1、western 轉(zhuǎn)膜條件蛋白來源：總蛋白蛋白名稱（可保密）：一些轉(zhuǎn)錄因子蛋白分子量：4070KDWB 用膜類型、孔徑：轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒流）：濕轉(zhuǎn)恒流400mA轉(zhuǎn)膜時(shí)間：6090minPS. 其實(shí)吧，以我的經(jīng)驗(yàn)來看，除非目的蛋白特別小，或者特別大， 不然轉(zhuǎn)膜時(shí)間真的不是那么重要，曾經(jīng)因?yàn)槭д`，轉(zhuǎn)了 15min就拆下來了，但從麗春紅染色來看，跟平常實(shí)驗(yàn)也沒有太大的區(qū)別。蛋白來源：內(nèi)皮細(xì)胞總蛋白蛋白名稱（可保密）：occludin&AKT蛋白分子量：65KD&56KDWB 用膜類型、孔徑：轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒流）：濕轉(zhuǎn)恒壓100V轉(zhuǎn)膜時(shí)間：6070min設(shè)備名字是“ Bio-Radm

2、ini” 。蛋白來源：乳鼠心肌細(xì)胞和成年鼠心肌組織總蛋白和核蛋白蛋白名稱（可保密）：保密蛋白分子量：65KD&55KDWB 用膜類型、孔徑：PVDF （預(yù)先用甲醇處理）轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒流）：半干轉(zhuǎn)恒壓12V轉(zhuǎn)膜時(shí)間：30-40min設(shè)備： “ Bio-Radmini”建議：最開始做過濕轉(zhuǎn)（過夜的那種），太費(fèi)事費(fèi)時(shí)，效果也不如半干轉(zhuǎn)。蛋白來源：293T 細(xì)胞蛋白名稱（可保密）：蛋白分子量：95KD&35KDWB 用膜類型、孔徑：PVDF轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒流）：濕轉(zhuǎn)恒壓90V-110V ，控制電流不要超過 300mA 。轉(zhuǎn)膜時(shí)間：70min蛋白來源：腫瘤手術(shù)標(biāo)本蛋白名稱（可保密）

3、：轉(zhuǎn)錄因子蛋白分子量：33KDaWB 用膜類型、孔徑：PVDF 膜轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒流）：350mA 恒流轉(zhuǎn)膜時(shí)間：150min轉(zhuǎn)膜設(shè)備：濕轉(zhuǎn)Bio-Rad說明：相同條件曾用于數(shù)個(gè)30-70KDa 的蛋白，都能成功轉(zhuǎn)上，不過沒有試縮短時(shí)間效果如何；實(shí)驗(yàn)時(shí)沒為轉(zhuǎn)膜條件苦惱，倒是電泳時(shí)膠的濃度及時(shí)間根據(jù)不同分子量而有區(qū)別。蛋白來源：成纖維細(xì)胞蛋白名稱（可保密）：smad3蛋白分子量：54KDaWB 用膜類型、孔徑：PVDF 膜轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒流）：350mA 恒流轉(zhuǎn)膜時(shí)間：150min轉(zhuǎn)膜設(shè)備：濕轉(zhuǎn)Bio-Rad蛋白來源：胰腺癌細(xì)胞蛋白名稱（可保密）：蛋白分子量：16KDaand42KDaWB

4、用膜類型、孔徑：PVDF 膜轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒流）：120V 恒壓轉(zhuǎn)膜時(shí)間：90min轉(zhuǎn)膜設(shè)備：濕轉(zhuǎn)Bio-Rad蛋白來源：大鼠血管平滑肌細(xì)胞蛋白名稱（可保密）：保密蛋白分子量：72KD ， 42KD 和 22KD轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒流）：濕轉(zhuǎn)，恒流一張膜，兩張膜。轉(zhuǎn)膜時(shí)間：90min設(shè)備： “ Bio-Radmini”建議： 轉(zhuǎn)膜緩沖液最多用3 次， 最好現(xiàn)用現(xiàn)配，我們用的沒有加SDS ， 轉(zhuǎn)的時(shí)候最好能用冰塊一類的東西降一下溫，這樣轉(zhuǎn)的效果要好一些，轉(zhuǎn)的時(shí)候一定要把三明治每層之間的氣泡除去，同時(shí)使濾紙大于膜，膜大于膠，以免燒壞電極。蛋白來源：大鼠PBMC蛋白名稱（可保密）：保密蛋白分子量：5

5、5KDWB 用膜類型、孔徑：的PVDF 膜轉(zhuǎn)膜方式（恒流）：濕轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)膜時(shí)間：60-90min設(shè)備： “ Bio-Radmini”建議： 轉(zhuǎn)膜液用過兩三次之后轉(zhuǎn)膜效果就很差了其它按照常規(guī)就好了其實(shí)的膜一般不怕轉(zhuǎn)過頭以我們的經(jīng)驗(yàn)，轉(zhuǎn)膜時(shí)間、電壓其實(shí)也有很大范圍的調(diào)整，并不是非要固定于哪一個(gè)最合適，曾經(jīng)做過一張膜轉(zhuǎn)，17KD 的和 170KD 的， 按照 170KD 的條件， 17KD的轉(zhuǎn)膜也很好的。蛋白來源：人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系蛋白名稱（可保密）：保密蛋白分子量：大于250kDWB 用膜類型、孔徑：milliporePVDF 膜轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒流）：濕轉(zhuǎn)，恒流。轉(zhuǎn)膜時(shí)間：180min設(shè)備： “ B

6、io-Rad”建議：電轉(zhuǎn)保持電壓在70V 以上，保持低溫，如果電壓低過70就需要換緩沖液了。蛋白來源：白血病細(xì)胞蛋白名稱（可保密）：保密蛋白分子量：28KDWB 用膜類型、孔徑：的NC 膜轉(zhuǎn)膜方式（恒流）：濕轉(zhuǎn)，90min ，設(shè)備： “ Bio-Rad”建議：海綿厚度要合適，一次轉(zhuǎn)磨用的海綿太薄，導(dǎo)致三明治沒夾緊，轉(zhuǎn)膜后拿出來一看，marker 都變得七扭八歪。但是有前輩說墊的海綿太厚可能將膠壓斷，沒經(jīng)歷過，不知道是不是會(huì)有這種情況。蛋白來源：腫瘤細(xì)胞蛋白名稱（可保密）：磷酸化蛋白蛋白分子量：10-200KDaWB 用膜類型、孔徑：milliporePVDF 膜轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒流）：120v

7、 恒壓轉(zhuǎn)膜時(shí)間：120min建議：轉(zhuǎn)膜緩沖液只用2 次，基本都轉(zhuǎn)上，5%BSA 封閉，減少 背景。蛋白來源：胰腺B細(xì)胞蛋白名稱（可保密）：*蛋白分子量：90-130KDaWB 用膜類型、孔徑：PVDF 膜轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒流）：250mA 恒流轉(zhuǎn)膜時(shí)間：150min轉(zhuǎn)膜設(shè)備：濕轉(zhuǎn)蛋白來源：原核表達(dá)蛋白名稱（可保密）：保密蛋白分子量：38KDWB 用膜類型、孔徑：轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒流）：濕轉(zhuǎn)恒壓：100V轉(zhuǎn)膜時(shí)間：120min蛋白來源：心臟蛋白名稱（可保密）：蛋白分子量：220kDa ， 130kDa ， 70kDa， 41kDaWB 用膜類型、孔徑：PVDF轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒流）：恒壓轉(zhuǎn)膜時(shí)間

8、：70v120min ， 180min ， 5-6h轉(zhuǎn)膜設(shè)備：伯樂濕轉(zhuǎn)建議改進(jìn)方向（可選）：40kDa 一下， 70v， 60-90min 足夠，40-70kDa90-120min 即可。70-120kDa ， 70v， 120-180min 足夠， 120-180kDa ， 180-240min ，180kDa 以上建議6h。蛋白來源：卵巢癌細(xì)胞膜蛋白蛋白名稱（可保密）：蛋白分子量：53KDWB 用膜類型、孔徑：PVDF 膜轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒流）：恒壓轉(zhuǎn)膜時(shí)間：80V100min轉(zhuǎn)膜設(shè)備：濕轉(zhuǎn)Bio-Rad蛋白來源：人宮頸癌HELA 細(xì)胞總蛋白蛋白名稱（可保密）：伊actin蛋白分子量：42

9、WB 用膜類型、孔徑：PVDF 膜轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒流）：恒壓轉(zhuǎn)膜時(shí)間：504h轉(zhuǎn)膜設(shè)備：濕轉(zhuǎn)Bio-Rad蛋白來源：腦組織蛋白名稱（可保密）：蛋白分子量：16KD 、 27KD 、 32KD 、 42KDWB 用膜類型、孔徑：轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒流）：半干轉(zhuǎn)恒流1mA/cm 2或 2mA/cm 2轉(zhuǎn)膜時(shí)間：不定轉(zhuǎn)膜設(shè)備：北京六一儀器建議：我共做了六個(gè)蛋白，所以總在想節(jié)約時(shí)間的方式。在預(yù)試時(shí)我會(huì)觀察電壓數(shù)與轉(zhuǎn)膜效率的關(guān)系，所以我不會(huì)按時(shí)間來定何時(shí)轉(zhuǎn)完，而是按電壓來定。通過染膠來確定電壓數(shù)與轉(zhuǎn)移蛋白分子量上限的關(guān)系。這樣有的5 分鐘就轉(zhuǎn)完了，不用多浪費(fèi)時(shí)間。 并且六一的半干轉(zhuǎn)膜儀隨著使用次數(shù)的增多

10、，效率也會(huì)下降，所以時(shí)間和轉(zhuǎn)膜效率（尤其是使用后期）的關(guān)系并不穩(wěn)定，單純依靠時(shí)間有時(shí)會(huì)有問題。蛋白來源：CHOcell蛋白名稱（可保密）：酶原蛋白分子量：40KDWB 用膜類型、孔徑：的PVDF 膜（ Biorad ）轉(zhuǎn)膜方式（恒壓）：100V ，濕轉(zhuǎn)，轉(zhuǎn)膜時(shí)間：60min 。設(shè)備： Tanon （上海天能）建議：1 . 轉(zhuǎn)膜液現(xiàn)用現(xiàn)配，用完倒掉。2 .轉(zhuǎn)膜時(shí)間，電壓可以適當(dāng)調(diào)整。分子量大或者小一些的蛋白，采用此條件一樣轉(zhuǎn)膜效率很高。蛋白來源：Hepg2蛋白分子量：170kdWB 用膜類型、孔徑：轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒流）：24V轉(zhuǎn)膜時(shí)間：2 個(gè)半小時(shí)轉(zhuǎn)膜設(shè)備：伯樂半干轉(zhuǎn)蛋白來源：肝癌細(xì)胞蛋白名稱

11、：HIF-1a蛋白分子量：120kDWB 用膜類型、孔徑：NC 膜轉(zhuǎn)膜方式（恒壓）：80 伏，濕轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)膜時(shí)間：150 分鐘設(shè)備： “ Bio-Radmini”建議：濕轉(zhuǎn)，轉(zhuǎn)膜液特別重要，否則會(huì)導(dǎo)致電壓或者電流不穩(wěn)影響轉(zhuǎn)膜條帶。轉(zhuǎn)膜均現(xiàn)配先用，不重復(fù)利用。轉(zhuǎn)膜時(shí)間一般是150 分鐘， 80 伏恒壓。經(jīng)李春紅染色，靠近蛋白膠的一側(cè)膜上蛋白染色深，膜另外一面染色淺，說明蛋白未轉(zhuǎn)過。該濕轉(zhuǎn)條件自己做過的蛋白分子量范圍：170-36kD 。蛋白來源：心肌細(xì)胞總和膜蛋白名稱（可保密）：蛋白分子量：128KD ， 100 ， 60， 55， 43KDWB 用膜類型、孔徑：NC 膜轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒流）：恒壓轉(zhuǎn)

12、膜時(shí)間：70V200min轉(zhuǎn)膜設(shè)備：濕轉(zhuǎn)Bio-Rad建議：轉(zhuǎn)膜液最好現(xiàn)配現(xiàn)現(xiàn)用，或配成母液，最好不重復(fù)使用，70V 電壓下，電流約154mA 。甲醇可以加到150ml 。對(duì)大分子量如 200KD 轉(zhuǎn)膜時(shí)間延長6-8h 。蛋白來源：肺臟蛋白名稱（可保密）：ICAM-1蛋白分子量：85110KDWB 用膜類型、孔徑：轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒流）：濕轉(zhuǎn)恒流300mA轉(zhuǎn)膜時(shí)間：120min設(shè)備名字Bio-Radmini一抗用的santacruz1mL 包裝的。比例調(diào)整到1 ： 800 做出很好的條帶。效價(jià)會(huì)一直降低的。去年做的這個(gè)指標(biāo)，今年夏天做就不行了。蛋白來源：成纖維細(xì)胞蛋白名稱（可保密）：蛋白分子量

13、：16KDaWB 用膜類型、孔徑：膜轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒流）：恒流轉(zhuǎn)膜時(shí)間：65min轉(zhuǎn)膜設(shè)備：濕轉(zhuǎn)Bio-Rad蛋白來源：成纖維細(xì)胞蛋白名稱（可保密）：蛋白分子量：28KDaWB 用膜類型、孔徑：膜轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒流）：恒流轉(zhuǎn)膜時(shí)間：60min轉(zhuǎn)膜設(shè)備：濕轉(zhuǎn)Bio-Rad蛋白來源：人腫瘤細(xì)胞蛋白名稱（可保密）：保密蛋白分子量：80KDWB 用膜類型、孔徑：膜轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒流）：半干轉(zhuǎn)移系統(tǒng)恒流，勿超過cm 2，同時(shí)轉(zhuǎn)多張膜電流需累加（串聯(lián)）轉(zhuǎn)膜時(shí)間：60-90min設(shè)備： Bio-Rad其實(shí)有些東西并不是非常嚴(yán)格的，要轉(zhuǎn)移的目的蛋白分子量小，那么轉(zhuǎn)移的時(shí)間就短一些，反之，則長一點(diǎn)；蛋白量

14、充足，可以多轉(zhuǎn)一會(huì)，蛋白量較少，則要少轉(zhuǎn)一下，免得蛋白穿膜而過到了濾紙上而前功盡棄。蛋白來源：人和鼠肝癌細(xì)胞總蛋白、胞漿、胞核蛋白蛋白名稱（可保密）：*蛋白分子量：17-116kdWB 用膜類型、孔徑：PVDF 膜轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒流）：恒流200mA轉(zhuǎn)膜時(shí)間：3h轉(zhuǎn)膜設(shè)備：濕轉(zhuǎn)北京六一24Dmini蛋白來源：COCOS7293T蛋白名稱（可保密）：保密蛋白分子量：482518KDWB 用膜類型、孔徑：膜轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒流）：濕轉(zhuǎn)90V 電流約為230-280mA 之間。兩張膜串聯(lián)疊加。轉(zhuǎn)膜時(shí)間：40min設(shè)備： Bio-Rad 法碼西亞蛋白來源：人腫瘤細(xì)胞蛋白名稱（可保密）：磷酸化蛋白蛋白

15、分子量：30-60KDaWB 用膜類型、孔徑：pallNC 膜轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒流）：恒流平方厘米膜轉(zhuǎn)膜時(shí)間：60-90min轉(zhuǎn)膜設(shè)備:北京六一半干轉(zhuǎn)建議： 轉(zhuǎn)膜緩沖液用新鮮配制的，可先配成2 倍的母液，轉(zhuǎn)膜液的多少會(huì)影響電轉(zhuǎn)的效率，一般將吸水紙潤濕即可，不要和膜一起浸泡，這樣效果很好。蛋白來源：人肝癌腫瘤細(xì)胞蛋白名稱（可保密）：notch蛋白分子量：60-120KDaWB 用膜類型、孔徑：pallNC 膜轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒流）：恒流轉(zhuǎn)膜時(shí)間：-20 度冰柜 120min轉(zhuǎn)膜設(shè)備:濕轉(zhuǎn)Bio-Rad建議： 轉(zhuǎn)膜緩沖液用新鮮配制的，可先配成10 倍或 5 倍的母液，保持低溫是轉(zhuǎn)膜效果的一個(gè)保證，

16、這樣效果很好。蛋白來源：膠質(zhì)瘤細(xì)胞總蛋白和核蛋白蛋白名稱（可保密）：蛋白分子量：18KDa 、 36KDa 、 55KDa 、 98KDaWB 用膜類型、孔徑：NC 膜 PALL轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒流）：恒流轉(zhuǎn)膜時(shí)間：60min轉(zhuǎn)膜設(shè)備：濕轉(zhuǎn)Bio-Radmini轉(zhuǎn)緩液的配制有點(diǎn)講究。如果蛋白大于一百多，一般加入SDS ，時(shí)間延長結(jié)果會(huì)更好些。由于，目前試驗(yàn)的蛋白就都不大，所以，我們都采用不加SDS的轉(zhuǎn)緩液，跑出來的條帶也很整齊、干凈。蛋白來源大腸癌205蛋白名稱（可保密）：保密蛋白分子量：92kd ， 43kdWB 用膜類型、孔徑：轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒流）：恒壓轉(zhuǎn)膜時(shí)間：90min轉(zhuǎn)膜設(shè)備：濕轉(zhuǎn)

17、，天能。蛋白來源：大鼠腦組織蛋白名稱（可保密）：BDNF （ 28KDa ）、 Bactin （ 42KDa ）、LaminB （ 72KDa ），以及磷酸化蛋白（保密43KDa ）WB 用膜類型、孔徑：PVDF （）膜轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒流）：300mA 恒流轉(zhuǎn)膜時(shí)間：60min轉(zhuǎn)膜設(shè)備：濕轉(zhuǎn)Bio-RadMini轉(zhuǎn)膜緩沖液：25甲醛覺得這個(gè)濃度的甲醛可以有效降低電轉(zhuǎn)的熱量，而且使膜對(duì)蛋白的吸附效果較好，Marker 轉(zhuǎn)到膜上很鮮艷。用立春紅染色效果也很好。蛋白來源：表達(dá)產(chǎn)物蛋白名稱（可保密）：蛋白分子量：29KDaWB 用膜類型、孔徑：PVDF轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒流）：恒流轉(zhuǎn)膜時(shí)間：80min

18、轉(zhuǎn)膜設(shè)備:濕轉(zhuǎn)Bio-Rad蛋白來源：celllysate,culturemedium蛋白名稱（可保密）：蛋白分子量：15-50kDWB 用膜類型、孔徑：NC， PVDF ，轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒流）：恒壓，semi-dry轉(zhuǎn)膜時(shí)間：about2hisokiftheproteinissmallandthevoltagecankeep100V ， ifnotincreaseto3-4h 。轉(zhuǎn)膜設(shè)備：Bio-Rad蛋白來源：肺臟、肝臟等。蛋白名稱（可保密）：actin蛋白分子量：43kDWB 用膜類型、孔徑：NC 膜轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒流）：濕轉(zhuǎn)恒流200mA轉(zhuǎn)膜時(shí)間：4560min設(shè)備名字Bio-Ra

19、dmini用的 santacruz 分裝和整裝的都可以。效價(jià)一般1 ： 1000-1 ： 3000左右，可穩(wěn)定較長一段時(shí)間。蛋白來源肺臟蛋白名稱（可保密）：保密蛋白分子量：19kd,35kdWB 用膜類型、孔徑：轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒流）：恒流250轉(zhuǎn)膜時(shí)間：150min轉(zhuǎn)膜設(shè)備：濕轉(zhuǎn)Bio-Radmini蛋白來源：大鼠血管蛋白名稱（可保密）：保密蛋白分子量：140kdWB 用膜類型、孔徑：轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒流）：恒流，200mA轉(zhuǎn)膜時(shí)間：210min轉(zhuǎn)膜設(shè)備:濕轉(zhuǎn),北京六一蛋白來源：心肌蛋白名稱（可保密）：蛋白分子量：90kDa ， 70kDa,WB 用膜類型、孔徑：NC轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒流）：

20、恒壓轉(zhuǎn)膜時(shí)間：70v240min ， 120min ， 60min轉(zhuǎn)膜設(shè)備：伯樂濕轉(zhuǎn)蛋白來源：腦蛋白名稱（可保密）：保密蛋白分子量：16KD60KDWB 用膜類型、孔徑：16 的用的 PVDF ， 60 的用的 NC轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒流）：20V轉(zhuǎn)膜時(shí)間：16 的 30min ， 60 的 90min轉(zhuǎn)膜設(shè)備：Bio-Rad 半干蛋白來源：子宮內(nèi)膜癌組織蛋白名稱（可保密）：蛋白分子量：WB 用膜類型、孔徑：NC 膜轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒流）：恒流400mA轉(zhuǎn)膜時(shí)間：90min轉(zhuǎn)膜設(shè)備：濕轉(zhuǎn)Bio-Rad蛋白來源：真核表達(dá)蛋白名稱（可保密）：（多種，30 個(gè)以上）蛋白分子量：40-200kDWB 用

21、膜類型、孔徑：PVDF轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒流）：恒壓100V （電流在280mA至350mA之間）轉(zhuǎn)膜時(shí)間：60min （ M<100kD ） ,60-100min（100kD<M<200kD）轉(zhuǎn)膜設(shè)備：濕轉(zhuǎn)蛋白來源：大鼠腎臟蛋白名稱（可保密）：保密蛋白分子量：130kDWB 用膜類型、孔徑：膜PALL轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒流）：濕轉(zhuǎn)恒流350mA轉(zhuǎn)膜時(shí)間：120min設(shè)備名字Bio-Radmini一抗用的sigma 羊抗大鼠，包裝的，打折后價(jià)格3000 多，有些貴哦。比例調(diào)整到1 ： 1500 左右條帶可，用 BSA 封閉。 但是背景稍高。蛋白來源：腦組織蛋白名稱（可保密）：蛋白

22、分子量：38KDaWB 用膜類型、孔徑：PVDF 膜，轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒流）：80v 恒壓轉(zhuǎn)膜時(shí)間：180min轉(zhuǎn)膜設(shè)備：濕轉(zhuǎn)Bio-Radmini蛋白來源：真核表達(dá)蛋白名稱（可保密）：蛋白分子量：約35kD （雙亞基）WB 用膜類型、孔徑：轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒流）：恒流200mA轉(zhuǎn)膜時(shí)間：60min轉(zhuǎn)膜設(shè)備：濕轉(zhuǎn)Bio-rad, 天能，六一轉(zhuǎn)膜時(shí)間其實(shí)不需要那么長的，轉(zhuǎn)膜沒轉(zhuǎn)上一般原因不在這里，可能是轉(zhuǎn)膜液的原因：有些蛋白SDS 可能影響其與膜的結(jié)合，還原型電泳因巰基乙醇的原因也可能導(dǎo)致后面的抗體不結(jié)合（這是我最近的經(jīng)驗(yàn)教訓(xùn)），還有一抗的選擇很重要，一定要選識(shí)別線性表位的抗體，才能用于做WB

23、。蛋白來源：細(xì)菌蛋白蛋白名稱（可保密）：全部的可溶性蛋白蛋白分子量：11-170KDWB 用膜類型、孔徑：轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒流）：濕轉(zhuǎn)恒流300mA轉(zhuǎn)膜時(shí)間：80min蛋白來源：骨肉瘤細(xì)胞蛋白名稱（可保密）：蛋白分子量：72kDaWB 用膜類型、孔徑：PVDF 膜轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒流）：半干轉(zhuǎn)恒流200mA轉(zhuǎn)膜時(shí)間：20-30min轉(zhuǎn)膜設(shè)備：Bio-Rad 型號(hào)忘了，就是有4 個(gè)插孔的電泳儀。建議改進(jìn)方向：低溫很重要，新鮮的電轉(zhuǎn)液也很重要。蛋白來源：骨肉瘤CELLLINE蛋白名稱（可保密）：Betaactin蛋白分子量：42kDaWB 用膜類型、孔徑：（Invitrogen）轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒

24、流）：濕轉(zhuǎn)，恒壓22v轉(zhuǎn)膜時(shí)間：90min轉(zhuǎn)膜設(shè)備：X-cellSureLockMini-cell（Invitrogen）建議改進(jìn)方向：轉(zhuǎn)膜過程冰水浴，保持低溫，TransferBuffer 重復(fù)使用。蛋白來源：腎瘤細(xì)胞蛋白分子量：39kDaWB 用膜類型、孔徑：（Invitrogen）轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒流）：濕轉(zhuǎn)恒壓100v轉(zhuǎn)膜時(shí)間：50min蛋白來源：MCF7蛋白名稱（可保密）：蛋白分子量：70kDaWB 用膜類型、孔徑：PVDF 膜（ GE ）轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒流）：濕轉(zhuǎn)100 伏轉(zhuǎn)膜時(shí)間：60min轉(zhuǎn)膜設(shè)備：伯樂小轉(zhuǎn)膜儀蛋白來源：pichia 分泌表達(dá)蛋白名稱（可保密）：細(xì)胞因子等蛋白

25、分子量：17 到 30kDaWB 用膜類型、孔徑：轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒流）：濕轉(zhuǎn)恒壓：100V轉(zhuǎn)膜時(shí)間：60min這個(gè)條件除了100KDa 的預(yù)染 maker 轉(zhuǎn)的不好，剩下的條帶都非常清晰。正向前面ycwzq 說的，感覺時(shí)間不是很重要，只要 蛋白別太小或太大，在一個(gè)比較寬的時(shí)間和電壓范圍都能轉(zhuǎn)上。當(dāng)然這些還有一個(gè)重要的影響因素就是所用的蛋白轉(zhuǎn)印緩沖液。 ？所以建議把自己用的轉(zhuǎn)印緩沖液的配方也貼上，便于分析交流。我先說我的吧，是大師兄師姐的配方，我用了感覺還不錯(cuò)，但是100KDa 以上的轉(zhuǎn)的不好。蛋白轉(zhuǎn)印緩沖液：Tris堿，甘氨酸9g,甲醇200ml ,加水定容至1000ml 。蛋白來源：大鼠坐

26、骨神經(jīng)蛋白名稱（可保密）：蛋白分子量：30kDaWB 用膜類型、孔徑：PVDF 膜轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒流）：濕轉(zhuǎn)恒流300mA轉(zhuǎn)膜時(shí)間：45min轉(zhuǎn)膜設(shè)備:Bio-Rad蛋白來源：小鼠胚胎成纖維蛋白名稱（可保密）：蛋白分子量：36KDa 、 55KDaWB 用膜類型、孔徑：PVDF 膜轉(zhuǎn)膜時(shí)間：60min轉(zhuǎn)膜設(shè)備:濕轉(zhuǎn)Bio-Radmini墊子變薄時(shí)，可用三層纖維墊，也沒問題。蛋白來源：小鼠前列腺癌細(xì)胞蛋白名稱（可保密）：P53P21RAD51GAPDH蛋白分子量：53KDa、 21KDa 、 37KDa 、 36KDaWB 用膜類型、孔徑：PVDF 膜轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒流）：恒壓110v轉(zhuǎn)膜時(shí)

27、間：60min轉(zhuǎn)膜設(shè)備:濕轉(zhuǎn)Bio-Radmini蛋白來源：HEK293 總蛋白蛋白名稱（可保密）：*蛋白分子量：200KDWB 用膜類型、孔徑：PVDF 膜 （用甲醇預(yù)先處理）轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒流）：恒壓25V轉(zhuǎn)膜時(shí)間：過夜（16-20hours）轉(zhuǎn)膜設(shè)備:bioradmini蛋白來源：人前列腺癌細(xì)胞蛋白名稱（可保密）：*蛋白分子量：40KDWB 用膜類型、孔徑：PVDF 膜 （用甲醇預(yù)先處理）轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒流）：恒壓 20V,限制最高電流。轉(zhuǎn)膜時(shí)間：過夜（16-20hours）轉(zhuǎn)膜設(shè)備：bioradsemi-dry蛋白來源：組織蛋白名稱（可保密）蛋白分子量：42KDaWB 用膜類型、孔

28、徑：PVDF 膜（）轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒流）：350mA 恒流轉(zhuǎn)膜時(shí)間：60-90min轉(zhuǎn)膜設(shè)備：濕轉(zhuǎn)Bio-Rad蛋白來源：蛋白名稱（可保密）：蛋白分子量：4kdWB 用膜類型、孔徑：轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒流）：恒壓15v轉(zhuǎn)膜時(shí)間：O/N轉(zhuǎn)膜設(shè)備:Bio-RadMini 濕轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)膜液的配制：for1Ltransferbuffer ， 200mlMethanol ，。用了 Trcine-gelSDSPage ，效果不錯(cuò)蛋白來源：腎臟蛋白名稱（可保密）：蛋白分子量：23kd轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒流）：恒壓20v轉(zhuǎn)膜時(shí)間：35mins轉(zhuǎn)膜設(shè)備:Bio-Rad 半干蛋白來源：來自MDCK 增殖的流感病毒裂解物蛋

29、白名稱（可保密）：PB1蛋白分子量：96kd （注意，10%SDS-PAGE ，冰上電泳。用預(yù)染 marker 觀察 100kd 的條帶跑到膠的正中間位置時(shí)，才開始轉(zhuǎn)膜，否則轉(zhuǎn)膜效率降低）WB 用膜類型、孔徑：NC 膜，轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒流）：恒壓，100V轉(zhuǎn)膜時(shí)間：2hours轉(zhuǎn)膜設(shè)備:BIO-rad 轉(zhuǎn)膜設(shè)備。其間，準(zhǔn)備一個(gè)冰盒，將電泳槽半埋到冰里。轉(zhuǎn)膜液的配制：（如甲醇的比例和是否加SDS 以及多大質(zhì)量濃度等）：甘氨酸，200ml 甲醇。蛋白來源：腎臟蛋白名稱（可保密）：蛋白分子量：9kdWB 用膜類型、孔徑：轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒流）：恒壓20v轉(zhuǎn)膜時(shí)間：30min轉(zhuǎn)膜設(shè)備:Bio-Rad 半干WB 用膜類型、孔徑：蛋白來源：軟骨細(xì)胞蛋白名稱（可保密）：b-actin蛋白分子量：43kdWB 用膜類型、孔徑：PVDF 膜，轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒流）