1、 中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)(u ji bio zhn)公告2012年第13號(hào)關(guān)于批準(zhǔn)發(fā)布三相異步電動(dòng)機(jī)試驗(yàn)方法等352項(xiàng)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)和45項(xiàng)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)樣品的公告國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局、國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)批準(zhǔn)三相異步電動(dòng)機(jī)試驗(yàn)方法等352項(xiàng)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)和45項(xiàng)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)樣品，現(xiàn)予以公布。 二一二年六月二十九日序號(hào) 標(biāo)準(zhǔn)號(hào) 標(biāo)準(zhǔn)名稱 代替標(biāo)準(zhǔn)號(hào) 實(shí)施(shsh)日期63 GB 15982-2012 醫(yī)院消毒衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn) GB 15982-1995 2012-11-01共五十頁(yè)附錄A：采樣及檢查(jinch)方法采樣和檢查原則；空氣微生物污染檢查法；物體表面微生物污染檢方法；醫(yī)務(wù)人員手衛(wèi)生檢查方法；醫(yī)療器材檢查方

2、法；消毒劑檢查方法；治療用水檢查方法；紫外線燈檢查方法；消毒器械(qxi)檢查方法；醫(yī)院污水檢查方法；疫點(diǎn)（區(qū)）消毒效果檢測(cè)方法；大腸菌群檢查方法；沙門菌檢查方法；乙型溶血性鏈球菌檢查方法；銅綠假單胞菌檢查方法；金黃色葡萄球菌檢查方法；其他目標(biāo)微生物檢查方法。共五十頁(yè)A1 采樣和檢查(jinch)原則采樣后應(yīng)盡快對(duì)樣品進(jìn)行相應(yīng)指標(biāo)的檢測(cè)，送檢時(shí)間不得超過(guò)4h；若樣品保存于04時(shí)，送檢時(shí)間不得超過(guò)24h。不推薦醫(yī)院常規(guī)開展滅菌物品的無(wú)菌檢查，當(dāng)流行病學(xué)調(diào)查懷疑醫(yī)院感染事件與滅菌物品有關(guān)時(shí)，進(jìn)行相應(yīng)物品的無(wú)菌檢查。常規(guī)監(jiān)督檢查可不進(jìn)行致病性微生物檢測(cè)，涉及疑似醫(yī)院感染暴發(fā)、醫(yī)院感染暴發(fā)調(diào)查或工作中

3、懷疑微生物污染時(shí)，應(yīng)進(jìn)行目標(biāo)微生物的檢測(cè)?？墒褂媒?jīng)驗(yàn)證的現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)儀器進(jìn)行環(huán)境、物體表面等微生物污染情況和醫(yī)療器材清潔度的監(jiān)督篩查；也可用于醫(yī)院清洗(qngx)效果檢查和清洗(qngx)程序的評(píng)價(jià)和驗(yàn)證。共五十頁(yè)A2 空氣(kngq)微生物污染檢查方法1、采樣時(shí)間類環(huán)境在潔凈系統(tǒng)自凈后與從事醫(yī)療活動(dòng)前采樣；、類環(huán)境在消毒或規(guī)定的通風(fēng)換氣后與從事醫(yī)療活動(dòng)前采樣。2、檢測(cè)方法(fngf)類環(huán)境可選擇平板暴露法和空氣采樣器法，參照GB50333醫(yī)院潔凈手術(shù)部建筑技術(shù)規(guī)范要求進(jìn)行檢測(cè)?？諝獠蓸悠鞣蛇x擇六級(jí)撞擊式空氣采樣器或其他經(jīng)驗(yàn)證的空氣采樣器。檢測(cè)時(shí)將采樣器置于室內(nèi)中央0.8m1.5m高度，按采

4、樣器使用說(shuō)明書操作，每次采樣時(shí)間不應(yīng)超過(guò)30min。房間大于10m2者，每增加10m2增設(shè)一個(gè)采樣點(diǎn)。、類環(huán)境采用平板暴露法：室內(nèi)面積30m2，設(shè)內(nèi)、中、外對(duì)角線3點(diǎn)，內(nèi)、外點(diǎn)應(yīng)距墻壁1m處；室內(nèi)面積30m2，設(shè)4 角及中央5 點(diǎn)，4角的布點(diǎn)部位應(yīng)距墻壁1m處。將普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂平皿(90mm)放置各采樣點(diǎn)，采樣高度為距地面0.8m1.5m；采樣時(shí)將平皿蓋打開，扣放于平皿旁，暴露規(guī)定時(shí)間（類環(huán)境暴露15min，、類環(huán)境暴露5min）后蓋上平皿蓋及時(shí)送檢。將送檢平皿置361恒溫箱培養(yǎng)48h，計(jì)數(shù)菌落數(shù)，必要時(shí)分離致病性微生物。3、結(jié)果計(jì)算平板暴露法按平均每皿的菌落數(shù)報(bào)告：cfu/皿暴露時(shí)間。共五十頁(yè)

5、共五十頁(yè)共五十頁(yè)共五十頁(yè)A3 物體(wt)表面污染檢查方法1、采樣時(shí)間潛在污染區(qū)、污染區(qū)消毒后采樣。清潔區(qū)根據(jù)現(xiàn)場(chǎng)情況確定。2、采樣面積被采表面100cm2，取全部表面；被采表面100cm2，取100cm2。采樣方法用5cm5cm滅菌規(guī)格板放在被檢物體(wt)表面，用浸有無(wú)菌PBS或生理鹽水采樣液的棉拭子1支，在規(guī)格板內(nèi)橫豎往返各涂抹5次，并隨之轉(zhuǎn)動(dòng)棉拭子，連續(xù)采樣14個(gè)規(guī)格板面積，剪去手接觸部分，將棉拭子放入裝有10mL采樣液的試管中送檢。門把手等小型物體則采用棉拭子直接涂抹物體采樣。若采樣物體表面有消毒劑殘留時(shí)，采樣液應(yīng)含相應(yīng)中和劑。3、檢測(cè)方法把采樣管充分振蕩后，取不同稀釋倍數(shù)的洗脫液1

6、.0mL接種平皿，將冷至4045的熔化營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基每皿傾注15mL20mL，361恒溫箱培養(yǎng)48h，計(jì)數(shù)菌落數(shù)，必要時(shí)分離致病性微生物。共五十頁(yè)A4 醫(yī)務(wù)人員手衛(wèi)生(wishng)檢查方法1 采樣時(shí)間采取手衛(wèi)生后，在接觸病人或從事醫(yī)療活動(dòng)前采樣。2 采樣方法將浸有無(wú)菌0.03mol/L磷酸鹽緩沖液或生理鹽水采樣液的棉拭子一支在雙手指曲面從指根到指端來(lái)回涂擦各兩次（一只手涂擦面積約30 cm2），并隨之轉(zhuǎn)動(dòng)采樣棉拭子，剪去手接觸部分，將棉拭子放入裝有10mL采樣液的試管內(nèi)送檢。采樣面積按平方厘米（cm2）計(jì)算。若采樣時(shí)手上(shu shn)有消毒劑殘留，采樣液應(yīng)含相應(yīng)中和劑。3 檢測(cè)方法把采樣

7、管充分振蕩后，取不同稀釋倍數(shù)的洗脫液1.0mL接種平皿，將冷至4045的熔化營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基每皿傾注15mL20mL，361恒溫箱培養(yǎng)48h，計(jì)數(shù)菌落數(shù)，必要時(shí)分離致病性微生物。共五十頁(yè)手、物表采樣(ci yn)液吐溫80（2%） 20g卵磷脂（0.3%） 3g硫代硫酸鈉（5 H2O）（0.5%） 7.85g蛋白(dnbi)胨 10g氯化鈉 8.5gPBS 1000ml 最終pH7.27.4 共五十頁(yè)A5 醫(yī)療(ylio)器材檢查方法1、采樣時(shí)間在消毒或滅菌處理后，存放有效期內(nèi)采樣。2、滅菌醫(yī)療器材的檢查方法可用破壞性方法取樣的，如一次性輸液（血）器、注射器和注射針等參照中華人民共和國(guó)藥典“無(wú)菌

8、檢查法”進(jìn)行。對(duì)不能用破壞性方法取樣的醫(yī)療器材，應(yīng)在環(huán)境潔凈度10000級(jí)下的局部(jb)潔凈度100級(jí)的單向流空氣區(qū)域內(nèi)或隔離系統(tǒng)中，用浸有無(wú)菌生理鹽水采樣液的棉拭子在被檢物體表面涂抹，采樣取全部表面或不少于100cm2；然后將除去手接觸部分的棉拭子進(jìn)行無(wú)菌檢查。共五十頁(yè)手機(jī)采樣方法決定(judng)檢測(cè)結(jié)果！棉簽涂擦法不能體現(xiàn)手機(jī)的無(wú)菌性！3、牙科手機(jī)：應(yīng)在環(huán)境潔凈度10000級(jí)下的局部潔凈度100級(jí)的單向流空氣區(qū)域內(nèi)或隔離系統(tǒng)中，將每支手機(jī)分別置于含20mL25mL采樣液的無(wú)菌大試管（內(nèi)徑25mm）中，液面高度(god)應(yīng)大于4.0cm，于旋渦混合器上洗滌震蕩30s以上，取洗脫液進(jìn)行無(wú)菌

9、檢查。共五十頁(yè)消毒醫(yī)療(ylio)器材的檢查方法可整件放入無(wú)菌試管的，用洗脫液浸沒后震蕩30s以上，取洗脫液1.0mL接種平皿，將冷至4045的熔化營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基每皿傾注15mL20mL，361恒溫箱培養(yǎng)48h，計(jì)數(shù)菌落數(shù)（cfu/件），必要時(shí)分離致病性微生物。可用破壞性方法取樣的，在100級(jí)超凈工作臺(tái)稱取110g樣品，放入裝有10mL采樣液的試管內(nèi)進(jìn)行洗脫，取洗脫液1.0mL接種平皿，計(jì)數(shù)菌落數(shù)（cfu/g），必要時(shí)分離致病性微生物。對(duì)不能用破壞性方法取樣的醫(yī)療器材，在100級(jí)超凈工作臺(tái)，用浸有無(wú)菌生理鹽水(shnglynshu)采樣液的棉拭子在被檢物體表面涂抹采樣，被采表面100cm2，取

10、全部表面，被采表面100cm2，取100cm2，然后將除去手接觸部分的棉拭子進(jìn)行洗脫，取洗脫液1.0mL接種平皿，將冷至4045的熔化營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基每皿傾注15mL20mL，361恒溫箱培養(yǎng)48h，計(jì)數(shù)菌落數(shù)（cfu/cm2），必要時(shí)分離致病性微生物。共五十頁(yè)消毒(xio d)后內(nèi)鏡采樣方法取清洗消毒后內(nèi)鏡，采用無(wú)菌注射器抽取50mL含相應(yīng)中和劑的洗脫液，從活檢口注入沖洗內(nèi)鏡管路，并全量收集（可使用MODEL BL100型蠕動(dòng)泵【1.0100.0轉(zhuǎn)/min】）送檢。將洗脫液充分混勻，取洗脫液1.0mL接種平皿，將冷至4045的熔化營(yíng)養(yǎng)瓊脂(qingzh)培養(yǎng)基每皿傾注15mL20mL，361恒

11、溫箱培養(yǎng)48h，計(jì)數(shù)菌落數(shù)（cfu/件）。將剩余洗脫液在無(wú)菌條件下采用濾膜（0.45m）過(guò)濾濃縮，將濾膜接種于凝固的營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上（注意不要產(chǎn)生氣泡），置361溫箱培養(yǎng)48h，計(jì)數(shù)菌落數(shù)。共五十頁(yè)采樣前準(zhǔn)備(zhnbi)無(wú)菌手套，80ML容量的螺口瓶及中和劑。采樣(ci yn)前需要瓶口酒精燈燒灼消毒。 抽取中和劑，需要用50的一次性注射器抽取，注意無(wú)菌操作。 將中和劑從內(nèi)鏡注水口緩緩注入，避免噴濺，注意無(wú)菌操作，手不能接觸到“推柱”內(nèi)側(cè)。 同時(shí)將出水端放入螺口瓶中，注意不要污染。 蓋上蓋子前仍酒精燈瓶口燒灼再旋緊蓋子，及時(shí)送檢。123456共五十頁(yè)A6 消毒劑檢查(jinch)方法1、消毒劑

12、采樣分庫(kù)存消毒劑和使用中消毒液。2、消毒劑有效成分含量檢查方法庫(kù)存消毒劑的有效成分含量應(yīng)依照消毒(xio d)技術(shù)規(guī)范或產(chǎn)品企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行檢測(cè)；使用中消毒液的有效濃度測(cè)定可用前述方法，也可使用經(jīng)國(guó)家衛(wèi)生行政部門批準(zhǔn)的消毒劑濃度試紙（卡）進(jìn)行監(jiān)測(cè)。3、使用中消毒液染菌量檢查方法用無(wú)菌吸管按無(wú)菌操作方法吸取1.0mL被檢消毒液，加入9mL中和劑中混勻；醇類與酚類消毒劑用普通營(yíng)養(yǎng)肉湯中和，含氯消毒劑、含碘消毒劑和過(guò)氧化物消毒劑用含0.1%硫代硫酸鈉中和劑，洗必泰、季銨鹽類消毒劑用含0.3%（W/V）吐溫80和0.3%卵磷脂中和劑，醛類消毒劑用0.3%甘氨酸中和劑，有表面活性劑的各種復(fù)方消毒劑可在中和劑

13、中加吐溫80至3%（W/V） ；也可使用該消毒劑消毒效果檢測(cè)的中和劑鑒定實(shí)驗(yàn)確定的中和劑。用無(wú)菌吸管吸取一定稀釋比例的中和后混合液1.0mL接種平皿，將冷至4045的熔化營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基每皿傾注15mL20mL，361恒溫箱培養(yǎng)72h，計(jì)數(shù)菌落數(shù)；必要時(shí)分離致病性微生物。消毒液染菌量(cfu/mL)平均每皿菌落數(shù)10稀釋倍數(shù)(A.6)共五十頁(yè)使用(shyng)中消毒液采樣液吐溫80（3%） 30g卵磷脂（0.3%） 3g硫代硫酸鈉（5 H2O）（0.5%） 7.85g甘氨酸 （0.5%） 5g營(yíng)養(yǎng)(yngyng)肉湯 1000ml調(diào)節(jié)pH7.27.4共五十頁(yè)A7 治療用水檢查(jinch)方法血

14、液透析相關(guān)治療用水按YY 0572血液透析和相關(guān)治療用水進(jìn)行檢測(cè)。1、試樣應(yīng)在收集后30min內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)，或立即放在15下儲(chǔ)存，24h內(nèi)檢測(cè)。2、應(yīng)采用傾注(qngzh)平板法細(xì)菌總數(shù)計(jì)數(shù)。培養(yǎng)基應(yīng)為胰蛋白酶大豆瓊脂或等價(jià)物，3537培養(yǎng)48h，48h后若呈陰性可72h后再檢查。也可采用膜過(guò)濾技術(shù)濾除500mL1000mL水,并在R2A低營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上,可2832下培養(yǎng)5d或更長(zhǎng)時(shí)間。3、應(yīng)用鱟試劑法檢查內(nèi)毒素。其他治療用水參照相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行?？谇辉\療沖洗用水等。共五十頁(yè)內(nèi)毒素：主要(zhyo)成分為脂多糖（lipopolysaccharide，LPS），LPS主要致熱及毒性部分為脂質(zhì)A（Li

15、pid A）。 內(nèi)毒素有高水溶性，高耐熱性，難以滅活及清除，有極強(qiáng)的發(fā)熱效應(yīng)，是最常見的外致熱源，是血液制品和輸液過(guò)程中的主要污染物。共五十頁(yè) 細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法本法(bn f)系利用鱟試劑來(lái)檢測(cè)或量化由革蘭氏陰性菌產(chǎn)生的細(xì)菌內(nèi)毒素，以判斷供試品中細(xì)菌內(nèi)毒素的限量是否符合規(guī)定的一種方法。共五十頁(yè) 細(xì)菌內(nèi)毒素檢查包括兩種方法：凝膠法：系通過(guò)鱟試劑與內(nèi)毒素產(chǎn)生凝集反應(yīng)的原理來(lái)檢測(cè)或半定量?jī)?nèi)毒素的方法。光度測(cè)定法：濁度法/顯色(xin s)基質(zhì)法 供試品檢測(cè)時(shí)，可使用其中任何一種方法進(jìn)行試驗(yàn)。當(dāng)測(cè)定結(jié)果有爭(zhēng)議時(shí)，除另有規(guī)定外，以凝膠法結(jié)果為準(zhǔn)。 細(xì)菌內(nèi)毒素的量用內(nèi)毒素單位（EU ）表示，1EU 與1

16、個(gè)內(nèi)毒素國(guó)際單位（IU ）相當(dāng)。共五十頁(yè) 試驗(yàn)(shyn)環(huán)境：百級(jí)潔凈工作臺(tái)。本試驗(yàn)操作過(guò)程應(yīng)防止微生物和內(nèi)毒素的污染。試驗(yàn)用器材：儀器：試管恒溫儀（恒溫水浴箱）、試管、刻度吸管、移液器等。材料：細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品、鱟試劑、細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水等。共五十頁(yè)細(xì)菌內(nèi)毒素國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品（RSE）系自大腸埃希菌提取精制而成，用于標(biāo)定、復(fù)核(fh)、仲裁鱟試劑靈敏度和標(biāo)定細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品的效價(jià)。細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品(CSE)系以細(xì)菌內(nèi)毒素國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品為基準(zhǔn)(jzhn)標(biāo)定其效價(jià)，用于試驗(yàn)中的鱟試劑靈敏度復(fù)核、干擾試驗(yàn)及各種陽(yáng)性對(duì)照。細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品：共五十頁(yè) 細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水：系指內(nèi)毒素含量小于0.015

17、EUml（用于凝膠法）或0.005EU / ml （用于光度側(cè)定法）且對(duì)內(nèi)毒素試驗(yàn)無(wú)干擾作用的滅菌注射用水。試驗(yàn)所用的器皿：需經(jīng)處理，以去除可能存在的外源性內(nèi)毒素。耐熱器皿常用干熱滅菌法（250 、30 分鐘以上 ) 去除，也可采用其他確證不干擾細(xì)菌內(nèi)毒素檢查的適宜方法。若使用塑料器械，如微孔(wi kn)板和與微量加樣器配套的吸頭等，應(yīng)選用標(biāo)明無(wú)內(nèi)毒素并且對(duì)試驗(yàn)無(wú)干擾的器械。供試品溶液的制備：一般要求供試品溶液的pH 值在6.08.0的范圍內(nèi)。對(duì)于過(guò)酸、過(guò)堿或本身有緩沖能力的供試品，需調(diào)節(jié)被測(cè)溶液（或其稀釋液）的pH 值，可使用酸、堿溶液或適宜的緩沖液調(diào)節(jié)pH 值。酸或堿溶液須用細(xì)菌內(nèi)毒素檢

18、查用水在已去除內(nèi)毒素的容器中配制。緩沖液必須經(jīng)過(guò)驗(yàn)證不含內(nèi)毒素和干擾因子。共五十頁(yè) 內(nèi)毒素限值的確定 藥品、生物制品的細(xì)菌內(nèi)毒素限值（L）一般按以下公式確定： L=K / M式中 L 為供試品的細(xì)菌內(nèi)毒素限值，一般以EU /ml、EU / mg 或EU / U （活性單位）表示；K 為人每千克體重(tzhng)每小時(shí)最大可接受的內(nèi)毒素劑量，以EU / ( kg h ）表示，注射劑K = 5EU/(kgh ) ，放射性藥品注射劑K=2.5EU / （kg h ) ，鞘內(nèi)用注射劑K = 0.2EU / （kg h ) ；M 為人用每千克體重每小時(shí)的最大供試品劑量，以ml / ( kg h ）、mg

19、 / ( kg h ）或U / ( kg h ）表示，人均體重按60kg 計(jì)算，人體表面積按1.62m2 計(jì)算。注射時(shí)間若不足1 小時(shí)，按1 小時(shí)計(jì)算。供試品每平方米體表面積劑量乘以0.027 即可轉(zhuǎn)換為每千克體重劑量（M）。按人用劑量計(jì)算限值時(shí)，如遇特殊情況，可根據(jù)生產(chǎn)和臨床用藥實(shí)際情況做必要調(diào)整，但需說(shuō)明理由。共五十頁(yè) 確定最大有效稀釋倍數(shù)（MVD ） 最大有效稀釋倍數(shù)是指在試驗(yàn)中供試品溶液被允許達(dá)到稀釋的最大倍數(shù)( 1MVD )，在不超過(guò)此稀釋倍數(shù)的濃度下進(jìn)行內(nèi)毒素限值的檢測(cè)。用以下公式來(lái)確定MVD : MVD=cL / 式中L 為供試品的細(xì)菌內(nèi)毒素限值；c 為供試品溶液的濃度，當(dāng)L 以

20、EU / ml 表示時(shí)，則c等于1.0ml / ml ，當(dāng)L 以EU / mg 或EU / U 表示時(shí)，c的單位需為mg / ml 或U / ml。如供試品為注射用無(wú)菌粉末或原料藥，則MVD 取1 ，可計(jì)算供試品的最小有效稀釋濃度c=/L ；為在凝膠法中鱟試劑的標(biāo)示(bio sh)靈敏度 EU / ml ) , 或是在光度測(cè)定法中所使用的標(biāo)準(zhǔn)曲線上最低的內(nèi)毒素濃度。共五十頁(yè)計(jì)算舉例： 當(dāng)L以EU/ml表示時(shí)，則C等于1.0ml/ml 適用于供試品為溶液狀態(tài)，并且規(guī)定限值為應(yīng)小于xx EU/ml。 例：計(jì)算限值為2.0 EU/ml，使用靈敏度為0.25 EU/ml的鱟試劑(shj)進(jìn)行檢驗(yàn)，則

21、MVD=1.0ml/ml2.0 EU/ml0.25EU/ml=8倍共五十頁(yè) 鱟試劑靈敏度復(fù)核試驗(yàn)： 在本檢查法規(guī)定的條件下，使鱟試劑產(chǎn)生凝集的內(nèi)毒素的最低濃度即為鱟試劑的標(biāo)示靈敏度，用EU / ml 表示(biosh)。當(dāng)使用新批號(hào)的鱟試劑或試驗(yàn)條件發(fā)生了任何可能影響檢驗(yàn)結(jié)果的改變時(shí)，應(yīng)進(jìn)行鱟試劑靈敏度復(fù)核試驗(yàn)。共五十頁(yè) 根據(jù)鱟試劑靈敏度的標(biāo)示值（），將細(xì)菌內(nèi)毒素國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品或細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水溶解，在旋渦棍合器上混勻15分鐘，然后制成2、0.5和0.25四個(gè)濃度的內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液，每稀釋一步均應(yīng)在旋渦混合器上混勻30 秒鐘。取分裝有0.1ml 鱟試劑溶液的10mm75mm

22、試管或復(fù)溶后的0.1ml/支規(guī)格的鱟試劑原安瓶18 支，其中16 管分別(fnbi)加入0.1ml 不同濃度的內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液，每一個(gè)內(nèi)毒素濃度平行做4 管；另外2 管加人0.1ml 細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水作為陰性對(duì)照。將試管中溶液輕輕混勻后，封閉管口，垂直放人37 士1 的恒溫器中，保溫60 分鐘2 分鐘。共五十頁(yè) 結(jié)果判斷：將試管從恒溫器中輕輕取出，緩緩倒轉(zhuǎn)(dozhun)l80 ，若管內(nèi)形成凝膠，并且凝膠不變形、不從管壁滑脫者為陽(yáng)性；未形成凝膠或形成的凝膠不堅(jiān)實(shí)、變形并從管壁滑脫者為陰性。保溫和拿取試管過(guò)程應(yīng)避免受到振動(dòng)造成假陰性結(jié)果。共五十頁(yè) 當(dāng)最大濃度2管均為陽(yáng)性，最低濃度0.25管均為陰

23、性，陰性對(duì)照管為陰性，試驗(yàn)方為有效按下式計(jì)算反應(yīng)終點(diǎn)濃度的幾何平均值，即為鱟試劑靈敏度的測(cè)定值（c）。 clg-1（X / 4 )式中 X 為反應(yīng)終點(diǎn)濃度的對(duì)數(shù)值（lg ）。反應(yīng)終點(diǎn)濃度是指系列遞減的內(nèi)毒素濃度中最后一個(gè)呈陽(yáng)性結(jié)果的濃度。當(dāng)c在0.52(包括0.52)時(shí)，方可用于細(xì)菌內(nèi)毒素檢查(jinch)，并以標(biāo)示靈敏度為該批鱟試劑的靈敏度。共五十頁(yè)內(nèi)毒素濃度20.50.25 陰性對(duì)照 終點(diǎn) 鱟試劑 平行管 0.5 0.5c= lg-1（(lg+lg+lg0.5+lg0.5)/4)=0.707共五十頁(yè) 干擾試驗(yàn)： 按表1 制備溶液A 、B 、C 和D ，使用的供試品溶液應(yīng)為未檢驗(yàn)出內(nèi)毒素且不

24、超過(guò)最大有效稀釋(xsh)倍數(shù)( MVD ）的溶液，按鱟試劑靈敏度復(fù)核試驗(yàn)項(xiàng)下操作。共五十頁(yè) 表1 凝膠法干擾試驗(yàn)(shyn)溶液的制備編號(hào)內(nèi)毒素濃度/被加入內(nèi)毒素的溶液稀釋用液稀釋倍數(shù)所含內(nèi)毒素的濃度平行管數(shù)A無(wú)/供試品溶液2B2/供試品溶液供試品溶液12421440.5480.254C2/檢查用水檢查用水12421440.5480.254D無(wú)/檢查用水2共五十頁(yè) 注：A為供試品溶液；B為干擾試劑系列；C鱟試劑標(biāo)示靈敏度的對(duì)照系列；D為陰性對(duì)照。只有當(dāng)溶液A 和陰性對(duì)照溶液D 的所有平行管都為陰性，并且系列溶液C 的結(jié)果在鱟試劑靈敏度復(fù)核范圍內(nèi)時(shí)，試驗(yàn)方為有效。按下式計(jì)算系列溶液C 和B 的

25、反應(yīng)終點(diǎn)濃度的幾何平均值（Es和Et ）: Es= lg-1（Xs/4 ） Et=lg-1（Xt:/4）式中Xs Xt分別為系列溶液C 和溶液B 的反應(yīng)終點(diǎn)濃度的對(duì)數(shù)值(shz)（lg）。當(dāng)Es在0.52（包括0.5和2）及Et在0.5Es 2 Es （包括0.5Es和 2 Es）時(shí)，認(rèn)為供試品在該濃度下無(wú)干擾作用。若供試品溶液在小于MVD 的稀釋倍數(shù)下對(duì)試驗(yàn)有干擾，應(yīng)將供試品溶液進(jìn)行不超過(guò)MVD 的進(jìn)一步稀釋，再重復(fù)干擾試驗(yàn)。可通過(guò)對(duì)供試品進(jìn)行更大倍數(shù)的稀釋或通過(guò)其他適宜的方法（如過(guò)濾、中和、透析或加熱處理等）排除干擾。為確保所選擇的處理方法能有效地排除干擾且不會(huì)使內(nèi)毒素失去活性，要使用預(yù)先

26、添加了標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)毒素再經(jīng)過(guò)處理的供試品溶液進(jìn)行干擾試驗(yàn)。當(dāng)進(jìn)行新藥的內(nèi)毒素檢查試驗(yàn)前，或無(wú)內(nèi)毒素檢查項(xiàng)的品種建立內(nèi)毒素檢查法時(shí)，須進(jìn)行干擾試驗(yàn)。當(dāng)鱟試劑、供試品的處方、生產(chǎn)工藝改變或試驗(yàn)環(huán)境中發(fā)生了任何有可能影響試驗(yàn)結(jié)果的變化時(shí)，須重新進(jìn)行干擾試驗(yàn)。共五十頁(yè)內(nèi)毒素濃度 2.0 0.5 0.25終點(diǎn)供試品陰性對(duì)照（溶液A） 內(nèi)毒素/供試品溶液（系列溶液B） 內(nèi)毒素/檢查用水 （系列溶液C） 2.02.0陰性對(duì)照（溶液D） Es=lg-1( Xs/4) = Et=lg-1( Xt/4)=1.41 共五十頁(yè) 凝膠限度試驗(yàn) ：按表2 制備(zhbi)溶液A 、B 、C 和D 。使用稀釋倍數(shù)為MVD 并且已

27、經(jīng)排除干擾的供試品溶液來(lái)制備溶液A 和B 。按鱟試劑靈敏度復(fù)核試驗(yàn)項(xiàng)下操作。共五十頁(yè) 表2 凝膠限度試驗(yàn)溶液(rngy)的制備編號(hào)內(nèi)毒素濃度被加入內(nèi)毒家的溶液平行管數(shù)A無(wú)供試品溶液2B2供試品溶液2C2檢查用水2D無(wú)檢查用水2注：A 為供試品溶液(rngy)；B 為供試品陽(yáng)性對(duì)照；C 為陽(yáng)性對(duì)照；D 為陰性對(duì)照。共五十頁(yè) 結(jié)果判斷：保溫(bown)60 分鐘2 分鐘后觀察結(jié)果。若陰性對(duì)照溶液 D 的平行管均為陰性，供試品陽(yáng)性對(duì)照溶液B 的平行管均為陽(yáng)性，陽(yáng)性對(duì)照溶液C 的平行管均為陽(yáng)性，試驗(yàn)有效。供試品溶液 供試品陽(yáng)性對(duì)照 陽(yáng)性對(duì)照 陰性對(duì)照 共五十頁(yè)若溶液A 的兩個(gè)平行管均為陰性，判定供試品

28、符合規(guī)定；若溶液A 的兩個(gè)平行管均為陽(yáng)性(yngxng)，判定供試品不符合規(guī)定。若溶液A 的兩個(gè)平行管中的一管為陽(yáng)性，另一管為陰性，需進(jìn)行復(fù)試。復(fù)試時(shí)，溶液A 需做4 支平行管，若所有平行管均為陰性，判定供試品符合規(guī)定；否則判定供試品不符合規(guī)定。供試品溶液供試品陽(yáng)性對(duì)照陽(yáng)性對(duì)照陰性對(duì)照供試品溶液供試品陽(yáng)性對(duì)照陽(yáng)性對(duì)照陰性對(duì)照符合規(guī)定不符合規(guī)定共五十頁(yè)供試品溶液供試品陽(yáng)性對(duì)照陽(yáng)性對(duì)照陰性對(duì)照須復(fù)試(fsh)供試品溶液供試品陽(yáng)性對(duì)照陽(yáng)性對(duì)照陰性對(duì)照復(fù)試時(shí)，供試品溶液需做4支平行管，若所有(suyu)平行管均為陰性，判供試品符合規(guī)定；否則判供試品不符合規(guī)定。 共五十頁(yè) 凝膠半定量(dngling)試

29、驗(yàn)： 本方法系通過(guò)確定反應(yīng)終點(diǎn)濃度來(lái)量化供試品中內(nèi)毒素的含量。按表3 制備溶液A 、B 、C 和D 。按鱟試劑靈敏度復(fù)核試驗(yàn)項(xiàng)下操作。 共五十頁(yè)表3 凝膠半定量試驗(yàn)(shyn)溶液的制備編號(hào)內(nèi)毒素濃度/被加入內(nèi)毒素的溶液稀釋用液稀釋倍數(shù)所含內(nèi)毒素的濃度平行管數(shù)A無(wú)/供試品溶液檢查用水12224282B2/供試品溶液122C2/檢查用水檢查用水12221240.5280.252D無(wú)/檢查用水2注：A為不超過(guò)MVD并且通過(guò)干擾試驗(yàn)的供試品溶液。從通過(guò)干擾試驗(yàn)的稀釋倍數(shù)開始用檢查用水稀釋至1倍、2倍、4倍和8倍，最后(zuhu)的稀釋倍數(shù)不得超過(guò)MVD；B為2濃度標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)毒素的溶液A（供試品陽(yáng)性對(duì)照）

30、；C為鱟試劑標(biāo)示靈敏度的對(duì)照系列；D為陰性對(duì)照。共五十頁(yè) 結(jié)果判斷 若陰性對(duì)照溶液D 的平行管均為陰性，供試品陽(yáng)性對(duì)照溶液B 的平行管均為陽(yáng)性，系列溶液C 的反應(yīng)終點(diǎn)濃度的幾何平均值在0.52之間，試驗(yàn)有效。系列溶液A 中每一系列平行管的終點(diǎn)稀釋倍數(shù)乘以，為每個(gè)系列的反應(yīng)終點(diǎn)濃度，所有平行管反應(yīng)終點(diǎn)濃度的幾何平均值即為供試品溶液的內(nèi)毒素濃度按公式(gngsh)cE=lg-1（X / 2 ） 。如果檢驗(yàn)時(shí)采用的是供試品的稀釋液，則計(jì)算原始溶液內(nèi)毒素濃度時(shí)要將結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)。 如試驗(yàn)中供試品溶液的所有平行管均為陰性，應(yīng)記為內(nèi)毒素濃度小于（如果檢驗(yàn)的是稀釋過(guò)的供試品，則記為小于乘以供試品進(jìn)行半定量試驗(yàn)的初始稀釋倍數(shù)）。如果供試品溶液的所有平行管均為陽(yáng)性，應(yīng)記為內(nèi)毒素的濃度大于或等于最大的稀釋倍數(shù)乘以。若內(nèi)毒素濃度小于規(guī)定的限值，判定供試品符合規(guī)定。若內(nèi)毒素濃度大