1、 和 地中海貧血的遺傳篩查和產(chǎn)前診斷 Genetic Screening and Prenatal Diagnosis for and thalassemia in Guangdong Meizhou 2006, December 07 徐湘民 南方醫(yī)科大學(xué)，醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)教研室 南方醫(yī)院產(chǎn)前診斷和遺傳病診斷技術(shù)中心 Southern Medical University,地中海貧血是全球最大的單基因遺傳病之一,中國(guó)南方不同高發(fā)地 區(qū)人群攜帶率 1 23%,研究背景,中國(guó)南方和地貧的人群攜帶率,珠海,韶關(guān),廣州,汕頭,湛江,廣東省五個(gè)地區(qū)地中海貧血遺傳流行病學(xué)調(diào)查,西,南,東,北,中,Journa

2、l of Clinical Pathology, 2004; 57(5):517-22.,廣東省人群中地貧的攜帶者頻率,廣東省人群中地貧的攜帶者頻率,廣東省年高風(fēng)險(xiǎn)妊娠預(yù)測(cè)數(shù)據(jù)（95%CI） 重型或中間型地貧： 645 （480，835） Barts胎兒水腫綜合征：1714 （1498，1945） 血紅蛋白（Hb）H ?。?1677 （1467，1901）,廣州市主要出生缺陷的發(fā)生率 (1998-2001),地貧純合子：致死性出生缺陷,重型地貧:胎兒水腫綜合征 早產(chǎn)死胎或出生前后死亡 可導(dǎo)致嚴(yán)重產(chǎn)科并發(fā)癥 無理想治療方法,重型地貧 出生后1年內(nèi)發(fā)病 多于未成年前因嚴(yán)重貧血而夭折 輸血和去鐵治療

3、可維持,代價(jià)昂貴,研究地中海貧血的意義 重癥地貧患兒的出生是世界公認(rèn)的公共衛(wèi)生問題 通過產(chǎn)前診斷阻止重癥患兒出生是首選預(yù)防措施 WHO優(yōu)先推薦在發(fā)展中國(guó)家實(shí)施預(yù)防的遺傳性疾病 預(yù)防地貧是中國(guó)南方高發(fā)區(qū)減少出生缺陷的戰(zhàn)略需求,研究背景,應(yīng)用于地貧 控制的人群篩查策略 基于醫(yī)院水平的預(yù)防計(jì)劃 基于社區(qū)水平的預(yù)防計(jì)劃 擴(kuò)展的家系篩查計(jì)劃,中國(guó)南方地貧人群預(yù)防的首個(gè)前瞻性篩查計(jì)劃, 時(shí)間：1993.01.01 2003.12.31 基于醫(yī)院的預(yù)防計(jì)劃: 廣州市婦嬰醫(yī)院 占廣州市出生數(shù)的 1 / 17 策略：孕期雜合子篩查 結(jié)合現(xiàn)行的孕期健康產(chǎn)科檢查實(shí)施,地貧攜帶者篩查及產(chǎn)前診斷流程,篩查結(jié)果,異常血紅

4、蛋白篩查結(jié)果,廣州市婦嬰醫(yī)院 1993-2003 篩查計(jì)劃的結(jié)果,( contd ),篩查發(fā)現(xiàn)的陽性孕婦或陽性夫婦 地貧1 地貧 地貧 地貧 5.7% 3.6% 4.4% 1.8%,Total of 4503 couples screened,54例Barts水腫兒和Hb H病,18例重型地貧,2804 1783 198對(duì) 83對(duì),產(chǎn)前診斷：187 例 地貧 82例 地貧,廣州市婦嬰醫(yī)院 1993-2003 篩查計(jì)劃的結(jié)果,產(chǎn)前診斷結(jié)果,地中海貧血的產(chǎn)前診斷, 胎兒取樣技術(shù) DNA診斷技術(shù) -地貧的診斷 -地貧的診斷,羊膜穿刺 (amniocentesis) 抽取胎兒樣品示意圖,DNA診斷技術(shù)

5、, 多重PCR （multiplex PCR） 等位基因特異性性寡核苷酸雜交（ASO） 反向點(diǎn)雜交 （RDB） 變性高效液相色譜（DHPLC） 多重引物延伸DHPLC（multiplex PE / DHPLC）,用于 和 地貧產(chǎn)前診斷的方法 (1993-2003 ),胎兒臍帶血血紅蛋白電泳圖譜,Diagnosis Patient 1 Barts hydrops fetalis Patient 2 Hb H disease Patient 3 thal trait,本實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用的主要技術(shù),采用Gap-PCR進(jìn)行-SEA地貧基因缺失的基因分型,-SEA地貧缺失的基因分型結(jié)果,與美國(guó)商品化UBI試劑

6、盒的對(duì)比研究,中國(guó)南方地貧突變的變異類型和位置,EXON 1,IVS 1,EXON 2,EXON 3,IVS 2, Fragment size: A = 453 bp B = 364 bp C = 423 bp One set of PCR conditions,DHPLC 分析人珠蛋白基因: 三個(gè)PCR片段擴(kuò)增,IVS2,3 UTR,A,B,C,DHPLC的三種 操作模式 非變性分析（ 50 C ） 雙鏈DNA大小測(cè)定 半變性分析（ 52-78 C ） 突變鑒定 全變性分析（ 78-80 C ） Oligo和RNA分析,PCR產(chǎn)物的半變性分析（ 52-78 C ）,Wild typeMuta

7、nt HeteroduplexesHomoduplexes,Reference Samples,PCR Products,DHPLC 檢測(cè)地貧突變的結(jié)果,DHPLC 檢測(cè)地貧突變的結(jié)果,DHPLC 檢測(cè)地貧突變的結(jié)果,RDB analysis: application to rapid prenatal diagnosis for eight thalassaemia mutations.,Genotype Father CDs41-42 (CTTT) / N Mother IVS-2-654 (CT) / N Fetus CDs41-42 / IVS-2-654 Normal control

8、 N / N,83 例 地貧高風(fēng)險(xiǎn)胎兒產(chǎn)前診斷結(jié)果,( contd ),266 例高風(fēng)險(xiǎn)妊娠的產(chǎn)前診斷結(jié)果,* Three Hb H disease involved,269 (95.7%) 孕婦實(shí)施產(chǎn)前診斷 187 地貧 83 地貧(1雙胞胎),72(26.7%) 孕婦要求終止妊娠 54 重型地貧 18 重型地貧(1雙胞胎),69 重型地貧被預(yù)防 51 水腫胎 18 重型地貧(1雙胞胎),12 孕婦不接受產(chǎn)前診斷,197例孕婦繼續(xù)妊娠,3 例HbH病出生,2例水腫胎出生,廣東省和地中海貧血預(yù)防模式研究 現(xiàn)場(chǎng)：廣東省四會(huì)市 時(shí)間：2001.1-2005.12 人口: 40萬 目標(biāo): 為制定2006年廣東省全境地貧 預(yù)防計(jì)劃提供方法和經(jīng)驗(yàn),產(chǎn)前遺傳學(xué)的臨床和公共衛(wèi)生問題 利用有效的公共衛(wèi)生教育資源，首先使醫(yī)生 和公眾了解更多的地貧知識(shí)和知曉選擇遺傳 服務(wù)及其對(duì)待產(chǎn)前診斷的態(tài)度是我們面臨的 一個(gè)重要課題； 2.為滿足大規(guī)模預(yù)防工作的需要，我們須大力 加強(qiáng)?？漆t(yī)生,遺傳咨詢師，及其他相關(guān)專業(yè) 人員的培訓(xùn)工作;,3.預(yù)防監(jiān)測(cè)系統(tǒng)建立過程中，要特別注重轉(zhuǎn)診、 病例登記、實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制的把關(guān);