1、實(shí)驗(yàn)五實(shí)驗(yàn)五 霉菌的形態(tài)觀察霉菌的形態(tài)觀察一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康囊?、?shí)驗(yàn)?zāi)康?1)觀察霉菌的菌落特征。觀察霉菌的菌落特征。(2)觀察根霉、青霉、曲霉的形態(tài)構(gòu)造及無觀察根霉、青霉、曲霉的形態(tài)構(gòu)造及無性孢子。性孢子。(3)學(xué)習(xí)并掌握霉菌的制片方法。學(xué)習(xí)并掌握霉菌的制片方法。二、實(shí)驗(yàn)原理二、實(shí)驗(yàn)原理 霉菌為真核微生物，菌絲較粗大，有分枝或不分枝的。菌絲體為無色透明或暗褐色至黑色，或呈現(xiàn)鮮艷的顏色。在顯微鏡下觀察時(shí)，菌絲皆呈管狀。在固體培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，為絨毛狀或棉絮狀。一些較高等的霉菌絲狀管道中皆有橫隔，將菌絲隔成許多細(xì)胞。霉菌細(xì)胞易收縮變形，而且孢子很容易分散，所以制標(biāo)本時(shí)常用乳酸石炭酸棉蘭染色液。該染色液可使

2、細(xì)胞不變形；具有防腐殺菌作用；不易干燥，能保持較長(zhǎng)時(shí)間；溶液本身呈藍(lán)色，有一定的染色效果。 此外，為了得到清晰、完整并保持自然狀態(tài)的霉菌形態(tài)，還可以利用載玻片培養(yǎng)法或玻璃紙透析培養(yǎng)法進(jìn)行觀察。載玻片培養(yǎng)法是在一定濕度的培養(yǎng)皿中，放人一霉菌載片培養(yǎng)物，并蓋上一塊蓋玻片，使霉菌在一狹窄的空隙中生長(zhǎng)、繁殖便于在顯微鏡下觀察霉菌的特殊形態(tài)構(gòu)造，如曲霉的足細(xì)胞、分生孢子、頂囊等生長(zhǎng)情況。并且還可在同一標(biāo)本上觀察到它們不同階段的生長(zhǎng)、發(fā)育狀況。玻璃紙透析培養(yǎng)法是利用玻璃紙的半透膜特性及透光性，將霉菌生長(zhǎng)在覆蓋于瓊脂培養(yǎng)基表面的玻璃紙上，然后將長(zhǎng)菌的玻璃之間取一小片，貼放在載玻片上，置于顯微鏡下觀察。本實(shí)驗(yàn)

3、以制片觀察為主。 三、實(shí)驗(yàn)材料三、實(shí)驗(yàn)材料1.菌種菌種 黑曲霉、青霉、黑根霉黑曲霉、青霉、黑根霉。2. 其他其他 顯微鏡、培養(yǎng)箱、養(yǎng)皿、乳酸顯微鏡、培養(yǎng)箱、養(yǎng)皿、乳酸石炭酸棉藍(lán)染色液、載玻片、蓋玻片、石炭酸棉藍(lán)染色液、載玻片、蓋玻片、無菌水、接種環(huán)、接種鉤、解剖針、酒無菌水、接種環(huán)、接種鉤、解剖針、酒精燈、火柴、濾紙、玻璃鉛筆等。精燈、火柴、濾紙、玻璃鉛筆等。 四、操作方法四、操作方法(一一)制片觀察法（水浸片法制作標(biāo)本片）制片觀察法（水浸片法制作標(biāo)本片）(1)在一潔凈載玻片上，滴一滴在一潔凈載玻片上，滴一滴乳酸石炭酸棉蘭乳酸石炭酸棉蘭染色液染色液；按無菌操作，用解剖針挑取少量帶有；按無菌操作

4、，用解剖針挑取少量帶有孢子的霉菌菌絲于染色液中（孢子的霉菌菌絲于染色液中（注：挑取帶有顏?zhàn)ⅲ禾羧в蓄伾木z色的菌絲），再細(xì)心地把菌絲挑散開，然后用），再細(xì)心地把菌絲挑散開，然后用蓋玻片蓋上（注：不要產(chǎn)生氣泡）。蓋玻片蓋上（注：不要產(chǎn)生氣泡）。(2)置于顯微鏡下，觀察霉菌菌絲的形態(tài)（觀察置于顯微鏡下，觀察霉菌菌絲的形態(tài)（觀察菌絲菌絲有無隔膜、假根、匍匐枝、足細(xì)胞；以及有無隔膜、假根、匍匐枝、足細(xì)胞；以及無性或有性孢子的形態(tài)、大小和顏色等無性或有性孢子的形態(tài)、大小和顏色等）。）。 (二二)玻璃紙透析培養(yǎng)觀察法玻璃紙透析培養(yǎng)觀察法(1)向霉菌斜面試管中加入5ml無菌水洗下孢子，制成孢子懸液；(2

5、)用無菌鑷子將已滅菌的直徑與培養(yǎng)皿相同的圓形玻璃紙覆蓋在察氏培養(yǎng)基平板上；(3)用1ml的無菌移液管吸取0.2ml孢子懸液于上述玻璃紙平板上，并用無菌玻璃棒涂抹均勻；(4)置于28培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)48h后，取出培養(yǎng)皿。打開皿蓋，用鑷子將玻璃紙與培養(yǎng)基分開，再用剪刀取一小片，置于載玻片上，用顯微鏡觀察其特殊形態(tài)。 根霉根霉黑根霉（匍枝根霉）黑根霉（匍枝根霉）菌落菌落：初期白色，老熟后灰褐色假根假根匍匐枝匍匐枝孢子囊孢子囊接合孢子接合孢子顯微形態(tài)顯微形態(tài)：菌絲體菌絲體無隔無隔，有有假根和匍匐枝，假根和匍匐枝，其中，其中，匍匐匍匐枝枝無色無色，假根假根發(fā)達(dá)呈發(fā)達(dá)呈褐色褐色。孢子囊孢子囊簇生呈簇生呈黑色或褐色黑色或褐色，可形成可形成球狀球狀接合孢子接合孢子。孢囊孢子孢囊孢子接合孢子接合孢子曲霉曲霉黑曲霉黑曲霉菌絲體心態(tài)：菌絲體心態(tài)：有橫隔，常無色，老熟時(shí)變?yōu)闇\黃色至褐色，有足細(xì)胞無性生殖體：分生孢子梗、頂囊、小梗、分生孢子足細(xì)胞足細(xì)胞分生孢子分生孢子有隔菌絲有隔菌絲小梗小梗頂囊頂囊分生孢子梗分生孢子梗分生孢子頭發(fā)辮狀分生孢子頭發(fā)辮狀黑曲霉的顯微形態(tài)黑曲霉的顯微形態(tài)青霉青霉菌絲體形態(tài)：菌絲體形態(tài)：營(yíng)養(yǎng)菌絲營(yíng)養(yǎng)菌絲有橫隔有橫隔，無足細(xì)胞無足細(xì)胞分生孢子梗分生孢子梗有橫隔有橫隔分生孢子頭分生孢子頭無頂囊無頂囊，呈，呈帚狀帚狀小梗頂小梗頂串生串生分生孢子分生孢子（球形（球形、橢圓或短圓柱狀）、橢