1、.,臨床生化檢驗反應(yīng)原理及報告的審核瀘州市人民醫(yī)院檢驗科 潘庭榮,.,主要內(nèi)容,常見的生化反應(yīng)原理 檢驗報告審核普遍存在的問題 檢驗報告審核的建議 總結(jié),.,終點分析法（平衡法） 連續(xù)監(jiān)測法 比濁測定法,一、常見的生化反應(yīng)原理,.,終點分析法是基于反應(yīng)達(dá)到平衡時反應(yīng)產(chǎn)物的吸收光譜特征及其對光吸收強度的大小，對物質(zhì)進行定量的一類分析方法。反應(yīng)混合物進行一定時間反應(yīng)后，達(dá)到平衡終點，即在顯色反應(yīng)處于穩(wěn)定階段時，監(jiān)測其顏色對光的吸收強度，以此計算待測物濃度。分為一點、兩點終點法,終點分析法,.,一點終點法,一點終點法：一點終點法的特點是使用一種或兩種試劑。當(dāng)樣品和試劑混合后，待測物與試劑的物理化學(xué)反

2、應(yīng)達(dá)到終點時，測定吸光度，計算待測物質(zhì)的濃度。該法要求試劑本底顏色要深，該法具有代表性的試驗有：總蛋白、白蛋白、鎂測定,.,TP反應(yīng)曲線,.,Mg反應(yīng)曲線,.,二點終點法：一般是用雙試劑，是自動化生化分析儀常用的一種方法。該方法的優(yōu)點是可以消除樣品、試劑的顏色、濁度以及一些干擾物質(zhì)的影響。代表性的試驗有葡萄糖等,兩點終點法,.,Cre反應(yīng)曲線,.,測定底物的消耗或產(chǎn)物生成的速度的化學(xué)方法稱為連續(xù)監(jiān)測法（又稱動態(tài)分析法、速率法或動力學(xué)法）。在反應(yīng)速度恒定期（零級反應(yīng)期）來連續(xù)觀察和記錄一定反應(yīng)時間內(nèi)底物或產(chǎn)物量的變化。以單位時間酶促反應(yīng)初速度計算酶活力的大小和代謝物的濃度。,連續(xù)監(jiān)測法,.,酶促

3、反應(yīng)進程曲線,.,酶促反應(yīng)進程曲線,.,典型酶聯(lián)法反應(yīng)曲線,.,AMY反應(yīng)曲線,.,ALT反應(yīng)曲線,.,通過檢測物質(zhì)對光的散射或透射強度來測定物質(zhì)的方法稱比濁法。比濁法可分為化學(xué)比濁法和免疫比濁法，免疫比濁法又分為透射比濁和散射比濁。全自動生化儀常用透射比濁法，常用于特種蛋白測定。其工作曲線為拋物線。,比濁測定法,.,比濁測定法,注意事項： 抗原或抗體量（測定物）大大過剩，可出現(xiàn)可溶性復(fù)合物，造成誤差。 應(yīng)維持反應(yīng)管中抗體蛋白（底物）始終過剩。 易受到脂血的影響。,.,二、報告審核中的普遍問題,責(zé)任心不強，未對結(jié)果進行認(rèn)真審核 對檢測儀器或試劑方法學(xué)不夠了解 專業(yè)知識欠缺，工作經(jīng)驗不足 對儀器

4、檢測的結(jié)果及室內(nèi)質(zhì)控結(jié)果過于相信,.,三、報告審核的建議,結(jié)合臨床資料審核 結(jié)合分析項目間的內(nèi)在聯(lián)系審核（專業(yè)知識） 結(jié)合影響檢驗結(jié)果因素審核 檢驗項目的方法學(xué)和線性 檢驗標(biāo)本的影響 檢驗儀器性能影響 結(jié)合當(dāng)日檢驗結(jié)果總體趨勢審核結(jié)果,.,結(jié)合臨床資料,結(jié)合病人的性別、年齡、臨床診斷、其他檢查結(jié)果審核 例：某病人檢測的TP為110g/L，該標(biāo)本沒有脂血等影響檢測結(jié)果的因素 臨床診斷：多發(fā)性骨髓瘤 另：胰島素與低血糖、病人輸注藥物對結(jié)果的影響,.,檢驗項目間的內(nèi)在聯(lián)系,各檢測參數(shù)間存在大小、比例、邏輯關(guān)系 例：HDL-C+LDL-CTC、Dbil Tbil CK-MB CK(M+B) -HBDH

5、 LDH(H+M) 原發(fā)性甲亢：T3、T4 、TSH等,.,影響檢驗結(jié)果的因素,試劑線性范圍： 了解檢驗項目試劑的線性范圍，對超過或低于范圍的項目，必須進行相應(yīng)的減量稀釋或增量后重新測定。,.,線性范圍,在實際工作中，用連續(xù)監(jiān)測法會遇到檢驗結(jié)果為0或者負(fù)值的情況，此時不能盲目相信該結(jié)果低就出具低值報告，應(yīng)查看其反應(yīng)曲線 例：某病人的尿液AMY檢測結(jié)果為0U/L 其反應(yīng)曲線如下圖：,.,AMY反應(yīng)曲線,.,AMY反應(yīng)曲線分析,分析：由于測定物質(zhì)濃度過高 處理：對測定物質(zhì)進行十倍左右的稀釋再測定，直到反應(yīng)曲線恢復(fù)正常結(jié)果才可靠,.,影響檢驗結(jié)果的因素,檢測項目的方法學(xué)： 要了解該項目試劑采用的方法

6、學(xué)： 例：某病人在測定心肌酶譜時，其CK:246U/L、 CK-MB:286U/L，標(biāo)本無溶血等因素影響 其結(jié)果中CK-MBCK,.,檢測項目的方法學(xué),分析：CK是由M和B兩類亞基組成的二聚體，其構(gòu)成為CK-MB(心型)約占0-3%、 CK-MM(肌型)約占97-100%、 CK-BB（腦型）約占0-1%,.,檢測項目的方法學(xué),CK-MB采用的檢測方法為免疫抑制法 原理:正常人體中，CK同工酶中CK-MM CK-MB CK-BB,其中CK-BB含量極少，可忽略。免疫抑制法正是建立于忽略CK-BB的基礎(chǔ)上。采用抗體抑制其M亞基活性，使CK-MM失去活性，而CK-MB失去一半的活性。單測定B亞基的

7、活性，其結(jié)果2即為CK-MB活性,.,檢測項目的方法學(xué),原因分析：由于在患輕度或中度腦損傷、腦 血管意外及腦手術(shù)后 、新生兒產(chǎn)程窒息造成 腦組織發(fā)生實質(zhì)性損害 的病人中，CK-BB會升高，這時該方法測定的CK-MB的活性相當(dāng)于是CK-MB+2CK-BB的活性之和，造成 CK-MB活性假性升高,.,檢測項目的方法學(xué),為什么CK-MB 2CK不可能 該測定CK-MB活性=CK-MB+2CK-BB,如果 CK-BB CK-MM,結(jié)果要乘2，即CK-MB+ 2CK-BB CK-BB+CK-MB+CK-MM,測定的CK-MB 活性 CK活性，但CK-MB 2CK 不可能 解決方法：其他方法測定CK-MB

8、的質(zhì)量,.,檢驗標(biāo)本的影響,標(biāo)本脂血會使反應(yīng)濁度增加，透光度下降，吸光度增加，從而造成檢驗結(jié)果不準(zhǔn)確。如TP、TG、UA顯著增高，GGT顯著下降或為0 標(biāo)本溶血會使K+、ALT、AST、LDH等檢驗結(jié)果顯著升高 抗凝劑的錯誤使用,.,儀器性能影響,儀器老化、故障、清洗管道堵塞、水質(zhì)不純等均會對檢驗結(jié)果造成影響 光路老化：表現(xiàn)為ALT、AST等項目結(jié)果重復(fù)性較差 水質(zhì)不純、反應(yīng)杯清洗不干凈：表現(xiàn)為無機物質(zhì)結(jié)果不準(zhǔn),.,檢驗結(jié)果的總體趨勢,即使質(zhì)控在控，也要注意當(dāng)日檢驗結(jié)果的總體的分布趨勢 如K+的參考區(qū)間為3.55.5，中值為4.5，如果當(dāng)日結(jié)果大部分甚至全部低于4.5，即使當(dāng)日質(zhì)控在控，任要考慮結(jié)果是否偏低，應(yīng)重新校準(zhǔn)、質(zhì)控后再測定 如在質(zhì)控中 TC(-1S),HDL (+1S) ,LDL(+1S),雖然在控，如出現(xiàn)大部分HDL+LDL TC，也應(yīng)考慮重新對三項目校標(biāo)、質(zhì)控后再測定,