海南地區(qū)ZETA鏈蛋白檢測在東南亞型地中海貧血篩查中的應(yīng)用價值中國優(yōu)生與遺傳雜志2008年第16卷第2期15海南地區(qū)ZETA鏈蛋白檢測在東南亞型O一地中海貧血篩查中的應(yīng)用價值覃西,吳潔,柯麗琴,黃燕妮海南醫(yī)學(xué)院檢驗系,?？谑?70102摘要目的以0/,一地中海貧血基因檢測結(jié)果為標準,探討ZETA鏈蛋白檢測在0/,一地中海貧血東南亞缺失型L臨床篩查中的應(yīng)用價值方法隨機收集634例EDTAK2抗凝全血標本,采用酶聯(lián)免疫法檢測人外周血細胞中ZETA鏈蛋白,同時提取全血DNA,采用多重PCR結(jié)合電泳法檢測標本0【一地中海貧血基因結(jié)果634例全血標本經(jīng)酶聯(lián)免疫法檢測ZETA鏈蛋白陽性L13例陰性521例ZETA鏈蛋白陽性標本中經(jīng)基因檢測全部確診為0【一地中海貧血東南亞缺失型,陰性中無0【一地中海貧血東南亞缺失型ZETA鏈蛋白檢測0【一地中海貧血東南亞缺失型靈敏度為100,特異度為100,假陽性率0假陰性率O,陽性試驗的預(yù)示值100,陰性試驗的預(yù)示值100結(jié)論酶聯(lián)免疫法檢測ZETA鏈蛋白是一種簡便,快速檢測0【一地中海貧血東南亞缺失型的方法,可用于臨床大規(guī)模篩查關(guān)鍵詞0【一地中海貧血東南亞缺失型ZETA鏈蛋白酶聯(lián)免疫法,中圖分類號1155671文獻標識碼A文章編號10069534200802001503CLINICALVALUEOFZETAGLOBINCHAINSANALYSISIN一一OCTHALASSEMIADIAGNOSISQINXIN,WU,”一G,HUANGYANNIDEPARTMENTOFCLINICLABORATORYOFHAINANMEDICALCOLLEGE,HAIKOU570102,HAINANABSTRACTOBJECTIVETOEVALUATECLINICALVALUEOFZETAGLOBINCHAINSIN一一0【一THALASSEMIAANDTAKINGGENEDIAGNOSISASTHESTANDARDMETHODSCOLLECTING634CASESOFBLOODSAMPLESANTICOAGULATEDWITIEDTAL2EACHSAMPLEWASSCREENEDFORZETAGLOBINCHAINSBYENZYMELINKEDIMMUNOSORBENTASSAYATTHESAMETIMEGENOMEDNAWASEXTRACTEDANDPCRFOLLOWEDBYELECTROPHORESISWASUSEDTOTEST0【GLOBINGENERESULTSENZYMELINKEDIMMUNOSORBENTASSAYSHOWEDTHATAMONG634SAMPLES,113WERECONFIRMEDTOBEZETAGLOBINCHAINSPOSITIVEOTHERSTOBENEGATIVEANDGENEDIAGNOSISPROVEDTHATALLTHESEZETAGLOBINCHAINSPOSITIVES鋤一PLESWERE一一0【一THALASSEMIAANDZETAGLOBINCHAINSNEGATIVESAMPLESWERENOT一一鄔0【一THALASSEMIATHESENSITIVITY,SPECIFICITY,FALSEPOSITIVERATE,FALSENEGATIVERATE,POSITIVEPREDICTIVEVALUESANDNEGATIVEPREDICTIVEVALUESWERE100,100,0,0,100AND100RESPECTIVELYCONCLUSIONENZYMELINKEDIMMUNOSORBENTASSAYFORZETAGLOBINCHAINSCANTEST一一0【一THALASSEMIASIMPLYANDRAPIDLYANDISVALUABLEINPOPULATIONSCREENINGPROGRAMSKEYWORDS0【一THALASSEMIA一一0【一THALASZEMIAZETAGLOBINCHAINSENZYMELINKEDIMMUNOSORBENTASSAYA一地中海貧血簡稱Q一地貧是世界上最常見的人類單基因遺傳性血液病之一,東南亞包括我國南方是該病的高發(fā)區(qū)其發(fā)病是由于A一珠蛋白基因突變導(dǎo)致A一珠蛋白肽鏈合成障礙,從而造成血紅蛋白合成減少廣東和廣西兩省區(qū)的人群0【一地中海貧血基因攜帶率高達8531119_LJ,海南地區(qū)發(fā)生率為45135,而黎族人群基因攜帶率可高達55L2J目前全世界已發(fā)現(xiàn)至少有81種Q一珠蛋白基因突變,其中東南亞缺失型為我國三種最常見突變類型之一_3J已闡明95以上的0【一地貧缺失類型是東南亞缺失型一一J,且該缺失型在人群中的基因攜帶率約為4目前對于地貧尚無根本有效的治療方法,只有通過遺傳篩查和產(chǎn)前診斷才能有效杜絕重癥地貧患兒的出生基因檢測是診斷6【一地貧最可靠的方法,已得到臨床的普遍認可J但費用較昂貴,且操作繁瑣,技術(shù)要求較高,需要依靠專業(yè)實驗室才能完成檢測,不利于大規(guī)模人群篩查因此準確,快速,簡便的檢測出A一地貧東南亞缺失型具有重要意義國外已有報道利用酶聯(lián)免疫法ENZYMELINKEDIMMFINOSORBENTASSAY,ELISA檢測ZETA鏈蛋白篩查0【一地貧東南亞缺失型SOUTHEASTASIANDELETION,一一的方法J,但國內(nèi)未見臨床應(yīng)用報道本研究即以基因檢測作為A一地貧診斷標準,探討ELISA法篩查0【一地貧東南亞缺失型的臨床應(yīng)用價值資料與方法1標本來源634例EDTA抗凝全血標本,356例來自2006年12月2007年3月期間來海南醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院就診的門診和住院病人,278例為2007年6月采集黎苗族婦女標本,一70保存?zhèn)溆?檢測試劑和儀器東南亞型0【一地貧ZETA鏈蛋白檢測試劑盒由南方醫(yī)科大學(xué)提供,全血DNA快速提取試劑盒和A一地貧基因檢測試劑盒購自深圳亞能生物技術(shù)有限公司,由珠海海泰生物制藥有限公司提供酶標儀為美國熱電雷勃MK3酶標儀,聚合酶鏈反應(yīng)POLYMERASECHAINREACTION,PCR擴增儀為珠海黑馬HEMA4800型電泳儀為北京六一儀器廠的BYCP一31D水平電泳儀3方法1ZETA鏈蛋白檢測雙抗體夾心酶聯(lián)免疫法定性檢測血液中ZETA鏈蛋白,操作嚴格按照試劑盒使用說明書進行,同時按照要求設(shè)立陰,陽性及臨界對照依據(jù)試劑盒提供的標準判斷結(jié)果,即在陰性對照孔吸光度OD015,臨界對16中國優(yōu)生與遺傳雜志2008年第16卷第2期照孔OD020,陽性對照孔OD050的前提下,若測定孔OD臨界對照OD值平均值,則判為東南亞型缺失一一陽性如測定孔OD臨界對照OD值的平均值085,則判為東南亞型缺失一一陰性O(shè)D值介于兩者之間,判為東南亞型缺失一一臨界陽性,如遇到此種情況,則需復(fù)查2一地貧基因檢測全血DNA提取按照全血DNA快速提取試劑盒操作說明提取全血基因組DNA,后采用12瓊脂糖凝膠電泳鑒定提取DNA的質(zhì)量穩(wěn)壓68V/CMPCR擴增采用單管四重PCRGAPPCR技術(shù)一地貧PCR反應(yīng)體積25L,擴增條件96C變性15MIN一9845S科OC1M30S一72OC3M35個循環(huán)一72延伸5MIN每次均設(shè)陰性,陽性對照擴增產(chǎn)物分析取一地貧擴增產(chǎn)物20TD與2電泳加樣緩沖液20混勻,12瓊脂糖凝膠電泳穩(wěn)壓68V/CM分析PCR產(chǎn)物DNA,紫外燈下觀察結(jié)果4數(shù)據(jù)統(tǒng)計以基因檢測為標準,計算ZETA鏈蛋白檢測篩查一地貧東南亞缺失型的靈敏度,特異性,準確性,陰性預(yù)測值NPV和陽性預(yù)測值PPV結(jié)果634例全血標本經(jīng)酶聯(lián)免疫法檢測ZETA鏈蛋白陽性113例,陰性521例ZETA鏈蛋白陽性標本中經(jīng)基因檢測全部確診為一地中海貧血東南亞缺失型,陰性中無一地中海貧血東南亞缺失型,見表1經(jīng)計算,ELISA法檢測ZETA鏈蛋白篩查東南亞型缺失一一靈敏度為10O,特異度為100,假陽性率0,假陰性率0,陽性試驗的預(yù)示值100,陰性試驗的預(yù)示值100表1評價試驗真實性歸納表討論一一大部分只是無癥狀基因攜帶者,但相互婚配子代可能出現(xiàn)東南亞型缺失純合狀態(tài)一一/一一,可引起致死的HBBARTS水腫綜合征,患有該病的幾乎所有胎兒均夭折于妊娠晚期或生下即死亡,并大大增加了母體罹患嚴重的先兆子癇,難產(chǎn),產(chǎn)前后出血和羊水過多等致死性并發(fā)癥的風險此外,東南亞型缺失還可合并其他一地貧基因突變,引起中,重度貧血及嚴重影響生命質(zhì)量的HBH病因此,一一檢測對于預(yù)防一地中海貧血,提高人口素質(zhì)至關(guān)重要ZETA鏈蛋白即珠蛋白鏈是由珠蛋白基因簇上的基因合成,是胚胎期血紅蛋白的特有成分,存在于所有的胚胎與臍血中胚胎1730周時ZETA鏈約占血紅蛋白的027015胚胎3137周為014011正常新生兒8O鐫的臍血可檢出,出生后3個月基因關(guān)閉,ZETA珠蛋白鏈將不再合成,而由開放的基因合成珠蛋白鏈,因而出生后半歲以上兒童及成人體內(nèi)不能檢出ZETA鏈東南亞型缺失一一基因攜帶者,水腫胎及HBH患者雖然全部或部分缺失了位于編碼血紅蛋白的珠蛋白基因簇上的兩個基因,卻保留了珠蛋白基因,故他們體內(nèi)仍有非常少量的ZETA珠蛋白鏈持續(xù)表達于嬰兒期及成人期,因此均可檢出ZETA鏈,即ZETA鏈是東南亞型缺失一一一地貧的標志性蛋白利用這一特殊的蛋白制備單克隆抗體可用于對東南亞型缺失一一一地貧基因攜帶者進行篩選和診斷早在1989年CHUI等就利用了放射性同位素標記的單克隆抗體檢測表達ZETA鏈的紅細胞,并進一步建立應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附法測定ZETA鏈蛋白的方法,完善后的雙抗體夾心法與地中海貧血診斷金標準分子生物學(xué)檢測的比較,其敏感度和特異性分別為893964和982100目前國內(nèi)已成功地研制出ZETA鏈蛋白單克隆抗體,但無臨床應(yīng)用報道2006年吳洪秋等人比較了ELISA法和血液學(xué)分析法檢測一一攜帶者靈敏度,特異性,并比較了兩者診斷一一攜帶者的臨床應(yīng)用價值,結(jié)果表明ELISA法診斷價值優(yōu)于血液學(xué)分析法國內(nèi)外已有研究表明ELISA法檢測ZETA鏈蛋白是一種很有價值的篩查一一的技術(shù)手段該法不但能完全篩出一一/病例,而且還能檢測出一一合并8一地貧特征的病例同時,該法檢測的通量大,易于自動化操作簡便,快速而又經(jīng)濟,且對技術(shù)和實驗室設(shè)備的要求不高,故特別適合于那些實驗室條件比較差的基層醫(yī)療衛(wèi)生單位如該法常規(guī)地應(yīng)用于小細胞低色素癥個體將大大改善臨床常規(guī)實驗室檢測一一攜帶者的能力,并對以控制重型一地貧出生為目標的婚前或產(chǎn)前一一攜帶者大樣本人群遺傳篩查的計劃有著重要的實用價值本課題采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法ELISA檢測ZETA鏈蛋白,一地中海貧血基因檢測作為標準,對ELISA法作為臨床常規(guī)篩查東南亞型缺失一一的方法進行評價結(jié)果顯示,ELISA法檢測ZETA鏈蛋白篩查東南亞型缺失一一靈敏度為100,特異度為100,假陽性率0,假陰性率0,陽性試驗的預(yù)示值100,陰性試驗的預(yù)示值100顯示高的靈敏度,特異度和準確度,且與已有研究結(jié)果相近,這表明ELISA法能有效地檢測出東南亞型缺失一一“攜帶者綜上所述,ELISA法是一種很有價值的篩查東南亞型缺失一一A一地貧攜帶者的技術(shù)手段,可用于大規(guī)模人群篩查參考文獻1徐湘民,等單管多重PCR快速檢測中國人三種常見缺失型D一地中海貧血基因J中華醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)雜志,20054,222180一L842姚紅霞海南黎族地中海貧血的研究現(xiàn)狀J中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志,2004,1143273293毛江洪,霍曉春D一地中海貧血的研究現(xiàn)狀J實用臨床醫(yī)學(xué),2005,631346下轉(zhuǎn)第69頁中國優(yōu)生與遺傳雜志2008年第16卷第2期69討論1孕前BMI及增長與妊娠并發(fā)癥的關(guān)系孕期體重指數(shù)BMI由體重和身高計算得出,反映了孕婦的營養(yǎng)狀況和基礎(chǔ)營養(yǎng)條件,是確定孕婦體重增加標準簡單可靠的方法隨著生活水平的提高,我國人民的膳食結(jié)構(gòu)和營養(yǎng)狀況發(fā)生了很大的變化,育齡婦女孕前體重基數(shù)逐漸增加,肥胖婦女也逐漸增加本組研究結(jié)果表明,超重及肥胖婦女妊娠后,妊娠期高血壓疾病,子癇前期,妊娠期糖尿的發(fā)生率高于正常組妊娠期高血壓疾病,子癇前期的發(fā)生是多種因素參與的結(jié)果,肥胖是其中之一文獻報道,肥胖婦女常有內(nèi)分泌代謝紊亂,易造成脂,糖代謝的紊亂血脂代謝紊亂可能與胎盤粥樣硬化導(dǎo)致妊娠期高血壓疾病的發(fā)生肥胖與孕期發(fā)生妊娠期高血壓疾病,妊娠期糖尿病有關(guān)無論肥胖與否,當孕婦孕期BMI增幅過高時,妊娠期高血壓疾病,子癇前期,妊娠期糖尿病的發(fā)生率也將明顯增加,這與孕婦孕期營養(yǎng)過剩,活動減少,使能量攝人大于能量消耗,孕婦及其胎兒內(nèi)分泌代謝平衡失調(diào)有關(guān)孕期應(yīng)采用合理的飲食結(jié)構(gòu),進行適宜的體力活動,使妊娠中晚期BMI增長幅度保持在正常范圍,以控制妊娠期高血壓疾病,妊娠期糖尿病的發(fā)生發(fā)展,對于孕13周時BMI較高的那些可能發(fā)生妊娠期并發(fā)癥的孕婦更重要2孕前BMI及增長與妊娠結(jié)局的關(guān)系母體的營養(yǎng)狀況對胎兒的生長發(fā)育起重要作用,有學(xué)者認為,肥胖孕婦巨大兒的發(fā)生率明顯增加本研究發(fā)現(xiàn)肥胖組孕婦巨大兒發(fā)生率明顯高于正常組,差異有高度統(tǒng)計學(xué)意義P0O1,隨之而來,難產(chǎn)率剖宮產(chǎn),陰道助產(chǎn)肥胖組,超重組的也明顯高于正常組胎兒宮內(nèi)窘迫的發(fā)生率也高于正常組但三組產(chǎn)后出血率相比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義,分析原因可能與提高了對肥胖產(chǎn)婦的產(chǎn)前認識,加強了圍產(chǎn)兒監(jiān)護,對肥胖孕婦的剖宮產(chǎn)術(shù)前準備充分以及術(shù)中術(shù)后及早使用宮縮素等原因有關(guān)妊娠后,由于胎兒的發(fā)育,子宮,乳房的增大,血容量,組織液的增加,孕婦的體重隨妊娠的進展不斷增加目前研究認為J過多的體重增加與異常產(chǎn),巨大胎兒有關(guān)資料顯示,孕期體重增加越多,巨大兒的發(fā)生率越高,難產(chǎn)率也明顯增高,這可能與肥胖影響腹肌受縮力,加之盆底組織過厚,外陰脂肪堆積等因素,造成胎頭下降阻滯,不利于胎頭娩出有關(guān),此時,新生兒窒息的發(fā)生率也明顯增高,但各組產(chǎn)后出血率相比較仍無統(tǒng)計學(xué)意義本研究發(fā)現(xiàn),BMI23的孕婦的巨大兒發(fā)生率明顯高于BMI23者,而分娩巨大兒者孕期體重增加明顯由此可見,肥胖應(yīng)作為高危因素進行監(jiān)護對孕前BMI23的婦女來說,應(yīng)調(diào)整飲食,加強體育鍛煉,增加體力活動,調(diào)整代謝功能正常妊娠期一般孕婦平均增重125KG,肥胖孕婦體內(nèi)儲存脂肪多,可以供給一部分能量消耗,節(jié)約葡萄糖共給胎兒,因此認為肥胖孕婦的孕期增重以79KG為宜J妊娠后應(yīng)加強指導(dǎo),妊娠32周后應(yīng)估計胎兒體重,若胎兒過大,尤其有糖耐量異常者應(yīng)控制血糖因此,應(yīng)重視孕期BMI在孕期保健中的意義,以減少因體重增加過多而引起的孕產(chǎn)期并發(fā)癥和新生兒并發(fā)往的發(fā)生,提高圍產(chǎn)兒質(zhì)量,降低剖宮產(chǎn)率參考文獻1嚴仁英,主編圍產(chǎn)醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)M北京人民衛(wèi)生出版社,19892522LAMMER,RANTAKAUIOP,HARTIKAINENA,ETA1PREPREGNANCYWEIGHTANDITSRELATIONTOPREGNANCYOUTCOMEJJOBSTETGYNECOL,1995L569753吳琦嫦,李素蕓孕前體重指數(shù)及孕期體重增長對妊娠結(jié)局的影響J中華圍產(chǎn)醫(yī)學(xué)雜志,2001,42814金世宗孕婦過度肥胖對圍產(chǎn)期的影響J中國優(yōu)生優(yōu)育雜志,L998,3331421445THORSDOTTIRI,TORFADOTTIRJE,BIRGISDOTTIRBE,ETA1WEIGHTNINWOMENOFNORMALWEIGHTBEFOREPREGNANCYCOMPLICATIONSINPREGNANCYORDELIVERYANDBRITHOUTCOMEJOBSTETGYNECOL,2002,99799806收稿日期20070525上接第16頁4王莉OT一地中海貧血的診治進展J國際兒科學(xué)雜志,20067,3352582605XUXM,ZHOUYQ,LUOGX,ETA1THEPREVMENCEANDSPECLRAMOFANDBETATHALASSEMIAINGUANGDONGPROVINCEIMPLICATIONSFORTHEFUTUREHEALTHBURDENANDPOPULATIONSCREENINGJJCLINPATHOL,2004,575175226湯麗霞,李仲笑,張晶,等血紅蛋白A2在地中海貧血篩查中的應(yīng)用價值J中國循證醫(yī)學(xué)雜志,2005,51475O71AFFERTYJ,CROWTHERM,WAYEJS,ETA1ARELIABLESCREENINGTESTTOIDENTIFYADULTCARRIERSOFTHE一一ALPH