1、淺論急性白血病患者外周血T淋巴細胞亞群和NK細胞水平檢測及臨床意義            作者：吳朝陽, 吳雅榮, 王法春, 陳巧云, 季勇慧 錢震 楊小飛 盛曉靜 張永寧, 錢軍【摘要】  目的： 研究急性白血病患者外周血T淋巴細胞亞群、NK細胞水平變化及臨床意義。方法： 采用流式細胞儀對32例急性白血病患者 (急性髓細胞性白血病23例、急性淋巴細胞性白血病9例)及18例正常人外周血T淋巴細胞亞群及NK細胞水平進行檢測。結(jié)果： 初治急性白血病組與正常對照組比較，CD3+細胞、CD4+

2、細胞、CD4+/CD8+比值及NK細胞下降（P0.05），CD8+細胞略升高（P0.05）?；熀?2例取得完全緩解，再次檢測上述指標接近正常對照組（P0.05）。初診急性淋巴細胞性白血病組CD4+細胞及CD4+/CD8+比值低于初診急性髓細胞性白血病組（P0.05）。結(jié)論： 急性白血病患者細胞免疫功能明顯異常。與急性髓細胞性白血病相比，急性淋巴細胞性白血病細胞免疫功能更為低下。T細胞亞群及NK細胞水平檢測在評價急性白血病療效及判斷預(yù)后方面具有一定的臨床價值。 【關(guān)鍵詞】  急性白血??； T細胞亞群； NK細胞   Abstract  Objective

3、: To study the changes of T lymphocyte subsets，NK cells in peripheral blood of patients with acute leukemia and its clinical significance.Methods： The different level of peripheral blood T lymphocyte subsets, NK cells of 32 acute leukemia patients and 18 normal controls were detected with flow cytom

4、etry. Results： Compared with the normal controls, the number of CD3+ T cell, CD4+T cell, NK cell and CD4+/CD8+ ratio reduced in newly diagnosed acute leukemia group(P0.05), while those of CD8+ T cell slightly increased(P0.05).Twelve of 32 patients achieved complete remission after chemotherapy.Their

5、 level of T lymphocyte subsets，NK cells near those of normal controls（P0.05）.The number of CD3+ T cell and CD4+/CD8+ ratio in newly diagnosed acute lymphoblastic leukemia group were lower than those in newly diagnosed acute myelogenous leukemia group(P0.05). Conclusion： Cellular immune function is s

6、ignificantly abnormal in patients with acute leukemia.Compared with acute myelogenous leukemia, patients with acute lymphoblastic leukemia had more poor cellular immune function.Detection of T lymphocyte subsets，NK cells are clinically value on evaluation of therapeutic effect and prognosis of acute

7、 leukemia.   Key words  acute leukemia; T lymphocyte subsets; NK cell   急性白血?。╝cute leukemia,AL）是造血干細胞的惡性克隆性疾病，其發(fā)生及發(fā)展與機體免疫紊亂有著密切的關(guān)系。在抗腫瘤免疫效應(yīng)中,細胞免疫比體液免疫起著更為重要的作用。T淋巴細胞和NK細胞執(zhí)行細胞免疫功能，是機體抗腫瘤免疫的重要活性細胞。本文采用流式細胞術(shù)（flowcytometry,FCM）檢測急性白血病患者及健康人群外周血T淋巴細胞亞群和NK細胞的水平，并探討其臨床意義。 

8、60; 1  材料和方法   1.1  材  料   32例急性白血?。ˋL）外周血標本均來自我院住院患者。其中男14例，女18例，年齡1572歲,中位年齡41歲；急性髓細胞性白血病(acute myelogenous leukemia,AML)23例，急性淋巴細胞性白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)9例。初診患者分別于化療前、完全緩解后采集外周靜脈血2 ml，枸櫞酸鈉抗凝。18例正常對照外周血標本采自健康體檢者。   1.2  方  法

9、0;  取100 l上述抗凝血分別加入4個試管中，每管加入抗CD45PerCP 10 l。各管再依次加入抗CD3-FITC+CD19-PE、抗CD3-FITC+CD4-PE、抗CD3-FITC+CD8-PE、抗CD3-FITC+CD16CD56-PE各10 l，避光室溫充分結(jié)合20 min后，每管加入溶血素2 m1,避光放置至透明后1 000 r/min 離心5 min，棄去上清液體，加入2 m1 PBS在混合器上使試管底部的細胞與PBS溶液混勻，1 000 r/min離心5 min，最后加入0.4 ml PBS溶液混勻直接上流式細胞儀（美國BD公司）檢測。  

10、1.3   統(tǒng)計學(xué)處理   應(yīng)用SPSS12.0處理數(shù)據(jù)，結(jié)果以±s表示，用t檢驗方法比較各組間差異。   2  結(jié)  果   32例急性白血病患者T淋巴細胞亞群及NK細胞的水平變化見表1。由表1可見: 與緩解AL組相比較，初診AL組外周血CD3+細胞、CD4+細胞、CD16+CD56+細胞及CD4+/CD8+比值降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)；CD8+細胞略升高，但無顯著差異(P0.05)。初診AL組與對照組相比較有類似的結(jié)果。而緩解AL組外周血CD3+細胞，CD4+細胞,CD

11、8+細胞、CD4+/CD8+比值及CD16+CD56+細胞與對照組相比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。初治ALL組與AML組相比較，ALL組CD4+細胞及CD4+/CD8+比值低于AML組，兩者間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。兩組CD3+細胞，CD8+及CD16+CD56+細胞間差異無統(tǒng)計學(xué)意義 (P0.05)。表1  急性白血病患者及正常對照組外周血T細胞亞群及NK細胞水平            3  討  論   機體的細胞免疫異常可使腫

12、瘤細胞逃避宿主的免疫監(jiān)視，最終發(fā)生腫瘤。CD4+T細胞、CD8+T細胞和NK細胞在體內(nèi)抗腫瘤免疫中具有重要的作用。   CD4+細胞能輔助T細胞、B細胞活化，后兩者活化釋放的大量細胞因子能促進CD8+T細胞及吞噬細胞的活性，并影響B(tài)細胞抗體的產(chǎn)生，從多方面調(diào)節(jié)和增強抗腫瘤效應(yīng)。CD8+細胞常在免疫應(yīng)答后期增多，除可對靶細胞產(chǎn)生細胞介導(dǎo)的細胞毒作用（ADCC）外，還能識別可溶性抗原，分泌抑制因子，減弱或抑制免疫應(yīng)答，對CD4+細胞有調(diào)節(jié)性抑制作用。CD4+/CD8+比例平衡是維持免疫內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定的一個中心環(huán)節(jié)，是機體免疫網(wǎng)絡(luò)調(diào)控的重要樞紐，反映了機體免疫反應(yīng)的調(diào)節(jié)能力1。這種免

13、疫平衡紊亂時，可引起繼發(fā)性免疫缺陷。本組資料分析了32例不同類型急性白血病患者的T淋巴細胞亞群，發(fā)現(xiàn)初治AL患者CD3+、CD4+細胞以及CD4+ /CD8+比值明顯降低。其他惡性血液病如非霍奇金氏淋巴瘤中有類似的變化2，3，在兒童急性白血病中也有類似報道4，5。這些提示白血病患者輔助性T細胞數(shù)量或功能低下，機體識別和殺傷白血病細胞的能力下降，與白血病的發(fā)生發(fā)展有一定的關(guān)系。本組資料還提示，化療后緩解的患者，T淋巴細胞各亞群抗原表達接近正常，細胞免疫功能得到一定程度恢復(fù)。通過分析我們還發(fā)現(xiàn)，與AML比較，ALL患者CD4+細胞、CD4+/CD8+比值降低程度更顯著，提示原發(fā)于淋巴系統(tǒng)腫瘤的細胞

14、免疫功能更低下。   CD16+CD56+是自然殺傷細胞（NK細胞）的標志物，表達的量可能與NK細胞的數(shù)量或功能有關(guān)。NK是重要的天然免疫細胞, 起源于CD34+造血細胞，在骨髓微環(huán)境內(nèi)發(fā)育，形成具有免疫活性的成熟型細胞。它不需預(yù)先致敏,無MHC限制性,即可自發(fā)地殺傷MHC1類分子缺陷或低表達的腫瘤細胞, 具有廣譜的抗腫瘤、抗感染、免疫調(diào)節(jié)等作用，在機體免疫監(jiān)視過程中發(fā)揮重要功能。分析本組資料發(fā)現(xiàn)AL患者化療前CD16+CD56+細胞明顯降低，與樓瑾6等的研究結(jié)果相似，而化療后完全緩解者CD16+CD56+細胞又恢復(fù)到正常水平，進一步說明初發(fā)急性白血病NK細胞免疫功能明顯受

15、損。   由于初治AL與緩解AL的T淋巴細胞亞群及NK細胞的水平有明顯差異，檢測T淋巴細胞亞群和NK細胞水平在評價AL療效及判斷預(yù)后方面具有一定的臨床價值。其臨床意義還有待積累  1 Yasutomo K. The cellular and molecular mechanism of CD4/CD8 lineage commitmentJ. J Med Invest, 2002，49(1/2):1-6.2 趙成艷，馬 榮，王忠利，等. 非霍奇金淋巴瘤患者T細胞亞群、NK細胞檢測的臨床意義J.中國免疫學(xué)雜志，2006,22(2):180-185.3 莊萬傳，李秀梅，韓秀華. 惡性血液病患者化療前后淋巴細胞亞群測定及其意義J. 白血病·淋巴瘤，2006，15（6）:442-443.4