1、大鼠維生素A和鐵的相互作用關(guān)系對缺鐵性 貧血的影響摘要：目的：通過研究維生素A缺乏和鐵缺乏的相互作用來探討缺鐵 性貧血的發(fā)生機(jī)制。方法：第一階段，將44只SD大鼠隨機(jī)分為4組， 分別為Fe+維生素A+ I組、Fe維生素A+H組、Fe維生素A+III組、Fe維生素AIV組；實驗動物喂養(yǎng)2個月后處死，測定視黃醇（血清）、血 紅蛋白（HB）、維生素A、視黃基酯（肝臟），并采用RTPCR法測定視 黃醇結(jié)合蛋白mRNA （RBPmRNA）的表達(dá)。第二階段，將SD大鼠按稱 重結(jié)果隨機(jī)分4組，分別為Fe+維生素A+V組，F(xiàn)e+維生素A-VI組, Fe+維生素A-VD組，F(xiàn)e維生素A-訓(xùn)!組。大鼠喂飼2個月后

2、處死留取肝臟，用半定量PCR的方法測量鐵調(diào)節(jié)蛋白2（IRP2）、鐵蛋白（Fn）、 轉(zhuǎn)鐵蛋白受體（TFR）轉(zhuǎn)錄mRNA的表達(dá)量。結(jié)果：第一階段制造鐵缺 乏動物模型，造模后大鼠的血清視黃醇，肝臟維生素A儲藏量開始降 低，同時RBP儲藏含量也有下降走勢，經(jīng)測肝臟RBP表達(dá)量下降明顯; 第二階段實驗原代肝細(xì)胞缺乏維生素A時，肝臟IRP2mRNA、TFRmRNA 表達(dá)同時增強(qiáng)，而FnmRNA卻表達(dá)下降，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義（PO. 05）o結(jié)論：維生索A和鐵相互缺乏時，可相互影響彼此的代謝和營養(yǎng)狀況，在得到補(bǔ)充后，相互造成的很多利用障礙的影響（如貧 血）都顯著減輕。關(guān)鍵詞：維生素A缺乏;鐵缺乏;缺鐵性貧

3、血研究證實，缺鐵和維生素A缺乏有密切關(guān)系，但對兩者相互作用機(jī)制、基礎(chǔ)還沒有明確闡述1。本研究通過大鼠實驗?zāi)Ｐ蛠硌芯烤S生素A或鐵缺乏時，通過彼此在血 清中和肝臟中含量變化來反映相互的代謝和營養(yǎng)狀況，為兩者相互缺 乏造成的紊亂機(jī)理提供科學(xué)依據(jù)。1材料與方法材料實驗用的標(biāo)準(zhǔn)品材料均來自美國Sigma；HB試劑盒（南京建成生 物）；SPF大鼠，哈爾濱醫(yī)科大學(xué)動物中心提供;總RNA提取、逆轉(zhuǎn)錄、 PCR試劑及引物合成分別來自Invitrogen （Trizol, US）、Promega （US）、北京全式金生物和上海英駿生物技術(shù)。調(diào)整的飼料配方在保證各營養(yǎng)素和能量滿足大鼠生長發(fā)育的同時，去掉AIN93G

4、嚙齒 類實驗動物合成飼料組方中的鐵和維生素A,后期實驗中人工添加調(diào) 整。1. 3方法第一階段：預(yù)約SPF級21d齡的雄性大鼠52只，動物中心適應(yīng)飼養(yǎng) 7d,稱重后分成4組，再給予調(diào)整后的純化飼料配方（AIN93G）,調(diào) 整后的各組維生素A、鐵含量如表1。第二階段：購買44只、21d齡 的SPFSD大鼠在實驗室適應(yīng)飼養(yǎng)7d,隨機(jī)分成4組，鐵、維生素A 調(diào)整配比方下，V組Fe為35mg/kg+維生素A為1200 u g/kg； VI組Fe 為0mg/kg+維生素A,含量為1200 口 g/kg； VII組Fe為15mg/kg+維生素 A 為 1200 口 g/kg； VIII組 Fe 為 15mg

5、/kg+維生素 A 為 120 u g/kg 飼料。 飼養(yǎng)條件同前，實驗期為10w23。實驗結(jié)束后處死動物，采血，離 體肝臟。1. 4評估參數(shù)維生素A表達(dá)量使用高效液相色譜法4（肝臟視黃基酯、血清視黃 醇和肝維生素A）;大鼠HB測定采用對照氧化高鐵HB比色計算法完 成。采用 RTPCR 法進(jìn)行 RBPmRNA、TFRmRNA. IRP2mRNA、FnmRNA 測定 （表2）。變性、退火、延伸的操作：9430s、5530s、延伸7230s,重復(fù)35次;2%瓊脂糖凝膠5 HL跑電泳，圖象分析比擬，與GAPDH和B actin做參照。5統(tǒng)計分析數(shù)據(jù)導(dǎo)入SPSS16.0,結(jié)果以xs表示；多組和兩兩比擬

6、采用先OneWayAnova,后 SNKq,檢驗標(biāo)準(zhǔn)為 a =0.05。2結(jié)果與分析2.1第一階段實驗大鼠血紅蛋白、血清視黃醇、肝臟維生素A肝臟視黃基酯水平比擬如表3所示，I組（正常補(bǔ)充組）血紅蛋白和視黃醇 或維生素A含量都是最好；I組與II組相比，在鐵充足的情況下，補(bǔ) 充維生素A可改善鐵的吸收，可改善血紅蛋白水平，而IV組為雙重缺 乏組，與單純?nèi)狈S生素A組（III組）相比，在維生素A均缺乏的情 況下，鐵的補(bǔ)充可改變機(jī)體維生素A的水平，進(jìn)而干擾維生素A的代 謝和轉(zhuǎn)運(yùn)。2第一階段RBPmRNA含量趨勢第一階段RBPmRNA密度最高，隨著組數(shù)增加，RBPmRNA密度隨著組數(shù) 增加而減弱（組數(shù)代表

7、鐵缺乏狀態(tài)）（圖1）。3第二階段大鼠肝臟TFRmRNA表達(dá)情況VI組、VH組、VHI組結(jié)果顯示，TFRmRNA表達(dá)增強(qiáng)，V組TFRmRNA的表 達(dá)最低，F(xiàn)nmRNA的表達(dá)那么與之相反（P0. 05）,提示維生素A缺乏缺 乏狀態(tài)下，機(jī)體通過轉(zhuǎn)錄水平影響大鼠鐵穩(wěn)態(tài)，肝細(xì)胞從血中攝取鐵 增加，從而血液因鐵的發(fā)動降低，最終導(dǎo)致貧血的發(fā)生。3討論維生素A缺乏加劇貧血病癥可能的核心機(jī)制可能通過鐵代謝調(diào)節(jié)5 o 本研究對2種營養(yǎng)素代謝相關(guān)基因的發(fā)現(xiàn)，為從轉(zhuǎn)錄水平研究維生素A與鐵代謝相互影響提供了基礎(chǔ)。RBP作為視黃醇轉(zhuǎn)運(yùn)中的運(yùn)轉(zhuǎn)工具, 從肝臟中保護(hù)、轉(zhuǎn)運(yùn)視黃醇入血，對血清維生素A的穩(wěn)態(tài)起到動態(tài)調(diào) 節(jié)作用。機(jī)

8、體鐵穩(wěn)態(tài)被認(rèn)為是分子水平的核心調(diào)節(jié)機(jī)制，主要受3種 蛋白(轉(zhuǎn)鐵蛋白受體、鐵蛋白、鐵調(diào)節(jié)蛋白)管理6。本研究第一 階段的實驗說明，鐵缺乏程度未對大鼠的體重、飲食造成影響，這可 能是未到達(dá)嚴(yán)重缺乏的地步，但鐵缺乏也造成了血清血紅蛋白，血清 視黃醇降低，肝臟維生素A、肝臟視黃基酯等指標(biāo)下降，原因可能是 本文檢測中的RBPmRNA表達(dá)的降低，使其作為從肝臟運(yùn)轉(zhuǎn)維生素A的 工具RBP表達(dá)減少，使視黃醇不能有效從肝臟發(fā)動入血而被利用導(dǎo)致, 暗示鐵缺乏可通過RBP的轉(zhuǎn)錄進(jìn)而影響維生素A的吸收和轉(zhuǎn)運(yùn)7。 第二階段實驗說明，維生素A缺乏時，肝臟鐵蛋白下降、轉(zhuǎn)鐵蛋白受 體和鐵調(diào)節(jié)蛋白2的轉(zhuǎn)錄水平升高，這種作用的直

9、接后果是肝細(xì)胞對 鐵的儲存、需求增加，導(dǎo)致鐵在各組織中的分布發(fā)生改變，使儲存在 肝臟中鐵增加，但紅細(xì)胞中使用降低，導(dǎo)致鐵也不能有效入血，而被 骨髓組織利用，使貧血更加嚴(yán)重，這與許多驗、臨床研究結(jié)果一致 8。維生素A與鐵之間的關(guān)系可能是互為在轉(zhuǎn)錄蛋白水平的激活劑 或輔助因子，當(dāng)一種輔助因子缺乏時，另一種的吸收、轉(zhuǎn)運(yùn)狀態(tài)的激 活受到影響，導(dǎo)致利用、釋放狀態(tài)障礙，不能釋放入血而被需要的組 織利用，加重缺乏，而肝臟作為機(jī)體儲存重要器官，起到了關(guān)鍵作用 912 o近年來的研究說明，兩者的缺乏還可能與呼吸道感染有關(guān)， 但需要更深入的研究證實。故探討維生素A和鐵代謝相互作用關(guān)系， 不僅為鐵缺乏導(dǎo)致維生素A吸

10、收障礙和維生素A缺乏導(dǎo)致貧血提供理 論依據(jù)，而且對于制定復(fù)合的營養(yǎng)干預(yù)措施、預(yù)防和更好的治療這兩 種營養(yǎng)素缺乏，預(yù)防呼吸道感染具有重要的指導(dǎo)意義。參考文獻(xiàn) 1李劍虹，樸建華，郭寧，等.兒童維生素A與鐵營養(yǎng)狀況的相關(guān)性 研究J.衛(wèi)生研究，2022, 35 (2)： 182184.2藍(lán)嵐，王朝旭，史銳，等.全反式視黃酸對大鼠原代肝細(xì)胞鐵代謝 的影響刀.衛(wèi)生研究，2022, 38 (5)： 603606.3史銳，王朝旭，藍(lán)嵐，等.鐵缺乏對大鼠維生素A代謝的影響J. 衛(wèi)生研究，2022, 38 (5)： 535537.4徐小磊，王朝旭，蘇暢，等.維生素A缺乏對大鼠鐵代謝影響J. 中國公共衛(wèi)生，2022

11、, 24 (10)： 12251226.5藍(lán)嵐，梁克紀(jì)，張羽飛，等.維生素A缺乏對缺鐵性貧血的影響體 內(nèi)外實驗比照研究J.中國食物與營養(yǎng),2022, 22 (4)： 6264.6姜珊.維生素A缺乏對大鼠鐵調(diào)節(jié)蛋白2影響J. 2022, 27(10)： 12711272.7梁學(xué)穎，徐琪壽.視黃醇結(jié)合蛋白的分子生物學(xué)J.生理科學(xué)進(jìn)展, 2000, 31 (3)： 277279.8辛勤.維生素A聯(lián)合鐵劑治療學(xué)齡期青少年缺鐵性貧血臨床觀察 J.湖南中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2022, 35 (8)： 5355.9林曉明，唐儀，龍珠，等.補(bǔ)充維生素A與鐵對改善學(xué)齡前兒童貧 血和免疫功能的影響J.中華預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志，

12、2022, 35(11)： 374377.10daCunhaMS,SiqueiraEM,TrindadeLS. VitaminAdeficiencumodulatesironmetabolismviainef fectiveerythropoiesisJ. NurBiochem, 2022, 25 (10)： 10351044.11藍(lán)嵐，鄒培斧，梁克紀(jì).原代肝細(xì)胞培養(yǎng)與動物實驗比照研究維 生素A缺乏對貧血的影響J.中國食物與營養(yǎng)，2022, 26(12)： 5961. EffectofVitaminADeficiencyRelatedlronDeficiencyonlronDefici enc

13、yAnemiainRatsLANLan1, 2, Z0UPeifu3, LIANGKeji4(IShenzhenBaoanAuthenticTCMTherapyHospital, Shenzhen518101, China；2TheHealthSupervisionInstituteofMudanjiangMunicipalHealthBureau, Mudanjiangl57000, China； 3DapengDistrictWomenandChildHealthHospital, Shenzhen518120, China；4DongguanKanghuaHospital , Dongg

14、uan523080 , China ) Abstract ： ObjectiveTostudytherelationshipofvitaminA ( VA ) deficiencyandirondeficiencyinrats. MethodStage I：44SDratsweredividedinto4groupsincludinggroup I：VA+Fe+； group II ( FeVA+ ) ； groupIII ( FeVA+ ) ； groupIV ( VAFe ), afterbeingraisedfor2months , retinolbindingprotein ( RBP

15、 ), hemoglobin , VAandRBPmRNAintheliverweredetermined. Stage II ： 52maleSDratsweredividedintofourgroupsrandomlyaccordingtothe irbodyweightsleadingeachoneincludedl3rats. Theyweregroup V ： normalVA , VI ：entireVAdef icientgroup, VII ：slightVAdef icientgroupandVHI：slightVAandirondeficientgroup. Afterth

16、eywereraisedforlOweeks , theratsweresacrificed. Hepatictransferringreceptor ( TFR ), ironregulatoryprotein2 ( IRP2 ) andferritin ( Fn ) mRNAexpressionwerecaculatedusingreversetranscriptionpolymer asechainreaction(RTPCR)method.ResultlrondeficiencydecreasedserumVA,HbandthelevelofRBPmRNAexpression. RatliverTFRandIRP2mRNAleve IswereincreasedbyVAdeficiency,whichdiminishingexpressionofFnmRNA. ConclusionVAorlrondefici encycaneffecteachothersmetabolismandnutritionals