1、三七總皂甙對梗阻性黃疸肝組織中bax，bcl(一)作者：周斌，于博，姚南，宋少莉【關(guān)鍵詞】阻塞性黃疸；,bax；,bcl【Abstract】AIM：ToexploretheprotectivemechanismofPanaxnotoginoside(PNS)againsthepaticinjuryafterobstructivejaundice(OJ)inrabbits.METHODS：FortyeighthealthyJapanesewhiterabbitswererandomizedinto2groups,24ineachgroup:groupAtreatedwithcommonbiled

2、uctligation(BDL),groupBofBDL+asusedtodeterminetheexpressionsofBaxandBcl2inhepatictissues.RESULTS：IngroupA,expressionsofbcl2andbaxinthehepatictissuewereobservedafterOJ.Expressionofbaxreachedthepeakatthe9thdayafterOJ,thentendedtodecline.Similarly,thehighestexpressionofbcl2wasobservedatthe21thdayafterO

3、J.Theapoptosisindex(AI)increasedwiththeincreaseofbaxexpressionbutdecreasedwithbcl2strongexpression.AftertreatmentwithPNSingroupB,alowerexpressionofbaxandahigherexpressionofbcl2werefound,andtheAIvaluewasalsolower,comparedwithgroupA.CONCLUSION：ThepathologyofOJmayberelatedtotheinitiationofapoptosis.PNS

4、mayplayaprotectiveroleagainsthepaticinjuryafterOJ,whichmayberealizedthroughupregulatingtheexpressionofbcl2anddownregulatingtheexpressionofbaxinthehepatictissues.【Keywords】obstructivejaundice;bax;bcl2;Panaxnotoginoside;liver;rabbits【摘要】目的：探討梗阻性黃疸肝損傷中的病理調(diào)控機(jī)制及三七總皂甙(PNS)的保護(hù) .方法：健康日本大耳白兔48 只，雌雄各半，隨機(jī)分為 2組

5、，每組 24 只.A 組：膽總管接扎組（ BDL）；B 組：BDL+PNS組.建立實(shí)驗動物模型 .所有實(shí)驗動物均在相同條件下飼養(yǎng).采用免疫組化法檢測肝組織 bax，bcl2 的表達(dá)情況 .結(jié)果： A 組動物在膽道梗阻后，肝組織可見 bcl2 和 bax 蛋白表達(dá)， bax 蛋白在梗阻 9d 達(dá)高峰，此后開始下降 . 而 bcl2 蛋白在梗阻 21d 達(dá)高峰 .凋亡指數(shù)（ AI）隨 bax 升高而升高，隨 bcl2 的升高而降低； B 組動物 bax 表達(dá)較同時相 A 組弱，而 bcl2 蛋白強(qiáng)于 A 組，B 組 AI 值較 A 組降低 .結(jié)論：梗阻性黃疸所致的肝組織病理變化可能與凋亡程序的啟動

6、有關(guān).PNS 對梗阻性黃疸肝組織損傷有明顯的保護(hù)作用 ,其機(jī)制可能是與上調(diào)肝組織bcl2 蛋白及下調(diào) bax 蛋白有關(guān) .【關(guān)鍵詞】阻塞性黃疸；bax；bcl2；三七總皂甙；肝；兔0 引言梗阻性黃疸是外科的常見病癥，肝臟是最先受損并損傷最重的器官.本實(shí)驗我們通過檢測梗阻性黃疸大耳白兔肝組織bax，bcl2 蛋白在不同時期的表達(dá)情況，同時給予三七總皂甙（Panaxnotoginoside,PNS）干預(yù)，探討梗阻性黃疸肝損傷的病理調(diào)控機(jī)制及藥物保護(hù).1 材料和方法1.1 材料日本大耳白兔72 只，體質(zhì)量 1.82.5kg，雌雄各半，蘭州生物制品研究所提供 .bax,bcl2 免疫組化試劑盒購于武漢

7、博士德生物工程有限公司 .PNS由山西三九萬榮藥業(yè)有限責(zé)任公司提供，批號20020628.1.2 方法1.2.1 分組將 48 只日本大耳白兔，雌雄各半，隨機(jī)分為2 組，每組 24只.A 組：膽總管接扎組（ BDL）；B 組： BDL+PNS組.分別于術(shù)后 3，6，9，21d 每組隨機(jī)取 6 只處死取材 .模型制作 BDL 組： 20g/L 戊巴比妥鈉 (40mg/kg,ip)麻醉，距膽總管起始部位 1cm 處雙重結(jié)扎 . BDL+PNS組：自膽總管結(jié)扎術(shù)日起腹腔注射 PNS25mg/kg，1 次/d ，至取材 .觀察指標(biāo)及檢測方法 肝組織的病理變化：剪取肝右葉組織約5mm× 5mm

8、× 4mm 大小，置于40g/L 多聚甲醛固定，然后脫水、透明、浸蠟、包埋，制成 4m厚的石蠟片， HE染色，顯微鏡觀察病理變化 . 肝功能檢測：分別于術(shù)后3，6，9，21d 將各組大耳白兔取材，自下腔靜脈取血 3.0mL，4， 3000r/min 離心 10min 后取上層血清測定谷丙轉(zhuǎn)氨酶 (ALT)、總膽紅素 (TBIL)、血清白蛋白（ ALB）. bax，bcl2 的免疫組化檢測 :先剖腹剪取肝右葉組織,約 5mm×5mm×4mm 大小，置于 40g/L多聚甲醛固定 24h，后依次進(jìn)行脫水、透明、浸蠟、包埋，然后切成 4m厚的石蠟片，貼片后行免疫組化染色

9、.染色操作步驟：抗生物素鏈酶親合素復(fù)合物法（ SABC）.切片脫蠟至水， 30mL/LH2O2 處理，微波擋修復(fù)抗原 20min 滴加正常山羊血清 10min，滴加一抗，濕盒內(nèi) 4孵育20h，0.01mol/LPBS洗 2×3次，滴加生物素兔化山羊抗兔 IgG37孵育20min，0.01mol/LPBS洗 2×3次，滴加 SABC復(fù)合物 37孵育 20min，0.01mol/LPBS洗 5×4次， DAB 顯色，鏡下控制反應(yīng)時間，雙蒸水終止反應(yīng)，蘇木素輕度復(fù)染，脫水、透明、封片、顯微鏡觀察 .結(jié)果判斷和數(shù)據(jù)處理采用網(wǎng)格測試法 .細(xì)胞質(zhì)出現(xiàn)棕黃色顆粒為染色陽性細(xì)胞，染色結(jié)果綜合染色強(qiáng)度及陽性細(xì)胞數(shù)量兩個方面進(jìn)行半定量分析，分別評分 03 分.染色強(qiáng)度：陰性（0 分）；淺黃色（ 1 分）；棕黃色（2 分）；棕褐色（3 分）.陽性細(xì)胞數(shù)計分： 無著色細(xì)胞（0 分）；陽性細(xì)胞數(shù) 1/3 （1 分）；1/3 2/3(2 分)；大于 2/3(3 分).根據(jù)兩項結(jié)果相加分?jǐn)?shù)判斷結(jié)果： 0 分（ -）； 2 分（ ±）；3 分（ +）；4 分(）；5 分(）.每例切片觀察 5 個高倍（ ×400）視野（向同一方向移動切片，不重復(fù)，不重疊