人胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞大鼠體內(nèi)移植的初步免疫學(xué)研究精品資料本文檔格式為WORD,感謝你的閱讀。最新最全的學(xué)術(shù)論文期刊文獻(xiàn)年終總結(jié)年終報告工作總結(jié)個人總結(jié)述職報告實(shí)習(xí)報告單位總結(jié)摘要目的了解大鼠對于人胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞是否存在天然免疫耐受，分析人胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞在大鼠體內(nèi)出現(xiàn)免疫排斥的可能。方法分離提取并鑒定人胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞，觀察大鼠尾靜脈移植人胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞后有無出現(xiàn)相關(guān)的免疫排斥癥狀、細(xì)胞在大鼠體內(nèi)的分布情況及臟器的病理改變。結(jié)果大鼠尾靜脈移植人胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞后未出現(xiàn)急慢性免疫排斥反應(yīng)，肝、腎、肺可見標(biāo)記后的人胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞的分布，但相關(guān)病理切片未見明顯的淋巴細(xì)胞浸潤和纖維組織增生現(xiàn)象。結(jié)論人胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞與大鼠臟器間存在天然的免疫耐受。關(guān)鍵詞胎盤；間充質(zhì)干細(xì)胞；免疫排斥R74234A16739701（2013）18000503近年來，由于間充質(zhì)干細(xì)胞的研究（MESENCHYMALSTEMCELLS，MSCS）逐步深入，人們對間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療大面積骨缺損12、神經(jīng)系統(tǒng)損傷3、卵巢早衰4等疾病產(chǎn)生了濃厚的興趣，而在種類眾多的間充質(zhì)干細(xì)胞中，人胎盤來源的間充質(zhì)干細(xì)胞被認(rèn)為是免疫原性最低的干細(xì)胞之一56，也是目前研究的熱點(diǎn)之一，學(xué)者們多通過大鼠移植人胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞來進(jìn)行相關(guān)疾病的研究710。然而，對于人胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞是否在人鼠間中存在天然的免疫耐受，尚無相關(guān)的動物實(shí)驗基礎(chǔ)。因此，為了了解人胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞移植對大鼠各臟器功能的影響，客觀的分析人胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞在大鼠體內(nèi)出現(xiàn)免疫排斥的可能，避免由于免疫的因素掩蓋或降低甚至誤導(dǎo)了研究因素的作用，我們對正常大鼠卵巢尾靜脈注射移植人胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞做了一個初步的研究。1材料與方法11主要試劑DMEMF12培養(yǎng)基（HYCLONE）、胰酶（HYCLONE）、胎牛血清（HYCLONE）、CO2培養(yǎng)箱（日本三洋）、流式細(xì)胞儀（FACSCALIBUR），PKH26試劑盒（SIGMA）（089K0781）。12方法取足月剖宮產(chǎn)分娩的健康胎兒的胎盤，在無菌條件下剪取小塊蛻膜側(cè)胎盤組織，進(jìn)行人胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞的原代培養(yǎng)。取第2代的胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞，胰酶消化后制成單細(xì)胞懸液，采用流式細(xì)胞儀進(jìn)行胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞免疫表型分析。PKH26標(biāo)記胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞，按SIGMA公司的說明書進(jìn)行操作。實(shí)驗分兩組，每組10只大鼠，為WISTA近交系大鼠，體重180200G。第一組為對照組，不做任何處理；第二組為尾靜脈注射組。移植成功后觀察在大鼠體內(nèi)的分布狀況和大鼠一般情況的觀察，評估PKH26標(biāo)記的胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞在大鼠體內(nèi)移植的安全性和可行性。2結(jié)果21胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞的形態(tài)觀察及生長情況分離出的胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞貼壁生長，細(xì)胞呈長梭形，類似于成纖維細(xì)胞樣，見胞漿突起，胞漿豐富，核大，呈平行排列或旋渦狀生長，細(xì)胞增殖活躍，約34D即可鋪滿全層，可穩(wěn)定傳代。見圖1。22胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞免疫表型分析取第2代細(xì)胞進(jìn)行流式細(xì)胞儀檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞表達(dá)CD29，CD44，CD73，CD90、CD105；不表達(dá)CD14，CD34（造血干細(xì)胞抗原），CD45（白細(xì)胞共同抗原）、CD106、CD133和HLADR（MHCII），提示所得貼壁細(xì)胞為人間充質(zhì)干細(xì)胞，表達(dá)間充質(zhì)細(xì)胞特異性抗原標(biāo)志而不表達(dá)造血干細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞特異性抗原。見圖2。23胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞標(biāo)記結(jié)果細(xì)胞標(biāo)記后染料在細(xì)胞膜上分布均勻一致，在倒置熒光顯微鏡下呈紅色熒光，細(xì)胞輪廓清晰。標(biāo)記百分率為100。臺盼藍(lán)染色細(xì)胞的存活率為99。見圖3。24大鼠移植胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞情況移植組大鼠進(jìn)食、活動、大小便均與對照組無異，未發(fā)現(xiàn)大鼠出現(xiàn)嗜睡、嘔吐、抽搐、猝死、無尿、精神狀態(tài)異常及偏癱等有關(guān)器官栓塞的癥狀，亦未發(fā)現(xiàn)大鼠出現(xiàn)呼吸困難、出血、脫毛、血尿、血便等急慢性免疫排斥反應(yīng)。25大鼠體內(nèi)的胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞的分布熒光顯微鏡下可見PKH26標(biāo)記后呈紅色熒光的胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞，均勻分布在肺臟、肝臟及腎臟皮質(zhì)。肝臟組織可見均勻分布紅色熒光，整個肝臟結(jié)構(gòu)組織清晰可見，包括肝臟的膽管和肝臟大血管均可見；在腎臟中亦可見紅色熒光細(xì)胞主要分布在腎臟皮質(zhì)，部分腎小體輪廓清晰可見。見圖4。26大鼠相關(guān)臟器的病理切片移植組大鼠肝、腎、大腦、膀胱HE染色后未見明顯淋巴細(xì)胞浸潤和組織結(jié)構(gòu)的破壞，與正常組大鼠未見明顯區(qū)別。見圖5。3討論間充質(zhì)干細(xì)胞具有多向分化潛能，在體外特定的誘導(dǎo)條件下能向成骨細(xì)胞、成軟骨細(xì)胞、成脂肪細(xì)胞、骨髓基質(zhì)甚至肝臟細(xì)胞和神經(jīng)細(xì)胞等分化，是目前細(xì)胞治療、基因治療中理想的種子細(xì)胞，在神經(jīng)系統(tǒng)損傷、卵巢早衰、糖尿病、骨缺損等疾病的治療中具有極大的應(yīng)用前景。而在眾多種類的間充質(zhì)干細(xì)胞中，尤其以胎盤來源的間充質(zhì)干細(xì)胞優(yōu)點(diǎn)突出，如來源豐富，易采集，病原微生物感染率和免疫原性較低，無致瘤性和倫理限制等成為目前研究的熱點(diǎn)。然而，國內(nèi)外學(xué)者對于間充質(zhì)干細(xì)胞治療相關(guān)疾病的機(jī)制研究，多采用動物模型進(jìn)行實(shí)驗，雖尚未見急慢性免疫排斥的報道，但并不代表著大鼠對于人胎盤來源的間充質(zhì)干細(xì)胞存在天然的免疫耐受，因為實(shí)驗中的大鼠多為相關(guān)疾病的模型，非正常狀態(tài)下大鼠。鐘志年等11選擇胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞，測定其細(xì)胞周期及凋亡率情況，原子力顯微鏡觀察細(xì)胞的表面結(jié)構(gòu)，及向成骨細(xì)胞誘導(dǎo)分化，探討胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)特性和超微結(jié)構(gòu)，并評價其在骨組織工程學(xué)中修復(fù)重建的應(yīng)用前景，結(jié)果表明人胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞為成纖維細(xì)胞樣，增殖能力強(qiáng)，97的細(xì)胞處于G2/M期或者S期，微結(jié)構(gòu)分析顯示其細(xì)胞代謝活躍，黏附能力強(qiáng)，能被誘導(dǎo)分化為成骨細(xì)胞，結(jié)論認(rèn)為人胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞具備適合應(yīng)用于骨組織工程學(xué)的良好生物學(xué)特性，并避免了免疫排斥和倫理問題，可望成為骨組織修復(fù)重建中的一個新的治療途徑。本次研究我們選擇了正常的成年大鼠，移植前后均未用任何藥物進(jìn)行免疫干預(yù)。事實(shí)上，人間充質(zhì)干細(xì)胞用于實(shí)驗動物研究的結(jié)果不令人滿意，所以近年來有學(xué)者使用大鼠胎盤來源的間充質(zhì)干細(xì)胞用于動物實(shí)驗研究。劉志鵬等12通過膠原酶消化法從大鼠胎盤分離并得到間充質(zhì)干細(xì)胞，并建立從大鼠胎盤分離間充質(zhì)干細(xì)胞的方法，觀察其基本生物學(xué)特性，結(jié)果表明，原代細(xì)胞培養(yǎng)8H后細(xì)胞貼壁，24H內(nèi)細(xì)胞形成集落，第4代細(xì)胞大小、形態(tài)基本一致，以梭形為主，細(xì)胞周期檢測提示G0/G1期、S期、G2期的比例分別為8376，801，823，免疫表型分析其表達(dá)CD29和CD90，不表達(dá)CD45，結(jié)論認(rèn)為胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞具有成脂和成骨分化的潛能。本研究結(jié)果也顯示大鼠尾靜脈移植人胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞后1個月，大鼠肺、肝、腎等組織均可見標(biāo)記了PKH26的人胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞的分布，說明移植的人胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞在大鼠體內(nèi)可成功存活。病理切片也顯示腦、肝、腎、膀胱等臟器未見明顯的淋巴細(xì)胞浸潤和纖維組織增生現(xiàn)象，說明人胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞的移植未對大鼠相關(guān)臟器產(chǎn)生免疫排斥影響。整個觀察期間大鼠均無明顯的急慢性的免疫排斥反應(yīng)，如呼吸困難、出血、脫毛、血尿、血便等，以上結(jié)果均證明大鼠對人胎盤來源的間充質(zhì)干細(xì)胞存在天然的免疫耐受。這種免疫耐受有可能源于胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞的低免疫原性甚至是無免疫原性。原因可能與以下因素有關(guān)胎盤在母兒體內(nèi)起著重要的免疫屏障和激素分泌的作用13，所以胎盤來源的間充質(zhì)干細(xì)胞從理論上講免疫原性更低，甚至不排除無免疫原性的可能，并且其分泌的免疫調(diào)節(jié)活性因子，對免疫功能排斥具有調(diào)節(jié)作用。人胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞的HLADR表面標(biāo)記陰性。HLA又稱移植抗原，能啟動免疫應(yīng)答，參與T細(xì)胞的分化，誘導(dǎo)免疫應(yīng)答，胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞的HLADR表面標(biāo)記陰性提示了其低免疫原性的部分原因。因此，人胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞在研究相關(guān)疾病的動物模型中，即便是人鼠間的異種間移植，但由于存在天然的免疫耐受，對實(shí)驗研究的結(jié)果影響甚小。參考文獻(xiàn)1JAMESAW，ZARAJN，CORSELLIM，ETALANABUNDANTPERIVASCULARSOURCEOFSTEMCELLSFORBONETISSUEENGINEERINGJSTEM，2012，1（9）6736842KANGBJ，RYUHH，PARKSS，ETALCOMPARINGTHEOSTEOGENICPOTENTIALOFCANINEMESENCHYMALSTEMCELLSDERIVEDFROMADIP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