1、1313C-C-嘧塞西啶呼氣試驗(yàn)測(cè)定肝細(xì)嘧塞西啶呼氣試驗(yàn)測(cè)定肝細(xì)胞儲(chǔ)備功能的臨床應(yīng)用胞儲(chǔ)備功能的臨床應(yīng)用 前言前言肝細(xì)胞功能減低 肝細(xì)胞總體數(shù)目減少：如肝纖維化、肝硬化、脂肪肝 理化損傷肝細(xì)胞：如在缺氧、中毒、酗酒等情況下，肝細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)中毒顆粒、細(xì)胞器減少 病毒性感染：包括大量病毒復(fù)制造成的肝細(xì)胞崩解以及自身免疫性肝炎引起大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)及細(xì)胞器損傷或減少。如乙肝、丙肝 門脈系統(tǒng)受阻：如門脈高壓、血栓等造成的代謝物運(yùn)輸障礙開展本項(xiàng)目依據(jù)開展本項(xiàng)目依據(jù)如何檢測(cè)肝臟代謝功能狀況和肝細(xì)胞的損傷程度以及儲(chǔ)備數(shù)量和代謝功能?v 目前臨床上廣泛應(yīng)用的肝功能生化檢測(cè)對(duì)于了解肝細(xì)胞是否有損害以及損害程度確有重

2、要意義，但其不能特異的、量化的反映肝細(xì)胞的儲(chǔ)備功能情況。并僅是反映肝細(xì)胞功能上的時(shí)間遲滯性決定了它不是能及時(shí)地反映肝細(xì)胞功能的準(zhǔn)確指標(biāo), 僅是以往一定時(shí)期內(nèi)肝功能的綜合“表現(xiàn)型”v 1970年代有研究者嘗試用13C-呼氣試驗(yàn)測(cè)定肝病患者的藥物定量肝代謝功能、診斷肝臟疾病、隨訪療效、評(píng)估預(yù)后，并已取得一定經(jīng)驗(yàn)。近年來(lái)，應(yīng)用13C-呼氣試驗(yàn)測(cè)定肝細(xì)胞的儲(chǔ)備功能在國(guó)際上越來(lái)越受到廣泛重視。 肝細(xì)胞功能檢測(cè)肝細(xì)胞功能檢測(cè)以往傳統(tǒng)的肝硬化分級(jí)是靠多個(gè)指標(biāo)的累加計(jì)分來(lái)完成，因?yàn)闆](méi)有任何一項(xiàng)可作為金標(biāo)準(zhǔn)來(lái)單獨(dú)衡量肝細(xì)胞功能,13C 肝功能呼氣試驗(yàn)可以說(shuō)是一個(gè)肝功能測(cè)定的新的里程碑，除了對(duì)內(nèi)科診斷及診療提供精

3、確可靠的數(shù)據(jù)外,目前西歐的兩個(gè)最大的肝臟移植中心已將IRIS 的13C 呼氣試驗(yàn)結(jié)果作為其判定肝細(xì)胞功能的金標(biāo)準(zhǔn):是否對(duì)患者實(shí)施肝移植，何時(shí)進(jìn)行移植，移植前后對(duì)比觀察，移植后肝細(xì)胞存活狀況及排異反應(yīng)的程度，及抗排異反應(yīng)的用藥量調(diào)整等等，都是依照13C 呼氣試驗(yàn)檢查結(jié)果而進(jìn)行。IRIS 已成為他們最得心應(yīng)手的工具。 呼氣試驗(yàn)測(cè)肝貯備原理 口服13C-Methacetin (美沙西啶，乙酰對(duì)甲氧基苯胺)經(jīng)腸道吸收后，隨血液轉(zhuǎn)運(yùn)至肝臟。在肝臟微粒體中混合功能氧化酶系統(tǒng)作用下，氧化脫甲基，生成13CO2， 13CO2隨血循環(huán)經(jīng)肺部由呼氣排除。收集120min內(nèi)9個(gè)時(shí)間內(nèi)收集呼出氣體，利用13C呼氣質(zhì)譜

4、儀測(cè)定呼出的13CO2的速度和量，并分析DOB、MV、CUM曲線及CUM120數(shù)值，即可精確反映肝細(xì)胞的儲(chǔ)備功能。該儀器用計(jì)算機(jī)全自動(dòng)控制。操作者只需將樣本放入全自動(dòng)進(jìn)樣器（每次可放入40個(gè)樣本），自動(dòng)進(jìn)樣器依次將樣本管送入取樣位置。然后取樣針頭自動(dòng)將樣本通過(guò)一八通閥送入色譜儀。在色譜儀中將CO2 與其他氣體（例如：O2 ，N2等）分離。被分離的CO2在水份分離器中被除去水份，經(jīng)開口分流器送入質(zhì)譜儀。1313C C呼氣質(zhì)譜儀呼氣質(zhì)譜儀 OH313C-O- -NH-C HOH213C-O-R CH3 H-O-R +Methacetin 在肝臟的氧化去甲基化過(guò)程C O2+H2O加O2加O檢測(cè)過(guò)程1

5、. 采集“零時(shí)”呼氣標(biāo)本2. 口服試劑: 1.0mg/kg體重3. 采集不同時(shí)間段呼氣標(biāo)本 檢測(cè)時(shí)間：分別于服藥后10、20、30、45、 60、 90、120、150、180分鐘采集呼氣標(biāo)本。 4. 填寫標(biāo)簽，送檢上機(jī)。 結(jié)果表示（一）（一）DOBDOB曲線：曲線：正常情況下，曲線的波峰應(yīng)在20分 鐘以前出現(xiàn)，曲線峰值不低于15（二）二）代謝速率曲線代謝速率曲線(Metabolisation Velocity Curve(Metabolisation Velocity Curve， MVMV) ) 正常情況下，曲線的波峰應(yīng)在20分鐘以前出現(xiàn)；曲線峰值不低于20%曲線上每一點(diǎn)的速率單位為Dos

6、e/h(%), 即在某一時(shí)刻對(duì) 13CO2 的呼出速率。具體表示為某一時(shí)刻呼出的 13CO2 的豐度占全部應(yīng)呼出量的13CO2豐度的百分比。它是根據(jù)每一患者的身高、體重計(jì)算其體表面積和CO2排出量，并在此基礎(chǔ)上依據(jù)服入體內(nèi)的底物的質(zhì)量、分子量及原子價(jià)，以及13C/12C的PDB常數(shù)等計(jì)算得出的。（三）（三）累積豐度曲線累積豐度曲線(Cumulated Dose Curve(Cumulated Dose Curve， CDCD) )正常情況下，CD曲線大部分或全部在正常界值內(nèi)它是指在某一時(shí)刻前累積呼出的13CO2的豐度總和, 單位表示為%, 即在某一時(shí)刻前呼出了百分之多少的應(yīng)呼出的13CO2 。

7、它實(shí)際上即是某一時(shí)刻前代謝速率曲線下面的面積。對(duì)此面積進(jìn)行微積分處理即得到該面積的精確數(shù)值, 它代表著各個(gè)時(shí)刻的累積豐度。正常值（正常值（2727） 患者患者3030分鐘前代謝速率峰值分鐘前代謝速率峰值1 1）MVMVmax30max30 = 正常值（正常值（1212）2 2）CUMCUM30 30 = = 患者患者3030分鐘分鐘1313COCO2 2累積呼出豐度累積呼出豐度正常值（正常值（2828）3 3）CUMCUM120 120 = = 患者患者120120分鐘分鐘1313COCO2 2累積呼出豐度累積呼出豐度（四）（四）MVMVmax30max30、CUMCUM3030（反應(yīng)肝儲(chǔ)備（

8、反應(yīng)肝儲(chǔ)備） 以及以及 CUMCUM120120 值值（反應(yīng)肝代償功能）：（反應(yīng)肝代償功能）：正常情況下應(yīng)在0.81.2范圍內(nèi)。 肝功能量化分級(jí) 肝功能亢進(jìn)肝功能亢進(jìn)( (誘導(dǎo)誘導(dǎo)) 1.20) 1.20 正常正常 0.800.801.201.20 病理性肝損傷及肝纖維化病理性肝損傷及肝纖維化 0.500.500.800.80 Child Pugh A 0.25 Child Pugh A 0.250.500.50 Child Pugh B 0.15 Child Pugh B 0.150.250.25 Child Pugh C 0.15 Child Pugh C 0.15肝功能量化分級(jí)病例分析：

9、病例分析：長(zhǎng)期酗酒，患酒精性肝硬化的患者長(zhǎng)期酗酒，患酒精性肝硬化的患者 DOB曲線：峰值在40分鐘出現(xiàn)，最大峰值為7.5,說(shuō)明肝功能顯著減退。MVmax30 參數(shù)低于正常值較多，試驗(yàn)顯示出其肝細(xì)胞儲(chǔ)備僅余30%40%。0102030405060010203040506080100120Test time minDose/h %MVmax30 =0.39CUM30及CUM120參數(shù)低于正常值較多，試驗(yàn)顯示出其肝細(xì)胞經(jīng)過(guò)代償肝功能僅能達(dá)到正常人的50， 歸入child Pugh A級(jí)。0510152025303540010203040506080100120Test time minCum.Dos

10、is %CUM120=0.52CUM30 =0.35 呼氣試驗(yàn)與傳統(tǒng)肝功能檢測(cè)的區(qū)別呼氣試驗(yàn)與傳統(tǒng)肝功能檢測(cè)的區(qū)別1.即時(shí)性 傳統(tǒng)的生化指標(biāo)反映的是患者一定時(shí)期內(nèi)的平均肝細(xì)胞功能狀況，并不能準(zhǔn)確、全面地反映抽血取樣當(dāng)時(shí)的肝功能。而呼氣試驗(yàn)則能在檢測(cè)的當(dāng)時(shí)給出當(dāng)日肝細(xì)胞貯備及代償狀況的功能曲線，使診斷一目了然。2. 準(zhǔn)確性 生化指標(biāo)僅反映一定時(shí)期內(nèi)肝功能的綜合“表現(xiàn)型”。而13C呼氣試驗(yàn)則能夠得到實(shí)時(shí)的完全量化的數(shù)據(jù)，有助于肝臟功能的臨床分期，對(duì)臨床治療和判斷預(yù)后具有很好的指導(dǎo)意義3.早期診斷 13C呼氣試驗(yàn)?zāi)茉谄渌喂δ苌笜?biāo)尚無(wú)變化的早期檢測(cè)到肝細(xì)胞功能的細(xì)微變化。4.精確性或重復(fù)性 13

11、C呼氣試驗(yàn)可精確至萬(wàn)分級(jí)水平，而傳統(tǒng)生化指標(biāo)的精確性或重復(fù)性為十分級(jí)或百分級(jí)水平。兩者懸殊很大。 5.無(wú)創(chuàng)性及方便性肝細(xì)胞呼氣試驗(yàn)則能在檢測(cè)的當(dāng)時(shí)給出當(dāng)日肝細(xì)胞貯備及代償狀況的功能曲線，使診斷一目了然，便于臨床醫(yī)師隨時(shí)地掌握病人動(dòng)態(tài)的肝細(xì)胞狀況，從而判斷病情并制定合理的診斷方案。13C呼氣試驗(yàn)則能夠得到實(shí)時(shí)的完全量化的數(shù)據(jù)，并直接描記當(dāng)時(shí)的肝細(xì)胞動(dòng)力曲線，從而得到對(duì)肝細(xì)胞功能整體水平評(píng)估的“肝細(xì)胞數(shù)量及功能型”. 由于13C是自然存在的穩(wěn)定性同位素, 無(wú)任何的放射性, 就像大氣中的16O的同位素17O、18O以及14N的同位素15N一樣, 對(duì)人體無(wú)絲毫傷害。因此, 較那些需抽血進(jìn)行的各種生化檢

12、查，13C肝細(xì)胞功能呼氣試驗(yàn)不但無(wú)創(chuàng), 且簡(jiǎn)單、方便。結(jié)論13C-Hiolein脂肪酸呼氣試驗(yàn)檢測(cè)胰腺外分泌功能的臨床應(yīng)用 前言前言 胰淀粉酶、胰脂酶、糜蛋白酶是胰腺分泌的消化酶，它們?cè)谑澄锵者^(guò)程中起著非常重要的作用，其活性高低代表著胰腺的外分泌功能。慢性胰腺炎的病程進(jìn)展可導(dǎo)致胰腺外分泌功能的異常,目前許多胰腺外分泌功能檢測(cè)的試驗(yàn),如促胰泌素試驗(yàn)、胰功肽試驗(yàn)(BT-PABA)試驗(yàn)及糞糜蛋白酶試驗(yàn)等,由于侵入性,操作復(fù)雜或穩(wěn)定性差等因素,在國(guó)內(nèi)外多用于研究,臨床使用受到限制 近年來(lái)應(yīng)用13C-Hiolein呼氣試驗(yàn)檢測(cè)胰腺外分泌功能越來(lái)越受到廣泛重視,它是用核素碳標(biāo)記在脂肪酸的碳原子上，能

13、與試驗(yàn)餐牢固結(jié)合，不在胃內(nèi)游離或吸收，只有當(dāng)其排入十二指腸后才開始被吸收,通過(guò)十二指腸中脂肪酶氧化水解,膽汁的乳化作用和正常腸黏膜的吸收,最終從呼氣排出CO2,未被吸收的脂肪酸經(jīng)糞便排出。定量評(píng)估慢性胰腺炎和膽囊纖維化時(shí)胰腺外分泌功能的損害，它較之十二指腸插管檢查安全、無(wú)痛苦，對(duì)影像學(xué)診斷是一項(xiàng)很好的補(bǔ)充。呼氣試驗(yàn)測(cè)呼氣試驗(yàn)測(cè)胰腺外分泌功能胰腺外分泌功能原理原理 樣品收集樣品收集 隔夜空腹 收集零時(shí)呼氣標(biāo)本 服用試餐（100mg脂肪酸100ml水100g面包 50g煎蛋或火腿腸） 收集不同時(shí)間段呼氣標(biāo)本時(shí)間：于安靜坐位狀態(tài) 下收集0、6小時(shí)、12小時(shí)呼氣標(biāo)本。 送檢，上機(jī) 呼出氣體的即刻13,是經(jīng)與PDB(pee dee belemnite)國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)比較后得出的,不同時(shí)相的13值減去0時(shí)13值,即為該時(shí)刻13豐度變化結(jié)果判斷結(jié)果判斷v 無(wú)創(chuàng)傷性v 簡(jiǎn)便可行,易被患者和醫(yī)生所接受v 除外肝膽及腸道病變,對(duì)胰腺外分泌功能相對(duì)特 異準(zhǔn)確 v 無(wú)放射性近年來(lái)13C穩(wěn)定性核素的廣泛應(yīng)用,可避 免14C等核素對(duì)環(huán)境的污染。適用于兒童、孕婦 及排卵期婦女及危重病人。 但也有缺點(diǎn):v對(duì)CP診斷敏感性不足者:胰腺有外分泌不足者,13CO2才出現(xiàn)異常v需有一定的測(cè)試儀器1313C- C- Hiole