分類號： 密級： 公開 研 究 生 學 位 論 文 論文題目（中文） 白、 侵襲性垂體腺瘤 中的表達及 研究 論文題目（外文） in 究生姓名 謝 民 學 科、專業(yè) 外科學 神經(jīng)外科學 研 究 方 向 鞍區(qū)腫瘤 學 位 級 別 碩 士 導(dǎo)師姓名、職稱 丁永忠 副 教授 論 文 工 作 起 止 年 月 2012 年 8 月至 2013 年 2 月 論文提交日期 2013 年 3 月 論文答辯日期 2013 年 5 月 學位授予日期 2013 年 6 月 校址：甘肅省蘭州市 原 創(chuàng) 性 聲 明 本人鄭重聲明：本人所呈交的學位論文，是在導(dǎo)師的指導(dǎo)下獨立進行研究所取得的成果。學位論文中凡引用他人已經(jīng)發(fā)表或未發(fā)表的成果、數(shù)據(jù)、觀點等，均已明確注明出處。除文中已經(jīng) 注明引用的內(nèi)容外，不包含任何其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的科研成果。對本文的研究成果做出重要貢獻的個人和集體，均已在文中以明確方式標明。 本聲明的法律責任由本人承擔。 論文作者簽名： 日 期： 關(guān)于學位論文使用授權(quán)的聲明 本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下所完成的論文及相關(guān)的職務(wù)作品，知識產(chǎn)權(quán)歸屬蘭州大學。 本人完全了解蘭州大學有關(guān)保存、使用學位論文的規(guī)定，同意學校保存或向國家有關(guān)部門或機構(gòu)送交論文的 紙質(zhì)版 和電子版，允許論文被 查閱和借閱；本人授權(quán)蘭州大學可以將本學位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進行檢索，可以采用任何復(fù)制手段保存和匯編本學位論文。 本人離校后發(fā)表、使用學位論文或與該論文直接相關(guān)的學術(shù)論文或成果時，第一署名單位仍然為蘭州大學。 本學位論文研究內(nèi)容： 可以公開 不 宜 公開，已在學位辦公室辦理保密申請，解密后適用本授權(quán)書。 （請在以上選項內(nèi)選擇其中一項打“ ”） 論文作者簽名： 導(dǎo)師簽名： 日 期： 日 期： I 白、 侵襲性垂體腺瘤中的表達及 研究 中文摘要 目的： 檢測肌動蛋白結(jié)合蛋白（ 基質(zhì)金屬蛋白酶 侵襲性垂體腺瘤中的表達水平，分析三者與患者性別、 腫瘤大小、腫瘤有無內(nèi)分泌功能之間的相關(guān)性 ，探討垂體腺瘤 侵襲性生長的 可能發(fā)病機理。 方法： 取 患者 術(shù)后 腫瘤組織 72例 ,其中男 33例，女 39例。年齡分布于 18均年齡 。侵襲性垂體腺瘤的判斷 按照 體腺瘤 詳細 分 類 標準 ,分析出 侵襲性組 27例，非侵襲性組 45例。其中無功能腺瘤 25例，有內(nèi)分泌功能腺瘤 47例；全部腫瘤中 15例直徑達 3余 57例腫瘤標本直徑在 3將術(shù)中切除的新鮮腫瘤組織 迅速裝入無菌凍存管， 投入液氮中，另一部分腫瘤組織置入福爾馬林液中 。 用免疫組織化學法（ 測在 72例垂體腺瘤中三者表達水平，表達強弱 結(jié)果判定參照免疫反應(yīng)積分 (定量法， 應(yīng)用統(tǒng)計學軟件 析兩組間三種蛋白表達的 差異性，及與不同臨床特征的 相關(guān)性。 結(jié)果： 1. 免疫組化結(jié)果 細胞核； 瘤細胞質(zhì)及細胞核。 表達 陽性 皆 則為 棕黃色顆粒。侵襲組 白、 表達水平高于非侵襲性組（ 顯 相關(guān)性（ ,顯 相關(guān)性（ ，三者相互之間表達差異性不明顯。 3. 垂體腺瘤中 白、 性別無關(guān)（ 2值分別為 P與腫瘤有無內(nèi)分泌功能無關(guān)（ 2值分別為 P與腫瘤大小有關(guān)（ 2值分別為 三者表達水平與不同性別患者、腫瘤 無內(nèi)分泌功能亦無明顯相關(guān)性，與腫瘤大小相關(guān) ，但 由于本實驗樣本量有限，三者在腫瘤細胞侵襲性生長過程中是否有 協(xié)同作用 ，相互作用的 分子機制仍然需進一步闡明， 在垂體腺瘤發(fā)生及侵襲過程中，雖然多數(shù)情況下存在三者的高表達，但可能伴隨其他因素的參與，具體機制及多因素相互間協(xié)同機理待進一步研究。 關(guān)鍵詞 ： 垂體腺瘤 ， 襲性，免疫組織化學 in he 9 ) in to 2 27 of 5 in In it 3 9 8 an in 7 5 5 7 5 up cm in 7 is or by by 1. in ， in 9 in t=t=t= no , no . 3. no 2 = P of or is no of of to a in to be in in be of to be 目 錄 中文摘要 . I . 一章 前言 . 1 究背景 . 1 體腺瘤發(fā)病機制 . 1 體腺瘤的分類 . 2 涉及的生物學標記物 . 2 . 2 . 3 第二章 實驗方法與實驗結(jié)果 . 5 料與方法 . 5 究對象 . 5 驗條件 及實驗原理與步驟 . 5 驗結(jié)果判定及統(tǒng)計學分析 . 6 驗結(jié)果 . 7 白， . 7 白， . 10 第三章 討 論 . 12 . 12 . 13 者在不同臨床體征中表達差異性 . 16 第四 章 結(jié) 論 . 16 參考文獻 . 17 在學期間的研究成果 . 29 致 謝 . 30 蘭州大學碩士學 位論文 白、 侵襲性垂體腺瘤中的表達及研究 1 第一章 前言 究背景 垂體腺瘤約占顱內(nèi)腫瘤的 15% 在 中樞 神經(jīng)系統(tǒng) 腫瘤 中的發(fā)病率很高，僅次于膠質(zhì)瘤和腦膜 瘤 。部分侵襲性 垂體腺瘤常 可累及海綿竇、鞍底骨板等組織結(jié)構(gòu) ， 手術(shù)很難徹底 切除 1。 35%垂體 腺 瘤術(shù)中肉眼可見局部侵襲， 高達80%的垂體腺瘤在在顯微鏡下可見侵潤 ,類似于 2。腫瘤細胞可能向各個方向侵潤周圍組織，向上甚至可突破鞍膈到達鞍上池，向下可侵襲鞍底骨質(zhì)甚至突入蝶竇腔，向側(cè)方可破壞海綿竇內(nèi)側(cè)壁，破壞其正常結(jié)構(gòu)甚至包繞頸內(nèi)動脈，向后發(fā)展可侵襲斜坡到達腦干 3。垂體腺 瘤的 侵襲性行為常降低手術(shù)與放療等傳統(tǒng)治療的有效性，導(dǎo)致腫瘤多次復(fù)發(fā) ,其在 診斷和治療方面都給臨床醫(yī)師帶來了巨大 挑戰(zhàn) 4。研究發(fā)現(xiàn) 白在細胞遷移、細胞粘附及細胞間信息交流等過程中發(fā)揮作用，參與腫瘤細胞的侵潤 過程 5。 基底膜和細胞外基質(zhì)的功能 ， 使其整體性遭到破壞 。 通過細胞外基質(zhì)重建，促進腫瘤新生血管形成，從而導(dǎo)致腫瘤細胞的局部侵潤甚至遠處轉(zhuǎn)移 6。本研究通過檢測垂體腺瘤中 白、 表達水平，探討其與腫瘤侵襲性生長的相關(guān)性。 體腺瘤的發(fā)病機制 目前，垂體腺瘤的發(fā)生及發(fā)展過程仍不十分明確，但大多集中于以下主要理論：垂體細胞內(nèi)缺陷即基因突變理論；垂體細胞增殖理論即來自外周刺激因素的影響 11。目前研究來 看，大多數(shù)學者較為支持前者理論。以前觀點解釋，細胞對內(nèi)在正常 刺激發(fā)生了過度 反應(yīng) ，促使 了腫瘤的發(fā)生 。 而 這一論斷并不能被大多數(shù)學者所認可接受。因此，原癌基因 活化 及抑癌基因的失活仍然是垂體腫瘤形成的至關(guān)重 要的前提 條件 13,14。 近年 來隨著基因研究的深入，基因突變理論在發(fā)病中的作用逐步揭示 ， 如 14,15、 因的失活 16、 7和 18、蛋白激酶 C（ 常激活 13、多發(fā)性內(nèi)分泌性腫瘤型基因（ 變 19、垂體腫瘤轉(zhuǎn)化基因（ 異常等 均 與垂體腺瘤的發(fā)生有關(guān) 20，近年來有關(guān) 垂體腺瘤侵襲性的分子生物學標志研究可進一步闡明垂體腺瘤發(fā)病機制，研究顯示1、 2、 3、 4、 0、 5、 6等多種分子與垂體腺瘤的產(chǎn)生 和 侵襲 有關(guān)。 蘭州大學碩士學 位論文 白、 侵襲性垂體腺瘤中的表達及研究 2 體腺瘤的分類 按照腫瘤大體直徑小于 于 1-3 過 將其 分 為： 微腺瘤 、大腺瘤 和 巨大腺瘤。正常垂體質(zhì)稍韌、粉紅色；而腺瘤質(zhì)軟、紅褐色，部分甚至 呈稀泥狀，變性時可呈灰白色。目前多根據(jù)內(nèi)分泌測定和電鏡下觀測超微結(jié)構(gòu)的改進，結(jié)合形態(tài)與功能差異將腫瘤分為：泌乳素（ 細胞瘤 ,生長激素型 (，促腎上腺皮質(zhì)激素腺瘤（ ，）促甲狀腺激 素型（ 促性腺激素型（ 多分泌型腺瘤，無內(nèi)分泌功能型，垂體腺癌，極罕見。 940 年首先提出侵襲性垂體腺瘤，主要指細胞向周圍組織 侵襲生長，病理上其侵襲性生長的特點是：單個瘤細胞或大量瘤細胞浸 潤 鞍周結(jié)構(gòu)，甚至達 海綿竇，包括頸內(nèi)動脈和視神經(jīng)，破壞正常組織結(jié)構(gòu)。 世界衛(wèi)生組織的分類 按照 對 八千 例手 切除的垂體腺瘤 進行系統(tǒng) 分析 后 總結(jié)出 ，垂體腺瘤的分類方法應(yīng) 考慮以下 方面 ： 臨床 癥狀 ， 血中激素水平 ， 術(shù)中所見與 神經(jīng)影像學 ， 光 鏡下 所見 及病理 分型 ， 電鏡下 腫瘤 細胞 形態(tài) 特 點 27。每一條分類標準在確定診斷 及 分析 瘤 細胞 生物學 行為 方面均有重要價值，但該 判定標準 操作復(fù)雜 ， 仍 不適合 在臨床 中 廣泛 利用 。 目前侵襲性垂體腺瘤的診斷多據(jù)影像學檢查， 臨床 常采用 期標準 28,29，符合下述條件之一可診斷為侵襲 性垂體腺瘤： 或 C、 D、 類法2級以上 ； 術(shù)前影像學檢查示鞍周結(jié)構(gòu)等存在垂體腺瘤 侵襲破壞；術(shù)中 可見硬腦膜或鞍底骨質(zhì)有腫 瘤侵襲破壞，腫瘤侵犯累及海綿竇甚至進入蝶竇腔；切取的 硬腦膜等 組織中 經(jīng)病 檢肯定有 腫瘤細胞 。 本文 選取 第一種分類法進行判定。 涉及的生物學標記物 概述 ： 由 美國 先在 海膽卵母細胞提取物 中 分離 ， 隨后在果蠅和人類 也得到確認，是分 布于 多數(shù)脊椎動物葉間組織和神經(jīng)系統(tǒng)中的一種細胞骨架蛋白， 其 基因調(diào)控點 位于染色體730。 1994年，研究者從人 畸胎瘤中克隆 出 細胞骨 架蛋白為其編碼產(chǎn)物，特征是進化保守，其化學 分子量為 55 1，其在成人樹突細胞和發(fā)育期神經(jīng)細胞中均有表達。 蘭州大學碩士學 位論文 白、 侵襲性垂體腺瘤中的表達及研究 3 在人體細胞中，存在 3種高度相關(guān)的 白表達，包括 網(wǎng)膜細胞中多見） 和 丸組織中多見） ，其中以 32。其表達 關(guān)鍵調(diào)控點在于 動蛋白 )的 結(jié)合， 并將其整合為平行排列的 肌動蛋白束 31。 而 結(jié)合涉及到 主要的機制就是抑制 白集束活性，即在蛋白激酶 C（ 型前磷酸化一個 39抑制肌動蛋白結(jié)合并在磷酸化的 致在細胞質(zhì)中 33。在腫瘤細胞遷移中， 偽足和細胞膜中不斷結(jié)合， 遷移與遠處轉(zhuǎn)移機制中是必要的。有效的細胞遷移取決于突起上的 合的分子基礎(chǔ)仍不是很清楚，但 粘附有關(guān)聯(lián) 34。 功能與臨床： 定位于肌動蛋白束的核心， 可使胞膜出現(xiàn)線 狀偽足、片狀偽足及微棘 。其能 參與細胞突起的構(gòu)成并使其能夠介導(dǎo)細胞粘附，移動和細胞間的相互作用 。 EC(管內(nèi)皮細胞 )、神經(jīng)細胞以及成纖維細胞等 多種 細胞， 但 是 在 卵巢 濾泡細胞中 其 基因 的 表達 卻被 抑制 35。研究 表明 性腫瘤 如乳腺癌，結(jié)腸癌，食道癌，胰腺癌，肺癌，卵巢癌 及胃癌中 存在高表達，并 可能與腫瘤的侵襲性及患者 的 后期恢復(fù) 密切相關(guān)，而在正常組織中呈現(xiàn)低表達或不表達 ,在多數(shù)上皮來源的腫瘤細胞及 臨床腫瘤標本中 出現(xiàn) 表達上調(diào) 36。 2012年）利用免疫組化實驗分析在 50例壺腹部胰腺癌中 表達水平，證實患者的腫瘤惡性程度也可能會相應(yīng)增高，患者的存活期將縮短 34。由此推測，顱內(nèi)神經(jīng)上皮來源的膠質(zhì)瘤以及顱外轉(zhuǎn)移至 顱內(nèi)的惡性腫瘤及侵襲性垂體腺瘤也可能上調(diào)表達 提示在 侵襲性垂體腺瘤中 ， 動蛋白骨架重建 ，這 在細胞膜突起、細胞運動、細胞黏 附及細胞 間因子 交流等過程中發(fā)揮作用。 述 ： 人類對基質(zhì)金屬蛋白酶系統(tǒng) 研究發(fā)現(xiàn)有 二十余 種， 根據(jù)作用底物以及基本結(jié)構(gòu)的差異性，可分為五類。 一類 編碼基因同源蛋白酶家族，可降 解各種細胞外基質(zhì) ， 其降 解破壞能力決定了腫瘤細胞的侵襲能力 37。 論文 白、 侵襲性垂體腺瘤中的表達及研究 4 基本結(jié)構(gòu) 由三部分構(gòu)成， 即氨基酸的信號肽和前肽部分、中間的催化活性區(qū)域以及羧基端的類血紅素結(jié)合區(qū) 。 中部 催化活性區(qū)有兩個 合區(qū)和 一個 合區(qū)， 其中一個 催化性 位于活化中心且 同時與三個氨基酸相連接，涉及 一個 結(jié)構(gòu)性 位于催化活性區(qū)內(nèi)， 個 175殘基的內(nèi)含子，這一內(nèi)含子是三個重復(fù)的類纖維連接蛋白結(jié)合區(qū)，研究表明其有助于 數(shù) 一些因子激活后才具有降 解 細胞外 基質(zhì)的活性 38。 主要 功能： 在腫瘤侵襲性生長程序 中，基質(zhì)金屬蛋白 酶發(fā)揮著至關(guān)作用。 在細胞外基質(zhì)金屬蛋白酶及其抑制劑方面，主要集中于 者為 自然有效 抑制劑。 互間的動態(tài)平衡在維持細胞外基質(zhì)的穩(wěn)態(tài)中具有決定性 作用 37。 腫瘤侵襲與轉(zhuǎn)移的首要步驟就是突破基底膜及細胞外基質(zhì)，基質(zhì)金屬蛋白酶 一組鈣鋅依賴性的蛋白酶家族，具有降解基底膜和 ，使其完整性破壞導(dǎo)致腫瘤細胞局部侵潤甚至遠處轉(zhuǎn)移 3。腫瘤細胞的侵襲能力與其誘導(dǎo)產(chǎn)生的蛋白酶降解細胞外基質(zhì)以及細胞基膜的能力密切相關(guān)。 底物包括明膠、彈性蛋白、型膠原、型膠原和粘結(jié)合蛋白等 ,與中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，能特異性降解腦內(nèi)硬膜型膠原蛋白。 而 進 壞細胞基底膜，出現(xiàn) 基質(zhì) 整合 重 建，加劇新生血管的產(chǎn)生 ，促使腫瘤的侵潤和轉(zhuǎn)移 39,40。 研究現(xiàn)狀： 國內(nèi)學者最早于 2004 年研究 高表達與腫瘤侵襲性有關(guān)，提示可作為腫瘤侵襲性的 一項指標。國外學者 在 1997年研究指出 能作為垂體腺瘤的生物學標記物 41，隨后 （ 2000年）實驗研究發(fā)現(xiàn)在垂體腺瘤細胞中 達明顯增高 42, （ 2005年） 研究在侵襲性垂體腺瘤中 43。2013年）使用定量 05 例頭頸部惡性腫瘤中 進行了 5年的隨訪調(diào)查，發(fā)現(xiàn)表達水平低者存活率高于表達高者，提示其可能與患者自然預(yù)后密切相關(guān) 44。 蘭州大學碩士學 位論文 白、 侵襲性垂體腺瘤中的表達及研究 5 第二章 實驗方法與結(jié)果 究對象 蘭州大學第二醫(yī)院神經(jīng)外科 經(jīng)鼻蝶竇入路或開顱手術(shù) ） 患者腫瘤組織 72例，術(shù)前均未行放、 化療，術(shù)后 均 經(jīng) 病理 檢查 證實為垂體腺瘤。其中男 33例，女 39例。年齡分布于 18均年齡 侵襲性垂體腺瘤的判定 按照 期標準 。其中侵襲性 腺瘤 組 27例，非侵襲性組 45例； 全部腫瘤中 15例直徑達 3以上，其余 57例標本直徑在 3內(nèi)分泌功能組 47例， 無 內(nèi) 分泌功能組 25例。將術(shù)中切除的新鮮腫瘤 ,迅速裝入無菌凍存管 ,投入液氮 中，另一部分腫瘤組織固定于 10%的福爾馬林液中。石蠟包埋 處理 ,切片機 制成 4 片。 驗條件 及實驗原理與步驟 主要試劑 鼠抗人 55 北京中杉金橋生物技術(shù) 公司 鼠抗人 北京中杉金橋生物技術(shù) 公司 兔抗人 北京中杉金橋生物技術(shù) 公司 染色試劑盒 同上 同上 濃縮型 劑盒 同上 抗原修復(fù)液 同上 主要設(shè)備 石蠟切片機 德國 蘭州大學第二醫(yī)院病理科 切片漂烘溫控儀 廣州 恒溫設(shè)備廠 蘭州大學第二醫(yī)院病理科 冰箱 廣州 科龍電 器有限公司 甘肅省中醫(yī)學院病理教研室 抗體離心沉淀器 上海 手術(shù)器械制造廠 甘肅省中醫(yī)學院病理教研室 電熱恒溫培養(yǎng)箱 上海 躍進儀器廠 同上 電熱恒溫水槽 北京 科偉永鑫設(shè)備廠 同上 光學顯微鏡 日本 同上 光學照相系統(tǒng) 日本 同上 蘭州大學碩士學 位論文 白、 侵襲性垂體腺瘤中的表達及研究 6 免疫組織化學 色法原理： 免疫組織化學又稱免疫細胞化學，是指帶顯色劑（熒光素、酶、同位素或金屬離子如 卟啉類 、鎂離子 、汞等）標記的特異性抗體在組織細胞原位通過抗原抗體反應(yīng)和組織化學的顯色反應(yīng)，對相應(yīng)抗 原 進行定性、定位和定量測定的一項新技術(shù)。將免疫反應(yīng)的特異性、組織化學的可見性很好 地結(jié)合起來，借助顯微鏡 (如 熒光顯微鏡、電子顯微鏡 )的顯像和放大作用，在細胞抑或 亞細胞水平檢測各種抗原物質(zhì) (如酶、多肽、病原體、激素、蛋白質(zhì) 以及受體等 )。 根 據(jù)酶標記的部位可將其分為直接法、間接法、橋聯(lián)法（多步法）等；間接染色法特異性較強，靈敏度較高，顯色背景也較清楚，為目前較理想的染色方法。 標記的抗體可以是用免疫動物制備的多克隆抗體 或特異性單克隆抗體，目前多使用特異性強的 單克隆抗體。 實驗 步驟： 1 切片處理，將石蠟封存的垂體腺瘤標本冰敷 15 分鐘后，使用防脫載波片以 4 個標本切 3張。 2 烤片，將切片置于 60恒溫箱中烤片、貼附 1小時。 3 脫蠟與水化：將烤片后的切片依次放入二甲苯溶液、中各浸泡 10 分鐘，完成脫蠟后再依次在無水乙醇、無水乙醇、 95%的乙醇溶液、 95%的乙醇溶液、 85%的乙醇溶液和 85%的乙醇溶液中各浸泡五分鐘，而后在蒸餾水中浸泡 5分鐘，用 次，每次 3分鐘完成水化。 4 抗原修復(fù)： 將切片浸泡于抗原修復(fù)液中，煮沸 20 分鐘，待自然冷卻至室溫，次，每次 5分鐘。 5 在每張切片上滴加一滴試劑 A(過氧化物酶阻斷劑 )，在室溫下孵育 10 分鐘，次，每次為 5分鐘。 6 除去 張切片滴加試劑 B（非免疫動物血清），在室溫下孵育 10分鐘。 7 除去試劑 B，不沖洗，同一標本的 3 張切片分別滴加不同一抗 1 滴（ 鼠抗人抗人 抗人 ， 4濕盒中孵育過夜，次日取出后自然復(fù)溫 1小時， 次，每次 5分鐘。 8 除去 張切片滴加一滴二抗（試劑 C）， 37恒溫下孵育 15分鐘，取出后 次，每次 5分鐘。 9 除去 張切片加一滴試劑 D（鏈霉素親生物素蛋白 37恒溫下孵育 15 分鐘后， 次，每次 5分鐘。 10 色，除去 ，配置新鮮 液（ 1餾水配比 劑盒中A、 B、 C 試劑各一滴），每張切片滴加 2 滴 液，顯微鏡下觀察，待細胞著蘭州大學碩士學 位論文 白、 侵襲性垂體腺瘤中的表達及研究 7 色明顯且背景顏色較淡時，加入 止反應(yīng)。 11 蒸餾水沖洗 3 分鐘，蘇木精復(fù)染 1 分鐘，蒸餾 水沖洗，鹽酸酒精分化 5 秒，氨水返藍 10秒。 12 梯度酒精脫水干燥于 70%， 80%， 90%， 95%， 100%乙醇溶液中各浸泡 5分鐘脫水干燥后，二甲苯透明，中性樹膠封片。 13 光學顯微鏡下觀察并進行拍照。 具體 可參考染色試劑盒說明書（北京中杉金橋生物公司提供）。 實驗均設(shè)有陽性對照和陰性 對照 ， 使用 陰性對照 ，所有抗原表達檢測均要求在同等 條件下。 驗結(jié)果判定及統(tǒng)計學分析 結(jié)果分類 按照 免疫反應(yīng)積分 半定量法 45： 如下表 1 所示。將表中 A、 B 項得分相乘， 陰性、陽性的具體判斷標準如下表所示 : 表 1： 計分 染色強弱 (A) 陽性細胞比 (B) (A) (B)得分 0 無著色 75% 中度陽性 (+) 5 中度陽性 (+) 6 中度陽性 (+) 6 強陽性 (+) 注：隨機觀察 5個高倍視野（ 40），每個視野計 數(shù) 100個腫瘤細胞，確定各視野中 的 陽性細胞 平均百分比 ，以此作 為該切片的陽性細胞百分比。 統(tǒng)計學軟件分析及結(jié)果顯示 ： 應(yīng)用 件進 行數(shù)據(jù)分析， 白、 疫組織化學結(jié)果采用 和檢驗。 三種指標間相關(guān)性采用 與不同臨床特征特征 是否 有關(guān)使 用 檢驗 ，以 ： 三種指標間相關(guān)性采用 相關(guān)檢驗，以 ,白與 明顯相關(guān)性（ , 蘭州大學碩士學 位論文 白、 侵襲性垂體腺瘤中的表達及研究 11 表 4 同臨床特征垂體腺瘤患者中的表達相關(guān)性 . of in of 臨床特征 n + + + - + + + - + + + 男性 33 10 12 7 4 11 10 9 3 7 14 9 3 6 12 14 7 7 11 14 7 10 12 13 4 4 8 10 3 5 6 9 5 6 8 8 3 12 16 11 8 13 15 14 5 11 18 14 4 16 20 13 8 17 19 13 8 16 24 13 4 0 4 8 3 1 2 10 2 1 2 9 3 女性 39 無內(nèi)分泌功能 25 有內(nèi)分泌功能 47 與腫瘤有無內(nèi)分泌功能無關(guān)（ 2 P；與腫瘤大小有關(guān)（ 2值分別為 但與腫瘤大小相關(guān)（ ，說 明在垂體腺瘤發(fā)生及侵襲過程中，雖然多數(shù)情況下三者呈 高 表達，但可能伴有其他因素的參與，具體分子機制及多因 素間促進機制需深入探索 。 3. 白、 達水平與不同性別患者、腫瘤有無內(nèi)分泌功能亦無明顯相關(guān)性 （ P 與腫瘤大小相關(guān) （ P 3）及 免疫反應(yīng)活性增強為特點 7。據(jù)此標準， 發(fā)現(xiàn)在接受手術(shù)的 121 例中，其中非典型垂體瘤占 15%， 83%均有鏡下侵襲 8。侵襲性腫瘤有放射性標志的侵襲及 病理學指標的增殖為特點，這類腫瘤介于典型垂體腺瘤及垂體 腺 癌之間 9。由于手術(shù)很難全切，大部分侵襲性垂體腺瘤會復(fù)發(fā)，通常二次手術(shù)旨在減壓以改善癥狀 ，整體預(yù)后仍不理想 10。回顧文獻，至今有 30例侵襲性垂體腺瘤接受替莫唑胺治療，患者年齡為 20，平均 51 歲，其中包括 12 例 瘤， 9 例 瘤， 2 例 瘤 ,7 例無功能腺瘤，其中 3%， 7%， 3%，腫瘤 整體有效緩解率 為 60%，詳見表 1。 垂體腺癌可定義為轉(zhuǎn)移性垂體腺 瘤，極為罕見，從 1961 年至 2009 年 12月，文獻報道 也僅 有 132例，其中泌乳素瘤占 36%， 占 30%， 無功能 型垂體瘤占 23%3。病理學檢查無明顯特異性，一般 很難 清晰鑒別兩者 。有 學者 提蘭州大學碩士學 位論文 白、 侵襲性垂體腺瘤中的表達及研究 24 出以下幾點 可考慮診斷惡性 ： 腦組織 被 侵犯 顯著； 通過腦脊液形成 腦內(nèi) 種植播散 ；經(jīng) 血 運 轉(zhuǎn)移 至腦 外 ； 核異型 、 核 分裂像 突出；顯著侵犯 或穿透骨質(zhì)，進入 填塞 蝶竇腔 12。根據(jù)病史及腫瘤生長迅速與遠處轉(zhuǎn)移的特點，是目前唯一可靠的診斷依據(jù)。最常轉(zhuǎn)移的部位 是 中樞神經(jīng)系統(tǒng)， 其次為 脊髓 ， 其他包括骨、淋巴結(jié)、肝和肺轉(zhuǎn)移，平均生 存期不到 4年 28目前可用的治療 預(yù)案 結(jié)果 均 不理想。 2006年， 例垂體腺癌 患者 使用替莫唑胺后癥狀明顯改善30，而之前采用了各 種治療 方案均為 無效 。 目前文獻共報道 19 例垂體腺癌病人用替莫唑胺治療 ， 其中 ， ,， 。用藥情況為 2臨床療效上， 69%的 垂體腺癌 患者激素水平 得到降低； 腫瘤 形態(tài)上也 發(fā)生改變 ， 臨床癥狀得到緩解 (表 1)。 表 1 :療后 其 療效對比 by or 20 16 13 3 49 12 9 7 2 30 8 7 3 1 19 of 3 3 2 3 3 %） 67 73 - 33 60 %） 56 66 40 35 61 3 莫唑胺（ 一種口服二代咪 佐 并四 氫 類烷化劑，通過對 前是治療惡性膠質(zhì)瘤的一線化療藥物 19。 生理 即可發(fā)揮作用，通過其 基化作用而產(chǎn)生細胞毒性，口服后吸收快速而完全， 可 通過血腦屏 障， 能 作用于腫瘤細胞分裂的各個時期 19。經(jīng)典治療劑量為每日 150mg/續(xù)服用 5 天， 28 天為一治療周期 33。 目前也有報道每日劑量 50mg/進展性及復(fù)發(fā)膠質(zhì)瘤有效。相比其他化療藥物，對大多數(shù)患者而言， 主要的副作用及毒性蘭州