四川大學(xué)碩士畢業(yè)論文 薄層色譜法拆分幾種1 3 一受體阻滯劑藥物的研究 應(yīng)用化學(xué)專業(yè) 研究生董海英指導(dǎo)老師梁冰 許多藥物或生理上非常重要的化臺(tái)物都是手性的，這些化合物的光學(xué)異構(gòu) 體在藥理上有較大的差異，在某些情況下，其光學(xué)異構(gòu)體也許會(huì)產(chǎn)生難以預(yù)料 的副作用。因此，為提高藥物活性，降低副作用以及指導(dǎo)藥物生產(chǎn)和質(zhì)量控制， 提供光學(xué)純化合物已成為生物化學(xué)和藥物學(xué)的一個(gè)重大課題。1 9 9 2 年f d a 發(fā)布 了手性藥物指導(dǎo)原則，要求所有在美國上市的消旋體新藥，均需提供詳細(xì)報(bào)告， 說明藥物中所含對(duì)映體各自的藥理作用、毒性和臨床效果。因此，外消旋手性 藥物的拆分非常重要。 本文詳細(xì)分析了手性拆分技術(shù)的發(fā)展趨勢(shì)，綜述了現(xiàn)有的手性拆分方法， 分析了各種方法的利弊。深入研究了d 1 0 一樟腦磺酸銨作為薄層色譜流動(dòng)相手性 離子對(duì)添加劑拆分鹽酸普萘洛爾對(duì)映體，通過單因素實(shí)驗(yàn)考察了展開體系、溫 度、預(yù)飽和時(shí)間、p h 、手性離子對(duì)試劑濃度以及濕度等的影響，得到了拆分的 最佳色譜條件；采用p 一環(huán)糊精固載薄層色譜法拆分了鹽酸普萘洛爾，并對(duì)拆分 的流動(dòng)相組成、配比和手性選擇體固載量進(jìn)行了考察，優(yōu)化了分離條件，得到 了拆分的最佳條件，并初步探討了1 3 一環(huán)糊精固載薄層色譜法拆分鹽酸普萘洛爾 的機(jī)理。 同時(shí)研究了d 一1 0 一樟腦磺酸銨作為薄層色譜流動(dòng)相手性離子對(duì)添加劑拆分 酒石酸美托洛爾和阿替洛爾對(duì)映體，討論了展開體系、溫度、預(yù)飽和時(shí)間、p h 、 手性離子對(duì)試劑濃度以及濕度對(duì)拆分的影響，分別得到了酒石酸美托洛爾和阿 替洛爾的最佳分離條件；也深入討論了0 一環(huán)糊精固載薄層色譜法拆分酒石酸美 托洛爾和阿替洛爾對(duì)映體的條件如：展開體系，溫度和手性選擇體固載量等。 關(guān)鍵詞：手性藥物，拆分，手性離子對(duì)添加劑，e 一環(huán)糊精，薄層色譜，機(jī) 四川大學(xué)碩士畢業(yè)論文 理，普萘洛爾，美托洛爾，阿替洛爾 四川大學(xué)碩士畢業(yè)論文 s t u d i e so nt h ee n a n t i o s e p a r a t i o no fs e v e r a l r e c e p t o rb l o c k i n gd r u g sb yt l c i h j o r ：a p p l i e dc h e m i s t r y p o s t g r a d u a t e ：d o n gh a ly i n gs u p e r v i s o r ：l i a n gb i n g m a n yd r u g so rn e c e s s a r y p h y s i o l o g i c a lc o m p o u n d sa l ec h i r a l ，a n dt h eo p t i c a l i s o m e r so f t h e s ec o m p o u n d sa r ev e r yd i f f e r e n ti np h y s i o l o g y ，i ns o m ec a s e s ，p e r h a p s t h eo p t i c a li s o m e r sh a v eu n e x p e c t e ds i d e e f f e c t s s o ，i no r d e rt oi m p r o v ed r u g a c f i v i t y ，d e c r e a s es i d e e f f e c ta n dp r o c e s sd r u gm a n u f a c t u r i n ga n dq u a l i t yc o n t r o l l i n g ， s u p p l y i n go p t i c a l l yp u r ec o m p o u n d s h a sb e c o m ea l li m p o r t a n ts u b j e c ti nb i o c h e m i s t r y a n d p h a r m a c o l o g y g u i d e l i n e so f e h i r a ld r u g s ，w h i c h w a s p u b l i s h e d b y f d a i n l 9 9 2 ， d e m a n d e dt h a td e t a i l e dr e p o r t so fr a c e m i cn e wd r u g ss h o u l db ep r o v i d e db e f o r e e n t e r i n gt h em a r k e ti nu s a ，w h i c hs h o u l dp r o v ep h y s i o l o g ye 毹c t s ，t o x i c i t ya n d c l i n i c a lr e s u l t so f i s o m e r si nd r u g s i naw o r d ，t h ee n a n f i o s e p a r a t i o no f r a c e m i cd r u g s i sv e r yi m p o r t a n t t h et r e n do fd e v e l o p m e n to fc h i r a l t e c h n i q u e s w a sa n a l y z e d ，a n dt h e f o r t h c o m i n gc h i r a ls e p a r a t i o nm e t h o d sa n dt h e i ra d v a n t a g e sa n dd i s a d v a n t a g e sw e r e r e v i e w e dd e t a i l e d l yi nt h i sp a p e r , t h ee n a n t i o s e p a r a t i o no fp r o p r a n o l o lb yt l cu s i n g d 一1 0 - c a m p h o ra m m o n i u ms u l f o n a t ea se h i r a li o n p a i ra g e n ti nt h em o b i l ep h a s ew a s s t u d i e di nd e p t h ，t h ee f f e c t so f t h em o b i l ep h a s e ，m m p e r a t u r e ，p r e s a t u r a t i o nt i m e ， p h ，t h e c o n c e n l r a t i o no f i o n - p a i ra g e n ta n dh u m i d i t yo ns e p a r a t i o nw e r ei n v e s t i g a t e d b ys i n g l e - f a c t o re x p e r i m e n t s ，a n dt h eo p t i m a lc h r o a t o g r a p h i cc o n d i t i o n s w e r l - e c o n c l u d e d ；s e c o n d l y ，r e s o l u t i o no fp r o p r a n o l o lh y d r o c h l o r i d ee n a n t i o m e r su s i n g1 3 - c y c l o d e x t r i ni m p r e g n a t e dt h i n - l a y e rc h r o m a t o g r a p h yw a ss t u d i e ds y n c h r o n o u s l y ，t h e 四川大學(xué)碩士畢業(yè)論文 m a k e u po ft h em o b i l ep h a s ea n dq u a n t i t yo ft h ei m p r e g n a t e dc h i r a ls e l e c t o r sw e r e s t u d i e d ，t h ec o n d i t i o n so fs e p a r a t i o nw e r eo p t i m i z e d ，t h e nc o n c l u d e dt h eo p t i m a l c o n d i t i o n so fs e p a r a t i o n i nt h em e a n t i m e ，w es t u d i e dt h ee n a n t i o s e p a r a t i o no f m e t o p r o l o la n da t e n o l o lb y t l cu s i n gd - 10 - c a m p h o ra m m o n i u ms u l f o n a t ea sc h i r a li o n - p a i ra g e n ti nt h em o b i l e p h a s e ，d i s c u s s e dt h ee f f e c t so f t h em o b i l ep h a s e ，t e m p e r a ：t i l r e ，p r e s a t u r a t i o nt i m e ， p h ，t h ec o n c e n t r a t i o no fi o n - p a i ra g e n ta n dh u m i d i t yo ns e p a r a t i o n ，a n dc o n c l u d e d r e s p e c t i v e l yt h eo p t i m a ls e p a r a t i o nc o n d i t i o n so fm e t o p r o l o la n da t a n o l o l ；w ea l s o d i s c u s s e dt h ec o n d i t i o n so fr e s o l u t i o no fm e t o p r o l o la n da t a n o l o le n a n t i o m e r su s i n g 1 3 一c y c l o d e x t r i ni m p r e g n a t e dt h i n - l a y e rc h r o m a t o g r a p h y ，s u c h a st h em a k e u po ft h e m o b i l ep h a s e ，t e m p e r a t u r ea n dq u a n t i t yo f t h ei m p r e g n a t e dc h i r a ls e l e c t o r s e t c k e yw o r d s ：c h i r a ld r u g s ，r e s o l u t i o n ，c h i r a li o n - p a i ra g e n t ，1 3 c y c l o d e x t r i n ， t h i n l a y e rc h d m a t o 鯽b y ，m e c h a n i s m ，p r o p r a n o l o l ，m e t o p r o l o l ，a t e n o l o l 四川大學(xué)碩士畢業(yè)論文 聲明 本人聲明所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的 研究成果。據(jù)我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含 其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得四川大學(xué)或其他教育機(jī) 構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料。與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢 獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說明并表示謝意。 本學(xué)位論文成果是本人在四川大學(xué)讀書期間在導(dǎo)師指導(dǎo)下取得的，論文成 果歸四川大學(xué)所有，特此聲明。 研究生簽名 導(dǎo)師簽名 2 0 0 6 年5 月 程必扣 回扔 荔謦， 四川大學(xué)碩士畢業(yè)論文 1 前言 1 1 手性與手性藥物 手性的概念與不對(duì)稱密切相關(guān)“。從原子到人都是不對(duì)稱的，如人的左手和 右手不能重疊，互為鏡象；自然界存在的糖都是d 一型的；氨基酸是l 一型；蛋白 質(zhì)和d n a 是右旋的；海螺的螺紋和纏繞植物都是右旋的。因此，我們的世界是 不對(duì)稱的，即手性是宇宙間的普遍特征，是自然界的本質(zhì)屬性之一。 如果有機(jī)化合物分子中的一個(gè)碳原子連接了4 個(gè)不相同的原子或基團(tuán)，則 該化合物沒有任何對(duì)稱因素( 如對(duì)稱中心、對(duì)稱面等) ，將有兩個(gè)互為實(shí)物 鏡象關(guān)系的對(duì)映體，于是該分子就具有手性，稱為不對(duì)稱分子。與四個(gè)不相同 的原子或基團(tuán)相連的碳原子稱為手性碳原子或不對(duì)稱碳原子。不對(duì)稱c 原子是 最常見的手性原子。除此之外，s ，n ，p ，b 也可形成穩(wěn)定的手性中心。此外， 一些具有手性軸或手性面的分子( 例如丙二烯型、聯(lián)苯型或提籃型旋光化合物分 子) 或金屬有機(jī)化合物分子( 例如二茂鐵衍生物) 也是手性的”“。旋光性不同的對(duì) 映體在其名稱前附加符號(hào)( + ) 一或d 一，表示右旋；而附加符號(hào)( 一) 一或卜，則表示 左旋。 手性是自然界普遍存在的現(xiàn)象，它與我們?nèi)粘Ｉ铌P(guān)系密切。3 。手性化合物 在非手性環(huán)境中具有相同的性質(zhì)，而在手性環(huán)境中則性質(zhì)不同。雖然右旋和左 旋異構(gòu)體之間的原子排列只存在微小的差別，但人類新陳代謝由一系列相互銜 接的化學(xué)反應(yīng)組成，從分子水平來看，手性代表著生命過程中最本質(zhì)的性質(zhì)。 氨基酸具有手性、小分子糖具有手性、多肽具有手性、蛋白質(zhì)具有手性、多聚 糖也具有手性，從而生物系統(tǒng)中不同的手性體在代謝與調(diào)節(jié)過程中具有明顯不 同的生理活性。而在藥物領(lǐng)域里，含有手性中心的藥物，稱之為手性藥物。當(dāng) 藥物存在對(duì)映體時(shí)，其藥性與藥物分子的立體構(gòu)型有密切關(guān)系。在手性藥物進(jìn) 入生物體內(nèi)后，由于人體細(xì)胞或身體可辨別出這種差別，且常常只能利用其中 一種異構(gòu)體( 例如酵母只能使左旋葡萄糖發(fā)酵，人體內(nèi)細(xì)胞也只能利用左旋氨基 酸來制造蛋白質(zhì)) ，故代謝途徑和藥理作用常常不同，生物活性和藥效、毒副作 用等也存在顯著差異。近年臨床實(shí)踐反復(fù)證實(shí)了這一點(diǎn)，即：一種立體異構(gòu)體有 藥效，而另一種則藥效很小，甚至完全沒有藥效或有相反的藥效。在藥理研究 四川大學(xué)碩士畢業(yè)論文 上。”，將活性最高的立體異構(gòu)體叫作e u t o m e r ，而活性最低的異構(gòu)體稱為 d i s t o m e r ( 希臘語，e l l = g o o d ，d i s = b a d ) 。在許多情況下，d i s t o m e r 不但本身 沒有藥效，還會(huì)部分抵消e u t o m e r 的藥效，有時(shí)還會(huì)產(chǎn)生有毒的代謝產(chǎn)物或引 起嚴(yán)重的副作用。 具體可從以下臨床研究實(shí)例來說明。4 “： ( 一) 手性藥物分子兩種對(duì)映體的具有相同藥效，但差別很大。 非巴比妥類靜脈麻醉藥依托咪酯( e t o m i d a t e ，甲芐咪唑) 結(jié)構(gòu)中含有手性碳 原子，僅右旋體有效：廣譜抗生素治瘧藥氯霉素，其d - ( 一) 一異構(gòu)體具有殺菌作用， 而l - ( 一) 一異構(gòu)體則完全沒藥效：酮咯酸( k e t o r o l a c ) 鎮(zhèn)痛活性是阿司匹林的8 0 0 倍，且消炎活性強(qiáng)于萘普生，其s 一異構(gòu)體的消炎作用和鎮(zhèn)痛作用較r 一異構(gòu)體強(qiáng) 1 0 倍和2 3 0 倍：倍他羅定( b p r o d i n e ) 的鎮(zhèn)痛作用約為阿法羅定( d p r o d i n e ) 的6 倍：右旋丙氧酚( p r o p o x y p h e n e ，達(dá)爾豐) 是成癮性很小的鎮(zhèn)痛藥，適用于由 慢性疾病引起的疼痛，而左丙氧酚為一鎮(zhèn)咳藥。 手性藥物分子兩種對(duì)映體的藥效相反。 哌西那朵( p i c e n a d 0 1 ) 是具有獨(dú)特混合作用的新型苯哌啶鎮(zhèn)痛藥，既有阿片 激動(dòng)活性，又有拮抗性，其( + ) 一異構(gòu)體為激動(dòng)劑，( 一) 一為拮抗劑。 d i s t o m e r 或其代謝產(chǎn)物有毒或引起嚴(yán)重副作用。 最典型的例子是“反應(yīng)停”。4 ( 沙利度胺，t h a l i d o m i d e ) 2 0 世紀(jì)5 0 年代 中期，德國c h e m i eg r u n e nt h a l 公司以消旋體上市t h a l i d o m i d e ，作為鎮(zhèn)痛劑 用于預(yù)防孕婦的惡心。1 9 6 1 年發(fā)現(xiàn)，懷孕后3 個(gè)月服用此藥可引起胎兒的海豹 畸形。據(jù)統(tǒng)計(jì)，由“反應(yīng)停”致畸的案例，全世界達(dá)1 7 0 0 0 例以上，是2 0 世紀(jì) 最大的藥害事件。1 9 7 9 年，德國波恩大學(xué)研究人員對(duì)該藥物進(jìn)行了拆分，發(fā)現(xiàn) 是s 型對(duì)映體具有致畸作用，而只有r 型對(duì)映體具有鎮(zhèn)痛作用。慘痛的教訓(xùn)使 人們認(rèn)識(shí)到，藥物必須注意他們不同的構(gòu)型。 同樣，在農(nóng)藥和除草劑、殺蟲劑殺菌劑等領(lǐng)域，手性化合物由于具有對(duì)映 體選擇效應(yīng)以及不同的生物降解速度而被關(guān)注，調(diào)味劑、香料、營養(yǎng)品等與人 們?nèi)粘Ｉ钕⑾⑾嚓P(guān)的化學(xué)產(chǎn)品也受到重視。在處理有生物活性的物質(zhì)如維生 素、信息素、輔酶、藥物產(chǎn)品以及一般天然存在的手性化合物時(shí)，對(duì)映體的分 離和分析都是最重要的問題?？傊邢嚓P(guān)領(lǐng)域都開始關(guān)注手性化學(xué)這個(gè)主 四川大學(xué)碩士畢業(yè)論文 題。 1 2 手性拆分的提出和意義 在藥物領(lǐng)域，據(jù)調(diào)查目前市場銷售與臨床應(yīng)用的化學(xué)合成藥物中，有7 5 以上是外消旋體藥物，即為兩種光學(xué)異構(gòu)體的等量混合物。為了用藥安全有效， 對(duì)手性化合物的各個(gè)異構(gòu)體分別進(jìn)行考察，了解其各自的生理活性是很有必要 的。1 9 9 2 年美國食品與藥物監(jiān)管局( f d a ) 的藥物評(píng)價(jià)與研發(fā)中心( c d e r ) 公布刪 了光學(xué)活性藥物的發(fā)展綱要，要求新藥的使用說明中必須明確量化每一種對(duì)映 異構(gòu)體的藥效作用和毒理作用，并且當(dāng)兩種異構(gòu)體有明顯藥效和毒理作用差異 時(shí)，必須以光學(xué)純藥品形式上市。因此，手性藥物的分離和鑒定在藥物分析中 就占有極其重要的地位，以便對(duì)藥物進(jìn)行質(zhì)量控制，并為藥物的藥理、毒理研 究提供分析手段。 f d a 的決定大大促進(jìn)了手性藥物的研制和開發(fā)，使得世界藥物市場中的藥物 銷售類型發(fā)生了巨大的變化，手性藥物的銷售額正以迅猛的勢(shì)頭不斷增長“： 1 9 9 3 年世界市場上出售的單一對(duì)映體形式的藥物比1 9 9 2 年增長了2 2 ，而1 9 9 4 年又比1 9 9 3 年增長2 7 ，達(dá)4 5 2 億美元?，F(xiàn)用于l 臨床的原料藥世界上總共有3 5 0 0 種4 0 0 0 種，其中約5 0 是合成藥物。在合成藥物中，又約有4 0 0 5 是外消旋體， 而外消旋體合成藥物在目前仍主要以外消旋體在臨床使用。 總之，制備旋光純手性對(duì)映體是非常重要的。因?yàn)椋?( 1 ) 不同的對(duì)映體具有不同的藥理作用； ( 2 ) 不同的對(duì)映體具有不同的生物活性； ( 3 ) f d a 嚴(yán)格提出了手性藥物需制備成單體的原則； ( 4 ) 與人們生活息息相關(guān)的化學(xué)品因具有手性，從而具有對(duì)映體選擇效 應(yīng)以及不同的生物降解速度； ( 5 ) 要研究和利用有生物活性的立體化合物異構(gòu)體，也要獲得對(duì)映體純 的手性化合物。 通過一般的化學(xué)反應(yīng)來制備某種物質(zhì)時(shí)，往往會(huì)得到左旋、右旋兩種光學(xué) 異構(gòu)體各占一半的混合物。研究不對(duì)稱合成技術(shù)耗費(fèi)資金較大，手性合成雖可 直接得到純度較高的光學(xué)純物質(zhì)，但其產(chǎn)率普遍較低，且不易實(shí)現(xiàn)。相反，若 四川大學(xué)碩士畢業(yè)論文 采用恰當(dāng)?shù)氖中圆鸱旨夹g(shù)，就可以得到較高產(chǎn)量的對(duì)映異構(gòu)體，分離手性化合 物從而得到單一旋光體是目前制備單一對(duì)映體最有效的方法，手性拆分技術(shù)也 就應(yīng)運(yùn)而生。 目前已經(jīng)開發(fā)的制備對(duì)映純化合物的方法，主要有以下幾種“7t 2 - t t ： ( 1 ) 從天然光活性產(chǎn)物中獲得，這種天然來源即“手性池”( c h i r a lp 0 0 1 ) ； ( 2 ) 由天然手性化合物經(jīng)化學(xué)改造合成； ( 3 ) 外消旋體化學(xué)拆分法。即用一種手性試劑把外消旋體混合物中的兩個(gè)對(duì) 映體轉(zhuǎn)變成非對(duì)映異構(gòu)體，然后利用兩種非對(duì)映體異構(gòu)體的物理性質(zhì)差 異，將其分開； ( 4 ) 外消旋體生物拆分法。即用微生物( 或酶) 選擇性地將兩對(duì)映體之一轉(zhuǎn)變 成另一對(duì)映體化合物，達(dá)到分離目的； ( 5 ) 色譜分離法。即利用手性色譜柱直接分離對(duì)映體，或由非手性色譜柱間 接分離非對(duì)映異構(gòu)體。目前主要的色譜拆分方法有氣相色譜法( g a s c h r o m a t o g r a p h y ；g c ) 、液相色譜法( l i q u i dc h r o m a t o g r a p h y ；l c ) 、 毛細(xì)管電泳( c a p i l l i a r ye 1 e c r t o p h o r e s i s ；c e ) 、超臨界色譜法 ( s u p e r c r i t i c a lf l u i dc h r o m a t o g r a p h y ；s f c ) 、平面色譜法( p l a i n c h r o m a t o g r a p h y ) 等等； ( 6 ) 動(dòng)力學(xué)拆分； ( 7 ) 不對(duì)稱合成。 隨著對(duì)手性化合物研究和認(rèn)識(shí)的不斷深入，人們對(duì)單一手性物質(zhì)的需求量 越來越大，對(duì)其純度的要求也越來越高。研究發(fā)展低成本、高效率的手性技術(shù) 的重要性日益凸現(xiàn)，為廣大醫(yī)藥工業(yè)領(lǐng)域的研究者帶來了巨大的挑戰(zhàn)和機(jī)遇。 廣闊的應(yīng)用前景和巨大的市場發(fā)展推動(dòng)了探索新的更有效的獲得單一手性化合 物方法的研究。 1 3 主要的手性拆分技術(shù)及其研究進(jìn)展 手性拆分技術(shù)主要包括：結(jié)晶拆分法嘲、化學(xué)拆分法、動(dòng)力學(xué)拆分法、酶拆 分法、膜拆分法、色譜拆分法等。 四川大學(xué)碩士畢業(yè)論文 1 3 1 結(jié)晶拆分法 ( 1 ) 晶體機(jī)械拆分法( 直接結(jié)晶拆分法) 如果對(duì)映體以晶體形式析出，并且不同構(gòu)型對(duì)映體晶體有明顯差異，則可 借助于放大鏡，將對(duì)映體晶體分別揀出，達(dá)到拆分的目的，此即機(jī)械拆分法。 1 8 4 8 年，l o u i sp a s t e u r 用放大鏡和鑷子成功地分離了酒石酸鈉銨鹽的外消旋 體，這項(xiàng)先驅(qū)性工作標(biāo)志著手性分離的開始。 本方法由于比較繁瑣，只能應(yīng)用在兩種對(duì)映體晶體可以被看出區(qū)別的那些 外消旋體混合物，所以應(yīng)用面較窄，不利于推廣。 ( 2 ) 接種結(jié)晶拆分法 向外消旋體中加入某一對(duì)映體的微晶，該構(gòu)型的對(duì)映體就可以優(yōu)先結(jié)晶出 來，且結(jié)晶量遠(yuǎn)大于種晶量。將晶體濾出后，濾液中就含有過量的另一對(duì)映體， 將濾液升溫后，加入外消旋體，冷卻，接著放入含量較多的對(duì)映體的種晶，從 而使該對(duì)映體自外消旋體混合物中析出。這種拆分方法只需要2 種對(duì)映體的少 量晶種即可完成。倘若外消旋體化合物比其對(duì)映體的溶解度大，那么也可以用 任一純對(duì)映體晶體接種，而使該對(duì)映體自外消旋化合物的飽和溶液中析出。 如果沒有純的對(duì)映體，還可考慮采用別的旋光化合物晶體做晶種來進(jìn)行結(jié) 晶拆分，這是近年來發(fā)展的所謂“干擾結(jié)晶拆分法”。如在外消旋的谷氨酸、酥 氨酸、天門冬氨酸胺飽和溶液中分別加入少許的s 一賴氨酸、s 一谷氨酸、s 一天門 冬氨酸，使r 一谷氨酸、r 一酥氨酸、r 一天門冬氨酰胺先結(jié)晶析出。 接種結(jié)晶拆分法工藝比較簡單，成本相對(duì)較低，效果也較好。但合適的溶 劑配比需要很多的探索實(shí)驗(yàn)來獲得，操作時(shí)的投料量和溫度等控制要求也相當(dāng) 嚴(yán)格。 1 3 2 化學(xué)拆分法 如果外消旋體分子含有如羧基、氨基、羥基和雙鍵等某些活性基團(tuán)，可讓 其與某一旋光活性化合物進(jìn)行反應(yīng)，生成兩種非對(duì)映異構(gòu)體，然后利用非對(duì)映 異構(gòu)體物理性質(zhì)主要是溶解度上的差別，將2 個(gè)非對(duì)映異構(gòu)體分開o “川 四川大學(xué)碩士畢業(yè)論文 ( + ) 一酸一( + ) 一+ ( 一) 堿 對(duì)映體+ ( 一) 一堿非對(duì)映立體異構(gòu)體 ( 一) 一酸- ( 一) 一+ ( 一) 堿 本方法主要用于酸堿拆分，天然的麻黃堿、酒石酸、喹啉、樟腦磺酸等都 是常用的拆分試劑。在羥基化合物和雙鍵化合物的分離中，還可用手性試劑與 金屬離子形成的配位化合物做拆分試劑。 1 3 3 動(dòng)力學(xué)拆分法 1 8 5 8 年，p a s t e u r 發(fā)現(xiàn)用灰綠青毒霉發(fā)酵消旋酒石酸銨時(shí)，右旋對(duì)映體的 代謝要比左旋體快，以此進(jìn)行分離，可得到光學(xué)活性化合物，這大概是化學(xué)史 上第一個(gè)動(dòng)力學(xué)拆分例子，又稱經(jīng)典動(dòng)力學(xué)拆分( c l a s s i c a lk i n e t i c r e s o l u t i o n s ，c k r ) 。這種方法最大限制是，最多只可能得到5 0 5 的理論產(chǎn)量。 由于經(jīng)濟(jì)和環(huán)境的影響，人們不僅僅需要生產(chǎn)高純度的對(duì)映體，也需要提高生 產(chǎn)的理論產(chǎn)量，在此條件下，出現(xiàn)了動(dòng)態(tài)動(dòng)力學(xué)拆分。1 ( d y n a m i ck i n e t i c r e s o l u t i o n s ，d k r ) 。個(gè)動(dòng)態(tài)動(dòng)力學(xué)拆分要想得到較高的e e 值，其反應(yīng)選 擇性必須很高，一般只有酶才有這樣好的選擇性，從而將拆分技術(shù)引入了酶拆 分”“方法的研究。 1 3 4 酶拆分法 利用微生物的活細(xì)胞所含的酶或自細(xì)胞中分離出來的酶進(jìn)行手性化合物 的拆分即所謂酶拆分法1 。酶拆分的獨(dú)特作用是由于它們由l 一氨基酸組成，其 活性中心構(gòu)成了一個(gè)不對(duì)稱環(huán)境，有利于識(shí)別外消旋體。在一定條件下，酶可 以催化d l - 體中的一個(gè)對(duì)映體發(fā)生某個(gè)反應(yīng)成為不同的化合物，從而使兩個(gè)對(duì)映 體彼此分開。一般而言，適合拆分的酶應(yīng)具有廣泛的底物選擇性、價(jià)格低、對(duì) 拆分的酸堿環(huán)境以及有機(jī)溶劑耐受力強(qiáng)等特點(diǎn)。 j e f f r e yh t 2 3 等利用酶拆分了環(huán)氧鹵丙烷，sj o l y “1 等也對(duì)b 一羥基酮進(jìn)行 了酶拆分研究。我國科研工作者也在相關(guān)領(lǐng)域作出了貢獻(xiàn)”1 。 6 四川大學(xué)碩士畢業(yè)論文 1 3 5 膜拆分法 手性拆分膜技術(shù)主要包括手性拆分液膜和手性拆分固膜兩種”“。作為一 種低能耗和易于工業(yè)放大的手性拆分技術(shù)，近年來隨著單一手性物質(zhì)需求的日 益增長而得到了廣泛的關(guān)注。 ( 1 ) 液膜拆分法 主要分為支撐液膜法、乳化液膜法、厚體液膜法。 在支撐液膜中，具有手性選擇能力的載體溶解于一定的液體溶劑之中，通 過與某個(gè)對(duì)映異構(gòu)體特異性的結(jié)合，將其從上相運(yùn)輸?shù)较孪?，從而?shí)現(xiàn)手性分 離，具有只需少量手性選擇劑的優(yōu)點(diǎn)”1 。通常用于手性拆分的支撐液膜是將膜 液( 溶劑和手性選擇劑) 通過毛細(xì)管力吸附在多孔固體膜( 液體的支撐膜) 的孔道 中，故又稱為浸漬式液膜。 乳化液膜又稱液體表面活性劑膜，是一種復(fù)乳。內(nèi)相和外相是相溶的，而 它們與膜相則互不相溶。膜相通常含有表面活性劑、萃取劑( 載體) 、溶劑與其 他添加劑以控制液膜的穩(wěn)定性、滲透性和選擇性。也具有傳輸速度快、對(duì)極性 溶劑容量大的優(yōu)點(diǎn)，且由于表面活性劑的穩(wěn)定效應(yīng)，受表面活性介質(zhì)破壞的影 響較小，相對(duì)支撐液膜過程更穩(wěn)定。3 + “。 厚體液膜采用一層相對(duì)較厚的不混溶的流體將料液相與接收相分開，膜相 不需支撐，而借助不可混溶性與其它相分開”1 。 c o e l h o s o 洶3 等研究了液膜拆分的機(jī)制，并建立了液膜拆分的模型。 四川大學(xué)碩士畢業(yè)論文 圖i 1 膜拆分圖示( 專利號(hào)：c n l 4 3 1 0 3 5 a ) ( 2 ) 固膜拆分法 分為選擇擴(kuò)散型手性固膜法和選擇吸附型手性固膜法。而選擇擴(kuò)散型手性 固膜法又包括了具有手性選擇性并能自身支撐的高聚物固膜8 ”、由不能自身支 撐而具有手性選擇性的高聚物洶神非選擇性支撐層組成的非對(duì)稱復(fù)合固膜?！?； 選擇吸附型手性固膜包括了采用接枝或浸漬等方法將手性選擇劑固定在多孔基 材上的手性固膜、將環(huán)糊精等手性選擇劑混合溶解于制膜液而制成的無孔高 分子手性膜、采用分子印跡技術(shù)制備的具有手性識(shí)別功能的高分子膜“。 1 3 6 色譜拆分法 色譜法是目前最常用的手性拆分方法，可采用兩種主要途徑即直接法和間 接法實(shí)現(xiàn)拆分。 所謂間接法，即將對(duì)映體與純的手性試劑反應(yīng)，生成兩個(gè)非對(duì)映異構(gòu)體， 然后用常規(guī)色譜方法分離。該方法分離的是對(duì)映體的衍生物而不是原對(duì)映體， 8 四川大學(xué)碩士畢業(yè)論文 涉及非對(duì)映異構(gòu)體的形成。間接法的優(yōu)點(diǎn)是：可使用價(jià)格便宜，柱效高的非手性 柱( 如0 d s 柱) ；可選用具有各種發(fā)色團(tuán)或較強(qiáng)熒光發(fā)射基團(tuán)的手性試劑。不足 之處有：對(duì)映體必須含有能與手性試劑反應(yīng)的基團(tuán)；衍生物反應(yīng)操作復(fù)雜、費(fèi)時(shí)， 且容易造成組分的損失；對(duì)手性試劑的純度、儲(chǔ)存和反應(yīng)過程中的穩(wěn)定性要求 較高；兩個(gè)對(duì)映體的衍生化反應(yīng)速度應(yīng)當(dāng)一致；生成的非對(duì)映體應(yīng)當(dāng)易分解為 原來的對(duì)映體。 在直接法中，又分為采用手性固定相和手性流動(dòng)相添加劑兩種操作。手性 固定相法基于樣品與鍵合到載體表面的手性選擇劑( 又稱手性識(shí)別劑) 問形成暫 時(shí)的非對(duì)映絡(luò)合物的能量差異或穩(wěn)定性不同而達(dá)到分離。手性流動(dòng)相添加劑法 則是通過對(duì)映體與添加到流動(dòng)相的手性物質(zhì)分子形成一對(duì)非對(duì)映的絡(luò)合物，由 于非對(duì)映絡(luò)合物的穩(wěn)定性、在流動(dòng)相中溶劑化作用或絡(luò)合物與固定相的鍵合等 性質(zhì)的差異而得到分離。與間接法相比，直接法避免了繁瑣的衍生化操作，具 有較大優(yōu)勢(shì)。目前市場上氣相色譜法、高效液相色譜法及超臨界流體色譜法設(shè) 計(jì)所使用到的手性固定相已有許多成品出售，其應(yīng)用日益廣泛。但手性固定相 的價(jià)格相對(duì)較高，在一定程度上限制了它的使用。新的手性固定相和手性流動(dòng) 相仍不斷出現(xiàn)。 色譜分離法因其優(yōu)秀的分辨能力，成為應(yīng)用最廣的手性拆分方法，尤其在 分離分析和純度檢測(cè)方面應(yīng)用更廣。目前手性拆分屬于色譜研究領(lǐng)域的最熱點(diǎn) 和最前沿，在這方面有大量的文獻(xiàn)報(bào)道。 各種不同的手性固定相具有不同的分離模式，從理論上講，不管選擇何種 固定相，分離何種對(duì)映體，手性分離或手性識(shí)別都必須滿足同時(shí)有三個(gè)相互作 用點(diǎn)。這些作用中至少一個(gè)是由立體化學(xué)決定的，這個(gè)原理是1 9 5 2 年首次由 d a l g l e i s h 提出，即著名的“三點(diǎn)作用原理”。 近年來利用毛細(xì)管電泳拆分手性化合物的報(bào)道日益增多，尤其是使用環(huán)糊 精及其衍生物為手性選擇劑的報(bào)道占主要部分，其他如冠醚、低聚糖、蛋白質(zhì)、 大分子抗生素等也有手性拆分能力。但毛細(xì)管電泳的樣品處理量太小，不適用 于制各。 計(jì)算機(jī)發(fā)展很迅速，它在分析中的應(yīng)用在不斷深入，從而帶動(dòng)著分析儀器 的發(fā)展，縮短了更新?lián)Q代的時(shí)間，出現(xiàn)了多種智能化、微型化的自動(dòng)分析儀器。 9 四川大學(xué)碩士畢業(yè)論文 同時(shí)，使用計(jì)算機(jī)技術(shù)指導(dǎo)手性拆分的研究也由a r m s t r o n g 。提出，并己運(yùn)用到 研究中。 ( 1 ) 氣相色譜法( g a sc h r o m a t o g r a p h y ， g c ) 手性氣相色譜拆分法”3 是手性色譜學(xué)的重要分支，是以g c 為基礎(chǔ)，引入新 的不對(duì)稱中心，使對(duì)映體的性質(zhì)產(chǎn)生差異，進(jìn)而被拆分，包括間接拆分法和手 性固定相拆分法。間接拆分法“：主要采用純的手性衍生化試劑進(jìn)行柱前衍生 化，將被拆分的外消旋體衍生化成非對(duì)映體混合物進(jìn)行拆分：手性固定相拆分法 是利用分子間可形成氫鍵( 如氨基酸衍生物) 、包合物( 如b - c d 及其衍生物、冠 醚等) 、配位鍵( 如萜烯衍生化的金屬共價(jià)化合物) 的手性選擇體制備固定相進(jìn)行 拆分。前兩種固定相的拆分依據(jù)是手性分子與手性固定相形成非對(duì)映異構(gòu)體， 由于非對(duì)映異構(gòu)體保留作用力不同，實(shí)現(xiàn)手性分離；后者是基于對(duì)映體分子中 的活性部位( 雙鍵、和雜原子等) ，與金屬配位化合物中的金屬離子在色譜柱內(nèi) 快速建立可逆的配位平衡，由于金屬配位化合物手性固定相中的手性配基在空 間的有序排列，使對(duì)映體靠近金屬離子的難易有別，在通過多次的配位與交換 以后，就可以達(dá)到對(duì)映體的分離。 氣相色譜手性固定相的發(fā)展過程經(jīng)歷了由作用力簡單、單一手性中心的氫 鍵型手性固定相向具有多種作用力、多手性中心復(fù)雜型手性固定相的發(fā)展過程， 以環(huán)糊精衍生物類固定相研究的最多。在實(shí)踐中，常將上述三類固定相與聚 硅氧烷固定液或毛細(xì)管壁進(jìn)行交聯(lián)。 ( 2 ) 毛細(xì)管電泳拆分法( c a p i l l i a r ye l e c r t o p h o r e s i s ，c e ) 利用毛細(xì)管電泳進(jìn)行手性拆分不是基于電泳分離的原理，而是依靠色譜原 理，采用構(gòu)建手性分離的環(huán)境的方法，使對(duì)映異構(gòu)體與手性選擇劑作用3 。通 過三種方法來構(gòu)建手性環(huán)境，即使用手性添加劑、使用手性填充毛細(xì)管或使用 手性涂層毛細(xì)管柱。其中手性填充或手性涂層毛細(xì)管需要特別的制作技術(shù)，推 廣有一定難度。添加劑法只需向電泳緩沖液中加入合適的手性試劑，經(jīng)過一定 的分離條件優(yōu)化即能實(shí)現(xiàn)手性分離，是一種簡便實(shí)用的方法。 手性拆分機(jī)理包括主一客體作用、絡(luò)合作用( 或配體交換) 、相分配、離子交 換等，核心是手性識(shí)別作用，這種識(shí)別作用導(dǎo)致遷移差異，產(chǎn)生分離。適合于 毛細(xì)管電泳的手性添加劑有：環(huán)糊精及其衍生物、大環(huán)抗菌素( 主要包括糖肽類 1 0 四川大學(xué)碩士畢業(yè)論文 大環(huán)抗菌素) 、手性冠醚( 要采用c 一1 8 一冠一6 - 4 一羧酸) 、手性杯芳烴( 如杯4 、杯6 芳烴的氨基酸衍生物) 、非環(huán)寡糖和多糖( 如a 一( 1 ，4 ) 一d 一葡聚糖、右旋糖苷、 糊精、二乙基氨基乙基右旋糖苷等) 、氨基酸( 如用組氨酸一銅金屬絡(luò)合物、天冬 酰苯丙氨酸甲酯一銅等來分離氨基酸對(duì)映體) 、蛋白質(zhì)( 如牛血清蛋白、人血清蛋 白、a 一酸糖蛋白、卵粘蛋白、纖維素酶，肽及肽庫也被用做篩選新的手性選擇 劑) 、表面活性劑( 如膽汁酸類) 。 毛細(xì)管電泳手性分離有兩種基本策略：構(gòu)建手性分離環(huán)境或手性消除。讓 對(duì)映體與手性試劑進(jìn)行化學(xué)反應(yīng)，可以使之轉(zhuǎn)變成非對(duì)映體，然后采用普通c e 辦法進(jìn)行分離，即為手性消除。由于手性消除反應(yīng)需要昂貴的手性反應(yīng)試劑， 而且產(chǎn)物的手性可能不得恢復(fù)，所以多數(shù)人不愿意采用這種方法拆分對(duì)映體。 而將手性物質(zhì)引入到c e 分離通道構(gòu)建手性分離環(huán)境，在該環(huán)境下樣品通過手性 相互作用來改變遷移速度，最終可獲得分離，本方法不觸及樣品本身，相對(duì)簡 單、快速、高效、發(fā)展空間大，己被普遍采用并迅速發(fā)展。 近年來，采用毛細(xì)管電泳進(jìn)行手性拆分的研究很多”。：，國內(nèi)外都進(jìn)行了大 量的研究。不過，由于毛細(xì)管電泳可分析的樣品量極少，從而限制了它在拆分 領(lǐng)域的放大化生產(chǎn)等實(shí)際應(yīng)用，一般只適宜開發(fā)為分析方法。 ( 3 ) 超臨界流體拆分法( s u p e r c r i t i c a lf l u i dc h r o m a t o g r a p h y ， s f c ) 超臨界流體是一種在臨界壓力和臨界溫度以上相區(qū)內(nèi)的流體，這個(gè)相區(qū)的 流體的物理特性介于液體和氣體之間。超臨界流體的粘度與氣體相近，比液體 低得多，可顯著減少過程阻力；超臨界流體的密度與液體相似，有很強(qiáng)的溶解 能力，適于分離難揮發(fā)和熱穩(wěn)定性差的物質(zhì)。 以超臨界流體作為流動(dòng)相進(jìn)行手性藥物拆分的色譜法就是超臨界流體拆分 法嘲。s f c 具有以下優(yōu)點(diǎn)”：s f c 比h p l c 分析時(shí)間短，單位時(shí)間內(nèi)具有更高的 分離度；s f c 可在比g c 操作溫度低的條件下進(jìn)行手性分離，可有效避免藥物消 旋化和手性固定相分解；s f c 既可使用h p l c 檢測(cè)器，也可使用g c 檢測(cè)器( 如質(zhì) 譜、氫火焰離子化檢測(cè)器) ，有利于手性藥物中痕量組分的檢測(cè)和定性分析。 所以，s f c 在手性藥物對(duì)映體分離的應(yīng)用中具有高效、快速、操作條件易于 變換等特點(diǎn)，不過，溫度、流動(dòng)相密度和組成對(duì)s f c 手性分離系統(tǒng)的立體選擇 及分離度有較大影響。 四川大學(xué)碩士畢業(yè)論文 “) 高效液相色譜法( h i g hp e r f o r m a n c el i q u i dc h r o m a t o g r a p h y ，h p l c ) h p l c 法在手性藥物拆分中的應(yīng)用比g c ，s f c 等拆分法廣泛的多“”，是藥物 質(zhì)量控制、立體選擇性的藥理學(xué)和毒理學(xué)研究的重要手段舊一，分為衍生化( c d r ) 法、手性流動(dòng)相添加劑( c m p a ) 法及手性固定相( c s p ) 法。 手性衍生化拆分法 手性衍生化拆分又稱間接拆分”3 ，要求手性化合物對(duì)映體的化學(xué)結(jié)構(gòu)中應(yīng) 具有易于衍生化的基團(tuán)( 如氨基、羧基、羥基或巰基等) ，手性試劑和反應(yīng)產(chǎn)物 的化學(xué)和手性性質(zhì)均穩(wěn)定，且手性試劑化學(xué)和光學(xué)純度較高，手性試劑和反應(yīng) 產(chǎn)物在衍生化反應(yīng)和色譜條件下應(yīng)較穩(wěn)定，衍生化后生成的非對(duì)映體在色譜分 離時(shí)可實(shí)現(xiàn)高柱效。本方法操作較復(fù)雜，且存在一個(gè)潛在的問題：用手性試劑進(jìn) 行衍生化時(shí)，有可能使化合物的立體結(jié)構(gòu)發(fā)生轉(zhuǎn)變舊”3 。 在色譜系統(tǒng)中，分離非對(duì)映體的差速遷移與非對(duì)映體分子的手性結(jié)構(gòu)、手 性中心所連接的基團(tuán)和色譜系統(tǒng)的分離效率( 包括溶質(zhì)分子與固定相和流動(dòng)相 之間的作用力，如氫鍵、偶極一偶極、電荷轉(zhuǎn)移和疏水性等) 有關(guān)。衍生后的產(chǎn) 物構(gòu)型差異越大，分離越容易。 手性流動(dòng)相添加劑( c m p a ) 法”1 分為手性包含復(fù)合法、手性配合交換法、手 性離子對(duì)色譜法。 手性包含復(fù)合法經(jīng)常采用環(huán)糊精( c d ) 和手性冠醚、杯芳烴等作為手性流動(dòng) 相添加劑。環(huán)糊精對(duì)疏水性和親水性藥物對(duì)映體都具有很強(qiáng)的包合作用，已用 于分離氨基酸及其衍生物、巴比妥類、哌嗪類鎮(zhèn)痛藥、偽麻黃堿、去甲羥基安 定等。采用的固定相呻7 ”常有o d s ，c n ，c 8 、苯基、硅膠等。 將手性金屬配合劑加入h p l c 流動(dòng)相中形成三元非對(duì)映體配合物，此配合物 與固定相發(fā)生立體選擇性吸引或排斥反應(yīng)，因結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性和能量差異而使對(duì)映 體得以分離，稱為手性配合交換法。配合交換系統(tǒng)使用水性流動(dòng)相和疏水性固 定相，洗脫順序與反相h p l c 一致，溶質(zhì)疏水性增加，保留時(shí)間延長，并可采用 u v 進(jìn)行檢測(cè)。常用的手性配合試劑有氨基酸及其衍生物，配位金屬包括c u ”， z n “，n i 2 + ，c d 2 + 等。 在h p l c 流動(dòng)相中加入反離子，使之與流動(dòng)相中對(duì)跌體生成非對(duì)映的具有不 同穩(wěn)定性和分配性質(zhì)的離子對(duì)復(fù)合物，與固定相發(fā)生靜電、疏水或氫鍵作用后， 四川大學(xué)碩士畢業(yè)論文 產(chǎn)生差速遷移而分離，稱為手性離子對(duì)色譜法。 手性固定相( c s p ) 法 c s p 法即將手性試劑化學(xué)鍵合到固定相上，拆分時(shí)，固定相上鍵合的手性試 劑與藥物對(duì)映體在c s p 表面形成非對(duì)映體對(duì)復(fù)合物，由于其穩(wěn)定常數(shù)不同而獲 得分離，分離效率和洗脫順序取決于復(fù)合物的相對(duì)強(qiáng)度。 c s p 的主要類型有蛋白質(zhì)鍵合相”“”、多糖類鍵合相7 3 7 ”、手性聚合物鍵合 相”、環(huán)糊精鍵合相和p i r k l e 型手性固定相“、大環(huán)抗體類”6 1 等。 ( 5 ) 薄層色譜拆分法( t h i nl a y e rc h r o m a t o g r a p h y ，t l c ) 薄層色譜是平面色譜的一種，為最簡便的色譜技術(shù)之一。薄層色譜拆分法 具有操作方便、使用設(shè)備較簡單、分離效率較高、分析速度快、色譜參數(shù)較易 調(diào)整等優(yōu)點(diǎn)，在對(duì)映體分離中具有實(shí)際意義”。”。 用t l c 拆分手性藥物的方法也主要有三種：手性試劑衍生化( c d r ) 法、手性 流動(dòng)相添加劑( c m p a ) 法、手性固定相( c s p ) 法。 色譜前用手性選擇性試劑與對(duì)映體進(jìn)行衍生化，被測(cè)定的多數(shù)為苯丙胺類、 b 一阻斷劑、氨基酸及抗炎藥物等，生成的衍生物可在正相或反相硅膠薄層上獲 得分離。 正相或反相薄層色譜中，還可在流動(dòng)相中添加手性選擇劑進(jìn)行對(duì)映體分離。 在硅膠鍵合相薄層板上，用b c d 以及其衍生物、牛血清蛋白、大環(huán)抗菌素萬古 霉素等做流動(dòng)相添加劑進(jìn)行拆分的研究都有報(bào)導(dǎo)?！啊?在手性固定相上進(jìn)行對(duì)映體分離，h p l c 法比t l c 法應(yīng)用廣泛些，主要因?yàn)?用于薄層的手性固定相具有很高的紫外背景，只能用于具有熒光或有色的樣品。 但薄層色譜手性固定相制備加工相對(duì)方便，且實(shí)驗(yàn)時(shí)操作簡單，所以至今仍在 手性拆分領(lǐng)域有重要用途，國內(nèi)外研究也很熱門眥“。手性固定相主要有手性固 定相( c h i r a ls t a t i o n a r yp h a s e ，c s p ) 及手性涂布相( c h i r a lc o a t e dp h a s e s ， c o p ) 兩類。 手性拆分是獲得光學(xué)物質(zhì)的主要途徑，薄層色譜法操作方便，設(shè)備簡單， 對(duì)樣品適應(yīng)性廣，可用于各類化合物的分離、精制、鑒定和定量，具有分離效 率高、分析速度快、結(jié)果直觀、色譜參數(shù)易調(diào)整，能快速更換流動(dòng)相、能同時(shí) 處理多個(gè)樣品等特點(diǎn)，已在化學(xué)、化工、生化、醫(yī)藥、衛(wèi)生等各個(gè)領(lǐng)域廣泛使 四川大學(xué)碩士畢業(yè)論文 用。而且，樣品分離后，可根據(jù)斑點(diǎn)在薄層上的位置、顏色深淺及大小與隨行 對(duì)照品比較，可簡便、快速地近似估算樣品中待測(cè)成分的含量，此謂薄層色譜 半定量；也可在測(cè)出待測(cè)物質(zhì)對(duì)照品在薄層上的檢出靈敏度后，對(duì)樣品中的該 成分進(jìn)行限量檢查；間接定量( 洗脫測(cè)定法) 和直接定量( 原位薄層掃描法) 是薄 層定量的兩種較好的辦法，已廣泛應(yīng)用于中藥的分析檢測(cè)中?？梢灶A(yù)見，薄層 色譜拆分法必將成為手性拆分的重要手段之一，在光學(xué)異構(gòu)體的分離、分析及 光學(xué)純度的測(cè)定中發(fā)揮重要的作用。 ( 6 ) 模擬移動(dòng)床法( s i m u l a t e dm o v i n gb e d ，s m b ) 為了克服通常液相制備色譜不能連續(xù)操作以及大量溶劑浪費(fèi)等弱點(diǎn)， b r o u g h t o n 于2 0 世紀(jì)6 0 年代提出了模擬移動(dòng)床色譜技術(shù)。所謂模擬移動(dòng)床色 譜就是在色譜分離中模擬出固定相和流動(dòng)相相對(duì)于進(jìn)樣口的循環(huán)流動(dòng)。這樣， 兩種具有不同保留值的組分就會(huì)被固定相和流動(dòng)相分別帶向進(jìn)樣口兩邊，從而 得到分離“”1 。為達(dá)到這一目的，模擬移動(dòng)床色譜由許多較短的色譜柱首尾相 連而成。模擬移動(dòng)床技術(shù)最早運(yùn)用于石油工業(yè)之中，近年來在大規(guī)模手性藥物 拆分領(lǐng)域中得到了廣泛的應(yīng)用。如采用s m b 技術(shù)可達(dá)到每年從外消旋體中分離 出1 00 0 0 k g ( 局一3 一氯一1 一苯基丙醇的規(guī)模，它是抗抑郁藥( 勵(lì)一氟西 汀( f l u o x e t i n e ) 的中間體。如今怎樣在保持較高效率的前提下提高手性藥物的 分離量，是模擬移動(dòng)床色譜在手性藥物拆分領(lǐng)域的研究中所面臨的主要問題。 表1 1 模擬移動(dòng)床色譜在工業(yè)拆分中的應(yīng)用實(shí)例 1 4