1、分子生物學(xué)常用技術(shù)分子生物學(xué)常用技術(shù)第第 一一 節(jié)節(jié)分子印跡與雜交技術(shù)分子印跡與雜交技術(shù)一、核酸分子印跡與雜交技術(shù)一、核酸分子印跡與雜交技術(shù)核酸分子雜交核酸分子雜交 (nucleic acid hybridization ) 把不同來源而具有一定同源性的把不同來源而具有一定同源性的DNA分子放在同分子放在同一溶液中做變性處理一溶液中做變性處理 ，或把單鏈，或把單鏈DNA與與RNA放在一放在一起，在一定條件下，它們之間的同源區(qū)域可按堿基互起，在一定條件下，它們之間的同源區(qū)域可按堿基互補(bǔ)原則復(fù)性形成雜合雙鏈補(bǔ)原則復(fù)性形成雜合雙鏈(heteroduplex) ，這一過程，這一過程稱為雜交。稱為雜交。

2、 在雜交之前，通常用瓊脂糖凝膠分離待在雜交之前，通常用瓊脂糖凝膠分離待測(cè)的測(cè)的DNA分子，再將分離的分子，再將分離的DNA片段轉(zhuǎn)移到片段轉(zhuǎn)移到特定的支持物上。由于轉(zhuǎn)移后各個(gè)特定的支持物上。由于轉(zhuǎn)移后各個(gè)DNA片段片段在膜上的相對(duì)位置與在凝膠中的相對(duì)位置一在膜上的相對(duì)位置與在凝膠中的相對(duì)位置一樣，故稱為印跡（樣，故稱為印跡（ blotting）。）。 印跡（印跡（ blotting）（一）（一）Southern印跡雜交印跡雜交 Southern印跡雜交（印跡雜交（Southern blotting）是是指指DNA與與DNA分子之間的雜交。其基本過程分子之間的雜交。其基本過程是將瓊脂糖凝膠電泳分離

3、的待測(cè)是將瓊脂糖凝膠電泳分離的待測(cè)DNA片段變性片段變性后，將凝膠中的后，將凝膠中的DNA分子轉(zhuǎn)移到一定的固相支分子轉(zhuǎn)移到一定的固相支持物上，然后用標(biāo)記的探針檢測(cè)待測(cè)的持物上，然后用標(biāo)記的探針檢測(cè)待測(cè)的DNA。 探針探針 (probe) 探針的種類探針的種類 寡核苷酸寡核苷酸 基因組基因組DNA cDNA片段片段 RNA片段片段標(biāo)記物標(biāo)記物 放射性同位素放射性同位素 生物素生物素 熒光染料熒光染料 是指經(jīng)過特殊標(biāo)記的是指經(jīng)過特殊標(biāo)記的已知序列核苷酸片段已知序列核苷酸片段，可以用來檢測(cè)某一特定核苷酸序列或基因序列可以用來檢測(cè)某一特定核苷酸序列或基因序列的的DNA或或RNA片段。片段。 將探針與固

4、定在將探針與固定在NC膜上的膜上的DNA或或RNA進(jìn)行進(jìn)行雜交，探針的序列如與膜上的核酸序列互補(bǔ)，雜交，探針的序列如與膜上的核酸序列互補(bǔ)，就可結(jié)合到膜上的相應(yīng)區(qū)帶，經(jīng)放射自顯影或就可結(jié)合到膜上的相應(yīng)區(qū)帶，經(jīng)放射自顯影或其他手段就可判斷是否有同源的核酸分子存在。其他手段就可判斷是否有同源的核酸分子存在。 放射性同位素放射性同位素-目前最常采用目前最常采用缺點(diǎn)缺點(diǎn)半衰期短半衰期短, 隨用隨標(biāo)隨用隨標(biāo)放射性污染放射性污染靈敏度極高靈敏度極高放射性核素對(duì)各種酶促反應(yīng)無任何放射性核素對(duì)各種酶促反應(yīng)無任何影響，也不會(huì)影響堿基配對(duì)的特異影響，也不會(huì)影響堿基配對(duì)的特異性與穩(wěn)定性和雜交性質(zhì)性與穩(wěn)定性和雜交性質(zhì)極

5、高的特異性極高的特異性優(yōu)點(diǎn)優(yōu)點(diǎn) 非放射性標(biāo)記物非放射性標(biāo)記物缺點(diǎn)缺點(diǎn)靈敏度不太高靈敏度不太高特異性不太高特異性不太高生物素生物素地高辛地高辛熒光素：熒光素：FITC，羅丹明，羅丹明非放射性標(biāo)記物非放射性標(biāo)記物無無放射性污染放射性污染穩(wěn)定性好，可較長時(shí)間存放穩(wěn)定性好，可較長時(shí)間存放優(yōu)點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)Southern印跡雜交的基本步驟印跡雜交的基本步驟 待測(cè)待測(cè)DNA樣品的限制性內(nèi)切酶消化樣品的限制性內(nèi)切酶消化 酶切酶切DNA樣品的電泳分離樣品的電泳分離 凝膠中凝膠中DNA的變性和的變性和Southern轉(zhuǎn)移轉(zhuǎn)移 探針的制備探針的制備 Southern雜交雜交 雜交結(jié)果的檢測(cè)雜交結(jié)果的檢測(cè) M1 210SS

6、C 轉(zhuǎn)移緩沖液轉(zhuǎn)移緩沖液Whatman濾紙濾紙凝膠凝膠Whatman濾紙濾紙紙巾紙巾玻璃板玻璃板重物重物支持物支持物500g1 2與探針同源雜交的與探針同源雜交的基因基因DNA片段片段基因組基因組DNADNA酶切片段酶切片段內(nèi)切酶內(nèi)切酶NC或尼龍膜或尼龍膜NC膜或尼龍膜膜或尼龍膜基因組基因組DNA的定性與定量分析。的定性與定量分析。 如對(duì)在基因組中特異基因的定位及檢測(cè)等。如對(duì)在基因組中特異基因的定位及檢測(cè)等。重組質(zhì)粒和噬菌體的分析。重組質(zhì)粒和噬菌體的分析。Southert blotting用途用途放放射射自自顯顯影影照照片片（二）（二）Northern印跡雜交印跡雜交 利用類似于利用類似于So

7、uthern印跡雜交的技術(shù)來印跡雜交的技術(shù)來檢測(cè)檢測(cè)RNA稱為稱為Northern印跡雜交（印跡雜交（Northern blotting）。）。 Northern印跡雜交基本原理和過程與印跡雜交基本原理和過程與Southern印跡基本相同，只是檢測(cè)的分子是印跡基本相同，只是檢測(cè)的分子是RNA，可用來對(duì)組織或細(xì)胞中的，可用來對(duì)組織或細(xì)胞中的mRNA進(jìn)行定進(jìn)行定性或定量分析。性或定量分析。 Northern印跡雜交的基本過程印跡雜交的基本過程 相同點(diǎn)：相同點(diǎn)：原理均為毛細(xì)管作用原理均為毛細(xì)管作用 名稱相對(duì)于名稱相對(duì)于Southern blotting轉(zhuǎn)移的是轉(zhuǎn)移的是RNA轉(zhuǎn)移前無需酶切轉(zhuǎn)移前無需酶

8、切轉(zhuǎn)移效率較高轉(zhuǎn)移效率較高變性方法（甲醛、乙二醛等變性方法（甲醛、乙二醛等 ）不同點(diǎn)：不同點(diǎn)：Northern blotting 用途用途 檢測(cè)某一組織或細(xì)胞中已知的特異檢測(cè)某一組織或細(xì)胞中已知的特異mRNA 的表達(dá)水平。的表達(dá)水平。 比較不同組織和細(xì)胞的同一基因的表達(dá)情況。比較不同組織和細(xì)胞的同一基因的表達(dá)情況。二、蛋白質(zhì)印跡技術(shù)二、蛋白質(zhì)印跡技術(shù)(Western blotting) 蛋白質(zhì)印跡技術(shù)是根據(jù)蛋白質(zhì)分子之間存在蛋白質(zhì)印跡技術(shù)是根據(jù)蛋白質(zhì)分子之間存在相互作用的特點(diǎn)，將蛋白質(zhì)電泳分離，然后將相互作用的特點(diǎn)，將蛋白質(zhì)電泳分離，然后將其轉(zhuǎn)移和固定于固體支持物（其轉(zhuǎn)移和固定于固體支持物（N

9、C膜或其它膜）膜或其它膜）上，再用相應(yīng)的蛋白質(zhì)分子對(duì)其進(jìn)行檢測(cè)。最上，再用相應(yīng)的蛋白質(zhì)分子對(duì)其進(jìn)行檢測(cè)。最常用的蛋白質(zhì)是抗體，因此被稱為免疫印跡常用的蛋白質(zhì)是抗體，因此被稱為免疫印跡（immunoblotting）技術(shù)。）技術(shù)。 首先將混合蛋白質(zhì)用首先將混合蛋白質(zhì)用PAGE按分子大小按分子大小分開，再將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到分開，再將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到NC膜上，蛋白質(zhì)膜上，蛋白質(zhì)的位置可保持在膠中的原位上。的位置可保持在膠中的原位上。與與DNA和和RNA印跡相似之處印跡相似之處n蛋白質(zhì)的轉(zhuǎn)移只有靠電轉(zhuǎn)移蛋白質(zhì)的轉(zhuǎn)移只有靠電轉(zhuǎn)移n蛋白質(zhì)的檢測(cè)以蛋白質(zhì)的檢測(cè)以抗體抗體作探針作探針n用堿性磷酸酶（用堿性磷酸酶（AL

10、P）、辣根過氧化酶）、辣根過氧化酶（HRP）標(biāo)記第二抗體，）標(biāo)記第二抗體，底物顯色底物顯色來檢測(cè)來檢測(cè)蛋白區(qū)帶的信號(hào)，底物亦可與蛋白區(qū)帶的信號(hào)，底物亦可與化學(xué)發(fā)光劑化學(xué)發(fā)光劑結(jié)合以提高敏感度。結(jié)合以提高敏感度。n或用同位素標(biāo)記第二抗體，或用同位素標(biāo)記第二抗體，放射自顯影法放射自顯影法檢測(cè)蛋白區(qū)帶的信號(hào)。檢測(cè)蛋白區(qū)帶的信號(hào)。與與DNA和和RNA印跡不同之處印跡不同之處Western blotting應(yīng)用應(yīng)用 檢測(cè)樣品中的特異蛋白質(zhì)的存在檢測(cè)樣品中的特異蛋白質(zhì)的存在 細(xì)胞中特異蛋白質(zhì)的定量分析細(xì)胞中特異蛋白質(zhì)的定量分析 蛋白質(zhì)分子的相互作用研究蛋白質(zhì)分子的相互作用研究三種印跡技術(shù)的比較三種印跡技術(shù)

11、的比較Western blotting垂直槽垂直槽Northern blotting水平槽水平槽Southern blotting水平槽水平槽第第 二二 節(jié)節(jié) PCR技術(shù)技術(shù)（Polymerase Chain Reaction，PCR）聚合酶鏈反應(yīng)聚合酶鏈反應(yīng) PCR技術(shù)是技術(shù)是1985年由美國科學(xué)家年由美國科學(xué)家Kary B Mullis建立的建立的體外體外擴(kuò)增基因片段的方法，它擴(kuò)增基因片段的方法，它具有特異、敏感、產(chǎn)率高、簡(jiǎn)便、重復(fù)性好、具有特異、敏感、產(chǎn)率高、簡(jiǎn)便、重復(fù)性好、易自動(dòng)化等易自動(dòng)化等突出優(yōu)點(diǎn)突出優(yōu)點(diǎn)，是分子生物學(xué)技術(shù)中，是分子生物學(xué)技術(shù)中一項(xiàng)具有一項(xiàng)具有革命性的創(chuàng)舉革命性的創(chuàng)

12、舉。 PCR方法被美國方法被美國Science雜志評(píng)為雜志評(píng)為1989年年的十大科技成就之一，而的十大科技成就之一，而Taq DNA聚合酶聚合酶被被評(píng)選為象征評(píng)選為象征1989年的年的“年分子年分子”(the molecule of year)。The Nobel Prize in Chemistry 1993for contributions to the developments of methods within DNA-based chemistry Michael Smith1944 -1932 - 2000La Jolla, CA, USA Kary B. Mullis Unive

13、rsity of British Columbia Vancouver, Canada for his invention of the polymerase chain reaction (PCR) methodfor his fundamental contributions to the establishment of oligonucleotide-based, site-directed mutagenesis and its development for protein studiesKary B. Mullis (1944 -)，在在Cetus公司工作期間，公司工作期間，發(fā)明

14、了發(fā)明了PCR。 他原本是他原本是要合成要合成DNA引物來進(jìn)行引物來進(jìn)行測(cè)序工作，測(cè)序工作， 卻常為沒有卻常為沒有足夠多的模板足夠多的模板DNA而煩而煩惱。惱。1983年春夏之交的年春夏之交的一個(gè)晚上，他開車去鄉(xiāng)一個(gè)晚上，他開車去鄉(xiāng)下別墅的路上萌發(fā)了用下別墅的路上萌發(fā)了用引物（而不是一個(gè)引物（而不是一個(gè)引物）引物）去擴(kuò)增模板去擴(kuò)增模板DNA 的想法的想法.Mullis開車的時(shí)候開車的時(shí)候, 瞬間感覺兩排路燈就是瞬間感覺兩排路燈就是DNA的兩條鏈，自己的車和對(duì)面的兩條鏈，自己的車和對(duì)面開來的車象是開來的車象是DNA聚合酶，面對(duì)面地合成著聚合酶，面對(duì)面地合成著DNA， n 1983年年9月中旬。月

15、中旬。 5 Primer 15 Primer 2Cycle 2Cycle 15 5 5 5 5 5 Template DNA5 5 5 5 5 5 5 5 一、一、PCR技術(shù)的基本原理技術(shù)的基本原理Cycle 35 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 2530 次循環(huán)后，模板次循環(huán)后，模板DNA的的含量可以擴(kuò)大含量可以擴(kuò)大100萬倍以上。萬倍以上。n模板模板DNAn 特異性引物特異性引物n耐熱耐熱DNA聚合酶聚合酶n dNTPsn Mg2+ PCR體系基本組成成分體系基本組成成分二、二、PCR技術(shù)的主要特點(diǎn)技術(shù)的主要特點(diǎn)1.特異性強(qiáng)特異性強(qiáng) 2.靈敏度高靈敏度高 3.簡(jiǎn)

16、便快速簡(jiǎn)便快速 4.對(duì)標(biāo)本的純度要求低對(duì)標(biāo)本的純度要求低 2. 采用采用PCR方法獲得目的基因方法獲得目的基因 引物選擇：引物選擇：特異引物、隨機(jī)引物、簡(jiǎn)并引物特異引物、隨機(jī)引物、簡(jiǎn)并引物 1. 采用采用RT-PCR方法擴(kuò)增目的基因方法擴(kuò)增目的基因三、三、PCR技術(shù)技術(shù)的主要用途的主要用途（一）目的基因的擴(kuò)增與克隆（一）目的基因的擴(kuò)增與克?。ǘ┗虻捏w外定點(diǎn)突變（二）基因的體外定點(diǎn)突變（三）基因突變分析（三）基因突變分析（四）（四） DNA和和RNA的微量分析的微量分析（五）（五） DNA序列測(cè)定序列測(cè)定三、三、PCR技術(shù)技術(shù)的主要用途的主要用途 (Sanger雙脫氧鏈終止法雙脫氧鏈終止法)

17、HO P O P O P O CH2OOOOHOHOHOA, C, G or T13 OH5 雙脫氧核苷三磷酸雙脫氧核苷三磷酸脫去脫去DNA鏈末端合成終止法鏈末端合成終止法The Nobel Prize in Chemistry 1958for his work on the structure of proteins, especially that of insulinFrederick Sanger University of Cambridge Cambridge, United Kingdom 1918 - The Nobel Prize in Chemistry 1980for h

18、is fundamental studies of the biochemistry of nucleic acids, with particular regard to recombinant-DNAfor their contributions concerning the determination of base sequences in nucleic acidsPaul BergStanford University Stanford, CA, USA1926 - Walter Gilbert Frederick SangerHarvard University, Biologi

19、cal Laboratories Cambridge, MA, USAMRC Laboratory of Molecular Biology Cambridge, United Kingdom1932 - 1918 - DNA鏈末端合成終止法鏈末端合成終止法DNA自動(dòng)測(cè)序自動(dòng)測(cè)序用用熒光替代放射性核素?zé)晒馓娲派湫院怂貥?biāo)記是實(shí)現(xiàn)標(biāo)記是實(shí)現(xiàn)DNA序列分序列分析自動(dòng)化的基礎(chǔ)。析自動(dòng)化的基礎(chǔ)。用用不同熒光不同熒光分子標(biāo)記分子標(biāo)記4種種ddNTP，然后進(jìn)行，然后進(jìn)行Sanger測(cè)序反應(yīng)，產(chǎn)物經(jīng)電泳（平板電泳或毛細(xì)測(cè)序反應(yīng)，產(chǎn)物經(jīng)電泳（平板電泳或毛細(xì)管電泳）分離。管電泳）分離。通過通過4種激光激發(fā)不同大

20、小種激光激發(fā)不同大小DNA片段上的熒光片段上的熒光分子使之發(fā)射出分子使之發(fā)射出4種不同波長熒光，檢測(cè)器采集熒種不同波長熒光，檢測(cè)器采集熒光信號(hào)，并依此確定光信號(hào)，并依此確定DNA堿基的排列順序。堿基的排列順序。 DNA自動(dòng)測(cè)序結(jié)果自動(dòng)測(cè)序結(jié)果四、幾種重要的四、幾種重要的PCR衍生技術(shù)衍生技術(shù)（一）反轉(zhuǎn)錄（一）反轉(zhuǎn)錄PCR技術(shù)技術(shù) (RT-PCR)（二）原位（二）原位PCR技術(shù)技術(shù) (ISP)（三）實(shí)時(shí)（三）實(shí)時(shí)PCR技術(shù)技術(shù) (real time PCR)RT-PCR技術(shù)技術(shù)AAnATTnT 55mRNA反轉(zhuǎn)錄酶mRNAcDNA3TTnTAAnA核糖核酸酶HTTnT3DNA poly IcDN

21、A核酸酶S1雙鏈cDNA35 35 5加熱變性加入特異性引物DNA聚合酶PCR擴(kuò)增出大量的產(chǎn)物實(shí)時(shí)實(shí)時(shí)PCR技術(shù)原理技術(shù)原理第第 三三 節(jié)節(jié)轉(zhuǎn)基因技術(shù)轉(zhuǎn)基因技術(shù)與基因剔除技術(shù)與基因剔除技術(shù) 是指將外源基因整合到動(dòng)物細(xì)胞或是指將外源基因整合到動(dòng)物細(xì)胞或植物細(xì)胞的基因組中并使外源基因在動(dòng)植物細(xì)胞的基因組中并使外源基因在動(dòng)物細(xì)胞或植物細(xì)胞中穩(wěn)定遺傳和表達(dá)的物細(xì)胞或植物細(xì)胞中穩(wěn)定遺傳和表達(dá)的技術(shù)。技術(shù)。 基因的導(dǎo)入方式主要：基因的導(dǎo)入方式主要： 顯微注射法顯微注射法 胚胎干細(xì)胞法胚胎干細(xì)胞法 逆轉(zhuǎn)錄病毒感染法逆轉(zhuǎn)錄病毒感染法 一、一、轉(zhuǎn)基因技術(shù)轉(zhuǎn)基因技術(shù)轉(zhuǎn)基因技術(shù)轉(zhuǎn)基因技術(shù) 基本原理是采用基因轉(zhuǎn)移技術(shù)

22、使目基本原理是采用基因轉(zhuǎn)移技術(shù)使目的基因整合入受精卵的細(xì)胞核內(nèi)或著床的基因整合入受精卵的細(xì)胞核內(nèi)或著床前的胚胎干細(xì)胞，然后將細(xì)胞導(dǎo)入受體前的胚胎干細(xì)胞，然后將細(xì)胞導(dǎo)入受體動(dòng)物子宮，使之發(fā)育成個(gè)體。動(dòng)物子宮，使之發(fā)育成個(gè)體。 轉(zhuǎn)基因轉(zhuǎn)基因被導(dǎo)入的目的基因被導(dǎo)入的目的基因轉(zhuǎn)基因動(dòng)物轉(zhuǎn)基因動(dòng)物( (transgenic animal)目的基因的受體動(dòng)物目的基因的受體動(dòng)物6只體型較原小只體型較原小鼠大一倍左右鼠大一倍左右大鼠生長大鼠生長激素基因激素基因小鼠（小鼠（lit/lit）的金屬）的金屬硫蛋白的基因（硫蛋白的基因（MT）MTrGH基因基因顯微注射法顯微注射法小鼠受精卵小鼠受精卵植入假孕鼠的子宮植

23、入假孕鼠的子宮21只小鼠，只小鼠，7中帶外源基因中帶外源基因著名的轉(zhuǎn)基因超級(jí)小鼠或巨鼠實(shí)驗(yàn)著名的轉(zhuǎn)基因超級(jí)小鼠或巨鼠實(shí)驗(yàn) 當(dāng)這一實(shí)驗(yàn)結(jié)果在當(dāng)這一實(shí)驗(yàn)結(jié)果在19821982年英國的年英國的NatureNature雜志雜志第第300300期上發(fā)表并在該期的封面上刊登超級(jí)小白鼠的期上發(fā)表并在該期的封面上刊登超級(jí)小白鼠的照片之后，照片之后，引起了全世界的轟動(dòng)引起了全世界的轟動(dòng)?？茖W(xué)家、企業(yè)家、?？茖W(xué)家、企業(yè)家、卡通畫作者和動(dòng)物保護(hù)主義者一時(shí)間都在談?wù)撧D(zhuǎn)基卡通畫作者和動(dòng)物保護(hù)主義者一時(shí)間都在談?wù)撧D(zhuǎn)基因動(dòng)物技術(shù)，估價(jià)它對(duì)社會(huì)和經(jīng)濟(jì)發(fā)展的潛在影響，因動(dòng)物技術(shù)，估價(jià)它對(duì)社會(huì)和經(jīng)濟(jì)發(fā)展的潛在影響，擔(dān)憂它會(huì)對(duì)環(huán)境

24、和社會(huì)倫理造成何種后果。擔(dān)憂它會(huì)對(duì)環(huán)境和社會(huì)倫理造成何種后果。 即即體細(xì)胞克隆技術(shù)體細(xì)胞克隆技術(shù)，是用顯微操作、，是用顯微操作、電融合等方法將動(dòng)物體細(xì)胞的細(xì)胞核電融合等方法將動(dòng)物體細(xì)胞的細(xì)胞核全部導(dǎo)入另一個(gè)個(gè)體的去除細(xì)胞核的全部導(dǎo)入另一個(gè)個(gè)體的去除細(xì)胞核的卵細(xì)胞內(nèi)，使之發(fā)育成為個(gè)體。卵細(xì)胞內(nèi)，使之發(fā)育成為個(gè)體。二、核轉(zhuǎn)移技術(shù)二、核轉(zhuǎn)移技術(shù)多多 莉莉 核轉(zhuǎn)移技術(shù)可使一個(gè)細(xì)胞變成一個(gè)核轉(zhuǎn)移技術(shù)可使一個(gè)細(xì)胞變成一個(gè)個(gè)體，這樣產(chǎn)生的個(gè)體所攜帶的遺傳個(gè)體，這樣產(chǎn)生的個(gè)體所攜帶的遺傳物質(zhì)與細(xì)胞核供體的遺傳物質(zhì)完全一物質(zhì)與細(xì)胞核供體的遺傳物質(zhì)完全一樣，是一種無性繁殖的過程，即樣，是一種無性繁殖的過程，即克隆

25、克隆(clone)。通過分子生物學(xué)的方法定向地敲除動(dòng)通過分子生物學(xué)的方法定向地敲除動(dòng)物體細(xì)胞內(nèi)的某個(gè)基因的技術(shù)稱為物體細(xì)胞內(nèi)的某個(gè)基因的技術(shù)稱為基因基因剔除剔除 (gene knock-out)或或基因打靶基因打靶 (gene targeting)。三、基因剔除技術(shù)三、基因剔除技術(shù)基因剔除技術(shù)基因剔除技術(shù) 基本原理是通過基本原理是通過DNA定點(diǎn)同源重組，定點(diǎn)同源重組，使小鼠胚胎干細(xì)胞使小鼠胚胎干細(xì)胞 (ES細(xì)胞細(xì)胞)特定的內(nèi)源基特定的內(nèi)源基因被破壞而造成其功能喪失。因被破壞而造成其功能喪失?？稍诩?xì)胞水平建立基因剔除細(xì)胞系；可在細(xì)胞水平建立基因剔除細(xì)胞系；也可以用顯微注射法將也可以用顯微注射法將

26、ES細(xì)胞移入小鼠囊細(xì)胞移入小鼠囊胚中，再移植到假孕母鼠內(nèi)獲得嵌合體小胚中，再移植到假孕母鼠內(nèi)獲得嵌合體小鼠，進(jìn)而獲得基因剔除小鼠。鼠，進(jìn)而獲得基因剔除小鼠。四、基因轉(zhuǎn)移和基因剔除在醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用四、基因轉(zhuǎn)移和基因剔除在醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用（一）建立疾病動(dòng)物模型（一）建立疾病動(dòng)物模型（二）生物制藥（二）生物制藥（三）治療性克隆和生產(chǎn)可用于人體器官（三）治療性克隆和生產(chǎn)可用于人體器官 移植的動(dòng)物器官移植的動(dòng)物器官第第 四四 節(jié)節(jié) 生生 物物 芯芯 片片 技技 術(shù)術(shù)DNA芯片芯片(DNA chip)、DNA陣列陣列(DNA array)cDNA芯片芯片(cDNA chip) 指將許多特定的指將許多特定的DNA

27、片段或片段或cDNA片段片段作為探針，有規(guī)律地緊密排列固定于單位作為探針，有規(guī)律地緊密排列固定于單位面積的支持物上。面積的支持物上。一、基因芯片一、基因芯片(gene chip) 將探針與熒光標(biāo)記的待測(cè)樣品分子將探針與熒光標(biāo)記的待測(cè)樣品分子進(jìn)行雜交，通過檢測(cè)系統(tǒng)檢測(cè)雜交的熒進(jìn)行雜交，通過檢測(cè)系統(tǒng)檢測(cè)雜交的熒光信號(hào)和強(qiáng)度，從而獲取樣品分子的數(shù)光信號(hào)和強(qiáng)度，從而獲取樣品分子的數(shù)量和序列信息。量和序列信息。 將高度密集排列的蛋白分子作為探將高度密集排列的蛋白分子作為探針點(diǎn)陣固定在固相支持物上，當(dāng)與待測(cè)針點(diǎn)陣固定在固相支持物上，當(dāng)與待測(cè)蛋白樣品反應(yīng)時(shí)，可捕獲樣品中的靶蛋蛋白樣品反應(yīng)時(shí)，可捕獲樣品中的靶蛋白，再經(jīng)檢測(cè)系統(tǒng)對(duì)靶蛋白進(jìn)行定性和白，再經(jīng)檢測(cè)系統(tǒng)對(duì)靶蛋白進(jìn)行定性和定量分析的一種技術(shù)。定量分析的一種技術(shù)。二、蛋白質(zhì)芯片二、蛋白質(zhì)芯片 (protein chip)又稱又稱蛋白質(zhì)陣列蛋白質(zhì)陣列 (protein array)基本原理基本原理： 蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)分子之間在空間構(gòu)象上能蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)分子之間在空間構(gòu)象上能特異性的相互識(shí)別和相互結(jié)合。如抗體與抗原特異性的相互識(shí)別和相互結(jié)合。如抗體與抗原或受體與配體之間的特異性結(jié)