基因工程,主要參考書(shū)：華東理工大學(xué)張惠展,基因工程,5,2,3,4,1,6,7,8,9,基因工程的基本概念,基因工程的基本原理,基因工程所需的基本條件,基因工程的操作過(guò)程,目的基因的克隆與基因文庫(kù)的構(gòu)建,大腸桿菌基因工程,酵母基因工程,哺乳動(dòng)物基因工程,高等植物基因工程,E酵母菌的表達(dá)系統(tǒng),7酵母基因工程,C酵母菌的載體系統(tǒng),B酵母菌的宿主系統(tǒng),A酵母菌作為表達(dá)外源基因受體菌的特征,F利用重組酵母生產(chǎn)乙肝疫苗,D酵母菌的轉(zhuǎn)化系統(tǒng),A酵母菌作為表達(dá)外源基因受體菌的特征,7酵母基因工程,酵母菌的分類(lèi)學(xué)特征,酵母菌（Yeast）是一群以芽殖或裂殖方式進(jìn)行無(wú)性繁殖的單細(xì),胞真核生物，分屬于子囊菌綱（子囊酵母菌）、擔(dān)子菌綱（擔(dān)子酵母,菌）、半知菌類(lèi)（半知酵母菌），共由56個(gè)屬和500多個(gè)種組成。如,果說(shuō)大腸桿菌是外源基因最成熟的原核生物表達(dá)系統(tǒng)，則酵母菌是最,成熟的真核生物表達(dá)系統(tǒng)。,A酵母菌作為表達(dá)外源基因受體菌的特征,7酵母基因工程,酵母菌表達(dá)外源基因的優(yōu)勢(shì),全基因組測(cè)序，基因表達(dá)調(diào)控機(jī)理比較清楚，遺傳操作簡(jiǎn)便,能將外源基因表達(dá)產(chǎn)物分泌至培養(yǎng)基中,具有原核細(xì)菌無(wú)法比擬的真核蛋白翻譯后加工系統(tǒng),大規(guī)模發(fā)酵歷史悠久、技術(shù)成熟、工藝簡(jiǎn)單、成本低廉,不含有特異性的病毒、不產(chǎn)內(nèi)毒素，美國(guó)FDA認(rèn)定為安全的,基因工程受體系統(tǒng)（GenerallyRecognizedAsSafeGRAS）,酵母菌是最簡(jiǎn)單的真核模式生物,B酵母菌的宿主系統(tǒng),7酵母基因工程,提高重組蛋白表達(dá)產(chǎn)率的突變宿主菌,抑制超糖基化作用的突變宿主菌,減少泛素依賴(lài)型蛋白降解作用的突變宿主菌,廣泛用于外源基因表達(dá)的酵母宿主菌,廣泛用于外源基因表達(dá)的酵母宿主菌,目前已廣泛用于外源基因表達(dá)和研究的酵母菌包括：,酵母屬如釀酒酵母（Saccharomycescerevisiae）,克魯維酵母屬如乳酸克魯維酵母（Kluyveromyceslactis）,畢赤酵母屬如巴斯德畢赤酵母（Pichiapastoris）,裂殖酵母屬如非洲酒裂殖酵母（Schizosaccharomycespombe）,漢遜酵母屬如多態(tài)漢遜酵母（Hansenulapolymorpha）,其中釀酒酵母的遺傳學(xué)和分子生物學(xué)研究最為詳盡，但巴斯德畢赤酵母,表達(dá)外源基因最理想。,Saccharomycescerevisiae,Pichiapastoris,Schizosaccharomycespombe,Kluyveromyceslactis,Hansenulapolymorpha,提高重組蛋白表達(dá)產(chǎn)率的突變宿主菌,能導(dǎo)致釀酒酵母中重組蛋白產(chǎn)量提高或質(zhì)量改善的突變類(lèi)型,ssc1改善重組蛋白分泌鈣離子依賴(lài)型的ATP酶,ssc2提高重組蛋白表達(dá)轉(zhuǎn)錄后加工,rgr1提高重組蛋白表達(dá)轉(zhuǎn)錄水平,ose1提高重組蛋白表達(dá)轉(zhuǎn)錄后加工,ssc11改善重組蛋白分泌羧肽酶Y,rho-提高重組蛋白表達(dá)轉(zhuǎn)錄水平,突變類(lèi)型,生物效應(yīng),作用位點(diǎn),抑制超糖基化作用的突變宿主菌,能抑制超糖基化的突變類(lèi)型,mnn甘露糖生物合成缺陷型,alg天門(mén)冬酰胺側(cè)鏈糖基化缺陷型,och外側(cè)糖鏈添加缺陷型,突變類(lèi)型,生物效應(yīng),許多真核生物的蛋白質(zhì)在天冬酰胺側(cè)鏈上接有寡糖基團(tuán)，,它們常常影響蛋白質(zhì)的生物活性。整個(gè)糖單位由糖基核心和外側(cè)糖,鏈兩部分組成。,酵母菌普遍擁有蛋白,質(zhì)的糖基化系統(tǒng)，但野生,型釀酒酵母對(duì)異源蛋白的,糖基化反應(yīng)很難控制，呈,超糖基化傾向，因此超糖,基化缺陷株非常重要。,減少泛素依賴(lài)型蛋白降解作用的突變宿主菌,泛素介導(dǎo)的蛋白質(zhì)降解作用：高度保守、廣泛分布的真核生物多肽,蛋白酶體,Lys,Ubiquitin（泛素）76aa,ubiquitinligaseE3,Lys,ubiquitinligaseE3,Lys,靶蛋白,靶蛋白,靶蛋白,泛素與靶蛋白的復(fù)合物在泛素激活酶E1、泛素運(yùn)載酶E2、泛素連接酶E3的作用下被降解為短肽直至氨基酸。,減少泛素依賴(lài)型蛋白降解作用的突變宿主菌,酵母菌泛素依賴(lài)型蛋白降解系統(tǒng)的編碼基因,酵母菌共有四個(gè)泛素編碼基因：,UBI1編碼泛素-羧基延伸蛋白52（CEP52）對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期表達(dá)穩(wěn)定期關(guān)閉,UBI2編碼泛素-羧基延伸蛋白52（CEP52）對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期表達(dá)穩(wěn)定期關(guān)閉,UBI3編碼泛素-羧基延伸蛋白76（CEP76）對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期表達(dá)穩(wěn)定期關(guān)閉,UBI4編碼泛素五聚體對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期關(guān)閉穩(wěn)定期表達(dá),酵母菌共有七個(gè)泛素連接酶基因：,UBC1、UBC2、UBC3、UBC4、UBC5、UBC6、UBC7,減少泛素依賴(lài)型蛋白降解作用的突變宿主菌,泛素降解途徑衰減的釀酒酵母,在釀酒酵母菌中，泛素主要由UBI4基因表達(dá)，UBI4-突變株能,UBI4缺陷型：,正常生長(zhǎng)，但細(xì)胞內(nèi)游離泛素分子的濃度比野生株要低得多，,因此UBI4缺陷突變株是外源基因表達(dá)理想的受體,UBA1缺陷型：,UBA1編碼泛素激活酶E1，UBA1突變株是致死性的，但其等位,基因缺陷是非致死性的，而且也能削弱泛素介導(dǎo)的蛋白降解,Ubc4-ubc5雙突變型：,七個(gè)泛素連接酶基因的突變對(duì)衰減蛋白降解作用同樣有效,C酵母菌的載體系統(tǒng),7酵母基因工程,酵母菌克隆表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建,酵母菌中的野生型質(zhì)粒,酵母菌中的野生型質(zhì)粒,釀酒酵母中的2m環(huán)狀質(zhì)粒,幾乎所有的釀酒酵母中都含有野生型2m,雙鏈環(huán)狀質(zhì)粒，拷貝數(shù)達(dá)50至100個(gè)。,IRs反向重復(fù)序列，599bp，重組,FLP編碼產(chǎn)物驅(qū)動(dòng)IRs的同源重組,REP編碼產(chǎn)物控制質(zhì)粒的穩(wěn)定性,STBREP的結(jié)合位點(diǎn),接合酵母屬中的pSR1和pSB1，以及,克魯維酵母屬中的pKD1等均與2m質(zhì),粒類(lèi)似。,酵母菌中的野生型質(zhì)粒,乳酸克魯維酵母中的線狀質(zhì)粒,乳酸克魯維酵母中含有兩種不同,pGKL18.9kb,DNA聚合酶毒素蛋白ab免疫蛋白g亞基,的雙鏈線狀質(zhì)粒pGKL1和pGKL1,拷貝數(shù)為50-100個(gè)，分別攜帶K1,K2兩種能使多種酵母菌致死的毒,反向重復(fù)序列,素蛋白編碼基因（abg），同時(shí)含有毒素蛋白抗性基因。,酵母菌克隆表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建,含有ARS的YRp質(zhì)粒的構(gòu)建,ARS為酵母菌中的自主復(fù)制序列，0.8-1.5kb，染色體上每30-40kb,就有一個(gè)ARS元件。酵母菌自主復(fù)制型質(zhì)粒的構(gòu)建組成包括復(fù)制子、標(biāo),記基因、提供克隆位點(diǎn)的大腸桿菌質(zhì)粒DNA。,以ARS為復(fù)制子的質(zhì)粒稱(chēng)為YRp,上述兩類(lèi)質(zhì)粒在釀酒酵母中的拷貝數(shù)最高可達(dá)200個(gè)，但培養(yǎng)幾代,以2m質(zhì)粒上的復(fù)制元件為復(fù)制子的質(zhì)粒稱(chēng)為YEp,后，質(zhì)粒的丟失率高達(dá)50%-70%，主要是由于分配不均勻所致。,酵母菌克隆表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建,含有CEN的YCp質(zhì)粒的構(gòu)建,CEN為酵母菌染色體DNA上與染色體均勻分配有關(guān)的序列（著絲粒區(qū)）,將CENDNA插入含ARS的質(zhì)粒中，獲得的新載體稱(chēng)為YCp,YCp質(zhì)粒具有較高的有絲分裂穩(wěn)定性，但拷貝數(shù)只有1-5個(gè),酵母菌克隆表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建,含有TEL（端粒區(qū)）的YAC質(zhì)粒的構(gòu)建：利用酵母的端粒TEL、CEN、ARS等原件構(gòu)建人工酵母染色體，用于克隆擴(kuò)增大片段的外源DNA-YAC載體,酵母菌克隆表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建,含有酵母菌染色體DNA同源序列的YIp質(zhì)粒的構(gòu)建,在大腸桿菌質(zhì)粒上組裝酵母菌染色體DNA特定序列和標(biāo)記基因，,構(gòu)建出來(lái)的質(zhì)粒稱(chēng)為YIp。目的基因表達(dá)盒通常插在染色體DNA特定,序列中，這樣目的基因就能高效整合入酵母菌特定的染色體DNA區(qū)域,又稱(chēng)為整合載體，不帶自身復(fù)制元件,YEp：YeastEpisome（游離）plasmidYIp：YeastIntegrative（整合）plasmidsYCp：YeastCentromere（著絲點(diǎn)）plasmidYRp：YeastReplicating（復(fù)制）plasmidYAC：YeastArtificialChromosome,D酵母菌的轉(zhuǎn)化系統(tǒng),7酵母基因工程,轉(zhuǎn)化質(zhì)粒在酵母細(xì)胞中的命運(yùn),酵母菌的轉(zhuǎn)化程序,用于轉(zhuǎn)化子篩選的標(biāo)記基因,酵母菌的轉(zhuǎn)化程序,酵母菌原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化法,早期酵母菌的轉(zhuǎn)化都采用在等滲緩沖液中穩(wěn)定的原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化,法，在Ca2+和PEG的存在下，轉(zhuǎn)化細(xì)胞可達(dá)原生質(zhì)體總數(shù)的1-2%。,但該程序操作周期長(zhǎng)，而且轉(zhuǎn)化效率受到原生質(zhì)再生率的嚴(yán)重制約,原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化法的一個(gè)顯著特點(diǎn)是，一個(gè)受體細(xì)胞可同時(shí)接納,多個(gè)質(zhì)粒分子，而且這種共轉(zhuǎn)化的原生質(zhì)體占轉(zhuǎn)化子總數(shù)的25-33%,酵母菌的轉(zhuǎn)化程序,堿金屬離子介導(dǎo)的酵母菌完整細(xì)胞的轉(zhuǎn)化,釀酒酵母的完整細(xì)胞經(jīng)堿金屬離子（如Li+等）、PEG、熱休克,處理后，也可高效吸收質(zhì)粒DNA，而且具有下列特性：,吸收線型DNA的能力明顯大于環(huán)狀DNA，兩者相差80倍,共轉(zhuǎn)化現(xiàn)象極為罕見(jiàn),酵母菌的轉(zhuǎn)化程序,酵母菌電擊轉(zhuǎn)化法,酵母菌原生質(zhì)體和完整細(xì)胞均可在電擊條件下吸收質(zhì)粒DNA，,但在此過(guò)程中應(yīng)避免使用PEG，它對(duì)受電擊的細(xì)胞具有較很大的負(fù),作用。電擊轉(zhuǎn)化的優(yōu)點(diǎn)是不依賴(lài)于受體細(xì)胞的遺傳特征及培養(yǎng)條件,適用范圍廣，而且轉(zhuǎn)化率可高達(dá)105/mgDNA。,轉(zhuǎn)化質(zhì)粒在酵母細(xì)胞中的命運(yùn),單雙鏈DNA均可轉(zhuǎn)化酵母菌，但單鏈的轉(zhuǎn)化率是雙鏈的10-30倍,含有復(fù)制子的單鏈質(zhì)粒進(jìn)入細(xì)胞后，能準(zhǔn)確地轉(zhuǎn)化為雙鏈并復(fù)制,不含復(fù)制子的單鏈質(zhì)粒進(jìn)入細(xì)胞后，能高效地同源整合入染色體,這對(duì)于體內(nèi)定點(diǎn)突變酵母基因組極為有利,克隆在YIp整合型質(zhì)粒上的外源基因，如果含有受體細(xì)胞的染色體,DNA的同源序列，會(huì)發(fā)生高頻同源整合，整合子占轉(zhuǎn)化子總,數(shù)的50-80%,用于轉(zhuǎn)化子篩選的標(biāo)記基因,用于酵母菌轉(zhuǎn)化子篩選的標(biāo)記基因主要有營(yíng)養(yǎng)缺陷型互補(bǔ)基因和,顯性基因兩大類(lèi),營(yíng)養(yǎng)缺陷型互補(bǔ)基因主要有氨基酸和核苷酸生物合成基因，如：,LEU、TRP、HIS、LYS、URA、ADE,但對(duì)于多倍體酵母來(lái)說(shuō)，篩選營(yíng)養(yǎng)缺陷型的受體非常困難,營(yíng)養(yǎng)缺陷型的互補(bǔ)基因,用于轉(zhuǎn)化子篩選的標(biāo)記基因,顯性標(biāo)記基因的編碼產(chǎn)物只要是毒性物質(zhì)的抗性蛋白,顯性標(biāo)記基因,aph氨基糖苷轉(zhuǎn)移酶抗G418,cat氯霉素乙酰轉(zhuǎn)移酶抗氯霉素,dhfr二氫葉酸還原酶抗氨甲喋呤和磺胺,cup1銅離子螯合物耐受銅離子,suc2蔗糖轉(zhuǎn)化酶耐受高濃度蔗糖,ilv2乙酰乳糖合成酶抗硫酰脲除草劑,標(biāo)記基因,編碼產(chǎn)物,遺傳表型,E酵母菌的表達(dá)系統(tǒng),7酵母基因工程,外源基因在酵母菌中表達(dá)的限制因素,酵母菌啟動(dòng)子的可控性,酵母菌表達(dá)系統(tǒng)的選擇,酵母菌啟動(dòng)子的可控性,pho4TS-PHO5啟動(dòng)子：,釀酒酵母PHO5啟動(dòng)子在培養(yǎng)基中游離磷酸鹽耗盡時(shí)才能打開(kāi),PHO4基因編碼產(chǎn)物是PHO5啟動(dòng)子的正調(diào)控因子,因此，裝在pho4TS-PHO5啟動(dòng)子下游的外源基因在35時(shí)關(guān)閉,23誘導(dǎo)表達(dá),溫度控制型啟動(dòng)子,PHO4溫度敏感型突變基因pho4TS的編碼產(chǎn)物在35時(shí)失活,酵母菌啟動(dòng)子的可控性,aa型啟動(dòng)子：,釀酒酵母有a和a兩種單倍體，分別由MATa和MATa兩個(gè)等位基因決定。a1因子決定a細(xì)胞特征表達(dá)（正調(diào)控）a2因子阻遏a細(xì)胞特征表達(dá)（負(fù)調(diào)控）a1-a2阻遏a細(xì)胞特征表達(dá)編碼a2因子的基因突變型hmla2-102能產(chǎn)生a2變體，它能滅活a1，同時(shí)阻遏a型,溫度控制型啟動(dòng)子,a型啟動(dòng)子,hmla2-102MATa,a1,Sir3-8TS,a型啟動(dòng)子,受體細(xì)胞基因組重組質(zhì)粒,a型啟動(dòng)子,hmla2-102MATa,a1,Sir3-8TS,a型啟動(dòng)子,a2,a1,25,35,酵母菌啟動(dòng)子的可控性,釀酒酵母,超誘導(dǎo)型啟動(dòng)子,GAL1,GAL7,GAL10,UAS,GAL4,GAL80,半乳糖誘導(dǎo)效果不明顯，基因基底水平表達(dá),GAL1,GAL7,GAL10,UAS,GAL4,GAL80,半乳糖誘導(dǎo)時(shí)，GAL4高效表達(dá)，GAL1、GAL1、GAL10超高效表達(dá),GAL10,Promoter,的半乳糖,利用酶系,由GAL1,GAL7和,GAL10,基因編碼,酵母菌啟動(dòng)子的可控性,無(wú)半乳糖或有葡萄糖存在時(shí)，GALl、GAL7、GAL10啟動(dòng)子受到阻遏；加入半乳糖或葡萄糖耗盡時(shí)，啟動(dòng)子活性被誘導(dǎo)1000倍。半乳糖的誘導(dǎo)作用與GAL4和GAL80的性質(zhì)密切相關(guān)，GAL4編碼正調(diào)控蛋白，能與GALl、GAL7、GAL10啟動(dòng)子上游的UAS特異性結(jié)合，GAL80蛋白是GAL4因子的頡頏劑。在一般情況下，GAL4基因的表達(dá)水平較低，限制了半乳糖誘導(dǎo)作用的程度。將野生型的GAL4置于GAL10啟動(dòng)子控制下，將該基因表達(dá)序列整合在釀酒酵母的染色體DNA上，由此構(gòu)建的受體茵在半乳糖缺乏時(shí)，野生型GAL4以低水平表達(dá)，加入半乳糖后，GAL4高表達(dá)，并與高濃度的半乳糖共同作用于控制外源基因表達(dá)的另一GAL啟動(dòng)子超誘導(dǎo)表達(dá)系統(tǒng)。,外源基因在酵母菌中表達(dá)的限制因素,外源基因穩(wěn)態(tài)mRNA的濃度,外源基因mRNA的翻譯活性,酵母菌對(duì)密碼子的偏愛(ài)性,在釀酒酵母中，高豐度的蛋白質(zhì)（如甘油醛-3-磷酸脫氫酶,GAPDH、磷酸甘油激酶PKG、乙醇脫氫酶ADH）中96%,以上的氨基酸是由25個(gè)密碼子編碼的,酵母菌表達(dá)系統(tǒng)的選擇,釀酒酵母的基因表達(dá)系統(tǒng)最為成熟，包括轉(zhuǎn)錄活性較高的甘油,醛-3-磷酸脫氫酶基因GAPDH、磷酸甘油激酶基因PKG、乙醇脫氫,釀酒酵母表達(dá)系統(tǒng),酶基因ADH所屬的啟動(dòng)子，多種重組外源蛋白獲得成功表達(dá)。,釀酒酵母表達(dá)系統(tǒng)的最大問(wèn)題在于其超糖基化能力，往往使得,有些重組蛋白（如人血清白蛋白等）與受體細(xì)胞緊密結(jié)合，而不能,大量分泌。這一缺陷可用非釀酒酵母型的表達(dá)系統(tǒng)來(lái)彌補(bǔ)。,酵母菌表達(dá)系統(tǒng)的選擇,乳酸克魯維酵母的雙鏈環(huán)狀質(zhì)粒pKD1已被廣泛用作重組異源,蛋白生產(chǎn)的高效表達(dá)穩(wěn)定性載體，即便在無(wú)選擇壓力的條件下，也,乳酸克魯維酵母表達(dá)系統(tǒng),能穩(wěn)定遺傳40代以上。,乳酸克魯維酵母表達(dá)分泌型和非分泌型的重組蛋白，性能均優(yōu),于釀酒酵母表達(dá)系統(tǒng)。,酵母菌表達(dá)系統(tǒng)的選擇,巴斯德畢赤酵母是一種甲基營(yíng)養(yǎng)菌，能在低廉的甲醇培養(yǎng)基中生,巴斯德畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng),長(zhǎng)，甲醇可高效誘導(dǎo)甲醇代謝途徑中各酶編碼基因的表達(dá)，因此生長(zhǎng),迅速、乙醇氧化酶基因AOX1所屬?gòu)?qiáng)啟動(dòng)子、表達(dá)的可誘導(dǎo)性是巴斯,德畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)的三大優(yōu)勢(shì)。,由于巴斯德畢赤酵母沒(méi)有合適的自主復(fù)制型載體，所以外源基因,的表達(dá)序列一般整合入受體的染色體DNA上。在此情況下，外源基因,具有經(jīng)濟(jì)價(jià)值的重組蛋白在巴斯德畢赤酵母系統(tǒng)中獲得成功表達(dá)。,的高效表達(dá)在很大程度上取決于整合拷貝數(shù)的多寡。目前已有20余種,酵母菌表達(dá)系統(tǒng)的選擇,多型漢遜酵母也是一種甲基營(yíng)養(yǎng)菌。其自主復(fù)制序列HARS已被,多型漢遜酵母表達(dá)系統(tǒng),克隆，并用于構(gòu)建克隆表達(dá)載體，但與巴斯德畢赤酵母相似，這種載,體在受體細(xì)胞有絲分裂時(shí)顯示出不穩(wěn)定性。所不同的是，HARS質(zhì)粒,能高頻自發(fā)地整合在受體的染色體DNA上，甚至可以連續(xù)整合100多,目前，包括乙型肝炎表面抗原在內(nèi)的數(shù)種外源蛋白在該系統(tǒng)中獲,個(gè)拷貝，因此重組多型漢遜酵母的構(gòu)建也是采取整合的策略。,得成功表達(dá)。,F利用重組酵母生產(chǎn)乙肝疫苗,7酵母基因工程,由乙型肝炎病毒（HBV）感染引起的急慢性乙型肝炎是一種嚴(yán)重,的傳染病，每年約有200萬(wàn)病人死亡，并有3億人成為HBV攜帶者，其,中相當(dāng)一部分人可能轉(zhuǎn)化為肝硬化或肝癌患者。目前對(duì)乙型肝炎病毒,還沒(méi)有一種有效的治療藥物，因此高純度乙型疫苗的生產(chǎn)對(duì)預(yù)防病毒,感染具有重大的社會(huì)效益，而利用重組酵母大規(guī)模生產(chǎn)乙型疫苗為其,廣泛應(yīng)用提供了可靠的保證。,F利用重組酵母生產(chǎn)乙肝疫苗,7酵母基因工程,產(chǎn)乙肝表面抗原的重組釀酒酵母,乙型肝炎病毒的結(jié)構(gòu)與性質(zhì),產(chǎn)乙肝表面抗原的重組巴斯德畢赤酵母,乙型肝炎病毒的結(jié)構(gòu)與性質(zhì),乙肝病毒是一種蛋白包裹型的雙鏈DNA病毒，具有感染力的病毒,乙型肝炎病毒的結(jié)構(gòu),顆粒呈球面狀，直徑為42nm，基因組僅為3.2kb。病毒顆粒的主要,結(jié)構(gòu)蛋白是病毒的表面抗原多肽（HBsAg）或S多肽，它具有糖基化,和非糖基化兩種形式。顆粒內(nèi)的蛋白成份包括核心抗原（HBcAg）、,除此之外，被乙肝病毒感染的人的肝臟還能合成并釋放大量的22,病毒DNA聚合酶、微量病毒蛋白。,nm的空殼亞病毒顆粒，其免疫原性是未裝配的各種包裝蛋白組份的,1000倍。包裝蛋白共有三種轉(zhuǎn)膜糖蛋白：S、M、L多肽。,乙型肝炎病毒的結(jié)構(gòu)與性質(zhì),乙型肝炎病毒的包裝蛋白編碼基因,ATG,ATG,ATG,TAA,108aa,55aa,226aa,preS1,preS2,S,S多肽,226aa,M多肽,281aa,L多肽,399aa,大量,少量,少量,乙型肝炎病毒的結(jié)構(gòu)與性質(zhì),乙肝病毒在體外細(xì)胞培養(yǎng)基中并