學校代碼學號碩士學位論文腺苷類似物對動物中樞神經(jīng)系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)和呼吸系統(tǒng)的影響院藥物研究所所姓名李偉指導教師張建軍研究員導師小組張建軍,胡卓偉,葉菲藥理學學科專業(yè)研究方向神經(jīng)精神藥理學/完成日期、匹銘目錄摘要仃英文縮略詞表、,撕前言實驗材料和方法。實驗結果一一、對中樞神經(jīng)系統(tǒng)的影響對動物大體行為的影響對小鼠翻正反射行為的影響腹腔注射對小鼠翻正反射行為的影響側腦室注射對小鼠翻正反射行為的影響對小鼠自主活動的影響。對小鼠自主活動的時效作用與抑制小鼠自主活動的效應腺苷受體拮抗劑對抑制小鼠自主活動作用的影響腺苷受體拮抗劑對抑制小鼠自主活動作用的影響對戊四唑致驚厥小鼠的保護作用對大鼠皮層腦電的影響對大鼠睡眠結構的影響對大鼠皮層低頻放電的影響對大鼠皮層高頻放電的影響二、對心血管系統(tǒng)和呼吸系統(tǒng)的影響對大鼠血壓和心率的影響對小鼠呼吸頻率的影響尼可剎米對抑制小鼠呼吸作用的影響腺苷受體拈抗劑對抑制小鼠呼吸作用的影響三、對小鼠的毒性對小鼠的急性毒性對小鼠的亞急性毒性短期重復給藥對小鼠體重的影響一短期重復給藥對小鼠臟器系數(shù)的影響對重要器官組織的組織病理學觀察討論結論參考文獻。綜述致謝。個人簡歷獨創(chuàng)性聲明腺苷類似物對動物中樞神經(jīng)系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)和呼吸系統(tǒng)的影響摘要腺苷是一種重要的內(nèi)源性生理調(diào)節(jié)因子,參與機體的各種病理生理過程?，F(xiàn)已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了四種腺苷受體亞型,分別為、和,并且開發(fā)出了許多腺苷配體,包括激動劑和拮抗劑,例如、等等,是一個新合成的腺苷類似物,表現(xiàn)出較好的配體受體親和活性和內(nèi)在活性。本研究分以下幾部分內(nèi)容一、對中樞神經(jīng)系統(tǒng)的作用二、的心血管系統(tǒng)和呼吸系統(tǒng)作用三、對小鼠的毒性。一、腺苷受體在體內(nèi)廣泛表達,生理作用廣泛。本研究的目的是確定對中樞神經(jīng)系統(tǒng)的作用及其可能的靶點,采用大體行為觀察、自主活動實驗、抗驚厥實驗和分析技術進行評價。結果顯示,使小鼠出現(xiàn)緩慢而吃力的腹式呼吸,對體溫無明顯影響。、和/,能夠劑量依賴性減少小鼠的自主活動,其鞏為士幾,效應強度與選擇性腺苷受體激動劑相當。對小鼠自主活動的抑制作用可以被選擇性腺苷拈抗劑拮抗,而不能被選擇性拮抗劑拮抗。另外腹腔注射,和/,或側腦室注射、和嶺,均能導致小鼠翻正反射消失?？裳娱L戊四唑誘導的小鼠痙攣潛伏期,減少驚厥發(fā)作次數(shù),降低死亡率,在/劑量下作用顯著。和內(nèi)累計汪睡眠嘰,可以顯著延長大鼠的汪睡眠,給藥后和,延長率分別為和,時間從分別延長至同時也增加】陋睡眠的功率,縮短睡眠,給藥后內(nèi)累計和睡眠時間從觚分別縮短至,縮短率分別為和。,并且引起低頻波段的功率增加,峰值位于高頻波段的功率顯著降低,提示抑制皮層的高頻電活性,增強低頻電活性,從而致皮層電活性抑制在更高劑量/,下,對人鼠皮層自發(fā)放電活動的抑制更加顯著。上述結果提示,具有很強的】昭中樞神經(jīng)系統(tǒng)抑制作用,這種作用可能是通過腺苷介導的。二、腺苷和都參與心血管和呼吸系統(tǒng)的調(diào)節(jié)作用,本研究旨在確定除中樞神經(jīng)抑制作用外的其他作用。結果顯示,、和/【和創(chuàng),劑量依賴性的降低大鼠的平均血壓和心率,其中/組作用顯著,平均血壓最低時降低和,心率最最低時降低和。另外,、和剛噸,顯著降低了小鼠呼吸頻率,最低時降低。對小鼠呼吸的抑制作用,可被呼吸興奮藥尼可剎米部分拮抗,并能完全被選擇性腺苷拮抗劑拮抗。上述結果提示,具有致大鼠低血壓和心動過緩效應,并具有較強的抑制呼吸作用,其對呼吸的影響可能是通過呼吸中樞和腺苷介導的。三、本研究采用急性毒性實驗和亞急性毒性實驗,初步確定了的毒性。小鼠腹腔注射的加如為士/,死亡小鼠鼻腔出血,尸解肺部成絳紅色,充血嚴重。亞急性毒性實驗中腹腔注射/,持續(xù)或天,降低小鼠體重,但不引起小鼠臟器系數(shù)的改變。病理組織學檢查發(fā)現(xiàn),除引起個別小鼠的肺出血外,其余各器官均未發(fā)現(xiàn)肉眼可見改變。鏡下檢查發(fā)現(xiàn)組小鼠出現(xiàn)腎小管上皮濁腫,管腔狹窄,并發(fā)現(xiàn)有透明滴狀變性細胞。肺切片出現(xiàn)局部炎癥病灶。而大腦、小腦、脾臟、心臟和肝均未出現(xiàn)明顯病理改變。上述結果提示,對小鼠有毒性,可能損傷腎小管上皮,并且能誘發(fā)肺局部炎癥?？偨Y以上結果,是一個新腺苷類似物,對中樞神經(jīng)系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)和呼吸系統(tǒng)都有很強的作用,這些作用可能和腺苷有關。關鍵詞腺苷類似物中樞抑制作用毒性呼吸抑制笛陀,眄朗鋤粕西鋤陰啪酉喇卻鋤鋤鋤態(tài)鋤鋤,鋤夥,鋤曲蠲印鋤仃鈾甜枷夠礬鶴鋤夥噦雒虢,鋤鋤虢肫鋤西撕鋤夥撲唱融朗仃哺鋤鋤畦撕撕撕啊也撕枷鋤鋤鋤“,量、,嘶謝肌夠陀哆,、量穢叫仃,觚,伽釷,柚劣鑼/鷸、析,印鋤肫丌,妙西柚,鋤,鋤幽鋤,曲鰣、油而加,/,盯鑼豁鋤砌夠哦啪心撕,伊鋤舭瞅峪遼鋤瓜,嘶,舾弱也嬲洫舶印印鋤舔鋤,鋤勰嬲舶而幻柚嬲印鋤觚啪笛、儺,鋤舔鰣鋤曲鋤婦陸仔力,甜馮鶴【/弱仃卟協(xié)髓,址柚弱撕艉雒鋤妙,鋤礬,鋤任/,鋤鋤鋤,鋤鋤舊閉艮的,甜【啪穢行鋤鋤腩鋤,獅“,玀哆,仟鋤呻,弱豁山穢鋤曲礬鋤秭咖肫羽肋士、,址鋤島兩撕哪,坤抽/鮒嘰弱鋤銹印岫面僦髓嘶冊舶岫鋤。盯百撕枷仃,百甜趾仃鋤訕,肌舶啪鋤鋤鋤鋤,劬豁印鋤鋤,弱岫,鋤袱擂【邪丘,鋤“唱鋤,弱噦舭舵,巧妙,曲鋤仃時嘣。穢伽旺匹墨英文縮略詞表撕鋤方差分析鋤姆前后體溫環(huán)戊基腺苷叫夠環(huán)戊二,一丙基黃嘌呤半數(shù)有效劑量腦電圖印姍肌電圖腎小球濾過率哲蘇木素伊紅鋤心率側半數(shù)致死劑量重平均血壓汪非快動眼睡眠億戊四唑妙拋快動眼睡眠印印心呼吸頻率晰叮疔一一呻氨基苯乙基呋【,一】一,一趵【,】喃基吡唑【,一】一,三唑【,一】嘧啶慢波活性前言腺苷是一種內(nèi)源性的嘌呤核苷,廣發(fā)分布于中樞神經(jīng)系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)、消化系統(tǒng)和呼吸系統(tǒng)等組織細胞?；A生理條件下內(nèi)源性腺苷水平非常低,初始認為腦【】,在基底前腦和丘腦的濃度約為【,在紋狀體內(nèi)腺苷濃度為一【。腺苷通過四種受體亞型發(fā)揮作用,分別約為【,在皮層約為為腺苷、和【,都屬于蛋白偶聯(lián)受體。其中/為腦偶聯(lián)受體,劇為偶聯(lián)受體。腺苷參與機體多種病理生理功能的調(diào)節(jié),腺苷受體配體激動劑或拮抗劑具有治療多種疾病的潛在效益。腺苷受體的分布在基礎低水平腺苷下,腺苷受體的分布對于腺苷在哪發(fā)揮何種調(diào)節(jié)作用很重要,而且對于激動劑或拮抗劑來說,通常受體數(shù)量越多,效應越強。采用放射配基和抗體等藥理學工具已經(jīng)得到和分布的大量信息【】,腺苷主要在腦皮層、小腦、海馬、脊髓背角、眼、腎上腺、心房等高表達,在其余腦區(qū)、骨骼肌、肝、腎、脂肪組織、唾液腺、食管、結腸、心竇、睪丸等中度表達,而在肺、胰腺等低水平分布,但在支氣管可能高分布。腺苷在脾、胸腺、粒細胞、血小板、紋狀體蒼白球能神經(jīng)元和嗅球高度表達,除此之外的腦區(qū)表達水平很低,在心、肺和血管等中度表達。與和冰分布相比,出和承的信息相對較少,大多是依據(jù)其偽的表達來得到,其中出在排泄系統(tǒng)如盲腸、結腸和膀胱等表達較高,在肺、眼、正中隆起和肥大細胞等中度表達,而在脂肪組織、腎上腺、腦、腎、肝、卵巢和垂體腺低度表達。在大鼠的睪丸和肥大細胞表達較高,小腦、海馬、肺、脾羊、松果體等中度表達,而在甲狀腺,大部分腦區(qū)、腎上腺、肝、腎、心、腸、人的睪丸和脾中低度表達。腺苷受體配體激動劑或拮抗劑腺苷受體和其配基可利用結合實驗和功能測試進行研究。第一批實用型腺苷類似物尺一和的發(fā)展是利用整體動物實驗進行的,尤其是血壓、心率和體溫是研究參數(shù)【一。采用脂肪細胞、肝、睪丸間質(zhì)細胞、腦勻漿和培養(yǎng)腦細胞測定燦,的變化的方法也被用來確定和,羽。受體結合實驗在早期開展起來,但是功能性實驗仍然發(fā)揮著重要的作用。例如,狗的冠脈血流實驗曾篩選并發(fā)展了一大批作用于的化合物【引。即使在今天,匹許多個功能測試仍然非常有用,不僅因為這些測試與天然信號通路相關。例如,介導的腺苷酸環(huán)化酶抑制可以在脂肪細胞上進行研究】,而血小板膜是研究通過激活腺苷酸環(huán)化酶的優(yōu)選系統(tǒng)”,利用成纖維細胞和大鼠主動脈刀確定椒。在較長時期內(nèi),大鼠腦膜是和【卅結合實驗的標準系統(tǒng)。現(xiàn)在,轉染了受體亞型的細胞系已經(jīng)成為確定配體的標準系統(tǒng),他們有多種優(yōu)點例。轉染細胞可以確定多個物種包括人的受體亞型特點。通過表達單個受體亞型,非選擇性配體與非研究受體的交叉作用可以排除。另外,在自然條件下表達水平非常低,現(xiàn)在也可以用于體外研究。轉染受體的細胞模型也可以用來確定效應劑偶聯(lián)特征。然而,這些結果不能代表生理條件的狀態(tài),因為在人造細胞模型上,受體密度、蛋白和其他信號轉導必須參與成分的可獲得性都會不同。目前通過放射性配基受體競爭結合實驗,腺苷四種受體亞型選擇性激動劑和拮抗劑都可以獲得【。放射配基親和力實驗數(shù)據(jù)都有,在個別情況下只有活性數(shù)據(jù)。生理活性激動劑腺苷和它的衍生物氯腺苷和是非選擇性的,然而他們對于親和力低,對大鼠親和力也低除。與腺苷不同的是,氯腺苷和代謝非常穩(wěn)定。過去年的大量研究在多個生物系統(tǒng)中使用了選擇性受體激動劑和拮抗劑。選擇性。腺苷衍生物的典型特征是在環(huán)外氨基上有一個環(huán)烷基或一個芳香基苯基或苯基異丙基取代基。一些化合物另外還在和/或核糖結構進行附加修飾。該類化合物對于相比和的高選擇性通常在衍生,但是有些化合物對于選擇性不高。一般認為,對于受體藥理學工具來說,其選擇性差異至少達到倍。標記的、和是標準的放射性配基。制藥得到了首個非腺苷衍生非核苷類腺苷受體激動劑氨基二氰基吡啶如【。選擇性激動劑通過在腺苷骨架的位引入大取代基而得到。玲廣泛用于研究激活,其標記形式是標準的放射性配基。它對大鼠選擇性好,但由于對人也有相對高的親和力,因此對人選擇性低。由于腺苷類似物通常對于的親和力很低,發(fā)展受體的選擇性激動劑要比其他受體難得多。目前僅有兩個選擇性激動劑,腺苷衍生物和。兩個化合物已得到廣泛的確定,的選擇性放射性配體現(xiàn)在還沒有。激動劑通過在腺苷骨架,和位置取代優(yōu)化而得到。大多數(shù)選擇性化合物,核糖部分被雙環(huán)烷基環(huán)形結構替代。標準的激動劑為和,后者對于相對于的選擇性要比前者高。非選擇性腺苷拮抗劑是黃嘌呤衍生物咖啡因和膽茶堿,兩者都有治療功效。與大量合成的烷基黃嘌呤相比,兩者對于腺苷受體效應要弱的多。更強效的選擇性拮抗劑是三唑喹啉衍生物。從黃嘌呤和非黃嘌呤結構衍生出了大量的選擇性拈抗劑。選擇性黃嘌呤通常特征是黃嘌呤核位存在大的環(huán)烷基取代基。是使用最廣泛的拮抗劑,盡管其對某些種屬選擇性一般例如人。其標記形式用于拈抗劑放射性配基。黃嘌呤氟化衍生物【】愀以被用于的追蹤劑。卸鑼衍生物比更強,其對大鼠的硒值為水平。許多拮抗劑有多種不同的結構類型。首先是一夠毹。然而,它也是單胺氧化酶的強效抑制劑。常用的冰拮抗劑是黃嘌呤衍生物和它的水溶性前藥和一、和。、一和都有標記形式成為放射性配體。由于與有親和力,在上述三個拈抗劑中選擇性最低。在過去十年中,已經(jīng)成功研發(fā)出強效選擇性的拮抗劑。最初的一個化合物是黃嘌呤衍生物,在人受體強效選擇性強而非其他種屬例如大鼠。進一步強效的選擇性黃嘌呤衍生物包括、一和幾。其中最強效選擇性拈抗劑是,在人和嚙齒類動物巾部表現(xiàn)出高親和力和選擇性。、都制成了標記形式作為的放射性配基。在體內(nèi)實驗尤其有用,因為其高水溶性,然而其汰親和力和選擇性要比其余親脂性的化合物低。除了黃嘌呤衍生物,近期也發(fā)展出了非黃嘌呤類拮抗劑,如。,的種屬差異明顯,尤其是對于拮抗劑。雜環(huán)形拮抗劑對人親和力高而對大鼠親和力低。因此,他們應用于小鼠或大鼠的研究很受限。其中一個例外是嘧啶衍生物,其對大鼠親和力也很高。常用的選擇性工具藥包括、】、和。和、很的標記形式作為拮抗劑放射性配體。咪唑嘌呤衍生物、和與其他相比的優(yōu)點是脂溶性弱,水溶性強,因為原子的存在。多種神經(jīng)系統(tǒng)疾病,如癲癇、痛覺、睡眠失衡、和腦損傷等【。最先發(fā)現(xiàn)腺苷的病理生理作用是作為內(nèi)源性的抗驚厥劑【,其抗癲癇作用主要是抑制突觸前腺苷調(diào)節(jié)突觸后效應相關的興奮性谷氨酸釋放實現(xiàn)的。對于痛覺的效應,腺苷依據(jù)其應用部位或參與受體的不同發(fā)揮促傷害性疼痛或抗傷害性疼痛的作用。大多研究資料都是集中于腺苷參與的痛覺通路,在神經(jīng)痛和炎癥疼痛的動物模型上證實了。介導了腺苷的抗傷害性疼痛作用矧。同時選擇性腺苷拮抗劑在急性熱痛測試中產(chǎn)生抗傷害性疼痛作用,成為治療慢性疼痛的新策略叨?；谠S多藥理學和行為學試驗的結果,腺苷很早就被認為是內(nèi)源性的睡眠調(diào)節(jié)物質(zhì)。等】在首次報道了腺苷對貓的催眠效應。研究顯示胞外腺苷的濃度隨著代謝和神經(jīng)元活性的增加而增加。在自由活動的大鼠,利用微透析法每檢測胞外的腺苷濃度,結果顯示與覺醒時收集到的樣品相比,完全睡眠周期、慢波睡眠和睡眠等收集到的樣品的腺苷濃度低陋。另外,部分腦區(qū)局部給予腺苷或提高內(nèi)源性腺苷的水平都能改變動物的睡眠覺醒周期。大鼠前腦的內(nèi)側視前區(qū)微量注射腺苷可以誘導睡眠們。貓的腦橋被蓋核促覺醒作用和腦干膽堿能區(qū)/微透析灌注腺苷,可明顯的縮短覺醚】。腺苷轉運體阻斷劑可以阻斷腺苷的雙相轉運,微透析灌注顯著的降低覺醒,提高慢波睡眠和睡眠【。阻斷線粒體電子傳遞鏈和口產(chǎn)生選擇性的提高膽堿能基底前腦和非膽堿能相鄰區(qū)域的腺苷濃度從而提高睡眠。大量研究證實腺苷通過。和受體亞型介導其催眠效應。早期腹腔或側腦室注射激動劑可提高睡眠傾向和睡眠期間的腦電慢波活性,表明在誘導睡眠中發(fā)揮著重要作用【】。貓和大鼠的實驗揭示腺苷在基底前腦膽堿能區(qū)的催眠效應是通過介導,單側灌注選擇性的拮抗劑,可以增加覺醒并減少睡眠。在腦橋網(wǎng)狀組織,注入激動劑降低覺醒,提高睡眠。近期,通過微透析反義寡聚核苷酸阻斷的表達,顯著降低迎睡眠和提高覺醒【。因此,膽堿能基底前腦的/區(qū)腺苷通過介導了睡眠覺醒效應。另外,大鼠基底前腦下蛛網(wǎng)膜下腔灌注激動劑如,可以誘導廈睡眠,而激動劑如則無效,此外拮抗劑可阻斷激動劑誘導的睡眠。報告顯示激動劑的催眠效應是通過誘導腹外側視前區(qū),抑制上行組胺能喚醒系統(tǒng)結節(jié)乳頭體核叫,從而產(chǎn)生促睡眠作用【。此外,與腺苷促睡眠作用相反的是,咖啡因促進覺醒?？Х纫蚺c和冰具有相似的高親和力,作為這兩種受體的拮抗劑發(fā)揮作用。近期,等證實咖啡因可以促進野生型和敲除型小鼠的覺醒,而對于敲除型小鼠無作用,表明咖啡因的喚醒作用是通過阻斷來產(chǎn)生的?；谕挥|可塑性是不同腦區(qū)學習記憶的基礎,腺苷調(diào)節(jié)不同學習記憶范例中的行為。腺苷通過調(diào)解突觸可塑性從而影響學習記憶羽,內(nèi)源性腺苷通過激活調(diào)節(jié)長時程突觸可塑性包括胍,、和去極化。腺苷拮抗劑可用于治療記憶障礙,而咖啡因的認知損傷效應與其對海馬和皮層腺苷的拮抗有關,這些腦區(qū)是學習記憶的主要腦區(qū)。腺苷在神經(jīng)損傷模型中具有雙向調(diào)節(jié)作用,即能進行神經(jīng)保護也會造成神經(jīng)損傷【,腺苷、和參與其中。缺血模型中急性給予腺苷激動劑可發(fā)揮神經(jīng)保護作用,而拮抗劑則加重神經(jīng)元損傷。腺苷在缺血損傷和多種毒性損傷模型中表現(xiàn)出神經(jīng)保護作用,如包括谷氨酸興奮性毒性、羥多巴胺、一硝基丙酸毒性、毒性等。腺苷的神經(jīng)保護和神經(jīng)變性的雙重作用與受體的激活時間急性或者慢性和受體的激活水平激動劑濃度相關,而多數(shù)研究傾向于支持其神經(jīng)保護作用。腺苷受體參與介導了帕金森氏病,主要為腺苷。病人的多巴胺缺乏導致紋狀體輸出通路失衡,一方面紋狀體黑質(zhì)神經(jīng)元活動降低,另一方面紋狀體蒼白球神經(jīng)元缺少多巴胺的抑制效應,在腺苷的興奮效應影響下活性升高,從而導致患者運動功能減退。腺苷拈抗劑可阻斷紋狀體蒼白球神經(jīng)元的興奮,恢復紋狀體黑質(zhì)和紋狀體蒼白球神經(jīng)元的平衡,從而治療帕金森氏病。腺苷參與心血管系統(tǒng)病理生理調(diào)節(jié)腺苷四種受體亞型在心血管廣泛分布,在心血管疾病的發(fā)生過程以及其治療策略中發(fā)揮重要作用【。激活有減慢心率和降低心肌收縮性的作用,通過減少心肌壞死和梗死,減少舒張期功能失常,提高心肌對能量缺乏的耐受而發(fā)揮保護心肌作用。研究發(fā)現(xiàn)缺血預適應和腺苷預治療可有效抑制大鼠肺缺血再灌損傷的血管和生化改變,而。的激活介導了此作用。而且,選擇性的腺苷。激動劑在抑制肺移植和其他肺血管缺血的缺血再灌損傷中作為藥理學領處理劑有效。腺苷出敲除小鼠顯示在減輕多種刺激造成的血管損傷【中發(fā)揮重要作用,例如內(nèi)毒素激發(fā)、導絲誘導股動脈內(nèi)皮剝落一種模擬人血管再狹窄的模型。同時敲除小鼠暴露在缺氧環(huán)境中主要器官血管滲透性升高,缺血預適應對心臟和腎臟的保護作用消失。另外,腺苷的激活在缺血再灌期間和其后的心臟保護中也發(fā)揮關鍵作用。腺苷的心臟保護作用效應以前都是歸因于激活腺苷,現(xiàn)在可能部分由于激活腺苷。腺苷參與炎癥疾病的病理調(diào)節(jié)已證實腺苷讎、蛔、承在控制炎癥反應中發(fā)揮了重要作用,。在免疫反應細胞如單核細胞、淋巴細胞、肥大細胞等廣泛表達,并發(fā)揮生理性免疫抑制作用,保護正常組織免受由于免疫細胞過度活化和前炎癥因子造成的附帶損傷,并已經(jīng)在多個炎癥動物模型上證實選擇性的腺苷激動劑抑制炎癥反應在內(nèi)毒素誘導腦膜炎模型中降低腦脊液淋巴細胞增多、較少血腦屏障通透性在內(nèi)毒素誘導的兔關節(jié)炎中減少粒細胞滲出在毒素誘導的腸炎小鼠模型中減少阻止損傷和炎癥。此外,在非感染動物模型中,激活也能減少再灌損傷,部分降低炎癥反應。在嚙齒類動物和人的哮喘或慢性肺阻塞的促炎癥效應中發(fā)揮效應,提示拮抗劑可能有抗哮喘和的治療價值。選擇性拮抗可以抑制鼠哮喘模型的氣道炎癥和氣道反應,從而為其臨床應用提供體內(nèi)證據(jù)。在炎癥反應中作用難以理解,既有促炎癥反應又有抗炎效應】。高表達腺苷的細胞如嗜酸性細胞、嗜中性粒細胞和巨噬細胞等都參與變態(tài)反應,而激活可造成肥大細胞脫粒和釋放變態(tài)介質(zhì),從而加重炎癥反應。激活后抑制人單核細胞和鼠巨噬細胞的內(nèi)毒素受體信號轉導通路誘導的旺【釋放,從而抑制炎癥反應。腺苷參與腎臟的病理生理調(diào)節(jié)腎小球濾過率和腎小管轉運的改變影響鈉轉運,腎內(nèi)腺苷通過影響這兩個過程從而改變能量供需的平衡。微循環(huán)中,腺苷受體調(diào)控腎仃撕伽,、腎素釋放和球管反饋。血流、腎小球濾過率翊在上皮細胞,腺苷通過改變轉運體活性直接影響液體和離子的轉運。腎內(nèi)表達四種腺苷受體,由于缺少可靠的抗體或放射性標記的探針,腺苷受體亞型在腎臟的分布還未完全闡明,有時會有互相矛盾的結果,同時對于腺苷受體亞型在細胞表面是否存在極化分布也不清楚。腺苷作為腎內(nèi)代謝產(chǎn)物在腎缺血期間積累,可能在一定程度上保護腎小管系統(tǒng)免二缺血再灌損傷。激活腺苷受體的不同亞型,可以增加腎缺血再灌時腺苷濃度,器雄性、,大鼠,一,均購自北京維通利華試驗動物技術有限公司許可證編號京。實驗前動物適應環(huán)境至少天。室溫保持在,自由進食和進水。藥品與試劑是一種腺苷類似物,由中國醫(yī)學科學院藥物研究所吳松教授實驗室合成提供。批號/,批號,購自。以上各試劑用少量吐溫潤濕后溶于蒸餾水中配成相應濃度。用蒸餾水吐溫低于做溶劑對照。尼克沙米注射劑批號,北京市永康藥業(yè)有限公司,地西泮片劑批號,北京益民藥業(yè)有限公司,戊四唑、咐仃,批號購自,水合氯醛批號過氧化氫國藥集團化學試劑有限公司儀器和設各自發(fā)活動實驗儀器、撕軟件上海移數(shù)信息科技有限公司,腦立體定位儀,深圳市瑞沃德生命科技有限公司,多導生理記錄儀、鼬塒電采集分析軟件,印睡眠分析軟件。植入式清醒動物生理信號遙測系統(tǒng)美國公司,系統(tǒng)由植入體個植入體個測試植入體,接收器,數(shù)據(jù)轉換器和記錄分析計算機構成。實驗方法和實驗設計自主活動實驗雄性小鼠隨機分為組,每組只,分別為溶劑對照組和三個劑量組,和后將小鼠放入單個不瓜。腹腔注射給予藥物透明的方形自主活動箱內(nèi),攝像機記錄內(nèi)小鼠的活動銘。一路程,并用軟件進行自動分析。小鼠翻正反射實驗雄性小鼠隨機分為組,每組只,分別為溶劑對照組,地西泮組咄,和三個劑量組,和舭,腹腔注射相應藥物后,以小鼠翻正反射消失以上為指標,觀察致小鼠翻正反射消失作用并記錄潛伏期。雄性小鼠隨機分為組,分別為溶劑對照組和三個劑量組、和嵋,側腦室注射相應藥物后,小鼠翻至背部平躺,以小鼠翻正反射消失血以上為指標,觀察的致小鼠翻正反射消失作用并記錄潛伏期。腺苷拮抗劑的自主活動拮抗實驗雄性小鼠隨機分為組,每組只,分別為組、組、組、和/以及組、和/。每組只。小鼠腹腔注射溶劑或相應拮抗劑,曲腹腔注射后將小鼠放入自主活動箱內(nèi),記錄小鼠/,的自主活動。腺苷拮抗劑的自主活動拮抗實驗雄性小鼠隨機分為組,每組只,分別為組、組眺、組和/以及組/和后腹腔注射/。小鼠腹腔注射溶劑或相應拮抗劑,后將小鼠放入自主活動箱內(nèi),記錄小鼠的自主活動。/,戊四唑致驚厥模型雄性小鼠隨機分為組,分別為溶劑對照組和三個劑量組、和腹腔注射戊四唑/,腹腔注射。給予受試物后/誘發(fā)驚厥,記錄痙攣發(fā)生潛伏期、驚厥發(fā)生次數(shù)和死亡率。大鼠和的采集和分析雄性大鼠在睡眠記錄前一周按標準程序進行手術。水合氯醛爪,麻醉后,將大鼠在立體定位儀上固定,剪開顱頂皮膚,擦凈骨膜,顱鉆打孔安置兩個腦電電極,以前囟為原點,參照大鼠腦圖譜,坐標分別為頸水內(nèi)/數(shù)據(jù)用多導生理記錄儀采集采樣率/瓶,放大增益增益,濾波并將模擬信號轉換后儲存,以為單位進行人工分析。睡眠結構分析所使用的、參數(shù)是波,、波,、【波,。根據(jù)不同行為狀態(tài)下特征伽波形不同,將睡以及波,眠結構分為覺醒、迮睡眠和睡眠。分類范疇如下覺醒低幅和高幅的表現(xiàn)為低幅快波,肌肉放電增加遼睡眠高幅同步化和低幅或無強直的以高幅波為主,肌肉放電降低汪睡眠低幅去同步化,無強直的呈鋸齒形,以波為主,超過,肌肉放電降至最低。大鼠隨機分為組,分別為溶劑對照組和啞啦和/,每組只,適應環(huán)境天后,記錄基礎班作為,記錄時間為至次日。大鼠腹腔注射溶劑或和/,記錄給藥后征,分析睡眠成分和功率頻譜。大鼠腹腔注射/,記錄給藥前后/,分析功率頻譜。植入式清醒動物生理信號遙測實驗雄性大鼠水合氯醛毗,麻醉,慢性植入無線電遙測植入子。每個植入子包含一個溫度感受器,一個壓力感受器固定連接著充滿非壓縮性液體的導管。手術前,植入子在室溫無菌生理鹽水中浸泡。打開腹腔后,按描述的技術方法將導管慢性植入腹主動脈。剝離腹主動脈,上下穿線,生物膠并用動脈夾夾閉血管,腹主動脈做契形切口,插入壓力感受器導管約水粘合導管與血管開口使之閉合,打開動脈夾撤去穿線,然后關閉腹腔。大鼠單籠飼養(yǎng),恢復一周后,將大鼠籠置于接收板上,記錄測定心血管信號。大鼠隨機分為四組,每組只,分別為溶劑對照組和組、和哦啦,大鼠藥物代謝至少兩天后才可重復利用。記錄大鼠的生理信號并穩(wěn)型竺坐型墮鱟星婆簍簍型型業(yè)堅定,腹腔注射、和或溶劑,記錄給藥后生理信號。小鼠呼吸頻率的測定雄性小鼠隨機分為組,每組只,分別為溶劑對照組和組、和咄。烏拉坦不影響小鼠的呼吸,小鼠腹腔注射烏拉坦麻醉后固定在操作臺上,通過壓力換能器連接至多導記錄儀,描繪其呼吸曲線。記錄基礎呼吸曲線后,小鼠腹腔注射、和/【或溶劑,記錄其后的呼吸曲線,計算小鼠呼吸頻率。尼可剎米的呼吸拮抗實驗雄性小鼠分為組,每組只,分別為溶劑對照組,組/,尼可剎米解救組和尼可剎米拮抗組。小鼠腹腔注射烏拉坦/麻醉,固定于后,腹腔注射給予溶劑或操作臺上,記錄呼吸曲線/,記錄其后“的呼吸曲線。其中尼可剎米解救組在給予后腹腔注射尼可剎米腹腔注射尼/,尼可剎米拮抗組在給予前可剎米/。計算小鼠的呼吸頻率。腺苷拮抗劑的呼吸拮抗實驗小鼠分為組,每組只,分別為溶劑對照組,組/,組、和/。小鼠腹腔注射烏拉坦后,腹腔注射溶劑或/麻醉,固定于操作臺上,記錄呼吸曲線、和后腹腔注射/,班或溶劑,記錄其后的呼吸曲線,計算小鼠的呼吸頻率。測定對小鼠的比雄性小鼠隨機分為組,每組只,組間距為,分別為,/六個劑量,腹腔注射,給藥后對小鼠進行一般觀察,并觀察天內(nèi)小鼠的死亡數(shù)并計算死亡率。采用法計算半數(shù)致死量凹如。死亡動物進行尸體解剖,觀察主要臟器的病變。短期重復劑量毒性實驗雄性小鼠分為兩組,分別為哦啦鮒,和組,婦每組只,每天觀察小鼠狀態(tài),記錄小鼠體重,并在給藥結束后處死。號連續(xù)給藥天,號連續(xù)給藥天后,處死,取主要臟器心、肝、脾、肺、腎、大腦、小腦,計算臟器系數(shù),并對號動物的器官進行組織病理學評價。蘇木素伊紅染色小鼠各器官在含甲醛固定,固定好的組織進行脫水、透明、浸蠟、包埋并用切片機連續(xù)切成岬厚的切片。所有蠟片放到水上,待其完全展開后,裱在有粘附劑的多聚賴氨酸包被的載玻片,置熱板上烘。然后用二甲苯脫蠟,梯度酒精從高至低最后水化,蘇木素染色,伊紅染色,梯度酒精脫水低至高,二甲苯透明,中性樹膠封片,分別在倍和倍顯微鏡下觀察。選取代表性切片拍照。數(shù)據(jù)處理軟件進行統(tǒng)計學分析。多組數(shù)據(jù)以均數(shù)士標準誤表示,應用孫間數(shù)據(jù)的比較采用單因素方差分析對數(shù)據(jù)進行結合或、鋤進行個組間差異比較。戊四唑致驚厥實驗中死亡率的比較采用精確檢驗。短期重復劑量毒性實驗中的體重進行、忍、,臟器系數(shù)比較采用檢驗。生竺些型墮遮星顯型薹簋型業(yè)些堅墮竺實驗結果一、對中樞神經(jīng)系統(tǒng)的影響對動物大體行為的影響腹腔注射和/,后,小鼠的整體表現(xiàn)和行為明顯改變。小鼠在注射后到分鐘活動逐漸減少直至停止活動,眼睜開,置于背臥位時,較高劑量時引起部分小鼠的翻正反射消失。小鼠呼吸頻率嚴重下降,出現(xiàn)緩慢而吃力的腹式呼吸。手測小鼠體溫沒有明顯的改變,沒有其他的異常行為,小鼠在內(nèi)蘇醒,未出現(xiàn)死亡。大鼠腹腔注射溶劑或、和/,采用無線遙測技術測定大鼠給藥前和給藥后的體溫。溶劑對照組大鼠的平均體溫。、和/【,對大鼠體溫無明顯影響見。曲每務弓。聳加骶鵬撕,鋤、,/,叮鵲鋤士車,木木峪粵,銘對小鼠翻正反射行為的影響腹腔注射對小鼠翻正反射行為的影響小鼠腹腔注射相應劑量的、地西泮或溶劑,記錄翻正反射消失的小,地西泮鼠數(shù)目和潛伏期。實驗結果顯示見鼬/【,可致小鼠翻正反射消失,、和,引起、和的小鼠翻正反射消失。并且潛伏期隨著劑量的增加而明顯縮短,其中刪/,與地西泮/,比較,翻正反射消失潛伏期無明顯差異。們二撕,鋤咄,印鋤笛器曲印印甜雒鋤士,小鼠自主活動顯著減少/,給藥后小鼠自主活動抑制率為私埏,給藥后小鼠的自主活動即顯著減少,到抑制率達到最大,為。言詈茜弓富葛皇量豇啪晡仃他越“伽仰鋤哂謝,鋤/【,鋤鋤穢鋤蕊、瑚黟鼴嬲鋤士奉,掌坩鋤咖仕,與抑制小鼠自主活動的效應為選擇性腺苷受體激動劑,小鼠腹腔注射不同劑量的、和后/,或、和眺,所示,能劑量依賴性的抑制小鼠的自主測定小鼠的自主活動。結果如活動,其防為士啞啦,的防為士/,二者效果相當見曲。旬旬旬一一葺,螟一一一囂置,吣,、,蚵謝,柚眺曲,勰雒甑,鋤舭曲,鋤枷懿沖弱鋤士鋤巧鋤、,鈕酷粕、,腺苷受體拮抗劑對抑制小鼠自主活動作用的影響小鼠腹腔注射相應劑量的溶劑或者拮抗劑,后腹腔注射溶劑或,測定小鼠的自主活動。結果見/,末次給藥后。溶劑對照組小鼠自主活動總路程為士/,/,單獨降低小鼠自主活動。腺苷拮抗劑、和注射不影響小鼠的自主活動。合并腺苷拮抗劑和,能劑量依賴性的拮抗對小鼠自主活動的抑制作用自主活動增加、和倍。在/劑量下完全消除對小鼠自主活動的抑制。害焉蔓口套是蓋三/岫引婦“豁他即囂粕柚毹曲嘶,鋤/,細曲、舔嬲/,鋤勰內(nèi)甜珈哆沖髂弱鋤士木幸,垤拌卯,辮撐垤,硼坶鋤眥姍儲腺苷受體拮抗劑對抑制小鼠自主活動作用的影響小鼠腹腔注射相應劑量的溶劑或者拮抗劑,血后腹腔注射溶劑或/【,末次給藥后測定小鼠的自主活動。結果見,瓜,降低小鼠自主活動。腺苷拮抗劑和瓜,單獨注射不改變小鼠的自主活動。合并腺苷拮抗劑和,不顯著改變對小鼠自主活動的抑制作用自主活動增加和倍。主奎要量差一心,眄,“加代蹄慨“舳觚肚,嬲剃/,“、,鋤巧勰笛鋤士奉叩佩幽鋤,對戊四唑致驚厥小鼠的保護作用戊四唑朗朗仃,為中樞神經(jīng)系統(tǒng)興奮劑,是受體的拮抗劑,能夠促使興奮性突觸的易化過程增強,從而引起驚厥,是常用的致驚劑。內(nèi)動物驚小鼠腹腔注射,后腹腔注射盯/,觀察厥潛伏期、發(fā)生次數(shù)與死亡率。結果如眺所示,在咄劑量下夠使多數(shù)動物誘發(fā)驚厥并死亡死亡率,平均潛伏期,每只小鼠平均發(fā)作次。、和砭啦,可劑量依賴性的延長驚厥潛伏期平均潛伏期分別為、和,降低發(fā)作次數(shù)分別為、和次與死亡率分別為、和,對盯誘導的癲癇小鼠有一定的保護作用。仃伽伽伽、/甜啪嬲鋤士牛佩,呵鋤、,夠豁對大鼠皮層腦電的影響對大鼠睡眠結構的影響大鼠注射/和/,或溶劑,記錄給藥后腦電所示,溶劑對照組大鼠每小時迮睡眠和肌電,分析睡眠結構。結果如笛約占/,睡眠時間很短。/【和/,可以顯著,給藥后內(nèi)累計迮睡眠時間從的延長匝睡眠見嘴和分別延長至,延長率分別為和,并分別在給藥后第和第恢復到正常水平。顯示在毗劑量下,第、和的睡眠為對照組的、倍。另外,內(nèi)累計在和,給藥后/【劑量下縮短汪睡眠睡眠時問從分別縮短至和,縮短率分別為和。量聃篡瞄拳一日奢一毫端髓一。一翻一一艄一一一一味糟附日口一鼴一一一一一日曙,口日,一皇一葺口一鼉、筒,葺口一暑一厶。一窆凹盈葺伽粕也髓伽他、歷/鋤/,聊鋤鋤鋤姬汪塒眥印印、枷簽。鷦士,幸宰鋤吼酣叩,對大鼠皮層低頻放電的影響文獻報道功率的功率,又稱慢波活性,在覺醒階段持續(xù)增加,在睡眠時逐漸降低,被認為可以反映覺醒期間的睡眠需求的積累,并在睡眠時逐漸釋放,可以表征睡眠壓力或傾向。記錄大鼠的基礎/作為,注射,和/,或溶劑,記錄給藥后的/,通過快速傅里葉轉換分析計算冱睡眠的功率?？梢蕴岣咤潘叩墓β?。給予/和/后迎睡眠的,在功率在無明顯改變,功率的時程變化見/劑量下,從第開始增加,到第約恢復至正常水平,其中第和第與溶劑組相比差異顯著。增大劑量至璣后,對大鼠的影響更明顯,給藥后小時睡眠的功率都顯著增加。,匹婦一。葺餮酋零一矗暑弓口。闊筒淞他擻比誦瑋嬲甜乙、瑚盯幣豁出,戚鋤士,木宰鋤咖甜對大鼠皮層高頻放電的影響大鼠皮層進行功率頻譜分析可分為波,、波,、僅波,、以及波,。其中波和波是皮層高頻波段,在大鼠清醒或活躍狀態(tài)下,活性強。大鼠注射/和后/,或溶劑,記錄給藥后的腦電和肌電,法分析計算給藥功率頻譜。顯示了腹腔注射咄和/,