1、如有你有幫助，請(qǐng)購(gòu)買下載，謝謝！微生物限度檢查法 微生物限度檢查法系檢查非規(guī)定滅菌制劑及其原料、 輔料受微生物污染程度的方 法。檢查項(xiàng)目包括細(xì)菌數(shù)、霉菌數(shù)、酵母菌數(shù)及控制菌檢查。微生物限度檢查應(yīng)在環(huán)境潔凈度 10000 級(jí)下的局部潔凈度 100 級(jí)的單向流空氣 區(qū)域內(nèi)進(jìn)行。 檢驗(yàn)全過(guò)程必須嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作， 防止再污染， 防止污染的措施 不得影響供試品中微生物的檢出。 單向流空氣區(qū)域、 工作臺(tái)面及環(huán)境應(yīng)定期按 醫(yī) 藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）懸浮粒子、浮游菌和沉降菌的測(cè)試方法 的現(xiàn)行國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 進(jìn)行潔凈度驗(yàn)證。供試品檢查時(shí) 如果使用了表面活性劑、 中和劑或滅活劑， 應(yīng)證明其有效性及對(duì) 微生物無(wú)毒性。除另有

2、規(guī)定外，本檢查法中細(xì)菌及控制菌培養(yǎng)溫度為 3035 C ；霉菌、酵母菌 培養(yǎng)溫度為2328 C 。2檢驗(yàn)結(jié)果以 1g 、 lml 、 10g 、 l0ml 或 10cm2 為單位報(bào)告，特殊品種可以最小 包裝單位報(bào)告。檢驗(yàn)量檢驗(yàn)量即一次試驗(yàn)所用的供試品量（ g 、 ml 或 cm2）。除另有規(guī)定外，一般供試品的檢驗(yàn)量為 10g或10ml;膜劑為100 cm2；貴重藥 品、微量包裝藥品的檢驗(yàn)量可以酌減。 要求檢查沙門菌的供試品， 其檢驗(yàn)量應(yīng)增 加 20g 或 20ml （其中 10g 或 10ml 用于陽(yáng)性對(duì)照試驗(yàn)）。檢驗(yàn)時(shí),應(yīng)從 2 個(gè)以上最小包裝單位中抽取供試品，膜劑還不得少于 4 片。 一般

3、應(yīng)隨機(jī)抽取不少于檢驗(yàn)用星（兩個(gè)以上最小包裝單位）的 3 倍量供試品。 供試液的制備根據(jù)供試品的理化特性與生物學(xué)特性， 采取適宜的方法制備供試液。 供試液制備 若需加溫時(shí)，應(yīng)均勻加熱，且溫度不應(yīng)超過(guò) 45C。供試液從制備至加入檢驗(yàn)用 培養(yǎng)基， 不得超過(guò) 1 小時(shí)。除另有規(guī)定外，常用的供試液制備方法如下。1. 液體供試品取供試品10ml ,加pH7.0無(wú)菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液至100ml ,混勻，作為1:10 的供試液。油劑可加入適量的無(wú)菌聚山梨酯 80 使供試品分散均勻。水溶性液體 制劑也可用混合的供試品原液作為供試液。2. 固體、半固體或黏稠性供試品取供試品 10g ，加 pH7.0 無(wú)菌氯化

4、鈉 -蛋白胨緩沖液至 1OOml ，用勻漿儀或其 他適宜的方法，混勻，作為 1:10 的供試液。必要時(shí)加適量的無(wú)菌聚山梨酯 80 ， 并置水浴中適當(dāng)加溫使供試品分散均勻。3. 需用特殊方法制備供試液的供試品（ 1 ）非水溶性供試品方法1取供試品5g （或5ml），加至含溶化的（溫度不超過(guò) 45C ） 5g司盤80、3g單硬脂酸甘油酯、10g聚山梨酯80無(wú)菌混合物的燒杯中，用無(wú)菌玻棒 攪拌成團(tuán)后，慢慢加人45 C的pH7.0無(wú)菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液至100ml，邊 加邊攪拌，使供試品充分乳化，作為 1 : 20 的供試液。方法 2 取供試品 10g ，加至含 20ml 無(wú)菌十四烷酸異丙酯（制法見(jiàn)

5、附錄 XII A 無(wú) 菌檢查法中供試品的無(wú)菌檢查項(xiàng)下） 和無(wú)菌玻璃珠的適宜容器中 必要時(shí)可增加 十四烷酸異丙酯的用量，充分振搖，使供試品溶解。然后加入 45 C的pH7.0無(wú) 菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液10Oml，振搖510分鐘，萃取，靜置使油水明顯分 層，取其水層作為 l : 10 的供試液。（ 2）膜劑供試品取供試品100cm2，剪碎，加pH7.0無(wú)菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液100ml （必要時(shí)可 增加稀釋液），浸泡，振搖，作為 1:10 的供試液。（ 3）腸溶及結(jié)腸溶制劑供試品取供試品 10g ，加 pH6.8 無(wú)菌磷酸鹽緩沖液（用于腸溶制劑）或 pH7.6 無(wú)菌磷 酸鹽緩沖液（用于結(jié)腸溶制劑）

6、至100ml，置45 C水浴中，振搖，使溶解， 作為 1 :10 的供試液。（ 4）氣霧劑、噴霧劑供試品取規(guī)定量供試品，置冰凍室冷凍約 1 小時(shí)，取出，迅速消毒供試品開(kāi)啟部位， 用無(wú)菌鋼錐在該部位鉆一小孔， 放至室溫， 并輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)容器， 使拋射劑緩緩全部釋出。用無(wú)菌注射器吸出全部藥液，加至適量的pH7.0無(wú)菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液（若含非水溶性成分，加適覺(jué)的無(wú)菌聚山梨酯 80 ）中，混勻，取相當(dāng)于 10g 或 10ml 的供試品，再稀釋成 1:10 的供試液。（5）貼劑供試品取規(guī)定量供試品， 去掉貼劑的保護(hù)層， 放置在無(wú)菌玻璃或塑料片上， 粘貼面朝上。 用適宜的無(wú)菌多孔材料 （如無(wú)菌紗布） 覆蓋

7、貼劑的粘貼面， 以避免貼劑粘貼在一 起。然后將其置于適宜體積并含有表面活性劑（如聚山梨酯 80 或卵磷脂）的稀 釋劑中，用力振蕩至少 30 分鐘，制成供試液。貼劑也可采用其他適宜的方法制 備成供試液。（6）具抑菌活性的供試品 當(dāng)供試品有抑菌活性時(shí)， 采用下列方法進(jìn)行處理， 以消除供試液的抑菌活性， 再 依法檢查。常用的方法如下。 培養(yǎng)基稀釋法 取規(guī)定量的供試液，至較大量的培養(yǎng)基中，使單位體積內(nèi)的 供試品含量減少，至不含抑菌作用。測(cè)定細(xì)菌、霉菌及酵母菌的菌數(shù)時(shí)，取同稀 釋級(jí)的供試液 2ml ，每 1ml 供試液可等量分注多個(gè)平皿，傾注瓊脂培養(yǎng)基，混 勻，凝固，培養(yǎng)，計(jì)數(shù)。每 1ml 供試液所注的平皿中生長(zhǎng)的菌落數(shù)之和即為 1ml 的菌落數(shù)， 計(jì)算每 1ml 供試液的平均菌落數(shù)， 按平皿法計(jì)數(shù)規(guī)則報(bào)告菌數(shù)； 控制 菌檢查時(shí)，可加大增菌培養(yǎng)基的用量。 離心沉淀法 取一定量的供試液， 500 轉(zhuǎn)分鐘離心 3 分鐘，取全部上清液 混合。用于細(xì)菌檢查。 薄膜過(guò)濾法 見(jiàn)細(xì)菌、霉菌及酵母菌計(jì)數(shù)項(xiàng)下的 “薄膜過(guò)濾法 ”。 中和法 凡含汞、砷或防腐劑等具有抑菌作用的供試品，可用適宜的中和劑 或