1、精選ppt 熱原及內(nèi)毒素?zé)嵩皟?nèi)毒素 精選ppt1.熱原的定義和分類熱原的定義和分類n熱原系指由微生物產(chǎn)生的，能引起恒溫動(dòng)物體溫異常升高的致熱物質(zhì)。它包括細(xì)菌性熱原、內(nèi)源性高分子熱原、內(nèi)源性低分子熱原及化學(xué)熱原等。細(xì)菌性熱原，是某些細(xì)菌的代謝產(chǎn)物、細(xì)菌尸體及內(nèi)毒素。致熱能力最強(qiáng)的是革蘭氏陰性桿菌的產(chǎn)物，其次是革蘭陽性桿菌類，革蘭陽性球菌則較弱，霉菌、酵母菌、甚至病毒也能產(chǎn)生熱原。精選pptn外源性致熱源：如微生物病原體及其產(chǎn)物、炎癥滲出物、無菌性壞死組織、抗原抗體復(fù)合物等，通過激活血液中的中性粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞和單核吞噬細(xì)胞系統(tǒng)，使其產(chǎn)生并釋放內(nèi)源性致熱源，引起發(fā)熱.n內(nèi)源性致熱源：又稱白細(xì)

2、胞致熱源，如白介素(IL-1)、腫瘤壞死因子(TNF)和干擾素等?？芍苯幼饔糜隗w溫調(diào)節(jié)中樞的體溫調(diào)定點(diǎn)，使溫閾上升，體溫調(diào)節(jié)中樞對體溫加以重新調(diào)節(jié)，并通過垂體內(nèi)分泌因素使代謝增加或通過運(yùn)動(dòng)神經(jīng)使骨骼肌陣縮(臨床表現(xiàn)為寒戰(zhàn))，使產(chǎn)熱增多；另方面可通過交感神經(jīng)使皮膚血管及豎毛肌收縮排汗停止，散熱減少。這一綜合調(diào)節(jié)作用使產(chǎn)熱大于散熱，體溫升高引起發(fā)熱。1.熱原的定義和分類熱原的定義和分類精選ppt2.熱原與熱原反應(yīng)熱原與熱原反應(yīng)n臨床上使用注射劑常易發(fā)生不良反應(yīng)(冷感、寒戰(zhàn)、發(fā)熱、頭痛、惡心、嘔吐、膚色灰白、昏迷、休克)而加重病情，甚至導(dǎo)致病人重要器官功能衰竭或死亡。q輸入帶有熱原的注射液的結(jié)果輸入

3、帶有熱原的注射液的結(jié)果：大約半小時(shí)就能產(chǎn)生發(fā)冷、寒戰(zhàn)、惡心嘔吐、體溫升高等不良反應(yīng)，嚴(yán)重者體溫可升至40度，出現(xiàn)寒戰(zhàn)，昏迷、虛脫不及時(shí)搶救甚至危及生命。熱原反應(yīng)一般存在一個(gè)短的潛伏期，溫度先稍上升，然后又略微下降，接著溫度再快速上升，并達(dá)到峰值，所以有人認(rèn)為細(xì)菌性熱原自身并不引起發(fā)熱，而是由于熱原進(jìn)入人體后使體內(nèi)多形性白細(xì)胞及其他細(xì)胞釋放一種內(nèi)源性熱原，作用于視丘下部體溫調(diào)節(jié)中樞，可能引起5-羥色胺的升高而導(dǎo)致發(fā)熱。精選ppt2.熱原與熱原反應(yīng)熱原與熱原反應(yīng)n細(xì)菌內(nèi)毒素的危害:當(dāng)人(或動(dòng)物)體血液系統(tǒng)的輸入液中混入微量的細(xì)菌內(nèi)毒素時(shí),在很短時(shí)間內(nèi)將會(huì)使人產(chǎn)生昏迷和高燒,若不及時(shí)搶救,很可能危及

4、生命。有研究報(bào)道,將細(xì)菌內(nèi)毒素濃度為5ngPml的試劑,按每單位體重(kg) 50ng的劑量注入家兔體內(nèi),家兔體溫會(huì)升高016,人對細(xì)菌內(nèi)毒素的反應(yīng)比家兔更敏感;細(xì)菌內(nèi)毒素在水中易集成締合體,這種顆粒性污染,后果相當(dāng)嚴(yán)重,會(huì)造成微血管栓塞,引起組織壞死或?qū)е卵軆?nèi)芽腫甚至血凝,因此國家藥典對注射品中細(xì)菌內(nèi)毒素指標(biāo)有嚴(yán)格規(guī)定.精選pptn1875年Brrdon-Sanderson從腐肉中分離出能引起上述一系列癥狀的不帶活菌的物質(zhì)稱為熱原,并將上述一系列不良反應(yīng)定為熱原反應(yīng)。n1923年Seibert肯定熱原來源于細(xì)菌,它能從濾器濾過，對熱穩(wěn)定，注射劑雖經(jīng)嚴(yán)格滅菌，仍不能排除熱原反應(yīng)的發(fā)生，而提出

5、采用家兔檢測熱原的方法。n1942年美國首先將家兔熱原檢查法收入藥典,作為檢查藥品注射液中發(fā)熱物質(zhì)的法定方法。此后世界各國藥典均規(guī)定了該檢查方法。中國藥典自1953年版開始收載了熱原檢查法。2.熱原與熱原反應(yīng)熱原與熱原反應(yīng)精選pptn1.2熱原致熱機(jī)理 熱原進(jìn)入血液循環(huán)系統(tǒng)后,并不直接引起發(fā)熱和其它毒性反應(yīng)，但它可使白細(xì)胞(單核細(xì)胞)釋放出“內(nèi)源性熱原”質(zhì)，從而導(dǎo)致機(jī)體發(fā)熱。 對于熱原目前國內(nèi)外仍未有統(tǒng)一的認(rèn)識,但從國內(nèi)外文獻(xiàn)報(bào)道中都普遍認(rèn)為:它是指細(xì)菌內(nèi)毒素的脂多糖。 歐洲藥典委員會(huì)副主席J.Van Noordwijk提出:“嚴(yán)格地講，不是每一種熱原都具有脂多糖的結(jié)構(gòu)，但所有已知的細(xì)菌內(nèi)毒素

6、脂多糖都有熱原活性”。在藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范（GMP）條件下，藥品生產(chǎn)的質(zhì)量控制一般可以接受的觀點(diǎn)是：不存在細(xì)菌內(nèi)毒素意味著不存在熱原。2.熱原與熱原反應(yīng)熱原與熱原反應(yīng)精選pptn細(xì)菌內(nèi)毒素是G-菌的細(xì)胞壁外壁層上的特有結(jié)構(gòu)，它在細(xì)菌生長、繁殖過程中，并不分泌到介質(zhì)中，也不能從外層上自然脫落，它不是細(xì)菌的代謝物，當(dāng)細(xì)菌死亡解體后，才顯示出一系列的內(nèi)毒素生物活性。n細(xì)菌內(nèi)毒素主要是由多糖抗原、核心多糖和類脂A三部分組成。其中類脂A是以脂化的葡萄糖胺二糖為單位，通過焦磷酸鍵組成的一種獨(dú)特的糖脂化合物，具有致熱作用，是細(xì)菌內(nèi)毒素的活性成分。3.細(xì)菌內(nèi)毒素的定義和組成細(xì)菌內(nèi)毒素的定義和組成精選pptn

7、內(nèi)毒素對哺乳類動(dòng)物有很顯著的致熱性。當(dāng)細(xì)菌死亡或粘附在其它細(xì)胞時(shí)，才表現(xiàn)出毒性。少量的內(nèi)毒素（2 ng/kg體重）靜脈注射就可以引起發(fā)燒，大劑量時(shí)可以引起血液循環(huán)障礙和內(nèi)毒素休克。在正常人體內(nèi)，肝臟在內(nèi)毒素的清除與解毒過程中起著重要作用，使血液中的內(nèi)毒素含量保持在較低水平。如果肝功能嚴(yán)重受損，經(jīng)腸道吸收的內(nèi)毒素就可通過肝臟進(jìn)入體內(nèi)循環(huán)，形成內(nèi)毒素血癥，進(jìn)而加重肝臟損害，并引起腎功能減退等。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，敗血癥、尿路感染、腦膜炎、重癥肝病、血栓性脈管炎等疾病都可能與內(nèi)毒素有關(guān)。 n根據(jù)國家藥典的規(guī)定，藥品或制劑中的內(nèi)毒素含量應(yīng)低于規(guī)定的限度。4.細(xì)菌內(nèi)毒素的臨床作用細(xì)菌內(nèi)毒素的臨床作用精選ppt5

8、.內(nèi)毒素產(chǎn)生毒性的基本機(jī)理內(nèi)毒素產(chǎn)生毒性的基本機(jī)理 n鑒于各種來源不同的內(nèi)毒素具有類似的內(nèi)毒素活性，這些內(nèi)毒素的多糖組分雖然不同，但都含有類脂A。因此，類脂A是內(nèi)毒素的活性中心。 n內(nèi)毒素表現(xiàn)出的致死毒性、熱原性、誘導(dǎo)白細(xì)胞減少等有害作用及其他生物活性見表1。 精選pptnA. 在機(jī)體水平上 n發(fā)熱性： 健康人1 ng ；病人0.20.5 ng ；n大劑量時(shí)具有致死毒性以及如下反應(yīng)和作用：nl Shwartzman反應(yīng) nl 骨髓反應(yīng)（bone marrow reaction） nl 白血球減少（IEUcopenia） nl 血小板減少（thrombocytopenia） nl 非特異的感染防

9、御（nonspecific resistancnl 耐受性（tolerant） nl 輔藥作用（adjuvant） nl 寒顫（血壓低下，血管內(nèi)凝固） 表表1 細(xì)菌內(nèi)毒素在不同水平上的生物活性細(xì)菌內(nèi)毒素在不同水平上的生物活性精選pptnB在細(xì)胞水平上 nl 提高巨噬細(xì)胞的活性化（TNF，IL-1.IL-6產(chǎn)生） nl 防止巨噬細(xì)胞游走 nl 促使前列腺素的產(chǎn)生 nl 具有抗腫瘤壞死作用 n nC在分子水平上 nl 提高Hageman因子活性化 nl 提高纖維蛋白溶酶原活性化表表1 細(xì)菌內(nèi)毒素在不同水平上的生物活性細(xì)菌內(nèi)毒素在不同水平上的生物活性精選ppt6.內(nèi)毒素自身的特點(diǎn)和潛在的生物學(xué)效應(yīng)內(nèi)

10、毒素自身的特點(diǎn)和潛在的生物學(xué)效應(yīng)n由于革蘭氏陰性菌非常頑固，在水中只需極少的養(yǎng)分即可存活，而內(nèi)毒素是革蘭氏陰性菌死亡或粘附于其它細(xì)菌時(shí)，細(xì)胞壁破碎或溶解所產(chǎn)生的，因此，內(nèi)毒素在各種溶液中及接觸水溶液的器壁上都是存在的，幾乎是無處不在。 精選pptn內(nèi)毒素是大多數(shù)生物材料的污染源，它的存在使得目前許多生物、藥物試驗(yàn)出現(xiàn)混亂的結(jié)果，給生產(chǎn)帶來了許多困難。（1）藥品的污染。如化學(xué)方法合成的種類繁多的西藥、從植物中提取的中藥，在其合成或提取的過程中有可能被內(nèi)毒素所污染。（2）生產(chǎn)原料、生物制劑。6.內(nèi)毒素自身的特點(diǎn)和潛在的生物學(xué)效應(yīng)內(nèi)毒素自身的特點(diǎn)和潛在的生物學(xué)效應(yīng)精選ppt7.熱原的基本性質(zhì)熱原的基

11、本性質(zhì)n細(xì)菌內(nèi)毒素系指細(xì)菌的死體或細(xì)菌代謝物,所以只要有細(xì)菌的地方,就會(huì)有細(xì)菌內(nèi)毒素存在,細(xì)菌內(nèi)毒素的主要成份是產(chǎn)生于革蘭氏陰性菌(以革蘭氏陰性桿菌最多)細(xì)胞外壁層的脂多糖類物質(zhì),其活性主要源于其結(jié)構(gòu)中的類脂A。n體積小:細(xì)菌內(nèi)毒素的大小、形態(tài)、化學(xué)組成因菌種不同而不同,細(xì)菌內(nèi)毒素要比細(xì)菌小得多,直徑僅15nm ,類脂A更小,分子量只有幾千,所以一般的過濾方法不易祛除,因其體小、質(zhì)輕,有時(shí)甚至在蒸餾時(shí)會(huì)隨水蒸氣的霧滴逸出到蒸餾水中。精選ppt7.熱原的基本性質(zhì)熱原的基本性質(zhì)n(1)水溶性：能溶于水,其濃縮的水溶液往往帶有乳光。n(2)耐熱性：60加熱1h不受影響，100也不分解，在120高溫下

12、加熱4小時(shí)僅能破壞98 % ,但在180，3-4h(2h挑戰(zhàn)試驗(yàn)驗(yàn)證不合格 ) ,250，30-45min或650 1min可使熱原徹底破壞。在通常注射劑的熱壓滅菌中熱原不易被破壞。精選pptn(3)體積小:細(xì)菌內(nèi)毒素的大小、形態(tài)、化學(xué)組成因菌種不同而不同,細(xì)菌內(nèi)毒素要比細(xì)菌小得多,約15nm ,類脂A更小,分子量只有幾千,所以一般的過濾方法不易祛除,因其體小、質(zhì)輕,有時(shí)甚至在蒸餾時(shí)會(huì)隨水蒸氣的霧滴逸出到蒸餾水中。n(4)不揮發(fā)性：熱原能溶于水但不揮發(fā)，但可隨水蒸氣的霧滴進(jìn)入注射用水中，因此制備注射用水時(shí)，原水中的熱原可經(jīng)蒸餾除去，但需多次蒸餾，并加有隔沫裝置，單次蒸餾往往效果不理想。 n(5

13、)化學(xué)穩(wěn)定性強(qiáng)：熱原能被強(qiáng)酸強(qiáng)堿破壞，也能被強(qiáng)氧化劑，如高錳酸鉀或過氧氫等破壞，超聲波及某些表面活性劑（如去氧膽酸鈉）也能使之失活。 7.熱原的基本性質(zhì)熱原的基本性質(zhì)精選ppt8.內(nèi)毒素去除是一個(gè)難題內(nèi)毒素去除是一個(gè)難題 n內(nèi)毒素的本質(zhì)說明了從水溶液中消除熱原是個(gè)難題。因細(xì)菌內(nèi)毒素體積小,耐熱性及化學(xué)穩(wěn)定性強(qiáng),所以一般的過濾、加熱和化學(xué)方法不易去除或滅活?？赡艹蔀榧?xì)菌滋生溫床的活性碳吸附法及離子交換樹脂吸附法,也不甚理想。行之有效的方法,多用超濾或反滲透法。精選ppt8.內(nèi)毒素去除是一個(gè)難題內(nèi)毒素去除是一個(gè)難題 n內(nèi)毒素分子由于具有磷酸基團(tuán)而帶負(fù)電荷，因此理論上可以用帶正電荷的吸附劑來去除。然

14、而，實(shí)際上這種結(jié)合效果不佳。其原因一方面是天然存在的內(nèi)毒素分子上所攜帶的磷酸基團(tuán)（負(fù)電荷）已經(jīng)被陽電荷的離子（Ca2，Mg2，Na，K 等）或多胺（尸胺、精胺、亞精胺、乙醇胺）等中和；另一方面，在自然界中內(nèi)毒素并不以單一分子存在，而是以相對分子質(zhì)量不等的集聚體存在，內(nèi)毒素分子與本身所攜帶的負(fù)電荷參與了聚合體的形成，很少由游離的負(fù)電荷暴露在集聚體外表。因此，在溶液中去除內(nèi)毒素污染或消除內(nèi)毒素便成了生物研究中的一個(gè)難題。 精選ppt9.注射劑污染熱原的途徑注射劑污染熱原的途徑(1) 從溶劑中帶入從溶劑中帶入 是注射劑出現(xiàn)熱原的主要原因。注射用水的熱原污染是注射劑熱原污染的主要來源。(2) 從原輔料

15、中帶入從原輔料中帶入 原料質(zhì)量不好，原料包裝不嚴(yán)閉，儲(chǔ)存不當(dāng)，均會(huì)被細(xì)菌污染產(chǎn)生細(xì)菌內(nèi)毒素，故配制注射劑時(shí)原輔料必須按原輔料質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)合格后方可使用，(3) 從容器、用具、管道和裝置等帶入從容器、用具、管道和裝置等帶入 如未按GMP要求認(rèn)真清洗處理，常易導(dǎo)致熱原污染，故注射劑的配制必須嚴(yán)格按容器具清潔消毒標(biāo)準(zhǔn)操作程序操作。精選ppt9.注射劑污染熱原的途徑注射劑污染熱原的途徑 (4) 制備過程與生產(chǎn)環(huán)境中的污染制備過程與生產(chǎn)環(huán)境中的污染 在生產(chǎn)過程中室內(nèi)衛(wèi)生差，空氣潔凈度不夠，操作時(shí)間過長，裝置不密閉，產(chǎn)生滅菌不及時(shí)或不合格，均增加細(xì)菌污染機(jī)會(huì)，從而可能產(chǎn)生熱原。配制注射劑應(yīng)在GMP規(guī)定的潔

16、凈區(qū)內(nèi)生產(chǎn)，同時(shí)操作人員的衛(wèi)生要符合潔凈區(qū)的要求。 (5) 從輸液器帶入從輸液器帶入 有時(shí)輸液本身不含熱原，但仍發(fā)現(xiàn)熱原反應(yīng)。這往往是由于輸液器具有時(shí)輸液本身不含熱原，但仍發(fā)現(xiàn)熱原反應(yīng)。這往往是由于輸液器具(如輸液吊瓶、膠皮管等如輸液吊瓶、膠皮管等)污染所致。污染所致。 （6）滅菌 生產(chǎn)注射劑時(shí)配制、灌封后需進(jìn)行滅菌操作，由于滅菌設(shè)備不正常、滅菌數(shù)量過多、操作失誤都會(huì)造成注射劑滅菌不完全，會(huì)造成微生物繁殖產(chǎn)生熱原。因此，滅菌設(shè)備需定期驗(yàn)證，并且滅菌設(shè)備應(yīng)有監(jiān)控系統(tǒng)，隨時(shí)監(jiān)測滅菌情況。精選ppt10.除去注射劑中熱原的方法除去注射劑中熱原的方法(1)吸附法：即在配液時(shí)加入0.1-0.5%（溶液體

17、積）的針用一級活性炭，煮沸并攪拌15分鐘，即能除去大部分熱原，而且活性炭還有脫色、助濾、除臭作用。但活性炭也會(huì)吸附部分藥液，故使用時(shí)應(yīng)過量投料，但小劑量藥物不宜使用 (2)離子交換:熱原在水溶液中帶負(fù)電，可被陰樹脂所交換，但樹脂易飽和，須經(jīng)常再生。 (3)凝膠濾過法：也稱分子篩濾過法，利用熱原與藥物分子量的差異，將兩者分開,當(dāng)制備的注射劑，其分子量明顯大于熱原分子時(shí)，可用此法除去熱原。(4)超濾法：3.015nm(50nm)超濾膜，效果較好。(5)反滲透法。精選ppt10.注射用水熱原的去除方法注射用水熱原的去除方法 1、反滲透法； 2、超濾法； 3、吸附法； 4、蒸餾法。精選ppt11.除去

18、容器上熱原的方法除去容器上熱原的方法(1)高溫法：熱原的耐熱性能良好，60加熱1h不被分解破壞，100不降解，但18034h、20060min或2503045min可使熱原徹底破壞。因此耐熱物品如玻璃制品、金屬制品、生產(chǎn)過程中所用的容器和其它用具以及注射時(shí)使用的注射器等，均可采用此法破壞熱原。但在通常使用的注 射 劑 熱 壓 滅 菌 條 件 下 不 足 以 破 壞 熱 原 。 (2)酸堿法：重鉻酸鉀硫酸清洗液或稀氫氧化鈉溶液。精選ppt12.細(xì)菌內(nèi)毒素控制措施細(xì)菌內(nèi)毒素控制措施n細(xì)菌內(nèi)毒素控制措施細(xì)菌內(nèi)毒素控制措施精選ppt13.熱原檢查法熱原檢查法n定義定義n2010 版與版與2005版區(qū)別

19、版區(qū)別n修訂背景修訂背景n實(shí)驗(yàn)用兔靈敏度測試實(shí)驗(yàn)用兔靈敏度測試n熱原檢查適用性研究熱原檢查適用性研究精選ppt熱原檢查法熱原檢查法n定義：本法系將一定劑量的供試品，定義：本法系將一定劑量的供試品，靜脈注入家兔體內(nèi)，在規(guī)定時(shí)間內(nèi)，靜脈注入家兔體內(nèi)，在規(guī)定時(shí)間內(nèi)，觀察家兔體溫升高的情況，以判定觀察家兔體溫升高的情況，以判定供試品中所含熱原的限度是否符合供試品中所含熱原的限度是否符合規(guī)定規(guī)定。精選ppt 2010 版與版與2005版區(qū)別版區(qū)別2010版版2005版版1、體重體重1.7kg以上以上（三部未改變）（三部未改變）體重體重1.73.0kg2、其中升溫達(dá)其中升溫達(dá) 0.6的的家兔應(yīng)休息家兔應(yīng)休

20、息2周以上周以上 3、 _*每一家兔的使用次數(shù)，用于每一家兔的使用次數(shù)，用于一般藥品的檢查，不應(yīng)超過一般藥品的檢查，不應(yīng)超過10次。次。*三部仍規(guī)定，對血液制品、抗毒素和其他同一過敏三部仍規(guī)定，對血液制品、抗毒素和其他同一過敏原的供試品在原的供試品在5天內(nèi)可重復(fù)使用天內(nèi)可重復(fù)使用1次。次。精選ppt2010版版2005版版4、在、在做做熱原檢查前熱原檢查前1-2日日 在在作作熱原檢查前熱原檢查前1-2日日5、溫度相差不得大于、溫度相差不得大于3 ，且應(yīng)控制在，且應(yīng)控制在1725（指實(shí)驗(yàn)室和飼養(yǎng)室）（指實(shí)驗(yàn)室和飼養(yǎng)室）實(shí)驗(yàn)室和飼養(yǎng)室的溫度相實(shí)驗(yàn)室和飼養(yǎng)室的溫度相差不得大于差不得大于5，實(shí)驗(yàn)室的，

21、實(shí)驗(yàn)室的溫度應(yīng)在溫度應(yīng)在17256、實(shí)驗(yàn)室溫度變化不得、實(shí)驗(yàn)室溫度變化不得大于大于3應(yīng)注意應(yīng)注意實(shí)驗(yàn)室溫度變化不實(shí)驗(yàn)室溫度變化不得大于得大于3精選ppt2010版版2005版版7、應(yīng)應(yīng)防止動(dòng)物騷動(dòng)防止動(dòng)物騷動(dòng)防止動(dòng)物騷動(dòng)防止動(dòng)物騷動(dòng)8、置于、置于寬松寬松適宜的裝置中適宜的裝置中置于適宜的裝置中置于適宜的裝置中9、且、且同組同組各兔間正常體溫各兔間正常體溫之差不得超過之差不得超過1且各兔間正常體溫之差且各兔間正常體溫之差不得超過不得超過1 精選ppt2010版版2005版版10、與供試品接觸的試、與供試品接觸的試驗(yàn)用器皿應(yīng)無菌、驗(yàn)用器皿應(yīng)無菌、無熱原。去除熱原無熱原。去除熱原通常采用干熱滅菌通常

22、采用干熱滅菌法（法（250、加熱、加熱30分鐘分鐘），也可采），也可采用其他適宜的方法用其他適宜的方法試驗(yàn)用器的注射器、針試驗(yàn)用器的注射器、針頭頭 及一切與供試品溶及一切與供試品溶液接觸液接觸 的器皿，應(yīng)置烘的器皿，應(yīng)置烘箱中用箱中用250加熱加熱30分分鐘鐘，也可采用其他適宜，也可采用其他適宜的方法除去熱原的方法除去熱原精選ppt2010版版2005版版11、 3只家兔體溫升只家兔體溫升高總和低于高總和低于1.3 （三部未變，仍為（三部未變，仍為1.4 ）3只家兔體溫升高總只家兔體溫升高總和低于和低于1.4 精選ppt修訂背景修訂背景n、熱原實(shí)驗(yàn)是一個(gè)整體的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，易受許、熱原實(shí)驗(yàn)是一個(gè)整

23、體的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，易受許多因素的影響。動(dòng)物自身的行為、生理、外部多因素的影響。動(dòng)物自身的行為、生理、外部環(huán)境以及一些實(shí)驗(yàn)過程等都可影響結(jié)果的準(zhǔn)確環(huán)境以及一些實(shí)驗(yàn)過程等都可影響結(jié)果的準(zhǔn)確性。性。n、對家兔體重取消了上限、對家兔體重取消了上限3.0kg3.0kg，同時(shí)取消，同時(shí)取消家兔使用次數(shù)不超過次的規(guī)定。家兔使用次數(shù)不超過次的規(guī)定。精選ppt 修訂背景修訂背景n、增加了升溫達(dá)、增加了升溫達(dá)0.6 的家兔應(yīng)休息的家兔應(yīng)休息2 周以上新要求。周以上新要求。n4、實(shí)驗(yàn)環(huán)境要求更加嚴(yán)格：實(shí)驗(yàn)室與飼養(yǎng)、實(shí)驗(yàn)環(huán)境要求更加嚴(yán)格：實(shí)驗(yàn)室與飼養(yǎng)室溫度相差由不大于室溫度相差由不大于 5 改為改為3 n5、強(qiáng)調(diào)同組各家

24、兔間溫差不大于、強(qiáng)調(diào)同組各家兔間溫差不大于1 ，對，對家兔固定方式：寬松。家兔固定方式：寬松。n6、判定標(biāo)準(zhǔn)更加嚴(yán)格：初試的、判定標(biāo)準(zhǔn)更加嚴(yán)格：初試的3只家兔體只家兔體溫升高總和低于溫升高總和低于 1.4 改為低于改為低于1.3 精選ppt實(shí)驗(yàn)用兔靈敏度測試實(shí)驗(yàn)用兔靈敏度測試n每年不定期隨機(jī)抽取體重和使用次數(shù)不同的每年不定期隨機(jī)抽取體重和使用次數(shù)不同的實(shí)驗(yàn)用兔，按熱原檢查法要求注射實(shí)驗(yàn)用兔，按熱原檢查法要求注射EU/kg或或10EU/kg內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品，應(yīng)得到不符合規(guī)內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品，應(yīng)得到不符合規(guī)定的結(jié)果。定的結(jié)果。精選ppt熱原檢查適用性研究熱原檢查適用性研究n新品種建立熱原檢查標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，建議進(jìn)行

25、適用新品種建立熱原檢查標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，建議進(jìn)行適用性研究，在不影響家兔正常生理的前提下，性研究，在不影響家兔正常生理的前提下，按人用每公斤體重每小時(shí)最大供試品劑量的按人用每公斤體重每小時(shí)最大供試品劑量的倍設(shè)定限值。倍設(shè)定限值。（化學(xué)藥品一般為倍，中藥為（化學(xué)藥品一般為倍，中藥為倍）。倍）。精選ppt熱原檢查適用性研究熱原檢查適用性研究n適用性試驗(yàn)時(shí)設(shè)三組：限值劑量的供試品適用性試驗(yàn)時(shí)設(shè)三組：限值劑量的供試品組組 10EU/kg內(nèi)毒素組含內(nèi)毒素組含10EU/kg內(nèi)毒素的內(nèi)毒素的供試品組。供試品組。n適用性試驗(yàn)判定：適用性試驗(yàn)判定： 組符合規(guī)定，組符合規(guī)定， 、組、組不符合規(guī)定表明該品種可建立熱原檢查項(xiàng)。

26、不符合規(guī)定表明該品種可建立熱原檢查項(xiàng)。精選ppt14.細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法n定義定義n2010版與版與2005版區(qū)別版區(qū)別n修訂背景修訂背景n注射用藥品、生物制品建立細(xì)菌內(nèi)毒素檢查注射用藥品、生物制品建立細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法指導(dǎo)原則法指導(dǎo)原則精選ppt細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法n定義：本法系利用鱟試劑來檢測或量化由定義：本法系利用鱟試劑來檢測或量化由革蘭氏陰性菌產(chǎn)生的細(xì)菌內(nèi)毒素，以判斷革蘭氏陰性菌產(chǎn)生的細(xì)菌內(nèi)毒素，以判斷供試品中細(xì)菌內(nèi)毒素的限量是否符合規(guī)定供試品中細(xì)菌內(nèi)毒素的限量是否符合規(guī)定的一種方法。的一種方法。精選ppt 2010 2010版與版與20052005版區(qū)別版區(qū)別

27、2010版2005年版1、細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水系指內(nèi)毒素含量小于0.015EU/ml（用于凝膠法）或0.005EU/ml（用于光度測定法）且對內(nèi)毒素試驗(yàn)無干擾作用的滅菌注射用水 凝膠法細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水系指內(nèi)毒素含量小于0.015EU/ml的滅菌注射用水。光度測定法用的細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水，其內(nèi)毒素的含量應(yīng)小于0.005EU/ml 精選ppt2010版2005年版2 2、常用干熱滅菌法（、常用干熱滅菌法（250250、3030分鐘以上分鐘以上）去除）去除 常用的方法是在常用的方法是在250 250 干烤至少干烤至少6060分鐘分鐘3、 或鱟試劑生產(chǎn)廠家推薦或鱟試劑生產(chǎn)廠家推薦4 4、內(nèi)毒素限值按內(nèi)

28、毒素限值按L=K/ML=K/M計(jì)算，計(jì)算，M M為人用每公斤體重每小時(shí)的最為人用每公斤體重每小時(shí)的最大供試品劑量，以大供試品劑量，以ml/ml/（kghkgh）、）、mg/mg/（kghkgh）或）或U/U/（kghkgh）表示，人均體重按）表示，人均體重按 60kg 60kg 計(jì)算，計(jì)算，人體表面積按人體表面積按1.62m1.62m2 2計(jì)算。計(jì)算。注射時(shí)間若不足注射時(shí)間若不足1 1小時(shí)，按小時(shí)，按1 1小時(shí)計(jì)算。小時(shí)計(jì)算。供試品每供試品每平方米體表面積劑量乘以平方米體表面積劑量乘以0.0270.027即可轉(zhuǎn)換為每千克體重劑量（即可轉(zhuǎn)換為每千克體重劑量（M M）內(nèi)毒素限值按內(nèi)毒素限值按L=K/ML=K/M計(jì)算，計(jì)算， M M為人為人用每公斤體重每小時(shí)的最大供試用每公斤體重每小時(shí)的最大供試品劑量，以品劑量，以ml/ml/（kghkgh）、）、mg/mg/（kghkgh）或