1、對化學(xué)性肝損傷的保護(hù)功能第三章 對化學(xué)性肝損傷有輔助保護(hù)保健食品的功效成分及檢測一、概述肝損傷就是肝臟受到外界因素的入侵，從而引起的肝臟受損。肝損傷分為病理性肝損傷和化學(xué)性肝損傷。化學(xué)性肝損傷主要是由于化學(xué)藥物中毒、過敏等引起，比如藥物性肝炎、酒精肝、有機(jī)農(nóng)藥中毒等都會(huì)引起肝損傷、肝功能異常。（一）化學(xué)性肝損傷分類目前，化學(xué)性肝損傷以藥物性和酒精性肝損傷最多見。1、藥物性肝損傷由于藥物及代謝產(chǎn)物的毒性作用或機(jī)體對藥物產(chǎn)生過敏反應(yīng)，對肝臟造成損害，引起肝組織發(fā)炎，即為藥物性肝損傷。引起藥物性肝損傷的藥物主要有解熱鎮(zhèn)痛抗炎藥、鎮(zhèn)靜催眠藥、抗結(jié)核藥、抗寄生蟲藥及某些抗菌藥和激素類藥物。藥物導(dǎo)致肝損傷

2、的機(jī)制包括：(1) 藥物代謝產(chǎn)物形成氧自由基使脂質(zhì)過氧化，引起肝損傷；(2) 部分藥物經(jīng)代謝產(chǎn)生親電子產(chǎn)物，通過共價(jià)結(jié)合，損傷肝細(xì)胞膜和肝線粒體、微粒體膜，引起細(xì)胞損傷；(3) 藥物代謝產(chǎn)生超氧化離子，促使脂質(zhì)過氧化，導(dǎo)致肝細(xì)胞損傷。2、酒精性肝損傷酒精性肝損傷是指長期大量飲酒或含有乙醇的飲料造成的肝臟疾患,包括輕癥酒精性肝病、酒精性脂肪肝、酒精性肝炎、酒精性肝纖維化、酒精性肝硬化。乙醇對肝臟的損害機(jī)理包括：(1) 乙醇進(jìn)入機(jī)體后，約90%在肝臟內(nèi)氧化，一條途徑是在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)經(jīng)乙醇脫氫酶(ADH)氧化為乙醛，乙醛在線粒體內(nèi)經(jīng)乙醛脫氫酶(ALDH)作用氧化為乙酸。乙醇氧化的ADH途徑會(huì)消耗大量的輔

3、酶1(NAD)，使NAD+/ NADH比值變小，使三羧酸循環(huán)受到抑制，影響細(xì)胞能量供給。(2) 乙醇損害線粒體的功能，使線粒體脂質(zhì)過氧化物增加，GSH水平下降，線粒體形態(tài)異常。(3) 乙醇氧化過程中的中間產(chǎn)物乙醛是高活性物質(zhì)，當(dāng)乙醛脫氫酶活性降低時(shí)，未被氧化的乙醛釋放入血，通過黃嘌呤氧化酶變?yōu)槌趸?，?dǎo)致脂質(zhì)過氧化，破壞細(xì)胞膜，促進(jìn)肝損傷。（二）化學(xué)性肝損傷的飲食治療1、控制飲酒量，盡量飲用低度酒或不含酒精的飲料。2、調(diào)整飲食結(jié)構(gòu)，提倡高蛋白質(zhì)、高維生素、低糖、低脂肪飲食。3、增加維生素的供給，尤其是B族維生素。B族維生素 （包括維生素B1、維生素B2、維生素B6、維生素B12、煙酸、泛酸、

4、葉酸等）和肝臟關(guān)系密切，缺少B族維生素，會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞功能降低，引起代謝障礙。4、增加微量元素的供給。微量元素可維持身體組織器官與臟器的代謝，有助身體健康。5、多攝入富含微生態(tài)活菌的營養(yǎng)補(bǔ)充劑。微生態(tài)活菌可以通過調(diào)節(jié)腸菌群，抑制革蘭氏隱性細(xì)菌繁殖，降低腸源性內(nèi)毒素水平，有助肝臟排毒。 （三）對化學(xué)性肝損傷有輔助保護(hù)功能的保健食品目前，我國登記注冊的“對化學(xué)性肝損傷的保護(hù)功能”的保健食品約260種，可分為以下情況：1、由中草藥或其提取物研制而成。如靈芝、大豆、枸杞、茶、黃芪、蘆筍、當(dāng)歸、山楂、銀杏、香菇等，這類植物具有活血化瘀的、清肝解毒、強(qiáng)肝益肝的作用。主要功效成分有：多糖、黃酮類、甙類、萜類及木

5、質(zhì)素類化合物等，如粗多糖、葛根素、原花青素、銀杏黃酮類、大豆皂甙、靈芝三萜、甘草酸、茶多酚、五味子甲素、五味子乙素、五味子醇甲等，這些物質(zhì)具有提高免疫能力、抗脂質(zhì)過氧化、抗腫瘤、抗衰老等功效。2、具有抗氧化、促進(jìn)細(xì)胞增殖、提高免疫力的營養(yǎng)物質(zhì)。主要有腺苷、?；撬帷⒏什菟?、硒、維生素E、維生素C等；3、一些特殊動(dòng)物如牡蠣、毛蟲干苦參、甲魚、螞蟻等提取成分制得。這類保健食品的具體功效成分還大多數(shù)不能確認(rèn)。4、一些生物因子：胎盤因子、多肽等。這類保健食品過多借助生物工程或化學(xué)合成得來，對其是否應(yīng)劃入保健食品行列還存在一些爭議，相關(guān)產(chǎn)品也少見。二、主要功效成分介紹（一）粗多糖1、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)粗多糖是從大

6、豆籽粒中提取出的可溶性寡糖的總稱，大豆中的寡糖屬于-半乳糖苷類，包括棉籽糖、水蘇糖等。棉籽糖是自然界中最知名的一種三糖，由半乳糖、果糖和葡萄糖結(jié)合而成，為白色結(jié)晶粉末，密度1.465，熔點(diǎn)80oC，溶于水，極微溶于乙醇等極性溶劑，不溶于石油醚等非極性溶劑。水蘇糖是由半乳糖、葡萄糖和果糖構(gòu)成的非還原四糖。其結(jié)構(gòu)式為：D-吡喃半乳糖基-1,6-D-吡喃半乳糖基-1,6-D-吡喃葡糖基-1,2-D-呋喃果糖苷，屬于蔗糖的衍生產(chǎn)物，是棉子糖的同系物，分子式為C24H42O21，相對分子量666.59。2、生物學(xué)功能（1）促進(jìn)雙歧桿菌的增殖人體雖然不能直接利用粗多糖，但是粗多糖可被腸內(nèi)細(xì)菌利用，并且能促

7、進(jìn)雙歧桿菌的增殖。雙歧桿菌是一種厭氧革蘭氏陽性細(xì)菌，是維護(hù)和保持腸道菌群平衡的一個(gè)極為重要的因素，也是判斷腸內(nèi)外環(huán)境是否正常的一個(gè)可靠依據(jù)。（2）抑制病原菌粗多糖能促進(jìn)雙歧桿菌的增殖，從而抑制有害細(xì)菌如產(chǎn)生莢膜梭狀芽孢桿菌的生長。雙歧桿菌能發(fā)酵粗多糖產(chǎn)生短鏈脂肪酸和一些抗菌素物質(zhì)，從而可抑制外源致病菌和腸內(nèi)固有腐敗細(xì)菌的生長繁殖。（3）防止便秘、腹脹，促進(jìn)消化，調(diào)節(jié)胃腸功能腸道內(nèi)的雙歧桿菌發(fā)酵粗多糖產(chǎn)生大量的短鏈脂肪酸（主要是醋酸和乳酸），能刺激腸道蠕動(dòng)，從而促進(jìn)消化，防止便秘的產(chǎn)生。（4）增強(qiáng)免疫功能如果人較長期的食用無細(xì)菌食物，腸道就會(huì)因?yàn)槿鄙俅碳ざ蛊洚a(chǎn)生抗體的能力下降，從而容易誘發(fā)疾病

8、。食用粗多糖，促進(jìn)雙歧桿菌的增殖，將對腸道免疫細(xì)胞產(chǎn)生刺激，提高其產(chǎn)生抗體的能力從而起到防治疾病的效果。 3、安全性觀察大葉車前子粗多糖膠囊對小鼠的急性毒性反應(yīng)。灌胃給予小鼠1日內(nèi)最大質(zhì)量濃度及最大體積的藥量，觀察急性毒性反應(yīng)一周。試驗(yàn)小鼠最大耐受量為10.98 g/kg，相當(dāng)于成人推薦劑量的343倍。試驗(yàn)小鼠毛色光潔，四肢活動(dòng)、飲水均正常，鼻、眼、口無異常分泌物，未出現(xiàn)任何毒性反應(yīng)。大葉車前子粗多糖膠囊毒性較低，安全性好，為臨床治療提供了一定的試驗(yàn)依據(jù)。（二）葛根素1、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)葛根素（puerarin）別名普樂林、葛根黃素、黃豆甙元8-C-葡萄糖甙，是葛根的主要有效成份之一和標(biāo)志成分?；瘜W(xué)

9、名為：8-D-葡萄吡喃糖-4,7一二羥基異黃酮。分子式C21H20O9，分子量為416.39。低含量時(shí)為棕色粉末，高含量為白色針狀結(jié)晶粉末，熔點(diǎn)187188，溶于甲醇，微溶于乙醇、水，不溶氯仿和乙醚，結(jié)構(gòu)見圖1。圖 1 葛根素結(jié)構(gòu)式2、生物學(xué)功能葛根素是葛根中含量最高的主要有效成分，因此成為評估葛根類保健食品中的重要指標(biāo)。具有增強(qiáng)心肌收縮力，保護(hù)心肌細(xì)胞作用。能擴(kuò)張血管、降低血壓、改善微循環(huán)。保護(hù)紅細(xì)胞的變形能力，增強(qiáng)造血系統(tǒng)功能。具有抗血小板聚集，增加纖溶活性，降低血粘度作用。對腎炎、腎病腎衰竭均有保護(hù)作用。對非特異性免疫、體液免疫、細(xì)胞免疫有明顯的調(diào)節(jié)作用。可促進(jìn)正常人和腫瘤病人的淋巴細(xì)胞

10、轉(zhuǎn)化率，增強(qiáng)自然素作用。對于干擾系統(tǒng)有明顯的刺激和誘生作用。其主要化學(xué)成份為皂苷類化合物葛根黃酮。此外，葛根素對肝組織免疫損害具有保護(hù)作用，對突發(fā)性耳聾患者的甲皺微循環(huán)有改善作用，對缺氧心肌具有保護(hù)作用等功效。3、代謝動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明，隨著給藥劑量的增加（35 mg/kg、75 mg/kg、370 mg/kg），藥物的消除半衰期明顯降低（分別為11.8 h、10.4 h、4.7 h）。體內(nèi)分布以肝、腎、心臟和血漿中較多，睪丸、肌肉、脾臟次之，并可通過血腦屏障進(jìn)入中樞。葛根素消除較快，在體內(nèi)不易蓄積。4、安全性小鼠靜脈注射葛根素，LD50為634.3 mg/kg，腹腔注射LD50為1412.2 mg

11、/kg。 大鼠腹腔注射葛根素150 mg/kg、100 mg/kg，50 mg/kg連續(xù)5周，無積蓄性毒性，對心、肝、肺、脾、腎、腎上腺及腸等臟器無明顯毒性。犬靜脈注射葛根素，每日50 mg/kg、30 mg/kg、15mg/kg連續(xù)5周，再觀察70天，對大小便常規(guī)、血常規(guī)、SGPT，BUN、血糖均無明顯影響。健康成年SD大鼠實(shí)驗(yàn)，劑量為50、150mg/kg，對雌性大鼠胚胎及雄性大鼠生殖細(xì)胞均無致畸作用。致突變試驗(yàn)表明，葛根素沒有潛在的致癌和致突變危險(xiǎn)性。少數(shù)病人在用藥開始時(shí)出現(xiàn)暫時(shí)性腹脹、惡心等反應(yīng)，繼續(xù)用藥可自行消失。極少數(shù)病人用藥后有皮疹、發(fā)熱等過敏現(xiàn)象，立即停藥或?qū)ΠY治療后，可恢復(fù)正

12、常。嚴(yán)重肝、腎損害，心衰及其他嚴(yán)重器質(zhì)性疾病者禁用。有出血傾向者慎用。對葛根素有過敏或過敏體質(zhì)者禁用。（三） 腺苷1、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)腺苷（Adenosine）是核苷的一種，也是核酸的基本結(jié)構(gòu)單位，全稱為腺嘌呤核苷 (Adenosine)。由核糖（呋喃核糖）與腺嘌呤的一部分組成，中間由-N9-配糖鍵（-N9-glycosidic bond）連結(jié)。其化學(xué)名為9-D-呋喃核糖基腺嘌呤，其分子式為C10H13N5O4，分子量為267.24。腺苷為白色或類白色結(jié)晶性粉末，易溶于水、甲醇、乙醇等極性溶劑，結(jié)構(gòu)見圖2。圖 2 腺苷結(jié)構(gòu)式2、生物學(xué)功能腺苷廣泛存在于動(dòng)物的肝臟，以及冬蟲夏草等生物體中，它具有參與人

13、體代謝和生理調(diào)節(jié)的功能。腺苷可以舒張冠狀動(dòng)脈，調(diào)節(jié)冠脈血流；腺苷是用于合成三磷酸腺苷（ATP）、腺 嘌呤、腺苷酸、阿糖腺苷的重要中間體。腺苷在腺苷酶的作用下，生成腺嘌呤核苷酸，簡稱腺苷酸(AMP)，腺苷酸可作為多種輔酶(NAD、FAD、輔酶A等)的基本組成部分，對輔酶與特定酶蛋白的結(jié)合起重要作用，例如腺苷脫氨酶，它的缺失會(huì)引起免疫缺陷癥。因此，腺苷對人體有著不可或缺的作用。隨著人們對保健品的日益青睞，目前市場上已出現(xiàn)多種以腺苷為主要功能因子的保健品。3、代謝：腺苷是存在于幾乎每個(gè)細(xì)胞內(nèi)的一種內(nèi)源性核苷。心肌細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞都能迅速地合成、轉(zhuǎn)運(yùn)腺苷，參與腺苷的代謝，并調(diào)節(jié)細(xì)胞間質(zhì)及

14、血漿中的腺苷濃度。靜脈應(yīng)用腺苷后，血液循環(huán)中的腺苷主要是通過經(jīng)細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞的攝取，而被快速清除，半衰期10s。超生理量的腺苷可以被細(xì)胞外的腺苷脫氨酶通過脫氨作用降解。腺苷的激活和滅活都不需要通過肝臟或者腎臟代謝。4、安全性：腺苷的副作用（潮紅、氣急、胸痛）較常見，但多為一過性（12 min內(nèi)消失）。對有竇緩或房室阻滯者慎用。由于腺苷的作用時(shí)間短，因此對血流動(dòng)力學(xué)幾無影響，較少引起低血壓。腺苷與某些藥物具有相互作用。治療濃度的茶堿能阻斷腺苷賴以發(fā)揮電生理和血流動(dòng)力學(xué)作用的受體。雙嘧達(dá)莫（潘生?。┳钄嘞佘盏臄z取，從而使其作用增強(qiáng)。對正在服用這些藥物的患者，應(yīng)選用其它藥物治療。（四）五味子素1

15、、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)五味子素為木蘭科植物五味子果實(shí)的提取物，主要有效成分為木脂素類如五味子甲素、五味子乙素、五味子醇甲、五味子醇乙、五味子丙素、五味子酯甲等。五味子素為棕色粉末，溶于氯仿、甲醇、丙酮、環(huán)己烷、正己烷等，不溶于水。五味子甲素(Schisandrin A)的分子式為C24H32O6，分子量416.51。五味子乙素分子式為C23H28O6，分子量為400.46。五味子醇甲的分子式為C24H32O7，分子量為432.51，五味子甲素、五味子乙素和五味子醇甲的結(jié)構(gòu)見圖3。圖 3 三種五味子素的結(jié)構(gòu)式2、生物學(xué)功能五味子素主要用于治療肝炎、神經(jīng)衰弱等癥。具有抗氧化、保肝抗肝損傷、降低轉(zhuǎn)氨酶及解毒作

16、用。還具有收斂固澀，益氣生津，補(bǔ)腎寧心的作用。(1) 避免肝臟受損：研究顯示，五味子素有保護(hù)肝臟的作用。在中了四氯化碳毒的動(dòng)物中，五味子素在改善肝臟功能方面起了很大的作用。(2) 促進(jìn)肝臟細(xì)胞再生：在1992年，Kubo等學(xué)者指出動(dòng)物在被切除部份肝臟后，五味子可以刺激肝臟的細(xì)胞再生。這是由于在早期的肝臟再生過程中，ODC這種酵素會(huì)參與其中，而五味子素正能增加ODC的活躍度，因而可以刺激肝臟的細(xì)胞再生。(3) 強(qiáng)化呼吸系統(tǒng)：五味子素能直接刺激在腦部的呼吸控制中心，從而增加呼吸的深度及次數(shù)。(4) 改善腦部機(jī)能：五味子素可直接改善神經(jīng)系統(tǒng)。五味子素可以增強(qiáng)人的思考能力；在有神經(jīng)衰弱問題(如疲倦、焦

17、慮等)的動(dòng)物身上，五味子可以使這些神經(jīng)細(xì)胞正常化，從而改善神經(jīng)衰弱的問題。(5) 其他功效：對循環(huán)系統(tǒng)，可以增強(qiáng)心臟肌肉收縮及血管舒張。對消化系統(tǒng)，可以調(diào)節(jié)胃液的分泌。對女性生殖系統(tǒng)，能夠刺激子宮的收縮。3、安全性五味子可說是不帶毒性的。在不同的臨床測試中，五味子素都顯示其極佳的耐藥力。在實(shí)驗(yàn)中，即使老鼠服用大劑量 (5 g/kg)也不會(huì)致命。而如果連續(xù)10天讓老鼠口服大劑量的五味子酒精抽取液 (5 g/kg)，也只是實(shí)驗(yàn)鼠身上發(fā)現(xiàn)輕微的中毒反應(yīng)，如：減少活動(dòng)量；但實(shí)驗(yàn)鼠的所有重要器官都沒有受到明顯的影響。（五）甘草酸1、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)甘草酸是甘草中最主要的活性成分，為白色或淡黃色結(jié)晶型粉末，無臭

18、，有特殊甜味，其甜度約為蔗糖的250倍。易溶于熱水和熱的稀乙醇，不溶于無水乙醇和乙醚。分子式為C42H62O16，分子量為822.93，熔點(diǎn)220，結(jié)構(gòu)見圖4。圖 4甘草酸結(jié)構(gòu)式2、生物學(xué)功能甘草酸具有抗炎、抗病毒和保肝解毒及增強(qiáng)免疫功能等作用。甘草酸具有腎上腺皮質(zhì)激素樣作用，能抑制毛細(xì)血管通透性，減輕過敏性休克的癥狀?？梢越档透哐獕翰∪说难迥懘肌Ｓ捎诟什菟嵊刑瞧べ|(zhì)激素樣藥理作用而無嚴(yán)重不良反應(yīng)，在臨床中被廣泛用于治療各種急慢性肝炎、支氣管炎和艾滋病。還具有抗癌防癌、干擾素誘生劑及細(xì)胞免疫調(diào)節(jié)劑等功能。3、代謝無論通過靜脈注射或口服給予甘草酸，甘草酸在體內(nèi)代謝成甘草次酸而發(fā)揮作用，這一轉(zhuǎn)化過

19、程依賴腸道正常菌群水解，緩慢進(jìn)行。靜脈注射的甘草酸首先在肝細(xì)胞內(nèi)由溶酶體中-D-葡萄甘酸酶代謝成3-單-葡萄甘酸甘草次酸，后者在肝臟中進(jìn)一步代謝，隨膽汁排入腸內(nèi)，由腸內(nèi)細(xì)菌代謝成甘草次酸，再吸收入血。甘草次酸在體外的活性較甘草酸強(qiáng)36倍，在體內(nèi)強(qiáng)1015倍。4、毒性毒性小，對重要臟器無明顯損害。少數(shù)患者服藥后可出現(xiàn)浮腫，個(gè)別可出現(xiàn)胸悶、口渴、低血鉀、輕度血壓升高、頭痛等不良反應(yīng)，也有一例用藥后引起精神癥狀的報(bào)道。以上癥狀停藥后均可消失。（六）總?cè)?、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)根據(jù)三萜類化合物在植物體內(nèi)的存在形式、結(jié)構(gòu)和性質(zhì)，可分為三萜皂苷及其苷元和其他三萜類（樹脂、苦味素、三萜生物堿及三萜醇）兩大類。角鯊烯

20、是三萜類化合物的重要代表（見圖6），是皂苷、羊毛甾醇等生物合成的前身72。圖 5 角鯊烯結(jié)構(gòu)式大多數(shù)三萜類(Triterpenes)化合物是一類基本母核由30個(gè)碳原子(含6個(gè)異戊二烯單位)縮合而成的萜類化合物，也是一類重要的中藥化學(xué)成分。目前已發(fā)現(xiàn)的三萜類化合物，多數(shù)為四環(huán)三萜和五環(huán)三萜，少數(shù)為鏈狀、單環(huán)、雙環(huán)和三環(huán)三萜。三萜類化合物在自然界的存在形式有游離或者與糖結(jié)合成苷或酯的形式存在。游離三萜化合物不溶于水，可溶于常見的有機(jī)溶劑。三萜苷類易于水，其水溶液劇烈振搖時(shí)能產(chǎn)生大量、持久的肥皂樣泡沫，故稱為三萜皂苷。最為常見的是三萜皂苷，另外，三萜皂苷多具有羧基，所以又常稱為酸性皂苷73。2、生物

21、學(xué)功能三萜類化合物具有廣泛的生理活性，通過對三萜類化合物的生物活性及毒性研究結(jié)果顯示，其具有調(diào)節(jié)免疫力74、溶血、抗癌、抗炎、抗菌、抗病毒、護(hù)肝75、降低膽固醇、殺軟體動(dòng)物、抗生育等功效。其中，熊果酸(Ursolic acid)是重要的有待開發(fā)的新型五環(huán)三萜類藥物。近年來，熊果酸及三萜同類物不斷地被報(bào)道具有抗腫瘤、抗HIV、抗糖尿病、抗菌、抗病毒、增強(qiáng)免疫功能和降血脂等效果。3、安全性角鯊烯是三萜類化合物的代表，以成人日攝入量的100倍（成人體重以60 kg計(jì)）作為最高劑量進(jìn)行試驗(yàn)，灌胃30 d后的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：角鯊烯對各試驗(yàn)組動(dòng)物的機(jī)體無不良影響，各劑量組大鼠的體重及其增重、進(jìn)食量、食物利用

22、率、大鼠的臟體比與對照組比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；血紅蛋白含量、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、白細(xì)胞計(jì)數(shù)及白細(xì)胞分類均在正常值范圍內(nèi)；血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、尿素、肌酐、總膽固醇、甘油三酯、血糖、總蛋白、白蛋白測定值均在正常值范圍內(nèi)。角鯊烯對機(jī)體未見不良印象，無副作用。三、檢測方法綜述1、粗多糖目前，我國對于保健食品中以粗多糖作為主要功效成分的檢測目前尚無統(tǒng)一的法定標(biāo)準(zhǔn)，文獻(xiàn)報(bào)道的方法有苯酚-硫酸法15、蒽酮比色法6、直接滴定法7、間接碘量法和高效液相色譜法等。蒽酮比色法對反應(yīng)條件的要求較高，如溫度、時(shí)間及蒽酮試劑的質(zhì)量等級等。直接滴定法測定結(jié)果可能偏高，因淀粉等多糖對其有干擾作用。苯酚-硫酸法是將樣品中水提

23、醇沉沉淀下來的粗多糖在硫酸的作用下, 水解成單糖并迅速脫水生成糖醛衍生物, 與苯酚縮合成有色化合物。以葡萄糖或葡聚糖作為標(biāo)準(zhǔn)品,通過換算系數(shù)校正，比色測定粗多糖含量。沈向紅1采用沸水浴加熱2 h提取保健食品中的粗多糖，經(jīng)無水乙醇沉淀高分子物質(zhì)以去除水溶性單糖，再用堿性硫酸銅提純后，以葡聚糖作標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行苯酚硫酸顯色。結(jié)果顯示，當(dāng)葡聚糖含量在0.00 mg0.10mgZ之間呈線性，對樣品進(jìn)行多次測定，批內(nèi)相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.01%4.95%，批間相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.49%7.31%，加標(biāo)回收率為91.80%100.4%。同時(shí)，該方法可可避免葡萄糖、果糖等單糖，蔗糖、纖維二糖、乳糖等雙糖，淀粉、糊精等多糖

24、及糖精鈉對粗多糖測定的干擾。肖蘇萍等2采用乙醇沉淀，苯酚-硫酸顯色法，測定了保健飲料中粗多糖的含量。由于葡聚糖標(biāo)準(zhǔn)品價(jià)格昂貴，該方法采用葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品代替葡聚糖標(biāo)準(zhǔn)品，不再采用堿性二價(jià)銅試劑分離出具有葡聚糖結(jié)構(gòu)的多糖，干擾因素較少。黃生權(quán)等3采用不同的測定方法測定真菌保健食品中的粗多糖的含量，考察標(biāo)準(zhǔn)品、提取方法、醇沉?xí)r間及顯色方法等因素對多糖測定結(jié)果的影響。實(shí)驗(yàn)表明選用硫酸苯酚法進(jìn)行顯色，葡萄糖做標(biāo)準(zhǔn)品，超聲功率250W, 超聲提取30min, 醇沉10min, 測定結(jié)果較好。趙陽楠等8通過苯酚硫酸法和間接碘量法分別測定同一樣品靈芝多糖的含量，兩種方法測得總糖含量的結(jié)果基本一致，分別為2.04

25、%和2.07%。兩種方法均穩(wěn)定可行。間接碘量法具有干擾少準(zhǔn)確度高的特點(diǎn)，但與苯酚硫酸法相比，操作過程較為繁瑣。錢一帆等9建立了靈芝孢子粉片中多糖含量的HPLC測定方法。采用Shodex SH1011(苯)乙烯二乙烯苯共聚物鍵合磺酸基)糖柱，流動(dòng)相0.6%硫酸溶液，檢測波長200 nm。靈芝孢多糖在0.25mg/mL8.00 mg/mL范圍線性關(guān)系良好，平均加樣回收率為102.73%，RSD=1.49%。2、葛根素目前，已報(bào)道的葛根素測定方法有分光光度法16、薄層掃描17、近紅外光譜分析18、毛細(xì)管電泳19和高效液相色譜法1115。分光光度法是比較普及和實(shí)用的方法，但干擾大，影響測定結(jié)果；薄層掃

26、描法具有試驗(yàn)費(fèi)用便宜等優(yōu)點(diǎn)，但只能作為半定量測定方法；近紅外光譜分析法由于儀器的普及率不高，故方法的推廣性不強(qiáng)；毛細(xì)管電泳法雖也是現(xiàn)在較為常用的檢測方法，但定量較差。因此，目前測定葛根素的方法多為高效液相色譜法。劉泰然等11建立了膠囊、口服液、片劑、保健茶等保健食品樣品中葛根素的高效液相色譜測定方法。以0.1%磷酸水溶液+乙腈（92+8）為流動(dòng)相，Kromasil ODS (3.9 mm150 mm，5 m) 色譜柱，239 nm紫外波長下，外標(biāo)法測定。葛根素的濃度在40g/mL200 g/mL范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系，加標(biāo)回收率為92.1%102.2%，最低檢出限為2 g/mL，相對標(biāo)

27、準(zhǔn)偏差為3.5%。甘賓賓等14以甲醇+水（30+70，v/v）超聲提取保健食品中的葛根素，采用DiamonsilTM C18(4.6 mm250 mm, 5m)色譜柱，甲醇+水(30+70，v/v)（用磷酸調(diào)節(jié)pH=3.0）為流動(dòng)相，檢測波長250 nm，建立了保健食品中葛根素含量的測定方法。方法的線性范圍為3 ng 300 ng，平均回收率為99.7%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.5%。楊振林等16采用薄層-紫外分光光度法測定葛根沖劑中葛根素的含量，以氯仿:甲醇:水（7:28:0.2）為展開劑，在紫外燈（365 nm）下定葛根素位置，在251 nm處測定吸光度來計(jì)算葛根素的含量。該方法印象因素較多，展

28、開、刮下及洗脫過程可能會(huì)造成被測成分一定程度的損失，導(dǎo)致回收偏低。陳斌等18研究了優(yōu)化分析葛根總異黃酮、葛根素和大豆苷含量數(shù)學(xué)模型的各種條件，包括建模樣品集的選擇、化學(xué)值的定標(biāo)、測量的方法及條件，應(yīng)用近紅外光譜技術(shù)建立了快速檢測葛根中有效成分的方法。但近紅外光譜分析法由于儀器的普及率不高，方法的推廣性不強(qiáng)。李存紅等19建立了葛秦湯制劑中5種有效成分的非水毛細(xì)管電泳測定方法，研究了各種實(shí)驗(yàn)參數(shù)對分離的影響，如緩沖液濃度、分離電壓、毛細(xì)管溫度等。其中葛根素的線性范圍為50.0 g/mL200.0 g/mL，檢測限為0.121 g/mL，遷移時(shí)間和峰面積的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.4%和2.7%。、腺苷核苷

29、為水溶性物質(zhì)，其配糖體的羥基極性較大，在極性溶劑中溶解性好。對保健品樣品中腺苷的提取，一般采用水、乙醇-水溶液、甲醇-水溶液、乙腈-水溶液、甲醇-緩沖鹽水溶液等。提取的方式主要有加熱回流提取、索氏提取、超聲提取等，以超聲提取的效果較好。腺苷的檢測方法有高效液相色譜法2028、薄層色譜法29、離子色譜法30、毛細(xì)管電泳法31, 32、液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜（LC-MS）法。HPLC是現(xiàn)在研究采用最多的方法，它具有分離效果好，無雜質(zhì)峰干擾，線形范圍寬等優(yōu)點(diǎn)，也是國家標(biāo)準(zhǔn)最常使用的檢測儀器。任一平等22應(yīng)用反相高效液相色譜線性梯度洗脫法對中奇蟲草膠囊、夕陽紅膠囊等保健品樣品中的腺苷進(jìn)行了分離測定。采用水超

30、聲提取樣品，使用Lichrospher 100RP-C18色譜柱，以pH4.55.5的磷酸二氫鉀溶液和甲醇作流動(dòng)相，在波長260 nm處檢測，外標(biāo)法定量。其標(biāo)準(zhǔn)曲線在1g/mL10g/mL的濃度范圍內(nèi)線性良好；加標(biāo)回收率在103.5%105%之間。甘賓賓等23以水超聲提取溶劑，超聲提取30 min，對保健食品中的蟲草素和腺苷含量進(jìn)行了提取，采用高效液相色譜法測定，回收率在98.8%99.5%之間。薄層色譜-紫外分光光度法步驟繁雜，耗時(shí)較多。LC-MS作為一種聯(lián)用技術(shù)為藥物分析提供了新的手段，可以鑒別藥物成分，在國外已有許多報(bào)道，國內(nèi)受到條件限制，研究報(bào)道較少。離子色譜法是近年來發(fā)展較為迅速的定

31、量技術(shù)之一，具有靈敏度高、重現(xiàn)性好、選擇性好等優(yōu)點(diǎn)，已廣泛地應(yīng)用于各個(gè)領(lǐng)域。脈沖安培檢測器對于多羥基、氨基等化合物有著靈敏的感應(yīng)。腺苷亦含有多羥基結(jié)構(gòu)，在安培檢測器上有相應(yīng)。鄒小莉等30建立了保健食品中腺苷的高效陰離子色譜測定方法。方法樣品中的腺苷經(jīng)乙腈-水提取后，以0.25 mol/L NaOH為流動(dòng)相，采用Amino PACPA10氨基酸分離柱分離，Au為工作電極的脈沖安培檢測器檢測。腺苷在1.00g/mL 20.00 g/mL濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，樣品平均加樣回收率為93.3%106.7%，樣品測定結(jié)果的RSD為8.86%。高效毛細(xì)管電泳法（HPCE）在藥物分析的應(yīng)用，已逐漸成為熱點(diǎn)，

32、其分析時(shí)間短，分離效率高，是高效液相色譜法（HPLC）的數(shù)十倍（一般可達(dá)每米幾百萬理論塔板數(shù)），檢測限低，進(jìn)樣量小，溶劑消耗少，自動(dòng)化程度高，但目前尚處于研究階段。阮婧華等32探討毛細(xì)管電泳法研究天然冬蟲夏草用不同溶劑提取的效果及測定其中核苷及其堿基含量的可行性。采用Unimicro毛細(xì)管電泳儀，石英毛細(xì)管柱（60 cm75 m I.D.），運(yùn)行緩沖液分別為36 mmol/L硼砂-15 mmol/L磷酸二氫鈉（pH8.9），分離溫度20，分離電壓15 kV，測定波長254 nm，虹吸進(jìn)樣15 s。腺苷的平均回收率和RSD分別為96.4%和0.89%（n6）。4、五味子素對于保健食品及藥品中五味

33、子素，多采用環(huán)己烷、正己烷、甲醇作為提取溶劑進(jìn)行提取，提取的方式主要有超聲和索氏提取。測定方法主要有高效液相色譜法42-48、薄層層析-紫外分光光度法49、毛細(xì)管電泳法50。文獻(xiàn)報(bào)道以高效液相色譜法為主，采用乙腈或甲醇和水為流動(dòng)相，在254nm或224nm處檢測45。袁軍等43以甲醇為提取溶劑對舒肝糖樂膠囊中的五味子甲素進(jìn)行提取，HPLC測定。五味子甲素在13g/mL137g/mL范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系，平均加標(biāo)回收率為100.55%，RSD=0.61%(n=3)。譚生建等46以己烷超聲提取肝復(fù)康丸中五味子甲素和五味子乙素，以乙腈-水（68:32）混合液（含0.2%磷酸，用三乙胺調(diào)pH5）作為流

34、動(dòng)相，使用LUNA-C18柱，五味子甲素和五味子乙素與其他成分分離良好，線性關(guān)系良好，平均加標(biāo)回收率為100.5%和102.4%，RSD為1.5%和1.7%(n=5)。胡美山等45采用甲醇超聲提取，建立了同時(shí)測定保健食品中五味子醇甲、五味子甲素和五味子乙素3種成分的高效液相色譜測定方法。色譜柱為Agilent zorbax SB-C18(4.6150 mm，5 m)，流動(dòng)相采用甲醇-水進(jìn)行梯度洗脫，檢測波長為254 nm。五味子醇甲、五味子甲素和五味子乙素的線性范圍分別為0.21g 1.55g、0.28g 2.08 g、0.20g 1.51 g；加樣回收率分別為97.48%、97.23%和97

35、.88%（n=5）。李惠霞等49采用薄層掃描法測定復(fù)方降糖丸中五味子甲素的含量，五味子甲素在 0.753.75g線性關(guān)系良好，平均回收率為103.2%。毛細(xì)管電泳法具有高效、快速、微量等特點(diǎn)，在藥物分析中得到了廣泛的應(yīng)用，在緩沖溶液中添加有機(jī)溶劑，可改善分離選擇性。劉海興等50采用毛細(xì)管電泳法，以磷酸氫二鈉(15 mmol/L)、硼砂(15 mmol/L)和20%乙醇的緩沖液作為運(yùn)行電解質(zhì)溶液，獲得了五味子甲素與五味子中其余成分的有效分離，準(zhǔn)確地測定了五味子中的五味子甲素含量。五味子甲素的線性范圍為0.030.37 g/L，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.63%（n=6），平均回收率為99.6%。5、甘草酸

36、甘草酸作為甘草中的主要有效成分，在醫(yī)藥、食品、化妝品、卷煙等行業(yè)中有著極其廣泛的應(yīng)用。目前，文獻(xiàn)報(bào)道的甘草酸的定量分析方法51主要有比色法、電化學(xué)方法、薄層掃描法、離子抑制色譜法、高效液相色譜法和高效毛細(xì)管電泳法。用于測定甘草酸含量的電化學(xué)方法主要有小波變換二次微分示波計(jì)時(shí)電位法52、極譜催化波法53。有近幾年來，應(yīng)用高效毛細(xì)管電泳法和高效液相色譜法定量分析甘草酸含量發(fā)展迅速。薄層掃描法是薄層色譜技術(shù)與光密度計(jì)和微型電子計(jì)算機(jī)結(jié)合起來的一種新型儀器分析方法。應(yīng)用薄層掃描儀可同時(shí)對各種復(fù)雜的樣品進(jìn)行分離和測定。何桂霞等54采用薄層掃描法測定開胃健脾膠囊中甘草酸的含量。展開劑正丁醇-冰醋酸-水(6

37、:1:3)上層液，測定波長 (s)為252 nm ，參比波長 (R) 500 nm。方法的線性范圍為2.1g 10.5g，平均回收率為 98.94% ，RSD為1.35%。吳容軍等55采用薄層掃描法測定術(shù)苓口服液中甘草酸的含量。平均加樣回收率為 98.8%，精密度RSD=3.99%。 高效毛細(xì)管電泳法是根據(jù)組分在外電場條件下電泳淌度的差異而進(jìn)行分離的一種新型分析技術(shù)，具有高效、快速、低耗、樣品預(yù)處理簡單等優(yōu)點(diǎn)。祖元?jiǎng)偟?6采用高效毛細(xì)管電泳法成功地分離測定了甘草中甘草酸的含量 ，在pH =5.8的50 mmol/L磷酸緩沖液，檢測波長252 nm，分離電壓25 KV ,進(jìn)樣壓力20 mm汞柱，

38、溫度30 oC的檢測條件下，標(biāo)準(zhǔn)溶液在 0.0448mg/mL0.224mg/mL范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。對于甘草酸的測定，應(yīng)用最為廣泛的是高效液相色譜法，GB/T 22248-200857規(guī)定了保健食品中甘草酸的測定方法。根據(jù)甘草酸易溶于醇、水等極性溶劑的理化性質(zhì)，不含油試樣中的甘草酸采用流動(dòng)相進(jìn)行提取，對于含油試樣則需用石油醚去油后再用流動(dòng)相提取，過濾后進(jìn)高效液相色譜儀，經(jīng)反相C18色譜柱分離后，由紫外檢測器檢測。取樣量3.0 g時(shí)，方法的檢出限為1.010-3 g/kg，方法的定量限為3.010-3 g/kg，線性范圍為5.0 g/mL 50 g/mL。何兵等58建立黃金咽喉片中

39、甘草酸含量的高效液相色譜測定方法。采用的色譜柱為 Dikma Kromasil C18柱 (4.6 mm250 mm，5 m )，流動(dòng)相為甲醇-0.2 mol/L醋酸銨-冰醋酸 (66:34:1)，檢測波長為252 nm。甘草酸在0.4 g4 g范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系，平均回收率為99.65%，RSD為0.514% ( n = 6)。方從容等59建立用反相高效液相色譜內(nèi)標(biāo)法測定保健食品中甘草酸含量的方法。該方法應(yīng)用內(nèi)標(biāo)法測定保健食品中的甘草酸含量，甘草酸在20 g/mL300 g/mL范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，方法的回收率為87.2%96.7%，RSD為3.05%。6、總?cè)茖τ诒＝∈称芳八幤?/p>

40、中總?cè)?，主要以乙醇、甲醇、乙酸乙酯為提取溶劑，其中選用乙醇為提取溶劑的文獻(xiàn)較多，提取方式主要有索氏提取、超聲提取81、回流提取76和浸提77。測定方法主要有分光光度法78,79、高效液相色譜法 76、高效液相色譜-質(zhì)譜法80，文獻(xiàn)報(bào)道以分光光度法為主。李宏楊等79以乙醇為提取溶劑，采用加熱回流的方式提取苦丁茶中的總?cè)?。提取出的總?cè)萍尤胂悴萑?冰醋酸、高氯酸顯色，以熊果酸純品為對照，在波長548 nm處用分光光度法測定苦丁茶中總?cè)坪?。陳穎等77以乙醇為提取溶劑，采用水浴浸提的方式，提取天花粉中三萜皂苷。選用熊果酸為對照品，香草醛-冰醋酸和高氯酸為顯色劑，以紫外分光光度法測定天花粉中總?cè)?/p>

41、萜皂苷的含量。在16 g48 g范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，加標(biāo)回收率為97.22%，RSD=1.59%。陳太平等83采用高效液相色譜法研究細(xì)薄星芒海綿總?cè)?，使用的色譜柱為Pack-SIL分析柱（250 mm4.6 mm，5 m）；以正己烷（A）和乙酸乙酯（B）為流動(dòng)相，梯度洗脫：030min A(75)，3035 min A(75%3% )，3550 min A(3% )；流速為1.0mL/min；檢測波長為360 nm；柱溫為室溫。該方法建立的細(xì)薄星芒海綿總?cè)铺崛∥锏母咝б合嗌V指紋圖譜的特征性和專屬性強(qiáng)。于能江等80以甲醇為提取溶劑，超聲波提取茯苓粉末中三萜成分，以乙腈-水為流動(dòng)相進(jìn)行液相分

42、離，二極管陣列(DAD) 和電噴霧質(zhì)譜( ESI-MS) 兩種檢測方法在線檢測。四、功效成分的檢測方法（一）保健飲料中粗多糖含量的苯酚-硫酸法測定法21、測定步驟精密吸取保健飲料液體試樣15 mL，加入無水乙醇60 mL，使含醇量達(dá)80%，充分?jǐn)嚢杌靹? min，以3 000 r/min離心5 min，棄去上清液，殘?jiān)?0%乙醇洗滌3次，低溫烘干。殘?jiān)盟芙獠⒍ㄈ葜?50 mL，得供試品溶液。吸取供試品溶液2.0 mL，加入50 g/L苯酚溶液2.0 mL，在旋轉(zhuǎn)混勻器上混勻，小心加入濃硫酸8.0 mL，于旋轉(zhuǎn)混勻器上小心混勻，置沸水浴中煮沸20 min，冷卻后用分光光度計(jì)在485 nm處

43、以試劑空白溶液為參比，1 cm比色皿測定吸光度值。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出葡萄糖含量，并計(jì)算該保健品飲料中水溶性粗多糖含量。2、方法特點(diǎn)方法的平均回收率為97.5%，RSD=1.96%。（二）層析-高效液相色譜法測定保健食品中葛根素的含量121、試劑和材料D101大孔吸附樹脂：70%乙醇浸泡24 h，充分膨脹后，反復(fù)用去離子水沖洗，將乙醇洗凈后裝柱；層析柱柱高為10cm，長15cm，內(nèi)徑1.0 cm。2、測定步驟（1）單一葛根提取物制成的試樣根據(jù)試樣含量，稱取0.50 g1.00 g試樣（精確至0.001g），加適量70%甲醇，超聲提取20 min，冷卻至室溫，再用70%甲醇定容至10mL，混勻，靜

44、置，上清液經(jīng)0.45 m濾膜過濾后，用液相色譜分析，外標(biāo)法定量。（2）多種植物提取物制成的試樣：需經(jīng)大孔樹脂凈化后再進(jìn)行高效液相色譜分析。根據(jù)試樣含量，稱取0.50 g1.00 g試樣（精確至0.001 g），加適量水溶解，超聲提取20 min,冷卻至室溫后用水定容至10 mL，混勻，4000 r/min離心5 min。取1 mL上清液上大孔吸附樹脂層析柱，用約40 mL水以1 mL/min淋洗雜質(zhì)，再用50 mL 70%甲醇洗脫葛根素，將洗脫液置于沸水浴蒸發(fā)近干，用70%甲醇將其溶解并定容至至1 mL，過0.45 m濾膜后，用液相色譜分析，外標(biāo)法定量。色譜條件：高效液相色譜儀配紫外檢測器；色

45、譜柱：ODS C18柱（250 mm4.6 mm i.d.，5 m）；流動(dòng)相：甲醇+36%乙酸+水（25+3+72）；流速：0.6 mL/min；檢測波長為247 nm；。葛根素標(biāo)準(zhǔn)溶液和多種植物提取物制成的試樣色譜圖見圖7。3、方法特點(diǎn)當(dāng)取樣量為1.0 g，定容體積為10mL時(shí)，以信噪比S/N=3計(jì)算方法的檢出限（LOD）為2.010-5 g/kg；當(dāng)取樣量為1.0 g，定容體積為10 mL時(shí)，以信噪比S/N=10計(jì)算方法的檢出限（LOQ）為6.010-5 g/kg。葛根素在 5.0 g/mL 50.0 g/mL內(nèi)呈線性關(guān)系, 方法的回收率為81.6%100.2%，試樣測定RSD為0.84%

46、 1.08%。圖 6葛根素標(biāo)準(zhǔn)溶液和多種植物提取物制成的試樣色譜圖（三）保健食品中腺苷含量的測定1、測定步驟取適量樣品用研缽研磨混合均勻，盛于清潔密閉容器內(nèi)標(biāo)識后作為試樣。準(zhǔn)確稱取試樣約0.5 g(精確到0.1 mg)于50mL燒杯中，加入15 mL甲醇溶液（1+1，V/V），于混勻器上稍加混勻后，置超聲波清洗器中超聲30 min，取出后冷卻至室溫，轉(zhuǎn)移至25mL容量瓶中，并用甲醇溶液（1+1，V/V）稀釋至刻度。取少量溶液于離心管中，離心15 min，取1.0 mL上部清液于10 mL容量瓶中，甲醇溶液（1+1，V/V）定容至刻度，取適量溶液用微孔過濾器過濾，供液相色譜測定，外標(biāo)法定量。色譜

47、條件：高效液相色譜儀配紫外檢測器；色譜柱用C18（250 mm4.6 mm i.d.，5 m）；流動(dòng)相：甲醇-0.05 mol/L磷酸氫二鈉緩沖溶液（15+85，V/V）；檢測波長：260 nm；柱溫為35；流速：0.6 mL/min。2、方法特點(diǎn)在方法所確定的實(shí)驗(yàn)條件下，在1.0 g/mL10 g/mL濃度范圍內(nèi)，腺苷的線性關(guān)系良好。以S/N=5確定測定低限（LOQ）為0.01%，該測定低限能滿足市售保健食品中腺苷含量要求。選用腺苷含量分別為0.00898%和0.249%兩個(gè)發(fā)酵蟲草菌粉樣品，進(jìn)行添加回收試驗(yàn)，方法的總體平均回收率在86.7%106.8%之間，總體平均相對標(biāo)準(zhǔn)偏差在1.22%

48、6.08%(n=6)之間。（四）保健食品中五味子醇甲、五味子甲素和五味子乙素的含量測定451、測定步驟精密稱取樣品（市售含五味子類保健食品）細(xì)粉0.5 g，精密加入25 mL甲醇，密塞，稱定質(zhì)量，超聲處理30 min，放至室溫，再稱定質(zhì)量，用甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻后過濾，即得到供試品溶液，供液相色譜測定，外標(biāo)法定量。色譜條件：Waters Alliance 2690高效液相色譜儀配DAD紫外檢測器；色譜柱為Agilent zorbax SB- C18 柱(150 mm4.6 mm i.d.，5 m)；流動(dòng)相：甲醇-水梯度洗脫（30min內(nèi)甲醇比例由65%遞增到85%）；流速：1.0 mL/m

49、in；檢測波長254 nm。標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣品色譜圖見圖8。2、方法特點(diǎn)五味子醇甲、五味子甲素和五味子乙素分別0.21 g 1.55 g、0.28 g 2.08 g、0.20 g1.51 g范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。以S/N=3為標(biāo)準(zhǔn)測得最低檢測限分別為五味子醇甲0.03 g、五味子甲素0.08 g和五味子乙素0.06 g。加樣回收率分別為97.48%、97.23%和97.88%（n=5）；同一樣品5次平行提取并測定的RSD分別為0.89%、0.93%和1.07%。圖 7 標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣品色譜圖（五）保健食品中甘草酸測定方法的研究591、試劑材料甘草酸對照品溶液: 精確稱取甘草酸對照品 10 mg，用甲醇

50、溶解定容至 10.0 mL，搖勻。對-羥基苯甲酸丁酯溶液: 精密稱取對-羥基苯甲酸丁酯10 mg，加甲醇定容成1 mg/mL的溶液, 作為內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液。2、測定步驟片劑或粉狀膠囊試樣：稱取0.5 g3.0 g均勻試樣，準(zhǔn)確到0.001 g，置于50 mL容量瓶中，準(zhǔn)確加入0.5 mL內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液，然后加入約40 mL 50%甲醇，超聲提取30 min后，加入50%甲醇定容至刻度，搖勻，3 000 r/min離心10 min，過0.45 m濾膜，供高效液相色譜測定，內(nèi)標(biāo)法定量?？诜涸嚇樱簻?zhǔn)確吸取5.0 mL 10.0 mL試樣于50 mL容量瓶中，準(zhǔn)確加入0.5 mL內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液，然后加入約40 m

51、L 50%甲醇，超聲提取30 min后，加入50%甲醇定容至刻度，搖勻，3000 r/min離心10 min，過0.45 m濾膜，用高效液相色譜測定，內(nèi)標(biāo)法定量。色譜條件：Waters 2695高效液相色譜儀配紫外檢測器；色譜柱為ODS C18柱 (4.6 mm150 mm，5 m)；流動(dòng)相：3%醋酸溶液+乙腈( 60+40)，內(nèi)標(biāo)物為對羥基苯甲酸丁酯，檢測波長：254 nm。對照品和試樣色譜圖見圖9。3、方法特點(diǎn)以甘草酸與內(nèi)標(biāo)峰面積比為縱坐標(biāo)，以濃度為橫坐標(biāo)進(jìn)行回歸甘草酸在20g/mL 300 g/mL范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，方法的回收率為87.2%96.7%，RSD為3.05%。圖 8 對

52、照品和試樣色譜圖（六）分光光度法測定靈芝孢子粉中總?cè)坪?21、測定步驟稱取靈芝孢子粉膠囊約1 g，用乙酸乙酯溶解，超聲震動(dòng)30 min，用乙酸乙酯定容至刻度，搖勻，濾過，棄去初濾液，取續(xù)濾液5 mL定容至50 mL作為供試品溶液。吸取1.00 mL供試品溶液于100水浴上蒸干后，加入5香草醛-冰醋酸溶液0.40 mL和1.00 mL高氯酸，65水浴加熱45 min后移人冰水浴中，再加入5.00 mL冰醋酸，搖勻后置于室溫。15 min后用紫外/可見分光光度計(jì)于548.1 nm波長下測定樣品溶液的吸光度。2、方法特點(diǎn)熊果酸含量在0.022 mg0.130 mg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系；加樣回收

53、率為101.71%11 6.16%，均值為108.94% ，RSD為5.24%。稱取同一靈芝孢子粉膠囊內(nèi)容物，平行測定6份，RSD為1.59 %。（七）保健食品中水飛薊素的含量測定方法HPLC法水飛薊是用于治療肝臟疾病的常用藥物，其主要有效成分是水飛薊素，屬于黃酮醇類物質(zhì)，包括水飛薊賓，異水飛薊賓，水飛薊寧，水飛薊亭等。藥理作用表明水飛薊素主要是通過限制ROS（reactive oxygen species）的活性來實(shí)現(xiàn)其治療作用的?，F(xiàn)行國家標(biāo)準(zhǔn)采用紫外分光光度法 ,以水飛薊賓計(jì)算水飛薊保健品中水飛薊素的含量，測定結(jié)果是水飛薊素 (總黃酮 )的含量，結(jié)果受顏色變化等因素影響較大，并不能準(zhǔn)確測定

54、水飛薊賓的含量。為了進(jìn)一步研究該類保健品的藥理作用，同時(shí)對該類制劑的質(zhì)量進(jìn)行監(jiān)控，非常有必要建立一種針對水飛薊保健品中的水飛薊素的分析方法。本方法建立了保健品中水飛薊賓含量測定的高效液相色譜法，采用水飛薊賓的兩種異構(gòu)體的色譜峰面積之和計(jì)算其含量，該方法具有分離效果好、靈敏、準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn) ,可用于該類產(chǎn)品的有效成分水飛薊素的含量測定和質(zhì)量控制。1、測定方法（1）提取取某保健品片劑20片，研碎混勻后取1g用25ml甲醇溶解，用超聲波輔助提取15分鐘，然后用3000 r/min的轉(zhuǎn)速離心5 min。為了提取完全，提取過程重復(fù)一次。提取溶液轉(zhuǎn)移至50ml容量瓶，用甲醇稀釋至刻度。取2ml樣品溶液經(jīng)0.4

55、5m膜過濾，供HPLC分析。（2）色譜分離條件的優(yōu)化水飛薊素的結(jié)構(gòu)式見圖3所示。在色譜柱選擇方面，比較了日本島津Shim-pack VP-ODS柱（250 mm4.6mm, 5m）和大連江申Spherigel C18柱，結(jié)果表明shim-pack VP-ODS柱有較好的分離效果，并且峰形也較好。流動(dòng)相我們考察了甲醇和不同添加劑的水溶液，結(jié)果表明甲醇和磷酸二氫鈉緩沖液梯度洗脫有較好的色譜分離效果，流動(dòng)相最終選擇為：流動(dòng)相A為甲醇水0.2mol/L磷酸0.5mol/L磷酸二氫鈉= 80:120:1:8，流動(dòng)相B為甲醇，梯度洗脫；流速：1.2 mL/min；檢測波長：280 nm ；柱溫：30 。實(shí)

56、驗(yàn)結(jié)果表明，在表8所示的梯度條件下，可以獲得滿意的分離效果（圖4）。圖 9 水飛薊賓的異構(gòu)體(Silybin)表 1 流動(dòng)相梯度表時(shí)間（min）A%B%0.0110005.00802024.00752535.00653555.00455560.00結(jié)束圖 10水飛薊賓標(biāo)準(zhǔn)品的色譜圖（峰3為水飛薊賓A, 峰4為水飛薊賓B,兩種異構(gòu)體可以很好的分離）3、方法的線性范圍與檢測限逐級稀釋水飛薊賓標(biāo)準(zhǔn)工作液至10、20、40、60、80、100g/ml濃度進(jìn)行測定，以水飛薊賓的2種異構(gòu)體的紫外響應(yīng)峰面積之和（Y軸）對相應(yīng)的水飛薊賓的濃度（X軸）作圖，定量分析水飛薊賓的檢測波長為280nm；本方法在10g

57、/m100l范圍內(nèi)呈線性，結(jié)果表明，紫外響應(yīng)峰面積和樣品濃度之間有很好的線性關(guān)系，檢測限（S/N=3）的范圍為2 ng/ml。4、方法的回收率與精密度選用不含水飛薊賓的陰性控制樣品，按2002/657/EC要求每個(gè)添加濃度水平取6個(gè)平行樣品，進(jìn)行3濃度水平添加回收試驗(yàn)，本方法的平均回收率為：94.5%95.8%，室內(nèi)相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為：2.82%6.38 %。參考文獻(xiàn)1 沈向紅. 保健食品中粗多糖測定方法研究. 食用預(yù)防醫(yī)學(xué), 2001, 8(6): 461-462.2 肖蘇萍, 吳劍威，曹韌楠，周琳，陳波. 苯酚-硫酸法測定保健飲料中粗多糖含量方法研究. 中國現(xiàn)代中藥, 2008,10(7): 37-38. 3 黃生權(quán), 敖宏, 郭愛玲. 真菌保健食品中多糖含量測定的比較. 現(xiàn)代食品科技 2010, 26