1、 實驗四實驗四 白細胞計數(shù)、網(wǎng)織紅細胞計數(shù)及血沉測定白細胞計數(shù)、網(wǎng)織紅細胞計數(shù)及血沉測定目的目的 1掌握顯微鏡白細胞計數(shù)的方法。掌握顯微鏡白細胞計數(shù)的方法。 2掌握網(wǎng)織紅細胞手工計數(shù)的方法。掌握網(wǎng)織紅細胞手工計數(shù)的方法。 3血沉測定示教。血沉測定示教。一、顯微鏡白細胞計數(shù)臨檢指點一、顯微鏡白細胞計數(shù)臨檢指點P32 1. 概述 人外周血白細胞 單核細胞 白細胞 淋巴細胞 中性分葉核粒細胞 粒細胞 中性桿狀核粒細胞 嗜酸性粒細胞 嗜堿性粒細胞一、顯微鏡白細胞計數(shù)一、顯微鏡白細胞計數(shù)2原理原理 用白細胞計數(shù)稀釋液用白細胞計數(shù)稀釋液2%冰醋酸參與冰醋酸參與1%美美藍或結(jié)晶紫數(shù)滴藍或結(jié)晶紫數(shù)滴0.38m

2、l，將血液，將血液20l稀釋稀釋20倍，在破壞成熟紅細胞的同時固定白細胞，后充入倍，在破壞成熟紅細胞的同時固定白細胞，后充入改良牛鮑計數(shù)板，在低倍鏡下計數(shù)四角改良牛鮑計數(shù)板，在低倍鏡下計數(shù)四角4個大方格個大方格內(nèi)的白細胞數(shù)，經(jīng)換算求得每升血液中白細胞數(shù)。內(nèi)的白細胞數(shù)，經(jīng)換算求得每升血液中白細胞數(shù)。一、顯微鏡白細胞計數(shù)一、顯微鏡白細胞計數(shù) 3.操作步驟 1加稀釋液 ：白細胞稀釋液0.38ml2稀釋血液：末梢采血20l，參與稀釋液中混勻3溶血 ：混勻后靜置，待液體變?yōu)樽睾稚?充池：同紅細胞計數(shù) 5計數(shù)：低倍鏡下計數(shù)四角4個大方格內(nèi)白細胞總數(shù)。 一、顯微鏡白細胞計數(shù)一、顯微鏡白細胞計數(shù)4.計算計算W

3、BC=N/41020106=N/20109/L5.參考值參考值 成人：成人： 410109/L 初生兒：初生兒： 1520109/L 6月月2歲：歲： 1112109/L 6.本卷須知本卷須知 1器材：微量吸管及牛鮑計數(shù)板的校正器材：微量吸管及牛鮑計數(shù)板的校正2標本采集和稀釋應(yīng)準確標本采集和稀釋應(yīng)準確3加蓋玻片方式：加蓋玻片方式： WHO引薦引薦“推式法推式法 4充液的影響：同紅細胞計數(shù)充液的影響：同紅細胞計數(shù) 5計數(shù)原那么計數(shù)原那么 一、顯微鏡白細胞計數(shù)一、顯微鏡白細胞計數(shù)6計數(shù)室內(nèi)的細胞分布要均勻：各大方格間細胞計數(shù)室內(nèi)的細胞分布要均勻：各大方格間細胞 數(shù)相差不超越數(shù)相差不超越10%，否那

4、么應(yīng)重新重池。，否那么應(yīng)重新重池。7調(diào)整計數(shù)白細胞的數(shù)量或稀釋倍數(shù)調(diào)整計數(shù)白細胞的數(shù)量或稀釋倍數(shù):細胞數(shù)量過細胞數(shù)量過 少，可擴展計數(shù)域少，可擴展計數(shù)域(計計8或或9個大方格個大方格)或加大取或加大取 血量；細胞數(shù)量過多，可添加稀釋液至血量；細胞數(shù)量過多，可添加稀釋液至0.79ml 或僅加血或僅加血10l。8去除有核紅細胞的影響去除有核紅細胞的影響 ： 實踐白細胞數(shù)實踐白細胞數(shù)/L=100校正前白細胞數(shù)校正前白細胞數(shù)/ 100+有核紅細胞有核紅細胞 7.方法學(xué)評價方法學(xué)評價 顯微鏡計數(shù)法是傳統(tǒng)的白細胞計數(shù)法，并可用顯微鏡計數(shù)法是傳統(tǒng)的白細胞計數(shù)法，并可用 于校準血細胞分析儀，但其精細度和反復(fù)性

5、欠佳。于校準血細胞分析儀，但其精細度和反復(fù)性欠佳。 用于校準血液分析儀時應(yīng)在嚴厲規(guī)范的條件下進展。用于校準血液分析儀時應(yīng)在嚴厲規(guī)范的條件下進展。 而校準的血液分析儀在嚴厲規(guī)范的條件下，精細度和而校準的血液分析儀在嚴厲規(guī)范的條件下，精細度和 準確性較高。準確性較高。一、顯微鏡白細胞計數(shù)一、顯微鏡白細胞計數(shù) 血液分析儀檢測速度快，適宜大規(guī)模安血液分析儀檢測速度快，適宜大規(guī)模安康人群普查，但需特殊儀器，當某些人為或康人群普查，但需特殊儀器，當某些人為或病理情況如外周血有核紅細胞、宏大血小病理情況如外周血有核紅細胞、宏大血小板和血小板凝集等可干擾白細胞計數(shù)。板和血小板凝集等可干擾白細胞計數(shù)。一、顯微鏡

6、白細胞計數(shù)一、顯微鏡白細胞計數(shù)8.臨床意義臨床意義 白細胞在生理或病理情況下均可有差別。多數(shù)白細胞在生理或病理情況下均可有差別。多數(shù)與中性粒細胞數(shù)量變化一致。與中性粒細胞數(shù)量變化一致。二、網(wǎng)織紅細胞計數(shù)臨檢指點二、網(wǎng)織紅細胞計數(shù)臨檢指點P261.原理原理 網(wǎng)織紅細胞網(wǎng)織紅細胞Ret是晚幼紅細胞脫核后到完全是晚幼紅細胞脫核后到完全成熟的成熟的紅細胞間的過渡細胞。其胞質(zhì)中殘存核糖核酸等嗜紅細胞間的過渡細胞。其胞質(zhì)中殘存核糖核酸等嗜堿性物堿性物質(zhì)，故經(jīng)煌焦油藍質(zhì)，故經(jīng)煌焦油藍/新亞甲藍染液活體染色后，可新亞甲藍染液活體染色后，可見有藍綠見有藍綠色點狀、線狀、顆粒狀或網(wǎng)狀構(gòu)造，故名網(wǎng)織紅細色點狀、線狀

7、、顆粒狀或網(wǎng)狀構(gòu)造，故名網(wǎng)織紅細胞。胞。 二、網(wǎng)織紅細胞計數(shù)二、網(wǎng)織紅細胞計數(shù) 2. 2.操作步驟玻片法操作步驟玻片法1 1加染液：于載玻片的中央滴加煌焦油藍乙醇溶液，自加染液：于載玻片的中央滴加煌焦油藍乙醇溶液，自 然枯燥后備用。然枯燥后備用。2 2加血液：取血加血液：取血1 1滴，滴在染料上，用推片角悄然將血滴，滴在染料上，用推片角悄然將血 滴與染料混勻，然后用另一載玻片垂直蓋在此滴與染料混勻，然后用另一載玻片垂直蓋在此玻片上玻片上 盡量不留氣泡，室溫下靜置盡量不留氣泡，室溫下靜置1520min1520min。3 3制備涂片。制備涂片。4 4油鏡下計數(shù)油鏡下計數(shù)10001000個紅細胞中的

8、網(wǎng)織紅細胞數(shù)普通個紅細胞中的網(wǎng)織紅細胞數(shù)普通 延續(xù)計數(shù)延續(xù)計數(shù)3 3個視野即可。個視野即可。5 5也可用米勒氏窺盤也可用米勒氏窺盤Miller oculordiscMiller oculordisc置入接目鏡內(nèi)置入接目鏡內(nèi) 進展計數(shù)如以下圖。進展計數(shù)如以下圖。 詳細方法是以窺盤的詳細方法是以窺盤的A A區(qū)計數(shù)紅細胞，區(qū)計數(shù)紅細胞，B B區(qū)計數(shù)網(wǎng)織區(qū)計數(shù)網(wǎng)織 紅細胞，由于紅細胞，由于B B區(qū)的面積為區(qū)的面積為A A區(qū)的區(qū)的9 9倍，故計算如下：倍，故計算如下： 網(wǎng)織紅細胞網(wǎng)織紅細胞% %=B=B區(qū)網(wǎng)織紅細胞數(shù)區(qū)網(wǎng)織紅細胞數(shù)/ A/ A區(qū)紅細胞數(shù)區(qū)紅細胞數(shù) 9 9 100%100%二、網(wǎng)織紅細胞計

9、數(shù)二、網(wǎng)織紅細胞計數(shù) 3.計算計算 網(wǎng)織紅細胞分數(shù)數(shù)網(wǎng)織紅細胞分數(shù)數(shù)=計數(shù)的網(wǎng)織紅細胞數(shù)計數(shù)的網(wǎng)織紅細胞數(shù)/1000 網(wǎng)織紅細胞絕對數(shù)網(wǎng)織紅細胞絕對數(shù)=紅細胞數(shù)紅細胞數(shù)/L網(wǎng)織紅細胞分數(shù)網(wǎng)織紅細胞分數(shù)數(shù)數(shù) 4.參考值參考值 正常成人：正常成人： 0.5%1.5% 新生兒：新生兒： 2%6% 成人網(wǎng)織紅細胞絕對值：成人網(wǎng)織紅細胞絕對值： 2484109/L5.本卷須知本卷須知1只需活體染色后才干看到網(wǎng)織紅細胞，故必只需活體染色后才干看到網(wǎng)織紅細胞，故必需將新穎需將新穎 血滴與染液相混合，染液與血液之比普通約血滴與染液相混合，染液與血液之比普通約為為1：1， 但假設(shè)貧血嚴重也可按但假設(shè)貧血嚴重也可

10、按1：2關(guān)系處置。留意關(guān)系處置。留意混勻，否那么混勻，否那么 有時凝固。有時凝固。2染色時間不得短于染色時間不得短于10min，否那么能夠著色，否那么能夠著色不佳。計數(shù)不佳。計數(shù) 前留意多部位察看，可與涂片的體尾交界處前留意多部位察看，可與涂片的體尾交界處選染色選染色 好，紅細胞分布既不分散又不重疊的區(qū)域進好，紅細胞分布既不分散又不重疊的區(qū)域進展計數(shù)。展計數(shù)。 經(jīng)此種染色后紅細胞呈明晰的藍綠色，凡胞經(jīng)此種染色后紅細胞呈明晰的藍綠色，凡胞質(zhì)中含有質(zhì)中含有 藍綠色點狀、短線狀構(gòu)造者為網(wǎng)織紅細胞。藍綠色點狀、短線狀構(gòu)造者為網(wǎng)織紅細胞。二、網(wǎng)織紅細胞計數(shù)二、網(wǎng)織紅細胞計數(shù)網(wǎng)織紅細胞網(wǎng)織紅細胞3計數(shù)時需

11、留意與異物或假象相區(qū)別。如有異物殘渣，計數(shù)時需留意與異物或假象相區(qū)別。如有異物殘渣， 多呈黑色，轉(zhuǎn)動微螺旋時可見其折光性。接目鏡中粉尖多呈黑色，轉(zhuǎn)動微螺旋時可見其折光性。接目鏡中粉尖 重疊于紅細胞上所致的假象，那么隨接目鏡轉(zhuǎn)動而移位。重疊于紅細胞上所致的假象，那么隨接目鏡轉(zhuǎn)動而移位。 勿將伸展紅細胞較深染的伸展點勿以為網(wǎng)織構(gòu)造，伸展勿將伸展紅細胞較深染的伸展點勿以為網(wǎng)織構(gòu)造，伸展 紅細胞其邊緣處均勻的鋸齒狀可供作鑒別。紅細胞其邊緣處均勻的鋸齒狀可供作鑒別。4染色后的涂片應(yīng)盡快察看計數(shù)，否那么其網(wǎng)織構(gòu)造可染色后的涂片應(yīng)盡快察看計數(shù)，否那么其網(wǎng)織構(gòu)造可因因 久置而溶解消逝尤其在夏天濕度大的季節(jié)。久

12、置而溶解消逝尤其在夏天濕度大的季節(jié)。 6.方法學(xué)評價方法學(xué)評價 玻片法取血量少，且易于使混合血液中的水分蒸玻片法取血量少，且易于使混合血液中的水分蒸發(fā)，造發(fā)，造 成染色結(jié)果偏低，但攜帶方便，適宜床邊采血檢查。成染色結(jié)果偏低，但攜帶方便，適宜床邊采血檢查。二、網(wǎng)織紅細胞計數(shù)二、網(wǎng)織紅細胞計數(shù)二、網(wǎng)織紅細胞計數(shù)二、網(wǎng)織紅細胞計數(shù)7.質(zhì)量控制質(zhì)量控制1.顯微鏡法顯微鏡法 網(wǎng)織紅細胞目視計數(shù)誤差較大，影響要素主要有：網(wǎng)織紅細胞目視計數(shù)誤差較大，影響要素主要有：操作人員對網(wǎng)織紅細胞認識不同；血涂片質(zhì)量好壞，操作人員對網(wǎng)織紅細胞認識不同；血涂片質(zhì)量好壞，計數(shù)紅細胞數(shù)量的多少和計數(shù)方法等。計數(shù)紅細胞數(shù)量的多

13、少和計數(shù)方法等。2.儀器法儀器法 雖可計數(shù)紅細胞雖可計數(shù)紅細胞10 00050 000個，但遭到個，但遭到H-J小體、小體、有核紅細胞、巨血小板等影響，可出現(xiàn)假陽性。有核紅細胞、巨血小板等影響，可出現(xiàn)假陽性。三、血沉測定示教臨檢指點三、血沉測定示教臨檢指點P291原理原理(魏氏法魏氏法) 將一定量的抗凝全血灌注于特制的血沉管中，垂將一定量的抗凝全血灌注于特制的血沉管中，垂直立直立 于血沉架上于血沉架上1h后讀取紅細胞下沉后所暴顯露的血漿后讀取紅細胞下沉后所暴顯露的血漿段高段高 度度mm/h。三、血沉測定三、血沉測定2方法方法 1取靜脈血取靜脈血1.6ml，參與含，參與含109mmol/L枸櫞酸鈉枸櫞酸鈉0.4ml 的抗凝管中混勻。的抗凝管中混勻。2吸血入血沉管中至刻度吸血入血沉管中至刻度“0處，將血沉管直處，將血沉管直立于血立于血 沉架上。沉架上。1h后察看結(jié)果。后察看結(jié)果。 三、血沉測定三、血沉測定3.參考值參考值 50歲：男性歲：男性015mm/h 女性