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文檔簡介

1、疏水性相互作用色譜疏水性相互作用色譜(HIC)一、概念一、概念 疏水性相互作用色譜(Hydrophobic interaction chromatography，HIC)是利用表面偶聯(lián)弱疏水性基團(tuán)(疏水性配基)的疏水性吸附劑為固定相，根據(jù)蛋白質(zhì)與疏水性吸附劑之間的弱疏水性相互作用的差別進(jìn)行蛋白質(zhì)類生物大分子分離純化的洗脫層析法。 鹽濃過高，鹽濃過高，沉淀不可沉淀不可Mechanism of HIC 圖中a的末端氨基以及a和b的鍵合亞氨基顯弱堿性，在中性pH范圍內(nèi)帶正電荷，因此，這類疏水件吸附劑除疏水性吸附外，還可能存在靜電吸附(離子交換)作用。 圖中c的吸附劑利用醚鍵結(jié)合不引入荷電基團(tuán)，對(duì)蛋白

2、質(zhì)僅產(chǎn)生疏水性吸附作用。疏水性吸附劑 每次實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，吸附劑需要再生。 因?yàn)槲絼┲猩辛粲薪Y(jié)合緊密的生物大分子、表面活性劑等。未經(jīng)再生的疏水吸附劑，其吸附容量將明顯降低。 一般來說可用蒸餾水、乙醇、正丁醇、乙醇、蒸餾水依次洗滌，裝柱，用初始緩沖液平衡吸附劑。吸附劑經(jīng)再生后可反復(fù)使用。 再生 操作操作1） 加樣：加樣：樣品溶液中補(bǔ)加適量的鹽。樣品溶液中補(bǔ)加適量的鹽。2） 洗脫：洗脫：用降低鹽濃度的平衡緩沖液洗脫。用降低鹽濃度的平衡緩沖液洗脫。3） 再生：再生：除去固定相吸附的雜質(zhì)除去固定相吸附的雜質(zhì) ，用水或，用水或 8mol/L 8mol/L 脲素溶液脲素溶液 。 應(yīng)用應(yīng)用 主要用于分離純化大分子物質(zhì)。主要用于分離純化大分子物質(zhì)。 應(yīng)用應(yīng)用 HIC主要用于蛋白質(zhì)類生物大分子的分離純化。這種方法與IEC的離子交換作用完全不同。 它不僅是一種有效的分離純化手段，而且還可與IEC互補(bǔ)短長，分離純化利用IEC難以分離的蛋白質(zhì)。 但是，疏水性相互作用機(jī)理比較復(fù)狀。吸附劑的選擇和洗脫分離條件不易掌握。疏水性相互作用疏水性相互作用色譜色譜的應(yīng)

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