1、羅氏羅氏HE4試劑性能評估綜述試劑性能評估綜述中山大學附屬腫瘤醫(yī)院中山大學附屬腫瘤醫(yī)院劉萬里劉萬里內容內容 羅氏 HE4檢測原理 Elecsys HE4 SFDA注冊研究概況 Elecsys HE4性能評估 Elecsys HE4性能小結內容內容 羅氏 HE4檢測原理 Elecsys HE4 SFDA注冊研究概況 Elecsys HE4性能評估 Elecsys HE4性能小結標記免疫電化學發(fā)光檢測標記免疫電化學發(fā)光檢測ECL (IA) Technology E Electro C Chemo L Luminescence I Immuno A AssayRoche HE4檢測試劑設計檢測試劑設

2、計雙抗體夾心一步法雙抗體夾心一步法原理：雙抗體夾心法 檢測時間：18分鐘 1st 孵育孵育: 分鐘10 L血樣, 生物素標記HE4特異性單克隆抗體，釕標記HE4特異性單克隆抗體，形成抗原抗體復合物 2nd 孵育孵育:分鐘加入鏈酶親和素包被的磁珠，通過生物素和鏈酶親和素反應，形成復合物 檢測檢測:反應復合物送入測量池，磁珠結合至電極表面，未結合的反應物通過ProCell清除通過對電極增加電壓觸發(fā)化學發(fā)光光電子釋放，后者通過光電倍增管檢測Roche HE4檢測試劑設計檢測試劑設計HE4檢測原理檢測原理生物素標記的生物素標記的HE4單克隆抗體單克隆抗體Ru待檢樣本中的待檢樣本中的HE4 (10 L)

3、釕標記的釕標記的HE4單克隆抗體單克隆抗體Ru鏈酶親和素鏈酶親和素包被的磁珠包被的磁珠Ru進行檢測進行檢測9 min9 minRoche HE4試劑成分試劑成分試劑試劑 工作溶液工作溶液 M: 包被鏈酶親和素的微粒（透明蓋），1 瓶，6.5 mL：包被鏈霉親和素的微粒0.72 mg/mL；防腐劑 R1: 生物素化抗人HE4抗體（灰蓋），1瓶，10 mL：生物素化單克隆抗HE4抗體（小鼠）0.75 mg/L，磷酸鹽緩沖液100 mmol/L，pH值6.5；防腐劑 R2: 釕復合物標記的抗人HE4抗體（黑蓋），1 瓶， 10 mL：釕復合物標記的單克隆抗HE4抗體（小鼠）1.5 mg/L；磷酸鹽緩

4、沖液100 mmol/L，pH值7.4；防腐劑Roche HE4試劑成分試劑成分需要的材料需要的材料試劑名稱試劑名稱貨號貨號規(guī)格規(guī)格Elecsys HE4 05950929 190100 測試Elecsys HE4 CalSet05950945 1904 x 1 mLPreciControl HE405950953 1902 x 1 mL each of PreciControl HE4 1 and 2試劑名稱試劑名稱貨號貨號規(guī)格規(guī)格Elecsys CA 125 II11776223 322 100 tests per rackpackElecsys CA 125 II CalSet11776

5、240 322 4 x 1 mLPreciControl Tumormarker11776452 122 2 x 3 mL each of PreciControl Tumormarker 1 and 2 卵巢癌腫瘤標志物卵巢癌腫瘤標志物提供提供HE4和和CA125檢測的廠家檢測的廠家HE4HE4CA 125CA 125Roche (Elecsys, cobas e)Roche (Elecsys, cobas e)Abbott (Architect)Abbott (Architect)Beckman (Access)Beckman (Access)Siemens (Immulite, Cent

6、aur, Siemens (Immulite, Centaur, Vista)Vista)Diasorin (Liaison)Diasorin (Liaison)B.R.A.H.M.S (Kryptor)B.R.A.H.M.S (Kryptor)Becton Dickinson (TriPath)Becton Dickinson (TriPath)plannedplannedCanAgCanAg（ELISAELISA）羅氏所有免疫平臺均可以同羅氏所有免疫平臺均可以同時提供時提供CA125CA125和和HE4HE4的檢測的檢測內容內容 羅氏 HE4檢測原理 Elecsys HE4 SFDA注冊研

7、究概況 Elecsys HE4性能評估 Elecsys HE4性能小結Elecsys HE4 SFDA注冊研究注冊研究研究概況研究概況 研究時間：2011.12011.6 研究中心中國醫(yī)學科學院腫瘤醫(yī)院浙江大學醫(yī)學院附屬婦產(chǎn)科醫(yī)院華中科技大學同濟醫(yī)學院附屬同濟醫(yī)院山西省腫瘤醫(yī)院Elecsys HE4 SFDA注冊研究注冊研究 研究目的一：與康乃格公司HE4 (酶聯(lián)免疫法) 進行比對檢測，評價試驗結果 研究目的二：盆腔腫塊患有卵巢癌風險的評估：Elecsys HE4和Elecsys 125II聯(lián)合檢測計算ROMA指數(shù)，評估風險高低 研究目的三：血清,血漿對比試驗，驗證不同類型樣本結果的一致性El

8、ecsys HE4 SFDA注冊研究結果注冊研究結果共入組共入組1487例樣本例樣本標本類型標本類型醫(yī)科院腫瘤醫(yī)科院腫瘤 浙大婦產(chǎn)浙大婦產(chǎn)武漢同濟武漢同濟山西腫瘤山西腫瘤合計合計卵巢上皮癌卵巢上皮癌103494045237疑似樣本疑似樣本 （盆腔包塊患者）（盆腔包塊患者）611916868388其他腫瘤其他腫瘤 （子宮內膜癌、（子宮內膜癌、肺癌、乳腺癌、消化道癌、肺癌、乳腺癌、消化道癌、膀胱癌等）膀胱癌等）621363648282表觀健康人群表觀健康人群12012511082437RF陽性陽性111091040溶血溶血1010101141脂血脂血1011101142黃疸黃疸10001020合計

9、合計3875322832851487Elecsys HE4 SFDA注冊研究結果注冊研究結果各研究中心不精密度結果各研究中心不精密度結果 CV（低濃度）（低濃度）CV(中濃度中濃度)醫(yī)科院腫瘤醫(yī)院醫(yī)科院腫瘤醫(yī)院2.21%4.35%浙江大學婦產(chǎn)醫(yī)浙江大學婦產(chǎn)醫(yī)院院1.05%1.11%武漢同濟醫(yī)院武漢同濟醫(yī)院1.06 %0.62 %山西省腫瘤醫(yī)院山西省腫瘤醫(yī)院1.61%0.66%選取中、低濃度的樣品各一份，分別檢測10次，計算CV值Elecsys HE4 SFDA注冊研究結果注冊研究結果各研究中心質控結果良好各研究中心質控結果良好參比試劑參比試劑考核試劑考核試劑CA125CA125醫(yī)院醫(yī)院名稱名稱

10、質控名稱質控名稱HE4HE4質控名稱質控名稱PreciControl HE4PreciControl HE4質控名稱質控名稱PC TMPC TM質控批號質控批號2796427964270922709227093270931560800015608000 1560810015608100靶值靶值47.5pmol47.5pmol/L/L391.5pmo391.5pmol/Ll/L45pmol/L45pmol/L341pmol/341pmol/L L32.6(U/m32.6(U/mL)L)101(U/mL)101(U/mL)范圍范圍33-6233-62313-470313-47035.0-35.0-

11、53.653.6262 262 40240225.7639.25.7639.444479.791279.79122.212.21醫(yī)科院腫醫(yī)科院腫瘤瘤檢測結果檢測結果43.7843.78447.4447.446.1846.18340.8340.828.728.7101.7101.7浙大婦產(chǎn)浙大婦產(chǎn) 檢測結果檢測結果41.3441.34367.74367.7447.847.8344.5344.529.0229.0280.2480.24武漢同濟武漢同濟 檢測結果檢測結果39.5939.59360.5360.542.7442.7432132133.6233.6291.9491.94山西腫瘤山西腫瘤 檢

12、測結果檢測結果50.9850.98441.71441.7143.4343.43343.9343.932.9632.9686.9186.91Elecsys HE4 SFDA注冊研究結果注冊研究結果與參與試劑有良好的一致性與參與試劑有良好的一致性y = 1.0942x + 2.7976y = 1.0942x + 2.7976相關系數(shù)相關系數(shù)r r0.9490.949回歸系數(shù)回歸系數(shù)R R2 20.89970.8997Elecsys HE4 SFDA注冊研究結果注冊研究結果ROMA指數(shù)可將盆腔腫塊患者進行風險分級指數(shù)可將盆腔腫塊患者進行風險分級絕經(jīng)絕經(jīng)前前:PI = -12,0 + 2,38*LNH

13、E4 +0,0626*LNCA125絕經(jīng)絕經(jīng)后后:PI = -8,09 + 1,04*LNHE4 + 0,732*LNCA125582例樣本被正確分入高例樣本被正確分入高/低風險組低風險組ROMA (%) =Exp(PI) x 1001 + Exp(PI)注：風險指數(shù)注：風險指數(shù)PI（Predictive Index） LN為自然對數(shù)為自然對數(shù)內容內容 羅氏 HE4檢測原理 Elecsys HE4 SFDA注冊研究概況 Elecsys HE4性能評估 Elecsys HE4性能小結病例報告病例報告 患者，女，患者，女，4545歲，歲，B B超檢查發(fā)現(xiàn)卵巢腫塊，超檢查發(fā)現(xiàn)卵巢腫塊， 羅氏試劑電化

14、學發(fā)光法檢測血清羅氏試劑電化學發(fā)光法檢測血清HE4HE4濃度，濃度，結果為結果為 136 pmol/L 136 pmol/L。如何判斷這患者如何判斷這患者HE4HE4結果是否異常？結果是否異常？臨床判斷臨床判斷HE4HE4檢測結果應考慮的問題檢測結果應考慮的問題參考值參考值HE4HE4實驗室檢測誤差實驗室檢測誤差樣本檢測前誤差：樣本檢測前誤差：標本采集影響標本采集影響 標本保存的影響標本保存的影響 干擾物質的影響干擾物質的影響 人生理變異人生理變異治療措施的干擾（藥物）治療措施的干擾（藥物）其他疾病的干擾其他疾病的干擾三組各年齡段三組各年齡段HE4濃度比較濃度比較a 均值標準差pmol/l（例

15、數(shù)）； 青年組：45歲；中年組：45-59歲；老年組：60歲。*LSD檢驗；#經(jīng)隨機區(qū)組設計方差分析組別組別總計總計a a (323)青年組青年組a a (34)中年組中年組a a (108) # 老年組老年組a a (181) #OC組組337.5156.4(160)304.6143.2(19)334.7156.4(60) 373.3132.5(81)良性組良性組72.038.7(54)*50.616.3(10)68.712.6(18)96.638.7(26)健康組健康組59.222.9(109)*42.28.9(5)58.77.6(30)76.85.6(74)1 1、參考值、參考值HE4在

16、不同觀察組間的差異 OC組，不同年齡的HE4良性病變組，不同年齡的HE4健康對照組組，不同年齡的HE4 年齡因素對年齡因素對HE4HE4濃度的影響濃度的影響HE4在各年齡在各年齡組參考值的設定和診斷價值評估組參考值的設定和診斷價值評估 所有病例的ROC曲線 青年組的ROC曲線 AUCAUCCutoffCutoff點點(PM)(PM)敏感性敏感性特異性特異性總體總體0.8390.839828267.3%67.3%93.6%93.6%青年組青年組0.9460.946757583.4%83.4%92.6%92.6%HE4在各年齡在各年齡組參考值的設定和診斷價值評估組參考值的設定和診斷價值評估 中年組

17、的ROC曲線 老年組的ROC曲線 AUCAUCCutoffCutoff點點(PM)(PM)敏感性敏感性特異性特異性中年組中年組0.8700.870* *808075.0%75.0%93.1%93.1%老年組老年組0.7750.775* *13013050%50%93.2%93.2%2、實驗室檢測誤差 日間精密度（羅氏）日間精密度（羅氏） 日間精密度（驗證）日間精密度（驗證）在三個研究中心進行的在三個研究中心進行的重復性檢測的結果：不重復性檢測的結果：不精密度（精密度（CV)CV)低值（低值（44.344.3） CV=2.1%CV=2.1%高值高值 （13171317） CV=1.9%CV=1.

18、9%2、實驗室檢測誤差初步結論初步結論實驗室檢測誤差實驗室檢測誤差 5%5%樣本檢測前誤差樣本檢測前誤差血清、血漿（血清、血漿（EDTA、肝素）、肝素） 樣品保存（樣品保存（24h24h內）內）血清血漿，血清血清血漿，血清24h24h內檢測，內檢測，HE4HE4無顯著性差異無顯著性差異樣本檢測前誤差樣本檢測前誤差 干擾物質影響（羅氏）干擾物質影響（羅氏） 藥物的影響（羅氏）藥物的影響（羅氏）回收率均回收率均 10%10%結論：上述濃度下的干結論：上述濃度下的干擾物質和藥物對擾物質和藥物對HE4HE4檢測檢測無顯著影響。無顯著影響。樣本檢測前誤差樣本檢測前誤差 對對HE4HE4濃度分別在濃度分別

19、在65 pmol/L 65 pmol/L 和和155 pmol/L155 pmol/L進行檢測，判進行檢測，判斷與乳清酸性蛋白家族其他斷與乳清酸性蛋白家族其他成員的交叉反應性成員的交叉反應性 Elafin :彈性蛋白酶特異性彈性蛋白酶特異性抑制劑抑制劑 SLPI：分泌性白細胞蛋白：分泌性白細胞蛋白酶抑制劑酶抑制劑 干擾物質的影響 ： 交叉反應（羅氏）結論：交叉反應對結論：交叉反應對HE4HE4結結果的影響可忽略不計。果的影響可忽略不計。樣本檢測前誤差樣本檢測前誤差 HE4生理變異的影響（n=2)初步結論初步結論: :HE4HE4個體日間變異度個體日間變異度10%10%樣本檢測前誤差樣本檢測前誤

20、差 肺部疾病的影響肺部疾病的影響 腎功不良的影響腎功不良的影響結論：肺部疾病，尤其是結論：肺部疾病，尤其是腎衰腎衰顯著影響顯著影響HE4水平水平總結總結1、HE4的參考值需按年齡段設定的參考值需按年齡段設定2、HE4實驗室檢測誤差實驗室檢測誤差52、HE4個體日間變異度約個體日間變異度約103、肺部疾病和腎衰、肺部疾病和腎衰HE4水平顯著升高水平顯著升高4、其他樣品前檢測影響因素對、其他樣品前檢測影響因素對HE4的影響不顯著的影響不顯著5、HE4結果結果超過參考值上限超過參考值上限20判斷為異常判斷為異常，對高于，對高于 正常參考限但未大于正常參考限但未大于20的患者，應連續(xù)追蹤觀察。的患者，

21、應連續(xù)追蹤觀察?；颊呋颊逪E4結果的初步判斷結果的初步判斷 患者，女，患者，女，4545歲，歲，B B超超檢查發(fā)現(xiàn)卵巢腫塊，檢查發(fā)現(xiàn)卵巢腫塊， 羅氏試劑電化學發(fā)光羅氏試劑電化學發(fā)光法檢測血清法檢測血清HE4HE4濃度，濃度，結果為結果為 136 pmol/L 136 pmol/L 腎功正常，無肺部疾腎功正常，無肺部疾病病 病理診斷：卵巢癌病理診斷：卵巢癌實驗室檢測誤差約實驗室檢測誤差約136x56.8個體變異個體變異36x10%=13.6預計該患者預計該患者HE4的結果為的結果為115.6156.4范圍內范圍內該年齡組參考限為該年齡組參考限為80pmol/L結論：該患者結論：該患者HE4異常增高異常增高內容內容 羅氏 HE4檢測原理 Elecsys HE4 SFDA注冊研究概況 Elecsys HE4性能評估 Elecsys HE4性能小結Elecsys HE4性能參數(shù)性能參數(shù) 小結小結Elecsys HE4 性能參數(shù)性能參數(shù)檢測時間檢測時間18