1、會計學1多聚酶鏈式反應(yīng)擴增多聚酶鏈式反應(yīng)擴增dna片段人教選修一片段人教選修一PCR 擴增技術(shù)1概念DNAPCR 技 術(shù) 是 _ 的 簡 稱 ， 是 一 種 在_ 進行的迅速擴增 DNA 的技術(shù)。它能夠以極少量的_為模板在短時間內(nèi)復制出上百萬份。2PCR 反應(yīng)過程(1)變性。(2)復性。(3)延伸。3結(jié)果兩個引物DNA 聚合酶只能特異性地復制在_之間的DNA 序列，使這段固定長度的序列呈指數(shù)擴增。多聚酶鏈式反應(yīng)體外第1頁/共16頁DNA 含量測定1原理：利用 DNA 在_的紫外線波段的吸收峰曲線來測定相應(yīng)含量。260 nm2 計算公式 ：DNA 含 量 (g/mL) 50(260 nm 讀數(shù))

2、(_)。稀釋倍數(shù)第2頁/共16頁體內(nèi)復制PCR 擴增解旋方式在解旋酶的作用下，細胞提供能量，部分解旋加熱至 90 左右，雙鏈全部解開，不需要解旋酶引物一小段 RNARNA 或者單鏈 DNA合成子鏈在引物的基礎(chǔ)上，一條鏈連續(xù)合成，另一條不連續(xù)合成分別從兩條鏈的引物端開始，連續(xù)合成，控制溫度條件在 72 特點邊解旋邊復制，半保留復制在體外迅速擴增DNA 聚合酶不需要耐高溫聚合酶耐高溫的 TaqDNA 聚合酶循環(huán)次數(shù)受生物自身控制30 多次相同點兩者都需要模板、四種脫氧核苷酸，都需要酶和能量，需要一定緩沖溶液環(huán)境DNA 的體內(nèi)復制與 PCR 擴增的區(qū)別與聯(lián)系第3頁/共16頁PCR 技術(shù)的原理及過程1

3、PCR 原理PCR 技術(shù)利用了 DNA 的熱變性原理：在 80100的范圍內(nèi)，DNA 的雙螺旋結(jié)構(gòu)解體，雙鏈分開，當溫度緩慢降低時，兩條彼此分離的 DNA 鏈又會重新結(jié)合成雙鏈。第4頁/共16頁2PCR 的反應(yīng)過程(1)變性：當溫度上升到 90 以上時，雙鏈 DNA 解旋為單鏈。(2)復性：溫度下降為 50 左右時，兩種引物通過堿基互補配對與兩條單鏈 DNA 結(jié)合。(3)延伸：當溫度上升至 72 左右時，四種脫氧核苷酸在DNA 聚合酶的作用下，合成新的 DNA 鏈。第5頁/共16頁3PCR 反應(yīng)的條件(1)穩(wěn)定的緩沖液環(huán)境。(2)DNA 模板。(3)分別與模板 DNA 兩條模板鏈相結(jié)合的引物。

4、(4)A、T、C、G 四種脫氧核苷酸。(5)耐熱的 DNA 聚合酶，一般用 TaqDNA 聚合酶。(6)能嚴格控制溫度變化的溫控設(shè)施。第6頁/共16頁PCR 擴增技術(shù)與 DNA 體內(nèi)復制的區(qū)別【例 1 】下列屬于 PCR 擴增區(qū)別于 DNA 體內(nèi)復制的是()需要解旋酶 需要引物 常溫常壓下進行以四種脫氧核苷酸為原料需要耐高溫的 TaqDNA 聚合酶邊解旋邊復制可以短時間得到大量拷貝需要模板ACBD第7頁/共16頁【名師點撥】：體內(nèi)復制與 PCR 擴增既有區(qū)別又有聯(lián)系，PCR 體外擴增概念很明確，在體外，加熱解旋，因此需要耐高溫的 TaqDNA 聚合酶，它能以極少量的 DNA 為模板，在幾小時內(nèi)

5、復制出上百萬份的 DNA?！敬鸢浮浚篊第8頁/共16頁【配對練習 1】真核生物細胞質(zhì)中也有 DNA，例如葉綠體、線粒體等，關(guān)于細胞質(zhì) DNA 復制不正確的是()A需要解旋酶B需要 DNA 聚合酶C兩條鏈同時復制只有一個起點D不是半保留復制解析：真核生物細胞質(zhì)中 DNA 復制需要解旋酶、DNA 聚合酶、兩條鏈同時復制只有一個起點，是半保留復制。答案：D第9頁/共16頁PCR 擴增的條件【例 2】PCR 擴增包括三個環(huán)節(jié)，變性、復性(退火)、延伸，這三步的溫度依次是()A94 、55 、72 B72 、55 、94 C55 、94 、72 D80 、60 、72 第10頁/共16頁【名師點撥】：P

6、CR 擴增的原理就是利用 DNA 耐高溫的特性，使 DNA 在 94 左右雙鏈解螺旋，然后在低溫(3755 )的情況下，兩條人工合成的寡核苷酸引物與互補的單鏈 DNA模板結(jié)合，形成部分雙鏈；在 TaqDNA 聚合酶的最適溫度(72 )下，以引物 3端為合成的起點，以單核苷酸為原料，沿模板從子鏈的 53方向延伸，合成 DNA 新鏈?！敬鸢浮浚篈第11頁/共16頁【配對練習 2】在下面哪個溫度范圍內(nèi)，DNA 雙螺旋結(jié)構(gòu)解開()A1020 B80100 C2030 D4060 解析：PCR 擴增在 80100 溫度范圍內(nèi)，DNA 雙螺旋結(jié)構(gòu)解開。 答案： B第12頁/共16頁DNA 含量測定1原理：

7、利用 DNA 在_的紫外線波段的吸收峰曲線來測定相應(yīng)含量。260 nm2 計算公式 ：DNA 含 量 (g/mL) 50(260 nm 讀數(shù))(_)。稀釋倍數(shù)第13頁/共16頁體內(nèi)復制PCR 擴增解旋方式在解旋酶的作用下，細胞提供能量，部分解旋加熱至 90 左右，雙鏈全部解開，不需要解旋酶引物一小段 RNARNA 或者單鏈 DNA合成子鏈在引物的基礎(chǔ)上，一條鏈連續(xù)合成，另一條不連續(xù)合成分別從兩條鏈的引物端開始，連續(xù)合成，控制溫度條件在 72 特點邊解旋邊復制，半保留復制在體外迅速擴增DNA 聚合酶不需要耐高溫聚合酶耐高溫的 TaqDNA 聚合酶循環(huán)次數(shù)受生物自身控制30 多次相同點兩者都需要模板、四種脫氧核苷酸，都需要酶和能量，需要一定緩沖溶液環(huán)境DNA 的體內(nèi)復制與 PCR 擴增的區(qū)別與聯(lián)系第14頁/共16頁體內(nèi)復制PCR 擴增解旋方式在解旋酶的作用下，細胞提供能量，部分解旋加熱至 90 左右，雙鏈全部解開，不需要解旋酶引物一小段 RNARNA 或者單鏈 DNA合成子鏈在引物的基礎(chǔ)上，一條鏈連續(xù)合成，另一條不連續(xù)合成分別從兩條鏈的引物端開始，連續(xù)合成，控制溫度條件在 72 特點邊解旋邊復制，半保留復制在體