1、最新修正版臨床標(biāo)本微生物檢驗(yàn)概述考點(diǎn)常見(jiàn)病原菌標(biāo)本采集及運(yùn)送 檢驗(yàn)方法 臨床意義臨床標(biāo)本微生物學(xué)檢驗(yàn)(血液、腦脊液、痰、尿液、糞便、性傳播疾病、創(chuàng)傷)(1)(2)(3)、臨床標(biāo)本細(xì)菌檢驗(yàn)的基本程序占眼觀塞(4)r涂片染色鏡檢T標(biāo)本直接松查航原檢查r*鑒定試驗(yàn)r驗(yàn)推告T產(chǎn)菌培養(yǎng)酸檢測(cè)日存需氧培養(yǎng)1XT分離壇養(yǎng)-厭氣培養(yǎng)L二氧化碳培養(yǎng)F物試驗(yàn) 血清學(xué)檢驗(yàn)二、血液感染正常人的血液是無(wú)菌的。菌血癥是指在血液中可檢測(cè)到細(xì)菌，包括一過(guò)性和持續(xù)性在血中存在。敗血癥是指病原菌侵入血流后，在其中大量繁殖并產(chǎn)生毒性產(chǎn)物，引起全身中毒癥狀。膿毒血癥是指化膿性細(xì)菌敗血癥時(shí)，細(xì)菌通過(guò)血流擴(kuò)散至全身其他組織或器官，產(chǎn)生新

2、的化膿性病 灶。(一)常見(jiàn)病原菌革蘭陽(yáng)性菌革蘭陰性菌球菌金葡、CNS A/B鏈球菌、肺炎鏈球 菌、腸球菌、草綠色鏈球菌腦膜炎球菌、卡他布蘭漢菌桿菌產(chǎn)單核李斯特菌、炭疽桿菌、結(jié)核分 枝桿菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌大腸桿菌、(副)傷寒沙門(mén)菌、克雷伯菌、沙雷菌、 綠膿桿菌、不動(dòng)桿菌、氣單胞菌、流感嗜血桿菌、 布魯菌、嗜肺軍團(tuán)菌、類(lèi)桿菌真菌假絲酵母菌、曲霉菌、隱球菌、球孢子丄(二) 標(biāo)本采集1. 采血時(shí)間和頻率病人發(fā)熱初期或高峰期采集，或在未用抗生素前采集。但懷疑細(xì)菌性心內(nèi)膜炎時(shí)，血培養(yǎng)不少于三 次。2. 采血量一般為靜脈采血，成人采血量1020ml，兒童35ml，嬰兒12ml。3. 床邊直接注入血液培養(yǎng)基，否

3、則用SPS抗凝劑送檢，不得用 EDTA枸櫞酸鈉抗凝。4. 檢查血管內(nèi)導(dǎo)管有無(wú)細(xì)菌污染，可無(wú)菌操作，剪下導(dǎo)管5cm遠(yuǎn)側(cè)段，置無(wú)菌容器內(nèi)送檢。（三）微生物分離培養(yǎng)和鑒定1. 培養(yǎng)基的選擇用自動(dòng)血培養(yǎng)分析儀時(shí)選用相應(yīng)的血培養(yǎng)瓶，如需氧+厭氧，需氧+高滲等。2. 分離和鑒定 當(dāng)觀察有細(xì)菌生長(zhǎng)時(shí)或血培養(yǎng)儀陽(yáng)性報(bào)警時(shí)，應(yīng)及時(shí)作如下檢驗(yàn)： （ 1）涂片染色鏡檢，結(jié)果及時(shí)與臨床聯(lián)系； （ 2）轉(zhuǎn)種血平板、巧克力平板、厭氧血平板或其他特殊培養(yǎng)基等分離培養(yǎng)純菌再進(jìn)行鑒定； （ 3）同時(shí)做藥敏試驗(yàn)，結(jié)果及時(shí)報(bào)告臨床作治療參考。（四）報(bào)告方式陰性結(jié)果： 7d報(bào)告無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)。23周,疑為亞急性細(xì)菌性心內(nèi)膜炎、布魯菌病、

4、厭氧菌血癥、真菌血癥時(shí)，血培養(yǎng)至少連續(xù)培養(yǎng) 仍無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)者可報(bào)告為陰性。陽(yáng)性結(jié)果三級(jí)報(bào)告方式：第一級(jí)報(bào)告告知標(biāo)本已出現(xiàn)陽(yáng)性并報(bào)告直接細(xì)菌涂片結(jié)果，同時(shí)做初步藥敏試驗(yàn)；第二級(jí)是報(bào)告初步藥敏結(jié)果，同時(shí)做正式鑒定和藥敏試驗(yàn)；第三級(jí)報(bào)告正式鑒定和藥敏試驗(yàn)結(jié)果。（五）臨床意義葡萄球菌菌血癥常由癤、癰、膿腫及燒傷創(chuàng)面等原發(fā)感染灶繼發(fā)，也可由呼吸道感染引起。 G-菌主要侵犯危及機(jī)體免疫功能低下的病人，耐藥菌株不斷增加。厭氧菌的菌血癥常合并需氧菌感染，臨床癥狀較重而復(fù)雜。 L型菌的菌血癥主要由于使用抑制細(xì)菌細(xì)胞壁合成的抗生素后，由缺損細(xì)胞壁的細(xì)菌感染所致。 免疫低下者常出現(xiàn)真菌菌血癥。院內(nèi)感染菌血癥不斷上升。

5、三、中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染（一）常見(jiàn)病原微生物革蘭陽(yáng)性菌革蘭陰性菌病毒真菌及其他葡萄球菌 肺炎鏈球菌 草綠色鏈球菌 A B群鏈球菌 結(jié)核分枝桿菌 產(chǎn)單核李斯特菌 消化鏈球菌腦膜炎奈瑟菌 卡他莫拉菌 流感嗜血桿菌 腸桿菌科細(xì)菌 非發(fā)酵菌 類(lèi)桿菌乙型腦炎病毒 柯薩奇病毒 脊髓灰質(zhì)炎病毒 新腸道病毒68-71型 狂犬病病毒新生隱球菌 假絲酵母菌 鉤端螺旋體（二）標(biāo)本米集用藥前，無(wú)菌操作腰穿方法采集23ml，盛于無(wú)菌試管常溫下立即送檢。天冷時(shí)保溫，不可冰箱保存。用于病毒檢測(cè)時(shí)應(yīng)冷藏送檢。（三）檢驗(yàn)方法1.涂片鏡檢 離心3000rpm, 15分鐘。革蘭染色（一般細(xì)菌）、抗酸染色（分支桿菌）、墨汁染色（隱球菌）

6、、電鏡檢查（病毒顆粒）。2. 分離培養(yǎng) 5g/L葡萄糖增菌肉湯、血平板、中國(guó)藍(lán)瓊脂平板或麥康凱瓊脂平板、巧克力平板。結(jié)核菌接種羅-琴培養(yǎng)基或米氏7H10培養(yǎng)基。真菌培養(yǎng)接種沙氏培養(yǎng)基。病毒培養(yǎng)常用動(dòng)物接種、雞 胚接種、細(xì)胞培養(yǎng)。3. 血清學(xué)檢測(cè)可直接檢測(cè)抗原。（四）臨床意義細(xì)菌性腦膜炎是中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染的常見(jiàn)類(lèi)型。真菌性腦膜炎最常見(jiàn)于隱球菌腦膜炎，其他的真菌性腦膜炎如白假絲酵母、球孢子性腦膜炎日漸增 多，特別是免疫功能低下和惡性疾病患者易發(fā)。流行性乙型腦炎可獲得持久免疫力，再次發(fā)病者極少見(jiàn)。腸道病毒對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)的危害性逐漸引起人們的關(guān)注和重視。四、呼吸道感染呼吸道按解剖結(jié)構(gòu)分為上呼吸道和下呼

7、吸道。上呼吸道感染主要指喉及喉以上的呼吸道感染。下呼吸道感染主要指氣管、支氣管和肺的感染。（一）上呼吸道的正常菌群1. 球菌 凝固酶陰性葡萄球菌，鏈球菌，微球菌，奈瑟菌，厭氧球菌。2. 桿菌 棒狀桿菌，嗜血桿菌，類(lèi)桿菌，梭桿菌。（二）常見(jiàn)病原微生物革蘭陽(yáng)性菌革蘭陰性菌球菌 桿菌 真菌 病毒葡萄球菌，肺炎鏈球菌，化膿性鏈球菌， 腸球菌白喉棒狀桿菌，結(jié)核分枝桿菌，炭疽芽胞 桿菌白假絲酵母菌，隱球菌，曲霉，毛霉（副）流感病毒，呼吸道合胞病毒，腺病毒，麻疹病毒，巨細(xì)胞病毒腦膜炎奈瑟菌，卡他莫拉菌流感嗜血桿菌，大腸埃希菌，克雷伯菌，銅 綠假單胞菌，肺炎支原體，軍團(tuán)菌，百日咳 桿菌（三）標(biāo)本米集1. 采集

8、方法（1）上呼吸道：常采用鼻咽拭子；在扁桃體部位、咽后壁及口腔內(nèi)炎癥、潰瘍或滲出部位采樣時(shí)，應(yīng) 先用清水漱口，再采集標(biāo)本。（2）下呼吸道：常采用自然咳痰法、支氣管鏡采集、胃內(nèi)采集、咽拭子。清晨第一口痰為宜，最好在 用抗菌藥物前采集，必須先用清水漱口，避免唾液混入。2. 立即送檢。（四）檢驗(yàn)方法1.涂片：檢查細(xì)菌常用革蘭染色、抗酸染色；檢查隱球菌采用墨汁染色；軍團(tuán)菌、支原體、病毒等可用免疫熒光抗體染色。合格的痰標(biāo)本：白細(xì)胞 25個(gè)/低倍視野，鱗狀上皮細(xì)胞V 10個(gè)/低倍視野。2.分離培養(yǎng)（1）痰標(biāo)本的前處理一般是用無(wú)菌生理鹽水將痰洗凈，再加入胰酶溶液使痰均質(zhì)化。（2）普通細(xì)菌培養(yǎng)采用血平板、中國(guó)

9、藍(lán)瓊脂平板或麥康凱瓊脂平板、巧克力平板。（五）臨床意義注意采集合格的下呼吸道標(biāo)本，以提高檢出率和陽(yáng)性的正確率。一些條件致病菌和耐藥菌成為醫(yī)院內(nèi)肺炎的主要致病菌。真菌性肺炎多為條件致病性真菌感染，常見(jiàn)的以白假絲酵母菌為主。五、尿路感染上尿路感染：主要有腎盂腎炎下尿路感染：主要有膀胱炎和尿道炎（一）常見(jiàn)病原微生物革蘭陽(yáng)性菌'1革蘭陰性菌球菌桿菌其他葡萄球菌，化膿性鏈球菌，腸球菌 結(jié)核分枝桿菌真菌，厭氧菌淋病奈瑟菌大腸埃希菌，腸桿菌，非發(fā)酵菌，變形桿菌， 沙門(mén)菌，沙雷菌，陰道加特納菌，布魯菌， 克雷伯菌（二）標(biāo)本采集1. 采集時(shí)間一般為晨起第1次尿送檢。2. 采集方法清潔中段尿：常采用，采集

10、標(biāo)本前要用肥皂水或碘附清洗外陰（女性）或陰莖頭（男性）。 腎盂尿采集法；膀胱穿刺法；導(dǎo)尿法：最好，防止逆行性感染。3. 注意事項(xiàng)1h,尿中不得加任何防腐劑和消毒劑。嚴(yán)格進(jìn)行無(wú)菌操作，盡量避免污染菌，立即送檢，不超過(guò)（三）分離培養(yǎng)1. 培養(yǎng)基的選擇普通細(xì)菌選用血平板、中國(guó)藍(lán)瓊脂平板或麥康凱瓊脂平板。特殊細(xì)菌使用特殊、選擇培養(yǎng)基。2. 尿細(xì)菌定量培養(yǎng)。（四）結(jié)果報(bào)告1. 陰性一般48h無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)。2. 陽(yáng)性菌落計(jì)數(shù)、鑒定及藥敏結(jié)果。G-桿菌 105cfu/ml ; G+球菌 104cfu/ml，有診斷意義。G+球菌V 104cfu/ml，多為污染；G球菌104105cfu/ml，可疑陽(yáng)性。3. 尿

11、路感染的細(xì)菌數(shù)少于 105CFUr ml時(shí)多見(jiàn)于以下幾種情況：應(yīng)用抗菌藥物，尿中細(xì)菌發(fā)育受到抑制；使用低敏感性藥物，大多數(shù)細(xì)菌停留在104CFUr ml ；尿濃度變化大時(shí)及 pH在5.0以下8.5以上，則發(fā)育受阻；尿頻時(shí)；病原菌發(fā)育要求條件高時(shí)；采尿時(shí)外陰部消毒劑混入尿中。六、消化道感染（一）常見(jiàn)病原菌腸毒素為主的病原菌 ：金葡，霍亂弧菌，志賀菌，ETEC/EHEC/EAggEC產(chǎn)氣莢膜梭菌，艱難梭菌侵襲性為主的病原菌 ：沙門(mén)菌，志賀菌，EPEC/EIEC小腸結(jié)腸炎耶爾森菌，副溶血弧菌，結(jié)核分枝桿菌，白假絲酵母菌 病毒：輪狀病毒，?？瞬《?，Norwalk病毒，腺病毒（二）標(biāo)本采集與運(yùn)送1. 采

12、集時(shí)間急性期、盡量在用藥前采集。2. 采集方法自然排便采集法、直腸拭子。標(biāo)本不能及時(shí)接種時(shí)，應(yīng)在標(biāo)本中加保護(hù)劑或用相應(yīng)的運(yùn)輸培養(yǎng)基。（三）分離培養(yǎng)培養(yǎng)基的選擇：普通致病菌如沙門(mén)菌、志賀菌等可選用SS瓊脂平板、中國(guó)藍(lán)瓊脂平板或麥康凱瓊脂平板。特殊細(xì)菌如彎曲菌、弧菌、厭氧菌等選擇相應(yīng)的選擇性培養(yǎng)基。病毒可用細(xì)胞培養(yǎng)。（四）臨床意義感染性腹瀉由多種病原體感染所致。消化性潰瘍由幽門(mén)螺桿菌感染引起。輪狀病毒常引起幼兒腹瀉，腺病毒是引起兒童腹瀉的主要病原，還可引起成人腹瀉，埃可病毒常引 起嬰幼兒腹瀉，Norwalk病毒常感染成人和大齡兒童。七、性傳播疾病性傳播疾病（STD :以性行為為主要傳播途徑的 -組

13、傳染病。（一）常見(jiàn)性傳播疾病及其病原體性傳播疾病病原體梅毒梅毒螺旋體淋病淋病奈瑟菌軟下疳杜克嗜血桿菌性病淋巴肉芽腫沙眼衣原體性病淋巴肉芽腫生物亞種細(xì)菌性陰道病陰道加德納菌和類(lèi)桿菌等厭氧菌非淋菌性尿道炎沙眼衣原體沙眼生物亞種、支原體尖銳濕疣人乳頭瘤病毒生殖器皰疹人類(lèi)單純皰疹病毒 2型（二）標(biāo)本采集拭子取尿道膿性分泌物（男性）或?qū)m頸分泌物（女性），供培養(yǎng)及鏡檢;梅毒病人取皮膚滲出液和淋巴穿刺液涂片；皰疹抽取皰內(nèi)液體，或刺破小皰后，用無(wú)菌拭子采樣。八、創(chuàng)傷和外科感染（一）常見(jiàn)病原菌r革蘭陽(yáng)性菌革蘭陰性菌球菌桿菌其他金葡，CNS化膿性鏈球菌，肺炎鏈球菌，腸球 菌，消化鏈球菌炭疽桿菌，結(jié)核分枝桿菌，產(chǎn)氣

14、莢膜桿菌，非 結(jié)核分枝桿菌，破傷風(fēng)梭菌放線菌（衣氏放線菌，諾卡菌）腦膜炎奈瑟菌，卡他布蘭漢菌大腸埃希菌，克雷伯菌，變形桿菌，銅 綠假單胞菌，流感嗜血桿菌，類(lèi)桿菌， 梭桿菌（二）標(biāo)本采集組織創(chuàng)傷用拭子采集標(biāo)本；施行清創(chuàng)術(shù)時(shí)，可選擇合適部位采集標(biāo)本送檢；骨髓炎病人應(yīng)取骨髓活檢標(biāo)本，如損害部位已形成竇道，可采取竇道引流液；膿腫時(shí)取內(nèi)部膿汁及膿腫壁標(biāo)本。（三）臨床意義由創(chuàng)傷、手術(shù)、侵入性器械操作等外科治療引起的感染最為常見(jiàn)。感染以化膿性炎癥改變?yōu)橹鳌Ｍ鈧詣?chuàng)傷感染以葡萄球菌和鏈球菌多見(jiàn)。深部創(chuàng)傷易引起破傷風(fēng)和氣性壞疽。燒傷創(chuàng)面以革蘭陰性桿菌最常見(jiàn)，次為革蘭陽(yáng)性球菌感染。急性化膿性骨關(guān)節(jié)炎常由金黃色葡萄球菌、化膿性鏈球菌、肺炎鏈球菌、淋病奈瑟菌感染所致。慢性化膿性骨關(guān)節(jié)炎、慢性骨髓炎常由結(jié)核分枝桿菌引起，葡萄球菌、鏈球菌也常見(jiàn)。【例題】引起肺部感染的病原菌中，能從痰標(biāo)本檢出的有A. 金黃色葡萄球菌B. 肺炎鏈球菌C. 肺炎克雷伯菌D. 結(jié)核分枝桿菌E. 肺炎支原體答疑編號(hào) 502389290101【正確答案】ABCDE【例題】標(biāo)本采集和處理的基本要求包括A. 抗菌藥物治療前采集標(biāo)本B. 據(jù)病原微生物感染特點(diǎn)，采集不同部位標(biāo)本送檢C. 無(wú)菌操作，采集標(biāo)本時(shí)需先消毒D. 應(yīng)用無(wú)菌容器收集標(biāo)本，立即送檢E. 檢材容器貼上患者姓名、標(biāo)本名稱(chēng)等項(xiàng)目的標(biāo)簽答疑編號(hào)