A1A0A2A3A5A6A4A7A8A9A10A11A12A1A0A2A3A1430625042A15A13A6A4A16A17A18A19A20A21A22A23A24A2A1406072P58A15A13A6A4A25A26A11A12A1A0A27A28A2A3A1430701109A15A30A29A31A32A5A34A33A35A37A38A371983A10A36A37A40A39A41A42A43A37A16A18A12A44A45A37A47A46A48A49A16A18A50A51A52A53A22A23A54A55A50A56A57A59TEMAILWYS0102163COMA60A58A30A29A5A62A61A63TEL01066933322EMAILPHARMACY302126COMA65A64A66EMAILDUXXCDEORGCN1微量量熱法研究清開靈注射液對金黃色葡萄球菌代謝的影響A67A68A691,2A70A71A721,2A70A73A741A70A75A761A70A77A78A791A70A80A81A823A70A83A842A851A86A87A88302A89A90A91A88A92A93A94A95A96A97A98A99100039A1002A101A102A92A89A93A103A104A93A104A90A97A101A102611137A1003A105A106A107A108A93A108A109A110A111A112A113A93A108A114A115A92A116A97A98A99100038A117摘要目的研究清開靈注射液對金黃色葡萄球菌生長代謝的影響，探索建立基于生物評價的清開靈注射液質控新方法。方法采用微量量熱法，考察藥物作用于細菌的生物熱效應，對所測得的熱功率輸出曲線進行對比分析和計算機擬合，抽提有效參數，得出系列熱動力學參數信息。結果在一定范圍內（0150L），隨劑量增加，金黃色葡萄球菌生長曲線呈“下降、后延”趨勢，且參數T1、T2、K1、P1、P2、I均與劑量呈較好的線性關系，清開靈注射液對金黃色葡萄球菌的半數抑菌量為97698L，最佳抑菌量為164L；不同廠家及同廠家不同批次清開靈注射液樣品的生長曲線G4396在不同G12255G5242G5058G5334。結論清開靈注射液對金黃色葡萄球菌有較G5390的抑G2058作用，微量量熱法G2499作為清開靈注射液的質量評價的一G12193新方法。關鍵詞微量量熱法；清開靈注射液；金黃色葡萄球菌；熱功率輸出曲線MICROCALORIMETRICSTUDYONTHEMETABOLICACTIONOFSTAPHYLOCOCCUSAUREUSAFFECTEDBYQINGKAILINGINJECTIONWUYANSHU1,2A118ZHANGQIAN1,2A118JINCHENG1A118YANDAN1A118XIAOXIAOHE1A118DUXIAOXI3A118WANGJIAN21PLAINSTITUTEOFCHINESEMATERIAMEDICA,302HOSPITALOFPLA,BEIJING100039,CHINA2PHARMACYCOLLEGE,CHENGDUUNIVERSITYOFTCM,CHENGDU610075,CHINA3CENTREFORDRUGEVALUATION,SFDA,BEIJING100038,CHINAABSTRACTOBJECTIVETOINVESTIGATETHEMETABOLICACTIONOFSTAPHYLOCOCCUSAUREUSAFFECTEDBYQINGKAILINGINJECTION,ANDSEARCHFORNEWMETHODBASEDON2BIOLOGICALASSESSMENTMETHODSTHEGROWTHTHERMOGENICCURVESWEREDETERMINEDBYMICROCALORIMETRYANDANALYZEDBYCOMPUTERRESULTSINTHECONCENTRATIONRANGEOF0150L,THEGROWTHTHERMOGENICCURVESOFSTAPHYLOCOCCUSAUREUSWEREDECLINEDANDREMOVEDBACKWITHINCREASINGDOSAGEOFQINGKAILINGINJECTIONTHEMAINPARAMETERSK1、P1、P2、T1、T2、IANDTHEDOSAGEOFQINGKAILINGINJECTIONHAVEGOODCORRELATIONTHE50INHIBITINGQUANTITYIS97698L,ANDTHEOPTIMALINHIBITINGQUANTITYIS164LTHEREWERESOMETHINGDIFFERENCESOFQINGKAILINGINJECTIONFROMDIFFERENTFACTORIESANDDIFFERENTBATCHESCONCLUSIONITWASPROVEDTHATQINGKAILINGINJECTIONCANINHIBITMETABOLICACTIONOFSTAPHYLOCOCCUSAUREUS,THEMICROCALORIMETRYCOULDBEAPPLIEDTOTHEQUALITYACCESSMENTOFQINGKAILINGINJECTIONKEYWORDSMICROCALORIMETRYQINGKAILINGINJECTIONSTAPHYLOCOCCUSAUREUSGROWTHTHERMOGENICCURVES清開靈注射液G7171G1268G13491G2529方“G4445G4479G10287黃G1036”的G6925G14403劑G3423，G11013G13978G18252、G10657G10676G8609（G12893）、G10494G2447G8699G13978G18252、G7636G4388、G8712G10287G16294（G12893）、G7507G15025G7693、黃G14461G14539、金G19146G144698G2631G1025藥G13464G6116。1992G5192G3999清開靈注射液G15999G6931G5232G2319藥G12661G10714G18108G19388G6363定為G1852G3281G1025G2319G2319G19510G5625G16798（G12197）G4472G5529G3803的G1025G6116藥，G1039G16213用于熱G11161、G12082G7139、G1025G20130G1571G11263、G12082G5547不清、G5625性G13937G9826、G990G2640G2572G17959G5875G7591、G13966G9826、G14053G15892G7655G5430G6116、G14053出G15892G16277G990G17860G16789G1517G137851，G1032G5214G11115效G11842G2011，G1306同G7114G5353G2469的藥物不G14403G2465應（ADR）在G2469生ADR的G1025藥G2058劑G1025G1313列G12544G11202。G3281家G20147品藥品G11429G11575G12661G10714G4628（SFDA）G19036對G5062G990G5078的G1025藥注射劑G7138G11842G16213G8726G726建立生物G8975性G7828測方法，G1209G5369G15929G11458G2081G7828G20576G6363G7643G1177G1177G14033控G2058G5062G11705G6116分的不足，從生物G8975性G16294G5242控G2058藥品的質量3。G1025藥質量生物控G2058G5062G6116為G1025藥質量控G2058研究G2469展的趨勢4?，F(xiàn)代藥G10714研究表G7138，清開靈注射液G1039G16213有解熱鎮(zhèn)靜、抗菌、抑毒保G13937、抗凝促溶、免疫調節(jié)等作用5。G1032G5214G990，清開靈注射液用于熱G11161、G5625性G990G2640G2572G17959G5875G7591及G13966G9826的頻率很高6，這與清開靈注射液G14403好的抗菌作用密不G2499分。結合G2081期研究7，本文G1209清開靈注射液的抗菌作用為著眼點，采用微量量熱法，對清開靈注射液影響金黃色葡萄球菌代謝的作用進行初步研究，為清開靈注射液質量的生物評價與控G2058的后續(xù)工作做了G5529G16213的鋪墊。1實驗儀器及材料311實驗儀器實G20576儀器采用瑞典THERMOMETRIC公司產的LKB2277生物熱G8975性G7828測系G13491，LKB2132蠕動泵。實G20576G7114系G13491控溫37。有關儀器的結構原G10714G16277文獻8。12實驗材料金黃色葡萄球菌CCTCCAB910393G11013武漢大學G1025G3281典G3423培養(yǎng)物保藏G1025心提供。清開靈注射液樣品G11013具代表性的兩個大廠家（BZY、SXTH）提供，各3批樣品，批次分別為G726811601、712604A、710510A；070930、071120、071219。培養(yǎng)基為LB培養(yǎng)基G726取蛋白胨10G，酵G8609G128935G，氯化鈉5G，溶于1000ML蒸餾G8712G1025，PH72，分裝后于121高壓蒸氣滅菌20MIN，置4冰箱G1025G3803用。2方法與結果21實驗方法采用停流法G7828測。測定G2081分別用適量01MOLL1氫G8699化鈉、01MOLL1鹽G18252、75乙醇溶液和無菌G8712清洗G12661G17959和流通池，待儀器得到穩(wěn)定的基線后，用蠕動泵G120950MLH1的流速，將菌液和清開靈注射液混合液泵入微量熱計G1025，當樣品充滿流通池后停泵，啟動采集卡開G3999采集數據，跟蹤記錄流通池內細菌生長的產熱曲線（PT曲線），當采集的數據重新回到基線后，實G20576結束。G7693據實G20576G16213G8726，將一定量的清開靈注射液加入到接G12193了金黃色葡萄球菌的培養(yǎng)液G1025，使菌含量為2106CELLSML1，用振蕩器混勻，G1209G3803進樣。整個過G12255為無菌操作。22結果與討論221金黃色葡萄球菌的生長熱功率輸出曲線4圖1金黃色葡萄球菌G4448整代謝曲線FIG1METABOLISMCURVEOFSTAPHYLOCOCCUSAUREUS圖1G717137下，停流法測定的金黃色葡萄球菌G4448整代謝曲線。曲線A（PT曲線）G7171所測定的細菌生長曲線，G2499G1209分G6116G3247個G19466G8585G726G265停G9394期、G266G6363數生長期、G267穩(wěn)定期和G268G15940G1141期。分別對應于細菌對培養(yǎng)基G1025不同G14841養(yǎng)G6116分的G2045用G5785G1929及不同的代謝過G122559，與G1268G13491方法測定的細菌代謝曲線G11468G1296。曲線B（LNPT曲線）G2029G7186G12046了線性擬合后細菌代謝熱功率輸出隨G7114G19400的G2476化G10317G546110。222重現(xiàn)性考察采用微量量熱G1055停流法測定金黃色葡萄球菌生長熱G16901曲線，在G11468同的實G20576G7477G1226下，P1、P2、K1、G440T的RSDG1552分別為3468、44739、24161、09413，G16840G7138實G20576結G7536具有G14403好的重現(xiàn)性。223清開靈注射液不同劑量對金黃色葡萄球菌代謝的影響（G16277圖2）圖2金黃色葡萄球菌G8999G5242G7811G5242圖FIG2CONCENTRATIONGRADIENTCURVESOFSTAPHYLOCOCCUSAUREUS用SXTH的批次為071120樣品，分別考察了0200L的8個G8999G5242G7811G5242，線性關系G14403好，當劑量增加到200LG7114，金葡菌生長曲線G5062G1017重G2476G5430，不G1889適用于G6363數生長G8181G3423，G16277圖2曲線A。定G1053藥物對細菌的抑G2058率為G726IK0KV/K0100，G5347G1025K0為劑量為G19658G7114細菌生長代謝的速率G5132數，KV為細菌G2475到劑量為V的藥物抑G2058G7114的速率G5132數。G11013G8504計算出金黃色葡萄球菌在清開靈注射液不同劑量下的抑G2058率I，作VI（）5圖，G8726得半數抑菌量為97698L。當K1為0G7114，細菌G4448G1852停G8502生長，G8726得最佳抑菌量為164L。細菌G1268代G7114G19400TGLN2/K。G16826細參數G16277表1。表1不同劑量清開靈注射液對金黃色葡萄球菌生長曲線參數影響TABLE1EFFECTOFQINGKAILINGINJECTIONOFDIFFERENTDOSAGEONPARAMETERSA119A120VA121LA122T1MINP1WQ1MJK1MIN1T2MINP2WQ2MJQTMJA123TMINTGMINI019630661639950034264443246824212537801124820232A12425204283056886300275346230191278888402654258251780196502062240354885002451486264372687763595422802828002857521017789523410020555422259228515137426333233730040010021213664478570017025981990429935738840438640725050312521611373462720013896401866632224840858542449903059515022091945950400090967416115369840492008454762540735A125A126A127A12809850989060809940989099109360676098509280998A129T1A130A131A132A133A134A135A136A137A138A139A140T2A130A141A142A135A136A137A138A139A140A143TA130A141A142A135A144A131A132A133A134A135A136A137A138A139A145A140P1A130A131A132A133A134A135A146A147A148A149A150A140P2A130A141A142A135A146A147A148A149A150A140K1A130A131A132A133A134A135A133A134A151A150A152A132A140IA130A153A154A155A156A157A158A159A150A140TGA130A156A157A160A161A138A139A140Q1A130A131A132A133A134A135A162A148A163A140Q2A130A141A142A135A162A148A163A140QTA130A164A162A148A163G11013圖G16901及參數分析，G2469現(xiàn)在一定范圍內（0150L），隨清開靈注射液劑量增加，金黃色葡萄球菌生長曲線整G1319呈“下降、后延”趨勢；細菌G6363數生長期速率G5132數K1、最大熱功率P1、穩(wěn)定期最大熱功率P2均G11468應G1955G4579，G6363數生長期G17810G4804G7114G19400T1、穩(wěn)定期G17810G4804G7114G19400T2、穩(wěn)定期與G6363數生長期G17810G4804G7114G19400G5058G440T、藥物對細菌抑G2058率I均G11468應增大，且均與劑量呈較好的線性關系（R分別為G7260994、0989、0991、0985、0989、0985、0998）；細菌G1268代G7114G19400TGG1075G11468應增加；G13792細菌G12544一G6363數生長期G2469熱量Q1整G1319G11065呈下降趨勢，穩(wěn)定期G2469熱量Q2、G5647G2469熱量QT整G1319G11065呈G990G2331趨勢，G1306G11468關性較G5058（R分別為0608、0936、0676）。224不同清開靈注射液樣品熱譜圖初步分析在G1209G990系列G8999G5242G1025，G17885G6333和G12366白G11468比參數G2476化較大，G1306圖G16901不G2469生G7138G7186G2476G5430的G8999G5242（50L），對清開靈注射液不同樣品的抑菌效G7536進行了測G16809，G16277圖3。6圖3不同清開靈注射液樣品對金黃色葡萄球菌的影響G947實線G252BZYG15406線SXTHFIG3EFFECTOFQINGKAILINGINJECTIONONMETABOLISMOFSTAPHYLOCOCCUSAUREUSA165SOLIDLINEBZYDASHLINESXTHG990圖G1025，實線所G12046圖為BZY清開靈注射液生長曲線圖，G15406線所G12046圖為SXTH清開靈注射液生長曲線圖。G7186G9994，BZY、SXTH兩個廠家G19400的樣品生長曲線有很大的G5058G5334，BZY樣品的穩(wěn)定期較SXTH樣品G3822一個G4804，G3926圖所G12046G4804B，且P1G1075較SXTH樣品大。G990圖所G12046G2318G3507（穩(wěn)定期）G2499G16277，BZY批次為811601的樣品生長曲線G7138G7186G2318別于G1866G1194樣品，G16277G990圖G7643G12046的G4804A，G7138G7186高于G1866G1194樣品；SXTH的3批次樣品生長曲線G5058G5334較G4579。G11013G8504G2499G16277，不同廠家、同廠家不同批次清開靈注射液質量G4396在不同G12255G5242的G5058G5334。225討論2251本實G20576G20330次通過微量量熱法較系G13491的研究了清開靈注射液對金黃色葡萄球菌代謝作用的影響，得出G1866抑菌效應，這與文獻G6265G17959一G14280。G5194得出G1866半數抑菌量（97698L）和最佳抑菌量（164L）。2252在G10317定G7477G1226下，藥物作用于細菌的生長曲線G7171G11468對穩(wěn)定的，且與G8975性G11468關，G3252G8504G6117G1216G12228G1055為“生物熱G8975性G6363G13453圖G16901”BIOACTIVITYFINGERPRINT。通過分析，G2469現(xiàn)在G11468同G7477G1226下，清開靈注射液不同廠家G1209及同廠家不同批次G19400樣品的生物熱G8975性G6363G13453圖G16901G4396在不同G12255G5242的G5058G5334，在一定G12255G5242G990G2465G7156了清開靈注射液質量7的G5058G5334性。2253清開靈注射液作用于金黃色葡萄球菌的生物熱G8975性G6363G13453圖G16901提G12046G6117G1216，微量量熱法在研究清開靈注射液質量一G14280性方G19766有很好的G14507G3848，進G13792為從G8975性G16294G5242評價清開靈注射液的質量提供了很好的G5617G17347。2254G3微量量熱G7828測G6228G7427具有G7234適性好、實G7114在線、G4470G16278靈G6947、定性定量、G13475G8994高效等G10317點，G12538合G1025藥藥效與質量評價的G4470G16278現(xiàn)實和G2469展方G2533，有G2045于G1025藥質量控G2058和藥效評價等G3809G7446性G19602G20076，在G10714G16782G990比現(xiàn)行的G1025藥G6363G7643性G6116分定性定量分析具有較G7138G7186的G1260G17246性4。2255本研究G1177G19036對清開靈注射液的抑菌作用進行了初步探G16764，生物熱G8975性G6363G13453圖G16901的G5058G5334G7171G2554G14033G4470G16278的G2465G7156清開靈注射液質量的G5058G5334，這G7171G2554與清開靈注射液不G14403G2465應頻G2469有關，G6117G1216將進行G9157入探究。參考文獻1G3281家藥典G4