1、胚胎發(fā)育學(xué)課件胚胎學(xué)實(shí)驗(yàn)內(nèi)容了解切片制作過程觀察斑馬魚、蛙、雞胚活體及切片 制作2Dpf雞胚整裝片一、切片的制作1、切片的種類 取材 切片、涂片、鋪片、壓片、磨片等； 切片 石蠟切片、冰凍切片、火棉膠切片； 連續(xù)切片、整裝片 2、切片的制作取材固定（浸蠟、包埋）切片染色透明封固等 next固定液?jiǎn)我还潭ㄒ簭?fù)合固定液長(zhǎng)處突出，短處抵消 染色液染色方法常用染色方法Mallorys三色染色鐵礬蘇木精染色尼氏體染色鍍銀法 上皮界限、網(wǎng)狀纖維、神經(jīng)細(xì)胞全貌（Golgi簡(jiǎn)易法）、神經(jīng)細(xì)胞（石蠟切片法）鍍金法 運(yùn)動(dòng)終板特殊組分染色法Feulgen反應(yīng)示DNAPyronine法示RNAPAS法糖元堿性磷酸酶G

2、omoni法（鈷）透明劑二甲苯（XYL）甲苯苯氯仿香柏油二、切片觀察觀察重點(diǎn)一早期卵裂斑馬魚 蛙胚 未受精卵 合子期胚胎分裂期胚胎 囊胚 （ 原腸胚 器官形成期）；原腸化蛙胚 背唇、腹唇、瓶狀細(xì)胞（早）； 原腸腔vs囊胚腔（早中晚）； 卵黃栓 （晚）； 神經(jīng)胚蛙胚 神經(jīng)板、脊索、原腸腔、中胚層； 神經(jīng)管、神經(jīng)嵴、（體腔）、外胚層；器官形成雞胚附：1、3mm蛙胚連續(xù)切片； 2、雞胚原條期切片。觀察重點(diǎn)二：雞胚發(fā)育過程整裝片及切片1、未孵化雞胚（處于囊胚期）切片2、原條期（孵育16小時(shí)）切片 明區(qū)，暗區(qū)，原條，原結(jié)，原窩3、19小時(shí)雞胚整裝片4、孵育1天的雞胚整裝片（四個(gè)體節(jié)） 明區(qū)，暗區(qū)，前羊膜

3、，神經(jīng)褶，四對(duì)體節(jié)， 脊索，退縮的原條5、33小時(shí)雞胚整裝片 前腦，視泡，中腦，菱腦，心臟，體節(jié)， 神經(jīng)管 6、孵育3天雞胚整裝片 端腦，間腦，中腦，后腦，聽泡，尿囊，心臟， 尾，體節(jié)觀察重點(diǎn)三：雞胚活體標(biāo)本的形態(tài)結(jié)構(gòu)特征 2 Dpf雞胚 氣室、卵殼膜、胚盤等 78 Dpf雞胚1、觀察四種胎膜(卵黃囊、羊膜、尿囊、絨毛膜) ，胚胎的外形，卵黃囊是否完全包住卵黃？尿囊的大??？2、羊膜大小。3、眼睛、喙、四肢、指和趾的分化。next三、整裝片制作實(shí)驗(yàn)材料、儀器及藥品受精的雞蛋(白來航2Dpf ）恒溫箱、檢卵燈、溫度計(jì)、濕度計(jì)；染色缸、藥匙、鑷子、吸管、廢液缸、解剖剪、玻璃皿、 生理鹽水、卡氏固定劑

4、、 95酒精、酒精洋紅、 100酒精、甘油、載玻片、蓋玻片等2Dpf雞胚整裝片制作流程 上 下 臨時(shí)制片取材0.9%的生理鹽水沖洗卡氏固定液，51095酒精，2酒精洋紅，203095酒精，2分鐘100酒精，2 (*2)100甘油封片永久制片1：1的100（酒精：二甲苯）10二甲苯10樹膠封片 附：1、蛙卵的獲得2、雞的孵化整裝片制作結(jié)束斑馬魚胚胎早期發(fā)育圖譜爪蟾的人工受精人工受精催青 1、激素催青絨毛膜促性腺激素（HCG）；12小時(shí) 2、垂體提取液催青步驟1、區(qū)分爪蟾的雌雄雌：大； 雄：婚爪墊；2、催青、抱對(duì) ；3、精子懸浮液制備處死4、取卵與人工受精擠壓5、體外受精蛙胚早期卵裂蛙原腸胚蛙神經(jīng)胚雞卵的人工孵育 選蛋 孵化前消毒0.01%高錳酸鉀 、水溫40 ，擦拭 孵化 21天1、 溫度37.8（36.538.5） 2 、濕度4070% 3 、通風(fēng)4 、翻蛋 3040次 vs 35次 /天 5 、晾蛋6 、照蛋 56天 無精蛋、裂紋蛋； 11天 死胚蛋 ； 21天死胚蛋、破殼蛋未孵化雞胚Back3Dpf雞胚器官原基8Dpf雞胚胚外結(jié)構(gòu)Back雞蛋的結(jié)構(gòu)1蛋殼；2氣室；3內(nèi)殼膜；4外殼膜；5系帶層蛋白；6胚盤；7卵黃；8卵黃膜；9濃蛋白；10稀蛋白；11臍帶；12潘氏