1、目錄1、溶菌酶的含義2、溶菌酶的理化性質(zhì)3、溶菌酶的提取及分離4、溶菌酶的用途什么是溶菌酶什么是溶菌酶？溶菌酶又稱胞壁質(zhì)酶或N-乙酰胞壁質(zhì)聚糖水解酶，是一種能水解致病菌中黏多糖的堿性酶堿性酶。溶菌酶的物理性質(zhì)：白色或微白色凍干粉，溶于水，不溶于乙醚和丙酮，pI為11.0-11.35，最適pH值6.5。穩(wěn)定性：酸性介質(zhì)中可穩(wěn)定存在，堿性介質(zhì)中易失活。存儲條件為2-8攝氏度。溶菌酶的化學性質(zhì)：溶菌酶的化學性質(zhì)：溶菌酶的結(jié)構(gòu)一一:【實驗?zāi)康膶嶒災(zāi)康摹?. 熟練掌握離子層析分離純化溶菌酶的原理以及離子交換層析的操作方法2. 理解SDS-聚丙烯酰胺凝膠（PAGE）測定蛋白質(zhì)純度與分子量的原理二:【實驗原

2、理實驗原理】溶菌酶是一種有效的抗菌劑，全稱為1,4-N-溶菌酶，又稱作粘肽N-乙酰基胞壁酰水解酶或胞壁質(zhì)酶。是一種糖苷水解酶，能催化水解粘多糖的N-乙酰氨基葡萄糖與N-乙酰胞壁酸間的-1，4糖苷鍵，由129氨基酸殘基構(gòu)成，由于其中含有較多堿性氨基酸殘基，所以其等電點高達10.8左右，最適溫度為50，最適PH為67左右。溶菌酶廣泛存在于動植物及微生物體內(nèi)，雞蛋(含量約為2%4%)和哺乳動物的乳汁是溶菌酶的主要來源，目前，溶菌酶仍屬于緊銷的生化物質(zhì)，雞蛋的蛋清中含有豐富的上述物質(zhì)，本實驗以雞蛋蛋清為原料，對溶菌酶進行提取并分離純化。溶菌酶常溫下在中性鹽溶液中具有較高天然活性 ，在中性條件下溶菌酶帶

3、正電荷，因此在分離制備時，先采用等電點法粗分離，再用DE-52纖維素離子交換色譜和葡聚糖G50凝膠層析分離純化?！静牧吓c儀器材料與儀器】雞蛋3個 DE-52纖維素 葡聚糖G500.5*7cm色譜柱、2.5*20cm色譜柱、燒杯(100ml,250mL，1000mL)、錐形瓶(100ml)、玻璃棒、漏斗、定性快速濾紙、紗布、量筒（100mL,250 mL，1000 mL）、10 mL 離心管、1.5mL Ep管、高速離心機、冰箱、電爐【試劑配制試劑配制】冰醋酸、 5mol/L NaOH、20%磺基水楊酸溶液、 考馬斯亮藍染色液、 脫色液：450mL甲醇：水（1：1）、50mL冰醋酸 、 0.02

4、 mol/L PBS( pH8.0)【實驗步驟實驗步驟】1.溶菌酶的粗提取溶菌酶的粗提?。s兩個半小時）拿3個雞蛋破殼取蛋清置于250mL燒杯中，輕輕攪拌5分鐘，使其的稠度均勻，然后用兩層紗布過濾，去除臍帶和蛋殼。記錄其體積V1 加入1.5倍體積的pH8.0 PBS緩沖液，攪拌均勻用冰醋酸調(diào)pH4.7左右，充分攪拌3500rpm，離心20min棄沉淀，轉(zhuǎn)移上清至燒杯中 加入1倍體積的pH8.0 PBS緩沖液，攪拌均勻，并用5mol/L NaOH調(diào)pH8.0 濾紙過濾，取清液，測量并記錄體積V2 取清液裝在10mL離心管中 -20凍存?zhèn)溆?。（樣品S1）2.溶菌酶的分離純化溶菌酶的分離純化（1）DE-52初次純化溶菌酶初次純化溶菌酶 DE-52纖維素的處理裝柱 加樣、洗脫（2）葡聚糖）葡聚糖G50再次純化溶菌酶再次純化溶菌酶 凝膠的處理 裝柱 加樣、洗脫 【注意事項】1.等電點沉淀后利用離心的辦法，要盡量除去沉淀；2.調(diào)節(jié)pH時要避免局部過酸；3.提取過程中盡量避免泡沫的產(chǎn)生4加樣蛋白濃度低于20 mg/mL，上樣體積小于柱體積的1/3。5. 在整個實驗過程中，流速必須得到一定的控制?？刂屏魉贋?mL/min。6沖平過程一定不能省。溶菌酶的用途 ：溶菌酶是生物體內(nèi)廣泛存在的一種能分解黏多糖的水解酶。能是革蘭陽性菌細胞壁溶解，從而發(fā)