1、    【關(guān)鍵詞】  嗎啡Lesion effects of nucleus accumbens and ventral tegmental area on drug priminginduced reactivation of extinguished conditioned place preference in rats【Abstract】 AIM:  To examine the possible role of nucleus accumbens (NAc) and ventral tegmental a

2、rea (VTA) in drug priminginduced reactivation of extinguished conditioned place preference (CPP). METHODS:  After the rats were successfully trained with morphine (10 mg/kg, sc.) by a CPP paradigm, NAc and VTA were lesioned with a DC current passing through the location. After a 15day abst

3、inence period, drug priming (morphine 1 mg/kg, sc.) was given and the place preference score was recorded. RESULTS:  Drug priming reactivated the place preference in sham lesion rats. However, the effect of drug priminginduced reactivation of extinguished CPP could be completely abolished

4、by lesion of NAc and VTA. CONCLUSION:  These results indicate that NAc and VTA play an important role in drug priminginduced reactivation of extinguished CPP.【Keywords】 morphine；relapse；nucleus accumbens；ventral tegmental area；conditioned place preference 【摘要】 目的： 研究定向毀損伏隔核（nucleus accumbe

5、ns, NAc）與腹側(cè)被蓋區(qū)(ventral tegmental area，VTA)對(duì)藥物誘導(dǎo)戒斷大鼠嗎啡覓藥行為的影響，分析NAc和VTA在大鼠成癮行為中的作用.方法： 雄性SD大鼠通過嗎啡強(qiáng)化形成條件性位置偏愛后，使用直流電分別毀損NAc與VTA.15 d后給予sc嗎啡誘導(dǎo)大鼠恢復(fù)位置偏愛行為，測(cè)量并比較毀損組與對(duì)照組的位置偏愛得分.結(jié)果： NAc毀損組和與VTA毀損組大鼠在注射嗎啡誘導(dǎo)下未恢復(fù)對(duì)嗎啡的條件性位置偏愛NAc毀損組(471±52) s，NAc對(duì)照組(673±53) s；VTA毀損組(482±49) s，VTA對(duì)照組(700±46) s.

6、結(jié)論： 毀損NAc和VTA能阻斷注射嗎啡誘導(dǎo)戒斷大鼠恢復(fù)覓藥行為.在成癮藥物誘導(dǎo)戒斷動(dòng)物覓藥行為中，NAc和VTA起重要作用.【關(guān)鍵詞】 嗎啡；復(fù)吸；伏核；腹側(cè)被蓋區(qū)；條件性位置偏愛0引言復(fù)吸是藥物成癮的主要特征之一，也是治療藥物成癮要解決的主要問題1.研究發(fā)現(xiàn)成癮藥物可以有效地誘發(fā)復(fù)吸.以往研究證明，中腦邊緣多巴胺系統(tǒng)（mesolimbic dopamine system, MLDS）在藥物精神依賴性中起重要作用，其中，伏隔核（nucleus accumbens, NAc）與腹側(cè)被蓋區(qū)(ventral tegmental area，VTA)在藥物渴求的建立中起關(guān)鍵性作用2.但NAc和VTA在

7、藥物誘發(fā)復(fù)吸中的作用目前還不清楚3.我們利用條件性位置偏愛(conditioned place preference,CPP)實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ停芯拷鋽嗪蟮膯岱纫蕾嚧笫笤趩岱茸⑸湔T導(dǎo)下的位置偏愛行為，并毀損NAc和VTA觀察其對(duì)大鼠CPP的影響，研究NAc和VTA在藥物誘發(fā)復(fù)吸中的作用.1材料和方法11材料SD大鼠,雄性，體質(zhì)量200250 g，40只(第四軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供），分籠飼養(yǎng)，自由進(jìn)食、飲水.鹽酸嗎啡： 沈陽第一制藥廠生產(chǎn),批號(hào)： 980305，用生理鹽水配制.12CPP實(shí)驗(yàn)程序CPP實(shí)驗(yàn)箱由有機(jī)玻璃做成的黑、白盒構(gòu)成，大小為37 cm×39 cm×30 cm.一

8、個(gè)箱子具有黑色內(nèi)壁和光滑地面，另一個(gè)具有白色內(nèi)壁和粗糙地面.偏愛箱的一面為透明有機(jī)玻璃，便于觀察大鼠行為.偏愛箱放入具有隔音和通風(fēng)設(shè)備的木制箱內(nèi)，木箱內(nèi)空間大小為60 cm×60  cm×50 cm，6壁均為乳白色，頂部裝1只5 W的白熾燈，使箱內(nèi)光線強(qiáng)度為20 lux，箱子正面壁上有15 cm×20 cm的觀察窗，可以從外向內(nèi)觀察.箱子側(cè)面配有光電管和多線平行接口.大鼠在實(shí)驗(yàn)箱內(nèi)的活動(dòng)時(shí)間由光電管自動(dòng)記錄，經(jīng)多線平行接口傳送到計(jì)算機(jī).40只SD大鼠進(jìn)行CPP試驗(yàn)，分3個(gè)階段.第1階段(d 1)首先測(cè)試大鼠的天然環(huán)境嗜好.在一般條件下,大鼠對(duì)黑

9、盒表現(xiàn)出天然嗜好,所以后面的訓(xùn)練階段以白盒為伴藥盒.第2階段(d 2d 7)為訓(xùn)練階段.在此期間,用隔板封閉兩盒間通道.每只大鼠上下午各sc 1次, 兩次間隔6 h以上.其中1次注射鹽酸嗎啡（10 mg/kg）,另1次注射等量生理鹽水,注射嗎啡后大鼠放入白盒,注射生理鹽水后放入黑盒,每次在盒中停留時(shí)間45 min.訓(xùn)練6 d.第3階段(d 8)為測(cè)試時(shí)間.在此階段中間隔板抬高12 cm, 大鼠不注射藥物,也不注射生理鹽水,將其放在兩盒中間讓其自由走動(dòng).啟動(dòng)計(jì)算機(jī)程序,記錄15 min內(nèi)大鼠分別在黑、白盒內(nèi)停留的時(shí)間，計(jì)算其均值和標(biāo)準(zhǔn)差，其中以動(dòng)物在伴藥盒（白盒）的停留時(shí)間作為CPP得分.整個(gè)試

10、驗(yàn)過程中保證箱內(nèi)光線、色調(diào)、氣味等環(huán)境條件一致.13動(dòng)物手術(shù)第9日進(jìn)行毀損.將CPP試驗(yàn)后的40只SD大鼠隨機(jī)分成4組，即NAc毀損組、NAc對(duì)照組、VTA毀損組和VTA對(duì)照組.手術(shù)過程在10 g/L戊巴比妥鈉深度麻醉下進(jìn)行（戊巴比妥鈉40 mg/kg，ip.）.參照Parkinson等建立的方法 4，使用直流電選擇性毀損NAc和VTA.大鼠按上述方法麻醉并安放在立體定向架上（Narishige，Japan）,門齒桿設(shè)定在耳間線下方33 mm.毀損使用射頻毀損電極（直徑06 mm,尖端裸露05 mm，F(xiàn)HC，USA）, NAc雙側(cè)坐標(biāo)為： 前后（AP）+17 mm，外側(cè)（L）±15

11、mm和背腹（DV）硬膜表面以下75 mm，毀損電流/時(shí)間為每30 s 1 mA毀損電流.VTA雙側(cè)坐標(biāo)為： 前后（AP）-52 mm，外側(cè)（L）±05 mm和背腹（DV）硬膜下78 mm，毀損電流/時(shí)間為每30 s 05 mA毀損電流.對(duì)照組用相同的過程但不通電流.14熄滅訓(xùn)練程序第1023日，每日給大鼠sc生理鹽水放入伴藥盒（白盒）中停留45 min，共14 d.第24日，測(cè)試大鼠的CPP得分，計(jì)算其均值和標(biāo)準(zhǔn)差.15嗎啡注射誘導(dǎo)CPP第25日，給大鼠注射嗎啡（25 mg/kg，sc.），15 min后放入CPP實(shí)驗(yàn)箱測(cè)量并記錄CPP得分，計(jì)算其均值和標(biāo)準(zhǔn)差.16對(duì)毀損的組織學(xué)評(píng)定

12、大鼠在10 g/L戊巴比妥鈉麻醉下心臟灌注取腦，60 m冠狀切片，用尼氏染色來觀察神經(jīng)缺損的范圍.毀損位置不正確或毀損過大過小的個(gè)體從組中排除.神經(jīng)缺失部位繪制在標(biāo)準(zhǔn)大鼠腦切片上4.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理： 計(jì)算各組CPP得分的均值和標(biāo)準(zhǔn)差，組間差異性比較采用SNKq檢驗(yàn).2結(jié)果21組織學(xué)分析在遮蔽行為結(jié)果的情況下進(jìn)行毀損的組織學(xué)分析.NAc毀損從前囟前27048 mm，見Fig 1.VTA毀損從前囟后52 58 mm 5，見Fig 2.圖1使用直流電毀損NAc的圖解略圖2使用直流電毀損VTA的圖解略22NAc毀損和VTA毀損對(duì)嗎啡注射誘導(dǎo)CPP的影響2只大鼠因毀損失敗而從組中排除，所以NAc毀損組和VT

13、A毀損組各9只.如Fig 3，在所有組中，第8日的CPP得分顯著高于第1日，說明經(jīng)過6 d的CPP訓(xùn)練，大鼠建立了對(duì)嗎啡的CPP.第24日的CPP得分與第1日無顯著性差異，說明經(jīng)過14 d的熄滅訓(xùn)練后，大鼠的CPP已消失.在NAc對(duì)照組和VTA對(duì)照組中，第25日的CPP得分顯著高于第1日NAc對(duì)照組，第25日（673±53） s，第1日（446±50） s，P005，說明毀損后嗎啡注射未恢復(fù)大鼠對(duì)嗎啡的CPP.圖3NAc毀損VTA毀損對(duì)嗎啡注射誘導(dǎo)CPP的影響略3討論復(fù)吸是藥物成癮的主要特征之一，也是治療藥物成癮要解決的主要問題.復(fù)吸的完整含義是藥物依賴者戒斷用藥一段時(shí)間后

14、由于某些因素的誘發(fā)，重現(xiàn)渴求感受藥物精神效應(yīng)欲望而恢復(fù)用藥行為.本實(shí)驗(yàn)中，大鼠經(jīng)過6 d的CPP訓(xùn)練建立了對(duì)嗎啡的CPP，又經(jīng)過14 d的熄滅訓(xùn)練，大鼠的CPP消失.在NAc對(duì)照組和VTA對(duì)照組中，1次sc嗎啡即恢復(fù)了大鼠對(duì)嗎啡的CPP.提示嗎啡依賴動(dòng)物停藥后，再次低劑量注射嗎啡可使動(dòng)物恢復(fù)覓藥行為，說明成癮藥物可有效誘導(dǎo)戒斷動(dòng)物復(fù)吸.近期研究表明，其他成癮藥物也有激發(fā)復(fù)吸行為的效力.可卡因依賴動(dòng)物，停藥8 d后，再次低劑量注射可卡因可使動(dòng)物恢復(fù)覓藥行為和用藥行為6.這種現(xiàn)象可用敏感化理論解釋，長(zhǎng)期用藥引起的腦內(nèi)有關(guān)回路的一系列適應(yīng)性改變使藥物依賴動(dòng)物表現(xiàn)出行為敏感化，低劑量成癮藥物即可使這些

15、動(dòng)物產(chǎn)生藥物渴求和復(fù)吸 .海洛因或可卡因成癮者，經(jīng)過系統(tǒng)治療后很長(zhǎng)時(shí)間，只要看到或接觸類似藥物就可能導(dǎo)致復(fù)吸7，這也是我國(guó)藥物依賴者復(fù)吸率高的原因之一.NAc被公認(rèn)為是邊緣系統(tǒng)和錐體外系運(yùn)動(dòng)系統(tǒng)之間的界面部分，與動(dòng)機(jī)行為和獎(jiǎng)賞行為密切聯(lián)系，是成癮藥物的作用基礎(chǔ).阿片類藥物，如嗎啡，與腦內(nèi)廣泛分布的受體結(jié)合，直接或間接作用于MLDS中的VTANAc的多巴胺通路，增加NAc多巴胺水平，產(chǎn)生獎(jiǎng)賞效應(yīng)8.但MLDS尤其是VTANAc多巴胺通路在藥物誘發(fā)戒斷動(dòng)物復(fù)吸中的作用還不清楚.本研究中，NAc毀損組和VTA毀損組中，嗎啡注射均未恢復(fù)大鼠對(duì)嗎啡的CPP.說明毀損NAc或VTA能阻斷嗎啡注射誘發(fā)戒斷大

16、鼠恢復(fù)覓藥行為，即復(fù)吸.表明NAc和VTA在成癮藥物誘導(dǎo)復(fù)吸中起重要作用，提示成癮藥物誘導(dǎo)復(fù)吸與MLDS系統(tǒng)中的VTANAc多巴胺通路的激活有關(guān).Mueller等提出的假說認(rèn)為，成癮藥物能恢復(fù)戒斷動(dòng)物對(duì)藥物相關(guān)刺激的興趣，導(dǎo)致復(fù)吸9.結(jié)合本研究結(jié)果，我們認(rèn)為，長(zhǎng)期用藥可能引起MLDS系統(tǒng)中的VTANAc多巴胺通路發(fā)生敏感化改變，使藥物依賴動(dòng)物表現(xiàn)出行為敏感化.在戒斷期，低劑量成癮藥物通過激活MLDS系統(tǒng)中的VTANAc多巴胺通路恢復(fù)這些動(dòng)物對(duì)藥物相關(guān)刺激的興趣引起藥物渴求，導(dǎo)致復(fù)吸 .毀損NAc和VTA切斷了該通路，阻止了動(dòng)物恢復(fù)對(duì)藥物相關(guān)刺激的興趣，從而阻斷了成癮藥物誘導(dǎo)戒斷動(dòng)物復(fù)吸.復(fù)吸是

17、戒毒治療的難點(diǎn)，高復(fù)吸率是毒癮醫(yī)學(xué)面臨的最大挑戰(zhàn).探討復(fù)吸誘發(fā)因素及其機(jī)制將為制訂治療藥物成癮的方法和策略提供理論依據(jù).研究電毀損神經(jīng)核團(tuán)在戒毒中的作用將為外科戒毒提供研究思路.【參考文獻(xiàn)】1 OBrien CP. A range of researchbased pharmacotherapies for addictionJ. Science，1997；278：66-70.2 Ito R，Dalley J，Howes S，et al. Extracellular dopamine in the nucleus accumbens core and shell measured using

18、in vivo microdialysis during cocaineseeking behavior and following presentation of cocaine cuesJ. J Neurosci，2000;20：7489-7495.3 Shalev U，Grimm JW，Shaham Y.Neurobiology of relapse to heroin and cocaine seeking：A reviewJ. Pharmacol Rev，2002;54：2-26.4 Parkinson JA，Olmstead MC，Burns LH，et al. Dissociation in effects of lesions of the nucleus accumbens core and shell on appetitive Pavlovian approach behavior and the potentiation of conditioned reinforcement and locomotor activity by DamphetamineJ. J Neurosci，1999;19(7)：2401-2411.5 Paxinos G，Watson C. The rat brain in stereotax