紅細(xì)胞平均指數(shù)可用于貧血形態(tài)學(xué)分類(lèi)及提示貧血的可能原因: MCV可將紅細(xì)胞按平均體積分為正細(xì)胞、小細(xì)胞和大細(xì)胞。 MCH常用于貧血分類(lèi)。在大多數(shù)貧血中，MCH與MCV相關(guān)；小細(xì)胞貧血與低色素相關(guān)，正細(xì)胞與正色素相關(guān)，很少有MCH增高而MCV不增高的情況。 MCHC反映了紅細(xì)胞中血紅蛋白的濃度，在許多造血系統(tǒng)疾病中，MCHC仍保持恒定。,貧血形態(tài)學(xué)分類(lèi)及臨

14、床意義,六、網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù),網(wǎng)織紅細(xì)胞（reticulocyte，Ret）是介于晚幼紅細(xì)胞和成熟紅細(xì)胞之間的過(guò)渡階段細(xì)胞，略大于成熟紅細(xì)胞（直徑8.09.5m），其胞質(zhì)中殘存的嗜堿性物質(zhì)核糖核酸（RNA）源自有核紅細(xì)胞。RNA是嗜堿性物質(zhì)，經(jīng)堿性染料（如天青B、煌焦油藍(lán)或新亞甲藍(lán)等）活體染色后，形成藍(lán)色或紫色的點(diǎn)粒狀或絲網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)沉淀物，故名網(wǎng)織紅細(xì)胞。網(wǎng)織紅細(xì)胞自骨髓釋放到外周血后仍具有合成血紅蛋白的能力，約12d后，其核酸物質(zhì)消失殆盡，過(guò)渡為成熟紅細(xì)胞。,分型：ICSH將網(wǎng)織紅細(xì)胞分為，不包括O型。,檢測(cè)原理,網(wǎng)織紅細(xì)胞的核糖核酸以彌散膠體狀態(tài)存在。常規(guī)血細(xì)胞染色法（如Wright染色）在涂

15、片及染色過(guò)程中對(duì)細(xì)胞進(jìn)行了固定，使網(wǎng)織紅細(xì)胞的核酸物質(zhì)即使著色也難于在普通顯微鏡下識(shí)別。網(wǎng)織紅細(xì)胞須經(jīng)活體或熒光染色后才可用顯微鏡識(shí)別或經(jīng)儀器計(jì)數(shù)分類(lèi)。 1。普通顯微鏡法 活體染料（新亞甲藍(lán)或煌焦油藍(lán)）的堿性著色基團(tuán)（帶正電荷）可與網(wǎng)織紅細(xì)胞RNA的磷酸基（帶負(fù)電荷）結(jié)合，使RNA膠體間的負(fù)電荷減少而發(fā)生凝縮，形成藍(lán)色的點(diǎn)狀、線狀或網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。 2.儀器法 包括流式細(xì)胞法網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)儀和血液分析儀法。熒光染料與網(wǎng)織紅細(xì)胞中RNA結(jié)合，發(fā)出特定顏色的熒光進(jìn)行RNA定量，可精確計(jì)數(shù)網(wǎng)織紅細(xì)胞占成熟紅細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)（Ret%）。,Miller窺盤(pán)：普通顯微鏡計(jì)數(shù)時(shí)，為縮小分布誤差，降低勞動(dòng)強(qiáng)度，ICS

16、H及我國(guó)衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心推薦使用Miller窺盤(pán)（圖右）進(jìn)行網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)。,A為紅細(xì)胞計(jì)數(shù)區(qū)，B+A為網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)區(qū),常見(jiàn)網(wǎng)織紅細(xì)胞參數(shù)有Ret百分?jǐn)?shù)、Ret絕對(duì)數(shù)、網(wǎng)織紅細(xì)胞生成指數(shù)RPI、網(wǎng)織紅細(xì)胞成熟指數(shù)（RMI)，Ret百分?jǐn)?shù)是評(píng)價(jià)紅系造血最簡(jiǎn)單有效的方法。 【參考值】 網(wǎng)織紅細(xì)胞百分?jǐn)?shù)：成人和兒童，0.0050.025；新生兒，0.020.05。 網(wǎng)織紅細(xì)胞絕對(duì)數(shù)：成人和兒童，（50100）109/L。,臨床意義,1評(píng)價(jià)骨髓增生能力，判斷貧血類(lèi)型 （1）網(wǎng)織紅細(xì)胞增多：表示骨髓造血功能旺盛，各種增生性貧血均可增多，溶血性貧血增加尤為顯著。 （2）網(wǎng)織紅細(xì)胞減少：常見(jiàn)于再生障礙性

17、貧血（診斷依據(jù)之一）。 （3）鑒別貧血：網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)在診斷正細(xì)胞貧血，或僅鐵蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白結(jié)果可疑的小細(xì)胞貧血時(shí)尤為重要；大細(xì)胞貧血伴網(wǎng)織紅細(xì)胞增多，常提示用葉酸或維生素B12治療有效。 2. 評(píng)價(jià)療效 （1）觀察貧血療效：Ret是貧血患者隨訪檢查的項(xiàng)目之一。缺鐵性貧血或巨幼細(xì)胞貧血經(jīng)有效治療后， 23d后Ret開(kāi)始上升，710d達(dá)到最高峰（約10%），2周后逐漸降至正常水平。 （2）骨髓移植后監(jiān)測(cè)骨髓造血恢復(fù)：骨髓移植后第21天，如Ret大于15109/L，常表示無(wú)移植并發(fā)癥；若骨髓開(kāi)始恢復(fù)造血功能，首先表現(xiàn)為HFR和MFR的上升，其次為網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)值上升，因此RMI的改變更為敏感。,3

18、.放療和化療的監(jiān)測(cè) 網(wǎng)織紅細(xì)胞的動(dòng)態(tài)觀察可指導(dǎo)臨床適時(shí)調(diào)整治療方案，避免造成嚴(yán)重的骨髓抑制。機(jī)體接受放、化療后，如出現(xiàn)骨髓抑制，早期HFR和MFR降低，而后網(wǎng)織紅細(xì)胞數(shù)值降低；停止放、化療，骨髓功能恢復(fù)后，這些指標(biāo)依次上升。,七、嗜堿性點(diǎn)彩紅細(xì)胞計(jì)數(shù),嗜堿性點(diǎn)彩紅細(xì)胞（basiphilic stippling cell）是不完全成熟的紅細(xì)胞，胞質(zhì)內(nèi)殘存的核酸變性、聚集形成顆粒，經(jīng)堿性染料（如美藍(lán)）染色后，細(xì)胞內(nèi)可見(jiàn)到深染的顆粒；若以Wright染色，則在粉紅色的胞質(zhì)中見(jiàn)到紫紅色或藍(lán)黑色顆粒，故名嗜堿性點(diǎn)彩紅細(xì)胞。,【檢測(cè)原理】制備血涂片，甲醇固定，堿性美藍(lán)染色。選擇細(xì)胞分布均勻的區(qū)域，油鏡計(jì)數(shù)

19、1 000個(gè)紅細(xì)胞中嗜堿性點(diǎn)彩紅細(xì)胞的數(shù)量，或油鏡計(jì)數(shù)50個(gè)視野中的嗜堿性點(diǎn)彩紅細(xì)胞，同時(shí)計(jì)數(shù)5個(gè)視野中的正常紅細(xì)胞數(shù)量，計(jì)算百分比。,【參考值】0.03%）。,臨床意義,嗜堿性點(diǎn)彩紅細(xì)胞計(jì)數(shù)增高主要見(jiàn)于鉛、汞、銀、鉍等重金屬及硝基苯、苯胺中毒，對(duì)慢性重金屬中毒具有輔助診斷價(jià)值。溶血性貧血、巨幼細(xì)胞貧血、白血病、惡性腫瘤時(shí)也可見(jiàn)嗜堿性點(diǎn)彩紅細(xì)胞增高。,八、紅細(xì)胞沉降率測(cè)定,紅細(xì)胞沉降率（erythrocyte sedimentation rate，ESR）簡(jiǎn)稱(chēng)血沉，指在規(guī)定條件下，離體抗凝全血中的紅細(xì)胞自然下沉的速率。ESR是傳統(tǒng)且應(yīng)用較廣的指標(biāo)，用于診斷疾病雖然缺乏特異性，但操作簡(jiǎn)便，具有動(dòng)態(tài)觀察病情療效的實(shí)用價(jià)值。,1、魏氏法：將離體抗凝血液置于特制刻度