1、中藥新藥臨床前藥效及毒理研究 總論 第1頁，共77頁。 第一章 基本概況 1985年國家頒布中華人民共和國藥品管理法新藥審批辦法中成藥生產(chǎn)規(guī)范 使我國藥品管理、生產(chǎn)、研發(fā)逐步規(guī)范科學(xué)。 2001年國家頒布了新藥品管理法2002年藥品注冊(cè)管理辦法 完善與國際接軌國家實(shí)行藥品質(zhì)量規(guī)范化管理，具體為GMP、GLP、GCP、GAP、GSP等，包括藥品生產(chǎn)、研發(fā)、臨床（安全生產(chǎn)）、栽培、種植及銷售各個(gè)環(huán)節(jié)。GLP.(good labortary praetice )GCP(good clinie practice )GAP(good agriculture proctice )GSP(good sale

2、 proctice)GMP(good manufactury proctice)第2頁，共77頁。同時(shí)加大抽查力度、月、季度公布抽查結(jié)果，藥品廣告，使用說明書等等方面。 加強(qiáng)整頓、遺留品種、保健品、地標(biāo)升部頒、民族藥物、醫(yī)院制劑。 假藥定義：藥品成份與國家標(biāo)準(zhǔn)不符的非藥品冒充藥品者（另外還有：未經(jīng)批準(zhǔn)生產(chǎn)、進(jìn)口、未經(jīng)檢驗(yàn)的、變質(zhì)的、被污染的、功能主治超范圍的） 劣藥：藥品成分含量不符合國家標(biāo)準(zhǔn)的為劣藥，（另外：未注明有效期、或更改不注明或更改生批號(hào)，超過有效期，包括未經(jīng)批準(zhǔn)，擅自添加輔料劑、劑）第3頁，共77頁。第一節(jié) 基本概念 一、新藥（新藥申請(qǐng)） 未曾在中國境內(nèi)上市，銷售的藥品（西藥以往按

3、進(jìn)口申請(qǐng)對(duì)等） 已上市藥品改劑型、給藥途徑、按新藥管理。 進(jìn)口藥申請(qǐng)，指在境外生產(chǎn)的藥品在中國上市銷售 避免在國外批準(zhǔn)在中國生產(chǎn)走進(jìn)品藥渠道 以前指的是：我國未生產(chǎn)過的藥品叫新藥。 二、藥品注冊(cè) 依照法定程序，對(duì)擬上市銷售的藥品安全性、有效性、質(zhì)量可控性等進(jìn)行系統(tǒng)評(píng)價(jià)，并做出是否同意進(jìn)行藥物臨床研究，生產(chǎn)藥品或者進(jìn)口藥品決定的審批過程。第4頁，共77頁。三、國家政策導(dǎo)向 國家鼓勵(lì)研制新藥，對(duì)創(chuàng)制的新藥及治療疑難危重疾病的新藥實(shí)行加快審批（艾滋病、癌癥等）。 四、藥物的臨床前研究 為申請(qǐng)藥品（注冊(cè)而進(jìn)行的藥物臨床前研究、包括合成工藝，提取方法，理化性質(zhì)及純度、劑型選擇、處方篩選、制備工藝、檢驗(yàn)方

4、法、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、穩(wěn)定性、藥理、毒理、藥代動(dòng)力學(xué)、藥材、炮制、加工、遺傳學(xué)、免疫學(xué)等研究）。 其中安全性評(píng)價(jià)必須執(zhí)行藥物非臨床研究質(zhì)量管理規(guī)范 五、非處方藥 指國家藥監(jiān)局公布，不需憑執(zhí)業(yè)醫(yī)醫(yī)師處方，消費(fèi)者可自行判斷，購買和使用的藥品（OTC）九十九條。 六、藥品標(biāo)準(zhǔn) 國家藥品標(biāo)準(zhǔn)，指國家為保證藥品質(zhì)量制定的質(zhì)量指標(biāo)，檢驗(yàn)方法以及生產(chǎn)工藝等技術(shù)要求，包括中華人民共和國藥典藥品注冊(cè)標(biāo)準(zhǔn)和其它藥品標(biāo)準(zhǔn) 注冊(cè)標(biāo)準(zhǔn)，國家藥監(jiān)局批準(zhǔn)給申請(qǐng)人特定藥品標(biāo)準(zhǔn)。 生產(chǎn)企業(yè)必須執(zhí)行有待轉(zhuǎn)正 第5頁，共77頁。七：注冊(cè)分類 1.未在國內(nèi)上市銷售的從中藥，天然藥物中提取的有效成分及其制劑。 2.未在國內(nèi)上市銷售的來源于植物

5、、動(dòng)物、礦物等藥用物質(zhì)制成的制劑。 3.中藥材的代用品。 4.未在國內(nèi)上市銷售的中藥材新的藥用部位。 5.未在國內(nèi)上市銷售的從中藥、天然藥物中提取的有效部位制成的制劑。 6.未在國內(nèi)上市銷售的中藥、天然藥物制成的復(fù)方制劑。 7.未在國內(nèi)上市銷售的中藥、天然藥物制成的注射劑。 8.改變國內(nèi)已上市藥品給藥途經(jīng)的制劑。 9.改變國內(nèi)已上市藥品給藥劑型的制劑。 10.改變國內(nèi)已上市藥品給藥工藝的制劑。 11.已有國家標(biāo)準(zhǔn)的中成藥和天然藥物制劑。 6中分為：傳統(tǒng)中藥復(fù)方制劑。 現(xiàn)代中藥復(fù)方制劑。 天然中藥復(fù)方制劑。 分別按技術(shù)要求（32套資料）第6頁，共77頁。第二節(jié)：目前中藥形勢(shì) 隨著中國加入WTO，

6、必須遵守國際標(biāo)則，特別是知識(shí)產(chǎn)權(quán)的保護(hù)。 階段標(biāo)志：仿制藥物時(shí)代結(jié)束，創(chuàng)新藥物時(shí)代開始，給我們提供了很好的機(jī)遇，但中醫(yī)藥也面臨了嚴(yán)峻的挑戰(zhàn)。 有利因素： 國家政策優(yōu)勢(shì)，（國內(nèi)方面） 美國FDA植物藥管理辦法頒布，使中藥可以合法身份進(jìn)入國際主流市場(chǎng)（國際上）。 需求：回歸自然。第7頁，共77頁。不利因素 1、國內(nèi)方面：自身技術(shù)落后，三、四、五類居多。有效成分不清，機(jī)理不清，質(zhì)控手段落后。2、國際方面：市場(chǎng)份頒太小，多是原料藥。日、韓、歐、美、高速發(fā)展。洋中藥進(jìn)口（10億元左右）。3、傳統(tǒng)藥物受到的挑戰(zhàn)。 人權(quán)保護(hù)、動(dòng)物保護(hù)，以及一些論理上的原因。 人體器官：紫河車、血余炭等。 動(dòng)物保護(hù)、穿山甲等

7、。 新鮮動(dòng)物臟器：來源、安全。動(dòng)物糞便、五靈脂、蠶砂。教材：18第8頁，共77頁。第二章 中藥新藥的開發(fā)研究 第一節(jié)：中藥新藥開發(fā)研究原則 一、中醫(yī)理論為指導(dǎo)作用。 中醫(yī)理論的指導(dǎo)作用 處方組成、功能主治、應(yīng)用范圍，包括藥效學(xué)研究體現(xiàn)出中醫(yī)理論特色。 二、社會(huì)效益、經(jīng)濟(jì)效益為前提。 開發(fā)前景，充分體現(xiàn)其優(yōu)勢(shì)艱病率高，廣大患者需要，市場(chǎng)缺乏，附加值高等。 三、以臨床療效為基準(zhǔn)。 按指導(dǎo)原則 四、突出創(chuàng)新特點(diǎn)。第9頁，共77頁。第二節(jié) 選題 一、了解國家藥品注冊(cè)法規(guī)、政策。 二、根據(jù)長期實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)，選方做到有的放矢，是在大量基礎(chǔ)研究基礎(chǔ)之上，而進(jìn)行開發(fā)研究，中醫(yī)藥開發(fā)與西藥（化學(xué)藥）的開發(fā)是不同的途

8、徑。 在中醫(yī)理論指導(dǎo)下進(jìn)行。 癥、證明確，治則，清楚，療效明確。 科學(xué)性，可操作性，先進(jìn)性，創(chuàng)新性。 三、選題目的：臨床價(jià)值，科研究價(jià)值，經(jīng)濟(jì)價(jià)值。 四、選方途徑 臨床實(shí)踐 選題依據(jù)：科學(xué)試驗(yàn) 古代文獻(xiàn) 1. 專統(tǒng)古方。 2.民間單方、驗(yàn)方、租傳秘方。 3.現(xiàn)代先進(jìn)科學(xué)技術(shù)篩選法。 4.由已知成分篩選發(fā)現(xiàn)新藥，（五味子丙素聯(lián)苯雙酯）。 5.活性成分結(jié)構(gòu)改造（秋水仙堿結(jié)構(gòu)改造）等等。 第10頁，共77頁。第三節(jié) 中藥新藥開發(fā)研究的具體內(nèi)容 一、中醫(yī)理論研究 處方組成、處方來源、古籍文獻(xiàn)、立題理論依據(jù)。條件具備：1.符合中醫(yī)理論，辨證用藥理論。2.君、臣、佐、使配伍合理。3.來材來源明確，標(biāo)準(zhǔn)明確

9、。4.功能主治，適應(yīng)證體現(xiàn)中醫(yī)理論。5.病因病機(jī)理論。6.治則治法，論證邏輯性。 7.從醫(yī)角度：明確適應(yīng)癥侯。 從藥角度：方藥分析，治則。 活血化瘀醫(yī)治法 藥 功效第11頁，共77頁。二、藥學(xué)研究（一）制備工藝和研究1.提取工藝研究藥材的鑒定，與前處理設(shè)計(jì)與選擇技術(shù)條件（參數(shù)）的研究2.分離、純化、濃縮、干燥、工藝研究3.劑型選擇4.成型工藝研究5.中試生產(chǎn)（二）質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究1.名稱：（漢語拼音、拉丁名）按中藥命名原則。2.來源：科名、中文名、拉丁名、藥用部位，來源、礦 成分。3.性狀：形狀、顏色、味、表面特征。4.鑒別：專屬、靈敏、快速、準(zhǔn)確（顯微、TLC、理化）。5.檢查：雜質(zhì)。6.浸出物

10、測(cè)定。7.含測(cè)。8.炮制（藥材）9.性味、歸經(jīng)、功能主治，用法用量，注意事項(xiàng)，貯藏、起草說明。 第12頁，共77頁。（三）質(zhì)量穩(wěn)定性研究二、中藥新藥藥理研究中藥藥理學(xué)是以中醫(yī)基本理論為指導(dǎo)，運(yùn)用現(xiàn)代科學(xué)方法，研究中藥對(duì)機(jī)體的作用與作用機(jī)理以及體內(nèi)代謝過程，闡明方治疾病原理的科學(xué)，指導(dǎo)用藥基本規(guī)律。中藥藥理研究為指中藥與中藥理論的現(xiàn)代藥理學(xué)。對(duì)中藥新藥而言指藥效，一般藥理學(xué)，藥代旨為申請(qǐng)臨床提供依據(jù)。 第13頁，共77頁。四、中藥非臨床安全性研究（毒理）安全性包括臨床和非臨床兩方面，臨床期間完成的叫臨床安全性研究，臨床前完成的叫非臨床安全性研究研究目的。1.消除不安全因素進(jìn)入臨床2.了解藥物可能

11、出現(xiàn)的毒副反應(yīng)3.為臨床確定治療有效劑量和安全劑量，提供依據(jù)，參考4.為確定臨床，禁忌證提供參考：GLP直譯為優(yōu)良實(shí)驗(yàn)室規(guī)范，在國外又被稱作“新藥非臨床安全性試驗(yàn)規(guī)范”。第14頁，共77頁。各論篇（第一章） 中藥新藥藥效學(xué)研究的基本內(nèi)容與要求一、中藥新藥藥效學(xué)研究的意義中藥新藥的基本要求是安全、有效、可控和穩(wěn)定，其中有效性或療效不切是新藥治病救人的首要條件，否則就不成其為藥物，因此，它是研究評(píng)價(jià)新藥的基礎(chǔ)，新藥有效性評(píng)價(jià)，主要包括兩部分，實(shí)驗(yàn)部分（即主要藥效學(xué)研究）和臨床部分（即臨床研究）。主要藥效學(xué)試驗(yàn)是在機(jī)體（主要為動(dòng)物）or其器官、組織、細(xì)胞、亞細(xì)胞、分子、基因水平等模型上，采用整體和離

12、體的方法，進(jìn)行綜合和分析的實(shí)驗(yàn)研究，以闡明藥物防治疾病的作用及其作用機(jī)制，從而為新藥的有效性評(píng)價(jià)提供科學(xué)的依據(jù)。通過藥效學(xué)研究，可以初步明確新藥是否有效，藥理作用的強(qiáng)弱和范圍；與同類藥or毒副反應(yīng)上的優(yōu)缺點(diǎn)和特色等。從而確定有無實(shí)用價(jià)值及發(fā)展前景，可否開始人體試用及進(jìn)行系統(tǒng)的臨床研究等。中藥的復(fù)方藥效學(xué)研究除觀察藥物的有關(guān)作用處，還可在更深層次上揭示方劑療效的物質(zhì)基礎(chǔ)，作用的機(jī)制及配伍的規(guī)律等，有效地指導(dǎo)臨床用藥和中藥新產(chǎn)品的研制。第15頁，共77頁。二、中藥新藥藥效等研究的重要性及局限性 1.發(fā)現(xiàn)研制新藥及對(duì)進(jìn)行再評(píng)價(jià)：中藥大多來自古方和經(jīng)驗(yàn)方，有長期的臨床實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)，但其用藥特點(diǎn)強(qiáng)調(diào)辨證施治

13、，隨證加減；用藥個(gè)體化；多為處方煎劑服用。而研制的新藥，包括利用現(xiàn)代醫(yī)學(xué)知識(shí)研制的組方，從復(fù)方or單味中藥內(nèi)提取的有效成分or有效部位（群），則為固定處方和劑型；工業(yè)化生產(chǎn)，有一定的提取工藝；其化學(xué)成分，藥物性質(zhì)、功能主治、劑量用法等，均會(huì)有很大的變化，特別是原有的治療作用，毒副反應(yīng)也可能有變化；應(yīng)用上強(qiáng)調(diào)通用性和社會(huì)化。因此，必須進(jìn)行藥效學(xué)研究，對(duì)研究藥物的有效性和安全性進(jìn)行新評(píng)價(jià)，以便了解該藥可能發(fā)生的變化。以及出現(xiàn)新的治療作用or毒副反應(yīng)等。 第16頁，共77頁。2.為新藥的臨床研究奠定基礎(chǔ)：在不了解新藥安全性、有效性的情況下，進(jìn)行人體試用和臨床研究，有可能對(duì)試用者造成危害，甚至發(fā)生意外

14、。因此，動(dòng)物試驗(yàn)作為人的潛身，在新藥用于人體之前，先進(jìn)行藥效及毒理試驗(yàn)，為臨床研究提供可靠的依據(jù)，確保受試病人不致延誤病情及產(chǎn)生不良后果。盡管人與動(dòng)物有差異，但大量研究工作表明藥物在人體和動(dòng)物，尤其是哺乳動(dòng)物，所表現(xiàn)的作用和毒性在大多數(shù)情況下與臨床研究結(jié)果是一致的。例如，黃連的抗菌作用可用于各種感染性疾病，益母草的收縮子宮作用可用于產(chǎn)后子宮復(fù)舊不全，甘草的腎上腺皮質(zhì)皮H樣作用可用于治療艾狄森病。再如人參、黃芪、淫羊藿等的提高免疫功能，丹參、川芎等的擴(kuò)張冠脈，抗心肌缺血等作用，都可作為臨床處方用藥及有關(guān)藥物的研制提供基礎(chǔ)。第17頁，共77頁。3.補(bǔ)充臨床研究的不足：臨床上有些疾病的發(fā)病率低，和（

15、or）潛伏期，病程長，因素等干擾，影響研究的準(zhǔn)確性，以及難于了解某些細(xì)節(jié)和規(guī)律。而藥效學(xué)研究；可根據(jù)試驗(yàn)?zāi)康?，?yán)格控制試驗(yàn)條件和各種影響因素，以及造成群體的動(dòng)物病理模型，便于在復(fù)雜因素中發(fā)現(xiàn)內(nèi)在規(guī)律性；滿足實(shí)驗(yàn)研究客觀性、準(zhǔn)確性、重復(fù)性及數(shù)據(jù)化等要求。再說，動(dòng)物試驗(yàn)不存在人體試驗(yàn)所受的種種限制和社會(huì)道德輿論，可反復(fù)進(jìn)行在人體無法進(jìn)行的傷害性試驗(yàn)。采用動(dòng)物模型作為人類疾病的“縮影”，按要求隨時(shí)收集各種樣品，乃至處死動(dòng)物收集標(biāo)本，這在臨床上是很難做到的。第18頁，共77頁。4.揭示中藥復(fù)方藥效的物質(zhì)基礎(chǔ)，開展作用機(jī)制及配伍規(guī)律的研究：中藥復(fù)方是中醫(yī)用藥的主要形式，運(yùn)用高新技術(shù)手段探討方劑作用的物質(zhì)

16、基礎(chǔ)及其作用機(jī)制，綜合分析配伍化學(xué)成分藥理效應(yīng)三者之間的關(guān)系是中藥復(fù)方系統(tǒng)研究的發(fā)展趨勢(shì)。例如，對(duì)于生脈散（人參、麥冬、五味子）復(fù)方化學(xué)動(dòng)態(tài)變化與藥效關(guān)系研究發(fā)現(xiàn)，配伍后產(chǎn)生了新物質(zhì)5-羥甲基-2-糖醛（5-HMF）。藥效試驗(yàn)表明，5-HMF能降低心臟缺血小鼠血清乳酸脫氫酶（LDH）水平及心肌組織中丙二醛（MDA）含量，有益于全方的抗心肌缺血的作用。等量配伍的芍藥甘草湯（白芍藥、炙甘草），兩藥單用對(duì)神經(jīng)肌突觸無阻滯作用的濃渡，并用后則產(chǎn)生明顯的作用。進(jìn)而用它們的有效成分芍藥苷（PF、25ug/ml）與甘草甜素（GLR,75ug/ml），亦能產(chǎn)生同類樣品劑量依賴性的并用效果，最佳配比為PF：GL

17、R=1：2。其作用機(jī)制類似于琥珀膽堿，作用點(diǎn)在突觸后膜。此外，通過藥效學(xué)研究，可以尋找能代表總體藥效最佳成分及其配比的有效成分or有效部位（群），為開發(fā)研制新藥奠定基礎(chǔ)。例如，從安宮牛黃丸中化裁出清開靈注射液，從當(dāng)歸龍薈丸中提取出靛玉紅，以及由蘇合香丸化裁出冠心蘇合丸等。第19頁，共77頁。配伍是中醫(yī)用藥的特點(diǎn)和優(yōu)勢(shì)，用藥理研究觀察方劑配伍組成及劑量比例與藥效學(xué)變化之間的關(guān)系，探討方劑配伍的規(guī)律，仍然是復(fù)方藥理研究的重要內(nèi)容。許多傳統(tǒng)處方中 君藥的藥理作用常是該方的主要藥效的體現(xiàn)，如治療胸痹的瓜蔞、薤白白酒湯（枯萎、薤白、白酒），在擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈，增加冠脈流量，拮抗垂體后葉素所引起的冠脈流量降低

18、等方面，單味瓜萎均有與復(fù)方相似的作用，體現(xiàn)了君藥的主導(dǎo)地位，但在有些方劑中發(fā)揮主要藥效作用的藥味，與原配伍關(guān)系的闡述并不一致，如正交設(shè)計(jì)研究旋覆代赭湯（旋覆花、代赭石、人參、半夏、炙甘草、生姜、大棗）對(duì)正常大鼠胃底條收縮的影響，結(jié)果表明方中主藥為旋覆花、黨參、與傳統(tǒng)認(rèn)為的旋覆花為君，代赭石為臣，黨參、生姜、甘草為佐使藥不盡相同。再如，生津止渴方劑白琥加人參湯可以降低糖尿病小鼠的血糖水平，方中人參調(diào)節(jié)血糖，知母促進(jìn)唾液分泌（解除口渴），石膏對(duì)二者均有效，說明全方配伍有相輔相成關(guān)系。當(dāng)歸芍藥湯在改善小鼠學(xué)習(xí)記障礙方面，當(dāng)歸和芍藥兩者最佳配比為1：1.35。第20頁，共77頁。5.藥效學(xué)研究的局限性

19、：動(dòng)物試驗(yàn)有一定局限性，人與動(dòng)物間存在種屬差異，臨床疾病與動(dòng)物模型的差異，以及社會(huì)因素和精神的差異等，都有可能影響試驗(yàn)結(jié)果；有的癥狀動(dòng)物也無法反映現(xiàn)來。有些藥物對(duì)人有明顯作用，但對(duì)動(dòng)物卻無作用。例如，巴豆為峻下逐水藥，使人類產(chǎn)生劇瀉，而對(duì)小鼠卻無瀉下作用，反使其長肥，故俗稱“肥鼠子”。雷公藤對(duì)人有毒，甚至可引起中毒死亡，但對(duì)羊無毒性。有些藥物在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中有效，而臨床上卻無效or效果不好，如丹皮中提取的丹皮酚，對(duì)實(shí)驗(yàn)性高血壓有明顯降壓作用，而對(duì)人的高血壓則無明顯效果，甚至無效；葛根中的黃酮類化合物， 對(duì)小鼠有很好的避孕效果，但對(duì)人無效；垂盆草治肝炎，總黃酮部分動(dòng)物實(shí)驗(yàn)有效，但臨床卻無明顯效果。因

20、此，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)不能代替人體觀察，中藥研究結(jié)果最終要由臨床來檢驗(yàn)。藥效學(xué)試驗(yàn)及臨床研究、是新藥有效性評(píng)價(jià)不可分割的兩個(gè)主要組成部分的基礎(chǔ)。后者是前者的繼續(xù)與最后判定，兩者相輔相成，綜合判斷，才能對(duì)新藥的有效性及安全性作出科學(xué)、準(zhǔn)確、全面的評(píng)價(jià)。第21頁，共77頁。三、中藥新藥效學(xué)研究的基本要求 1.試驗(yàn)主要負(fù)責(zé)人應(yīng)具有藥理、毒理專業(yè)高級(jí)技術(shù)職稱和有較高的理論水平，工作經(jīng)驗(yàn)與資歷。確保試驗(yàn)設(shè)計(jì)合理，數(shù)據(jù)可靠，結(jié)果可信，結(jié)論判斷準(zhǔn)確。試驗(yàn)報(bào)告應(yīng)有負(fù)責(zé)人簽字及單位蓋章。2.研究單位應(yīng)具有效高的科研水平：技術(shù)力量及組織管理能力，具有良好的客觀條件，實(shí)驗(yàn)室、儀器設(shè)備等。從事新藥安全性研究的實(shí)驗(yàn)室應(yīng)符合國家藥

21、品監(jiān)督管理局藥品非臨床研究質(zhì)量管理規(guī)范GLP（Good Laboratory Practice）相應(yīng)要求，藥效學(xué)研究也可參照實(shí)行。直譯為優(yōu)良實(shí)驗(yàn)室規(guī)范，在國外又被稱作“新藥品臨床安全性試驗(yàn)規(guī)范”。第22頁，共77頁。3.實(shí)驗(yàn)記錄：實(shí)驗(yàn)記錄應(yīng)符合國家藥品監(jiān)督管理局藥品研究實(shí)驗(yàn)記錄暫行規(guī)定要求。實(shí)驗(yàn)記錄應(yīng)真實(shí)、完整、規(guī)范，對(duì)實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)的新部題特殊現(xiàn)象均應(yīng)寫明情況，防止漏記和隨意涂改。描記和形態(tài)學(xué)檢查應(yīng)有相應(yīng)的記錄圖or照片。不得偽造，編造數(shù)據(jù)。實(shí)驗(yàn)記錄的內(nèi)容通常應(yīng)包括下列幾項(xiàng)：實(shí)驗(yàn)的名稱：每項(xiàng)實(shí)驗(yàn)應(yīng)首先注明課題各稱和實(shí)驗(yàn)名稱。實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)or方案，這是實(shí)驗(yàn)研究的實(shí)施依據(jù)。各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)的首頁應(yīng)有一份詳細(xì)的實(shí)

22、驗(yàn)設(shè)計(jì)or方案。實(shí)驗(yàn)時(shí)間：每次實(shí)驗(yàn)須按年月日順序記錄實(shí)日期和時(shí)間。實(shí)驗(yàn)材料：受試樣品，對(duì)照樣品，及其他實(shí)驗(yàn)材料的來源及批號(hào)；實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的種屬，來源及合格證；菌種、瘤株、細(xì)胞株及其來源；實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備名稱，型號(hào)；主要試劑的生產(chǎn)廠家、規(guī)格和生產(chǎn)批號(hào)；自制試劑的配制方法時(shí)間和保存的條件等。實(shí)驗(yàn)材料如有變化，應(yīng)在相應(yīng)的實(shí)驗(yàn)記錄中加以說明。實(shí)驗(yàn)環(huán)境：根據(jù)實(shí)驗(yàn)的具體要求，記錄實(shí)驗(yàn)當(dāng)天的天氣情況和實(shí)驗(yàn)微小氣候，如溫度濕度，光照及通風(fēng)等。實(shí)驗(yàn)方法：常規(guī)實(shí)驗(yàn)方法應(yīng)在首次記錄時(shí)注明方法來源，并簡述主要步驟。改進(jìn)，創(chuàng)新的實(shí)驗(yàn)方法應(yīng)詳細(xì)記錄實(shí)驗(yàn)步驟和操作細(xì)節(jié)。實(shí)驗(yàn)過程：詳細(xì)記錄操作過程，觀察到的現(xiàn)象，異?，F(xiàn)象的處理，影響

23、國因素的分析等。實(shí)驗(yàn)結(jié)果：準(zhǔn)確記錄，計(jì)量觀察指標(biāo)的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)和定性觀察指標(biāo)的實(shí)驗(yàn)變化。結(jié)果分析：每次實(shí)驗(yàn)結(jié)果應(yīng)做數(shù)據(jù)處理和分析，并有明確的文字小結(jié)。實(shí)驗(yàn)人員：應(yīng)記錄所有參加實(shí)驗(yàn)研究的人員。 第23頁，共77頁。四、中藥新藥藥效學(xué)研究的步驟及其本內(nèi)容 （一）試驗(yàn)設(shè)計(jì)在進(jìn)行藥效學(xué)研究工作之前，首先應(yīng)該在查閱和熟悉文獻(xiàn)的基礎(chǔ)上，制訂試驗(yàn)設(shè)計(jì)方案，擬定開展藥效試驗(yàn)的范圍和方法，觀察指標(biāo)，確定陽性對(duì)照藥，選擇動(dòng)物模型和采用的動(dòng)物，設(shè)立分組和劑量，給藥途徑，所需儀器設(shè)備及其他材料，安排試驗(yàn)進(jìn)度，參加人員及分工等。這是實(shí)施的依據(jù)，當(dāng)然也不是一成不變的，在實(shí)施過程中，根據(jù)具體情況，可以進(jìn)一步修改、補(bǔ)充、完善及調(diào)

24、整?？茖W(xué)和周密的設(shè)計(jì)，可以排除各種干擾or無關(guān)因素，獲得正確、可靠的結(jié)果，并能節(jié)省人力，物力和時(shí)間，避免走彎路。1.試驗(yàn)設(shè)計(jì)的根據(jù)和原則試驗(yàn)設(shè)計(jì)應(yīng)依據(jù)新藥審批辦法及有關(guān)藥政法和規(guī)定；參照新藥的組方劑型，給藥途徑，特別是功能主治；臨床經(jīng)驗(yàn)及有關(guān)科研和文獻(xiàn)資料。其原則是要求實(shí)事求是；體現(xiàn)出高水平；堅(jiān)持中藥特點(diǎn)及有新意。研究工作要嚴(yán)格做到：“隨機(jī)、對(duì)照、重復(fù)”，以及統(tǒng)計(jì)學(xué)處理等。第24頁，共77頁。2.根據(jù)新藥不同情況設(shè)計(jì)試驗(yàn)方案（1）以病名為主治的新藥：要根據(jù)主治，參考功能選擇相應(yīng)的試驗(yàn)方法，這適合大多數(shù)中藥，包括以西醫(yī)病名為主治的新藥。例如，主治陽痿證的藥物，應(yīng)首先與生殖系統(tǒng)（特別是性功能）有關(guān)

25、的試驗(yàn)；同時(shí)參照新藥的功能和（或）疾病的主要癥狀，以相應(yīng)的試驗(yàn)，作為輔助藥效，從多方面證實(shí)新藥的藥效。健脾補(bǔ)腎可選用一些健脾調(diào)整胃腸功能的試驗(yàn)。治療急性支氣管炎的藥物，除了抗感染抗炎作用外，針對(duì)疾病的癥狀，選做鎮(zhèn)咳、祛痰及解熱試驗(yàn)等。有時(shí)還需做針對(duì)新藥作用環(huán)節(jié)or作用機(jī)制的試驗(yàn)，如治療糖尿病藥物的降血糖作用是由胰臟內(nèi)還是胰臟外因素發(fā)揮的機(jī)制探討 第25頁，共77頁。（2）以中醫(yī)證名為主治的新藥：應(yīng)根據(jù)該病癥的現(xiàn)代認(rèn)識(shí)設(shè)計(jì)關(guān)鍵主要的試驗(yàn)，參照新藥的主要功能和病證的臨床癥狀；設(shè)計(jì)藥理試驗(yàn)方案，例如；治療脾虛證的藥物，根據(jù)脾虛證的表現(xiàn)為消化系統(tǒng)功能減退，副交感，神經(jīng)系統(tǒng)功能偏亢，免疫功能和代謝能力偏

26、低等。藥效學(xué)試驗(yàn)應(yīng)以運(yùn)化水谷及健脾益氣為主，故選做有關(guān)胃腸功能的試驗(yàn)，對(duì)脾虛模型動(dòng)物的治療作用，以及抗應(yīng)做試驗(yàn)和免疫功能測(cè)定等。（3）缺乏適當(dāng)動(dòng)物模型的新藥：如系統(tǒng)性紅斑狼瘡，皮肌炎、系統(tǒng)性硬皮病等系統(tǒng)疾病，精神病，以及梅核氣，奔豚證等，應(yīng)根據(jù)疾病因、病理變化、臨床癥狀及及新藥的主要功能等，設(shè)計(jì)藥理試驗(yàn)方案，用間接的藥效提示新藥的作用。再結(jié)合臨床研究，對(duì)新藥的有效性作出評(píng)價(jià)。例如，銀屑病的確切病因尚不明，可能與遺傳、代謝障礙、感染、免疫功能紊亂等因素有關(guān)；基本病理特點(diǎn)為皮損部位表皮細(xì)胞過度增殖和角化不全。藥效學(xué)可選擇調(diào)節(jié)表皮細(xì)胞生長，影響免疫功能，抗炎和止癢作用，以及活血化瘀等試驗(yàn)。 第26頁

27、，共77頁。3.新藥研究要求的水平：中藥及其復(fù)方的藥理作用廣泛，常為多成分、多靶點(diǎn)、多系統(tǒng)的綜合效應(yīng)，故應(yīng)行選擇相應(yīng)的方法從多方面反映新藥的藥效。但必須緊扣功能主治，避免“以廣取勝”。主要藥效學(xué)研究，應(yīng)選擇能夠反映中藥作用本質(zhì)的實(shí)驗(yàn)方法和觀察指標(biāo)，首先應(yīng)確定主要作用（關(guān)鍵性藥效）。一般主要作用設(shè)1-3項(xiàng)，每項(xiàng)應(yīng)選作23種實(shí)驗(yàn)方法，從多指標(biāo)驗(yàn)證其藥效。其他作用（輔助性藥效）可酌情做25項(xiàng)，每項(xiàng)選做12種實(shí)驗(yàn)方法。應(yīng)分清主次，突出重點(diǎn)。 第27頁，共77頁。例如：抗癌中藥多從多方面進(jìn)行研究。第一為抗癌作用，抑制or殺死癌細(xì)胞；第二為扶正作用：增強(qiáng)免疫功能，提高機(jī)體的抗病能力；第三為增效作用：對(duì)瘤動(dòng)

28、物or患者的化療的放療具有增效作用；第四為減毒作用：可減輕正常的荷瘤動(dòng)物對(duì)化療和效療的毒副反應(yīng)。上述四種作用中，抗癌作用是主要的，有明確的抗癌作用，可能開發(fā)為抗癌藥物；抗癌作用不明顯，但具有扶正，增效的減毒作用者，只能作為抗癌輔助藥應(yīng)用。研究抗癌藥物應(yīng)主要去荷瘤動(dòng)物非觀察其抗癌作用應(yīng)選擇3種or以上（包括實(shí)體瘤，腹水瘤和白血病各一種）腫瘤，重復(fù)3批實(shí)驗(yàn)，觀察新藥對(duì)腫瘤大小、重量、外觀、可通過切片及荷瘤動(dòng)物體重、全身癥狀和生存期等的影響；還要進(jìn)行試管內(nèi)抗癌作用研究，可選擇對(duì)藥物較敏感的腫癌細(xì)胞，進(jìn)行試管內(nèi)抗癌試驗(yàn)，or進(jìn)行腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)的抗癌試驗(yàn)。第28頁，共77頁。新藥的藥效應(yīng)能證實(shí)其主要的治療

29、作用，以較主要的其他治療作用。主要的藥效作用該應(yīng)明確，并力求反映量效和（or）時(shí)效關(guān)系。有時(shí)藥效不夠明顯，or僅見作用趨勢(shì)，統(tǒng)計(jì)學(xué)處理無顯著差異，應(yīng)如實(shí)上報(bào)作為參考，但僅適用于輔助藥效；藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)，通過體內(nèi)，體外多種實(shí)驗(yàn)方法，從多方面、多層次、全面深入地闡明其藥作用；也可只做能充分證實(shí)其主要治療作用的藥效，但應(yīng)有明確的量效關(guān)系和時(shí)效關(guān)系， 并有一定的作用機(jī)制研究，盡可能用實(shí)驗(yàn)證明其人效成分和有效部位（群）就是主要藥理作用的成分。藥效學(xué)試驗(yàn)應(yīng)盡量反映出受試藥的特點(diǎn)，包括作用強(qiáng)度作用時(shí)間，作用特點(diǎn)，避免低水平重復(fù)。對(duì)于局部用藥治療遠(yuǎn)隔部位or全身疾患的藥物，如局部or穴位貼藥治療高血壓，冠心病等，

30、如有可能應(yīng)進(jìn)行透皮吸收實(shí)驗(yàn)，以了解藥物吸收數(shù)量及速度等，有助于評(píng)價(jià)藥效。但很多中藥成分復(fù)雜，目前正難以確定有效成分，進(jìn)行透皮吸收試驗(yàn)尚有困難。至于藥物的作用機(jī)制，藥代動(dòng)力學(xué)及復(fù)方中藥的配伍試驗(yàn)等，在可能的情況下適當(dāng)選做，由于中藥的特點(diǎn)及技術(shù)的困難等因素，目前不宜強(qiáng)求。中藥材新的藥用部位，以人工方法在動(dòng)物體內(nèi)制取物和引種（養(yǎng)殖）藥材的藥效學(xué)試驗(yàn)、均應(yīng)與原藥材作比試驗(yàn)。以中藥療效為主的中藥和化學(xué)藥品復(fù)方劑，需做該組方中的中藥、化學(xué)藥品，制劑三者在藥效、毒理方面的對(duì)比試驗(yàn)，以出現(xiàn)組分間的任何協(xié)同or毒副反應(yīng)等方面具有一定的優(yōu)點(diǎn)，包括藥效作用的增強(qiáng)和（or）互補(bǔ)，毒副反應(yīng)在的降低等。第29頁，共77頁

31、。（二）藥效學(xué)試驗(yàn)的方法 中藥藥效試驗(yàn)的方法大致分為體外實(shí)驗(yàn)和體內(nèi)實(shí)驗(yàn)兩類：1.體外實(shí)驗(yàn)：又稱離體實(shí)驗(yàn)，是在體以進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)觀察方法，包括離體器官、離體組織，細(xì)胞體外培養(yǎng)及試驗(yàn)等。它可以排除體內(nèi)多種因素的干擾，重復(fù)性好，結(jié)果易于分析，具有省藥、省動(dòng)物等優(yōu)點(diǎn)，適用于分析試驗(yàn)，特別是作用機(jī)制的研究。但存在一定的缺點(diǎn)和局限性，尤其是中藥的粗制劑，直接與器官、細(xì)胞等接觸，雜質(zhì)和理化性質(zhì)的均能影響實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，如藥物的溶解性、粒度、PH、無機(jī)離子及鞣質(zhì)、不溶物質(zhì)等。往往在試管內(nèi)抗菌作用強(qiáng)的中藥，在體內(nèi)不一定出現(xiàn)抗菌效果。含有大量鈣離子or鞣質(zhì)的煎劑，盡管對(duì)離體平滑肌，有明顯的興奮作用，在口服時(shí)不一定出現(xiàn)相應(yīng)

32、的作用。再則，離體實(shí)驗(yàn)失去了機(jī)體完整統(tǒng)一的內(nèi)環(huán)境和N體液調(diào)節(jié)，與臨床狀態(tài)相距較遠(yuǎn)。有些藥物須經(jīng)內(nèi)體代謝為活性成分后才有藥理作用。因此，離體實(shí)驗(yàn)與體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果不一致的現(xiàn)象時(shí)有發(fā)生。例如，理氣藥陳皮、青皮等對(duì)胃腸邊平滑肌作用表現(xiàn)，離體為抑制，口服煎劑一般為興奮，主要原因是離體時(shí)為其中橙皮苷和對(duì)羥福林等成份的作用；口服時(shí)藥物的所含揮發(fā)油對(duì)胃腸粘膜的刺激發(fā)揮作用。梔子苷的利膽作用很弱，在體內(nèi)代謝物京尼平（genipin）作用增強(qiáng)；正如磺胺類藥物體外的抗菌作用甚弱一樣。 第30頁，共77頁。為了解決這個(gè)問題，血清藥理學(xué)的實(shí)驗(yàn)方法是首先給動(dòng)物服藥，然后取其血清作為藥物源進(jìn)行藥理學(xué)觀察。粗制劑和復(fù)雜的成分經(jīng)

33、過消化已及吸收分布，代謝排除等體內(nèi)過程，再取含藥的血清進(jìn)行藥理實(shí)驗(yàn)，比較接近藥物體內(nèi)環(huán)境中產(chǎn)生藥理作用的真實(shí)過程，故適用于中藥，特別是復(fù)方進(jìn)行藥效評(píng)價(jià)及其作用機(jī)制的研究，還可進(jìn)行血清藥化學(xué)及藥氣力學(xué)的研究。受試動(dòng)物多用大鼠，豚鼠、家兔等。每日服藥1次或2次（間隔24h），連用3日，亦可每日1次，連續(xù)7日。給藥劑量可參考公式：劑量=在體實(shí)驗(yàn)的給藥量反應(yīng)系統(tǒng)中被稀釋的倍數(shù)。但可能因血藥濃度不完全隨給藥劑量相應(yīng)增加，以及受灌骨濃度和容量的限制等，不可能達(dá)到公制成的血清凍干粉，加入反應(yīng)系統(tǒng)，使之達(dá)到需要的濃度。給藥后采血的參考時(shí)間，如每日給藥2次，連續(xù)3日，為末次給藥后的30mim至1h。血清藥理實(shí)驗(yàn)

34、，雖然可以克服離體實(shí)驗(yàn)中存在的某些缺點(diǎn)，但尚未完全成熟，還存在著一定的問題。例如，血清的來源和含藥濃度、加藥劑量（不能添加100%濃度的血清），以及動(dòng)物給藥的劑量、給藥方式、采血時(shí)間、血清處理等諸多因素，需要進(jìn)一步完善和確定，故影響其推廣應(yīng)用。另外，對(duì)不通血液而起的作用，尤其是中藥對(duì)整體的調(diào)節(jié)功能，便不能反映和觀察。因此，不能完全取代體內(nèi)實(shí)驗(yàn)。第31頁，共77頁。2.體內(nèi)實(shí)驗(yàn) 又稱在體實(shí)驗(yàn)，是用整體動(dòng)物進(jìn)行藥理實(shí)驗(yàn)的方法。根據(jù)試驗(yàn)需要可以選用正常動(dòng)物或病理模型動(dòng)物，按照試驗(yàn)的周期可以分為急性實(shí)驗(yàn)和慢性實(shí)驗(yàn)。前者一般指觀察一次給藥后機(jī)體在短時(shí)間內(nèi)出現(xiàn)的反應(yīng)，如麻醉動(dòng)物血壓實(shí)驗(yàn)、急性毒性試驗(yàn)等。但

35、中藥往往起效較慢，作用較溫和，即使急性實(shí)驗(yàn)，有時(shí)也需持續(xù)多次給藥，如37日甚至更長時(shí)間后才能出現(xiàn)效應(yīng)。慢性實(shí)驗(yàn)指觀察機(jī)體在較長時(shí)間內(nèi)多次給藥出現(xiàn)的反應(yīng)，如壽命試驗(yàn)、慢性造瘺（胃腸瘺、子宮瘺等）、長期毒性試驗(yàn)等。在體實(shí)驗(yàn)比較接近臨床狀態(tài)，尤其符合中藥多成分、多靶點(diǎn)、多系統(tǒng)的調(diào)節(jié)整體作用，并可彌補(bǔ)離體實(shí)驗(yàn)的不足和局限性，故中藥的藥效學(xué)試驗(yàn)以體內(nèi)實(shí)驗(yàn)為主，體外實(shí)驗(yàn)為輔。結(jié)合中醫(yī)臨床用藥的實(shí)踐，以消化道給藥為主，其他給藥途徑為輔。尚若為中藥有效成分或有效部位（群）、制劑較純者，或臨床為注射給藥者，可用體外實(shí)驗(yàn)或注射給藥進(jìn)行主要藥學(xué)試驗(yàn)。 第32頁，共77頁。（二）藥效學(xué)試驗(yàn)的動(dòng)物模型 研究和評(píng)價(jià)新藥的

36、防治作用需要建立動(dòng)物模型，20世紀(jì)以來，新藥研究發(fā)展較快的原因之一是成功建立了很多病理模型，從而開辟了實(shí)驗(yàn)治療的廣闊領(lǐng)域。1.藥效學(xué)研究中動(dòng)物病理模型的基本要求：理想的動(dòng)物模型應(yīng)與人類疾病的臨床相似，特別是中醫(yī)“病”或“證”的動(dòng)物模型應(yīng)具有中醫(yī)特點(diǎn)，與臨床辨證相似。但要求一個(gè)動(dòng)物模具型完全與人類疾病及臨床表現(xiàn)相似，這幾乎是不可能的。因?yàn)樵S多人類疾病的病因和病理變化尚未闡明，除傳染病以外，大多來類推于基因的異常和缺陷。中醫(yī)的“病”、“證”尤為復(fù)雜，例如，脾虛證可見消化道吸收、分泌、自主神經(jīng)功能紊亂，體溫調(diào)節(jié)中樞和血管運(yùn)運(yùn)中樞失常，內(nèi)分泌和免疫功能變化等系統(tǒng)的異常。某些動(dòng)物模型往往側(cè)重于體現(xiàn)有關(guān)“

37、病”、“證”的一定階段，某一證型，某些主要癥狀或病理變化。第33頁，共77頁。動(dòng)物模型有自發(fā)性動(dòng)物模型及誘發(fā)性或?qū)嶒?yàn)兩大類。前者包括突變系的遺傳疾病和近交系的腫瘤模型，如高血壓大鼠、高血糖小鼠、肥胖癥小鼠、無胸腺裸鼠、青光眼兔等。其最大優(yōu)點(diǎn)是疾病的發(fā)生發(fā)展類似于人類，但這些模型來源困難，不可能大量使用。近代醫(yī)學(xué)常用的是實(shí)驗(yàn)性動(dòng)物模型，即通過物理、化學(xué)和生物等致病因素，人工誘發(fā)動(dòng)物某些組織器官或全身的損傷，在功能、代謝和（或）形態(tài)學(xué)上出現(xiàn)與人類相應(yīng)疾病類似的病變。這類模型可以在短期內(nèi)大量復(fù)制及適應(yīng)研究目的等特點(diǎn)，但其與自然發(fā)生的疾病模型畢竟存在一定差異性。為此，在設(shè)計(jì)制造該類模型時(shí)，應(yīng)盡可能克服

38、其不足之處，發(fā)揮特點(diǎn)。評(píng)價(jià)模型的好壞、成功與否，關(guān)鍵是看能否反映防治對(duì)象的本質(zhì)。只要能反映事物的本質(zhì)，模型的設(shè)計(jì)越簡單好。例如，抗毒藥的模型，只要給動(dòng)物攻毒就行；藥物的抗菌、抗病毒作用常用體內(nèi)保護(hù)試驗(yàn)可做常規(guī)的抗菌譜，觀察指標(biāo)合理，效率也高。至于技術(shù)的先進(jìn)性，方法的難易固然能反映研究的水平，但不是主要的。如果模型選擇不當(dāng)，再高的水平只是花架子，不可能得到正確的結(jié)果。 第34頁，共77頁。動(dòng)物模型選擇標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)盡可能符合中醫(yī)臨床證或病的要求，以整體模型為主。例如，根據(jù)“虛則補(bǔ)之”的辨證施治原則，研究補(bǔ)益藥最好采用虛證模型，因?yàn)檎?dòng)物屬陰陽平衡，正氣不虛的機(jī)體，故對(duì)許多臨床患者有效的補(bǔ)益藥用正常動(dòng)物

39、往往看不到補(bǔ)益的效果。研究證明，在“氣虛證”動(dòng)物模型上，免疫指標(biāo)比正常動(dòng)物普遍低下，給予參芪注射液后，多項(xiàng)免疫指標(biāo)明顯回升，而對(duì)正常動(dòng)物則不如虛證模型升高明顯。正如解熱藥只降低發(fā)熱者的體溫，對(duì)正常體溫卻無降溫作用，解痙藥則對(duì)痙攣情況下的器官作用強(qiáng)而顯著一樣。 第35頁，共77頁。2.動(dòng)物模型的意義 動(dòng)物病理模型是具有人類疾病模擬性表現(xiàn)的實(shí)驗(yàn)對(duì)象和材料，它是探索人類疾病本質(zhì)及新藥有效性評(píng)價(jià)的一個(gè)重要方法和手段。人類各種疾病的發(fā)生發(fā)展極為復(fù)雜，要深入研究其發(fā)病機(jī) 機(jī)和病理變化，以及觀察和評(píng)價(jià)藥物的療效，不能也不應(yīng)該在病人身上進(jìn)行。例如，放射病、毒氣中毒、烈性傳染病等平時(shí)很難見到，急性白血病、血友病

40、及自身免疫性疾病等收集亦較困難。有的疾病潛伏期及病程較長，如腫瘤、慢性氣管炎、肺心病等，要幾年、幾十年，有些致病因素需要隔代乃至幾代才能顯示。即使病種病情相同，因病人的性別、年齡、體質(zhì)、遺傳及社會(huì)因素等不同，也會(huì)影響疾病的病理過程。利用動(dòng)物，可以在控制實(shí)驗(yàn)條件下，用單一或特定的病因，短期或較短時(shí)間內(nèi)復(fù)制出典型的病理模型，不但在群體上容易得到滿足，并且可以避免在人身上進(jìn)行實(shí)驗(yàn)的危險(xiǎn)性。正確制作或選擇一個(gè)合理的動(dòng)物模型，可以增加藥效學(xué)研究的真實(shí)性、可信性、成功率，提高研究的設(shè)計(jì)水平和科學(xué)性。相反，使用一個(gè)不合理的模型，則會(huì)使實(shí)驗(yàn)結(jié)果失去準(zhǔn)確性，甚至與原設(shè)計(jì)完全相反。即使得出實(shí)驗(yàn)者滿意的結(jié)果，也會(huì)因

41、動(dòng)物模型選擇不當(dāng)而得不到認(rèn)可。 第36頁，共77頁。3.中醫(yī)證的動(dòng)物模型 “證”是中醫(yī)在長期臨床實(shí)踐中對(duì)某些癥候群的概括，對(duì)診斷和治療等十分重要，辨證才能施治?？梢姡⒆C的動(dòng)物模型，一方面可提供該證的研究對(duì)象，探索其病因、病機(jī)、證候及病理變化等，以便了解疾病的本質(zhì)；另一方面則用于觀察和評(píng)價(jià)新藥的療效。在中藥藥理研究中，目前應(yīng)用較多的動(dòng)物模型主要有兩類：一類是擬“病”的模型，另一類是擬“證”的模型。后者如“血瘀”、“陰虛”、“陽虛”、“氣虛”、“血虛”、“脾虛”、“腎虛”、“厥脫證”等動(dòng)物模型。但由于目前對(duì)各種“證”的病因病機(jī)和生理生化變化等本質(zhì)遠(yuǎn)未徹底闡明，故很難復(fù)制與臨床有關(guān)“證”相符的動(dòng)

42、物模型。為檢驗(yàn)所制“證”模型的可靠性，目前常從兩個(gè)方面加以衡量，一是用比較法，將動(dòng)物模型的癥狀與中醫(yī)臨床癥狀加以比較。由于中醫(yī)辨證是從人體出發(fā)，采用望、聞、問、切的診斷方法很難在動(dòng)物身上進(jìn)行，所以要用要模型動(dòng)物上所測(cè)得的生理生化指標(biāo)、組織形態(tài)變化與臨床患難與共者情況進(jìn)行比較。另一是用藥物反證法，即用中藥代表方（藥）對(duì)所建立病理模型進(jìn)行治療，根據(jù)有無療效來判斷模型的可靠與否，同時(shí)也可以觀察中藥的作用。例如，模擬血瘀證的病理模型能被活血瘀方（藥）所逆轉(zhuǎn)；血虛證動(dòng)物模型，用養(yǎng)血藥治療，應(yīng)產(chǎn)生預(yù)期的治療作用。為使動(dòng)物模型盡量接近中醫(yī)的“證”，應(yīng)采用多種病因，不同動(dòng)物，以及多方法，多指標(biāo)地進(jìn)行研究。第3

43、7頁，共77頁。4.模型的相對(duì)性 動(dòng)物模型雖然在人類疾病及藥物的研究中，發(fā)揮了不可抹抹滅的作用，但由于種屬差異，造模方法，機(jī)體反應(yīng)性的不同，特別社會(huì)因素和環(huán)境因素等，很難與人類疾病及證候的臨床表現(xiàn)完全相同。盡管人們建立了一些?。ㄗC）的動(dòng)物模型，但尚處于探索階段，有的僅用于病因病機(jī)證候的研究，不適宜藥理學(xué)試。比較成熟、科學(xué)合理的中醫(yī)?。ㄗC）動(dòng)物模型甚少，無論是數(shù)量或是質(zhì)量均與目前要求相差甚遠(yuǎn)。在不同模型上，藥物療效的差異給新藥的研制工作帶來較大的困難。為此，研究中應(yīng)盡量選擇與人體反應(yīng)比較接近的動(dòng)物模型，發(fā)現(xiàn)矛盾時(shí)應(yīng)深入分析原因，從中找出比較合理的模型。一個(gè)藥物往往需要用幾個(gè)模型（一般為2個(gè)或以上

44、），從不同側(cè)面證實(shí)其藥效。有的要在研制工作中反復(fù)進(jìn)行，切忌單憑個(gè)別動(dòng)物指標(biāo)就作絕對(duì)的肯定或否定。 第38頁，共77頁。在實(shí)際評(píng)價(jià)具體的模型時(shí)，仍然存在很多分岐，即使像病因已明的病毒性乙型肝炎，至今仍無大家能接受的模型，有的認(rèn)為鴨肝炎可以作為模型，但有人認(rèn)為鴨肝炎與人的乙型肝炎相差較大。對(duì)中醫(yī)“證”的動(dòng)物模型爭(zhēng)議更大，如20紀(jì)紀(jì)60年代的糖皮激素“陽虛”模型，至今仍持有不同見解。有些疾病的模型本身就不大好建立，如高血壓、冠心病、風(fēng)濕病等，雖相應(yīng)地建了許多模型，亦成功的評(píng)選過一些新藥，但與人體比較，在病因和病理上還有相當(dāng)?shù)木嚯x。有的疾病現(xiàn)在還缺乏模型，如神經(jīng)性皮炎、鱗屑病、酒查鼻等。有些藥物劑型也

45、難以在動(dòng)物上實(shí)施，如臍敷、坐敷及肛門栓劑等。由上可見，很多動(dòng)物模型尚有待改進(jìn)、完善和積累經(jīng)驗(yàn)，更多的則有待于創(chuàng)新建立。應(yīng)該支持和鼓勵(lì)人員努力探索，在充分實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上，創(chuàng)建新的動(dòng)物模型。由于中藥與化學(xué)藥品藥效學(xué)研究的基本原則、主要內(nèi)容和技術(shù)要求，有很多相同之處，故亦可借鑒現(xiàn)代藥理學(xué)的理論、方法和手段，以補(bǔ)充中藥藥理學(xué)研究工作方法的不足。例如，結(jié)扎冠狀動(dòng)脈造成“心肌缺血”的動(dòng)物模型，用醋酸刺激制造“潰瘍病”動(dòng)物模型等。只有這樣，才能促進(jìn)藥效學(xué)評(píng)價(jià)的發(fā)展。另外，每一種動(dòng)物模型，常常對(duì)某些藥效反液壓較敏感和準(zhǔn)確，而對(duì)其他方面則較差，在選用動(dòng)物模型時(shí)，應(yīng)充分權(quán)衡其優(yōu)缺點(diǎn)，用其所長，以取得理想的結(jié)果。第39

46、頁，共77頁。（四）藥效學(xué)試驗(yàn)指標(biāo)的選擇 藥效學(xué)試驗(yàn)選用的指標(biāo)應(yīng)能準(zhǔn)確無誤地反映藥物對(duì)機(jī)體的影響，所以要注意以下幾項(xiàng)要求。1.特異性 所選指標(biāo)應(yīng)該針對(duì)性強(qiáng)、專屬性好，能夠反映變化本質(zhì)。例如，要觀察藥物的降壓或升壓作用，檢測(cè)血壓是特異性的關(guān)鍵指標(biāo)；如要說明藥物對(duì)急性腎炎的治療作用，盡管血壓升高也是急性腎炎常見癥狀，但并非特異的關(guān)鍵指標(biāo)。因?yàn)榧毙阅I炎并不一定會(huì)有血壓升高，血壓變化也不能代表藥物對(duì)急性腎炎的療效；而應(yīng)選擇腎功能檢查、尿液檢查或腎形態(tài)學(xué)檢查等作為關(guān)鍵指標(biāo)。在中藥藥理研究中，有時(shí)確定特異性指標(biāo)還存在困難。例如，要說明中藥的解表、開竅、助陽、滋陰等，難以找到單一的特異性指標(biāo)。對(duì)此，在一個(gè)指

47、標(biāo)不夠時(shí)，可以用一組指標(biāo)來彌補(bǔ)。如解表藥可選用發(fā)汗解熱、鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)咳、祛痰、平喘、抗炎、抗敏及免疫功能等藥效學(xué)試驗(yàn)指標(biāo)。第40頁，共77頁。2.敏感性 指標(biāo)要敏感，能準(zhǔn)確反映病情、證候的變化及藥物的防治作用。敏感性差或遲鈍的指標(biāo)，會(huì)遺漏某些陽性變化，造成假陰性。有的指標(biāo)，由于彌散度大，標(biāo)準(zhǔn)差大，而導(dǎo)致統(tǒng)計(jì)學(xué)無顯著性意義。3.重視性 指標(biāo)要穩(wěn)定，重現(xiàn)性好，結(jié)果才可靠。如發(fā)現(xiàn)重復(fù)性差，應(yīng)及時(shí)排除種種干擾因素，糾正對(duì)檢測(cè)指標(biāo)的影響，重新實(shí)驗(yàn)。否則重復(fù)性差的結(jié)果不可信，不能作為新藥療效評(píng)價(jià)的依據(jù)。4.客觀性 主觀檢測(cè)的指標(biāo)，不夠準(zhǔn)確。例如，肉眼觀察動(dòng)物自發(fā)活動(dòng)的影響，可帶有很大的主觀性。如果用光電計(jì)數(shù)儀

48、，計(jì)算動(dòng)物活動(dòng)的次數(shù)，或用記錄儀記錄小鼠在一定時(shí)間內(nèi)活動(dòng)或行走的軌跡，那就是客觀的量化指標(biāo)。肉眼測(cè)量血壓計(jì)水銀柱，亦有很大誤差，而用描記儀直接描記血壓曲線，動(dòng)態(tài)的記錄血壓的變化，則更為客觀。第41頁，共77頁。5.指標(biāo)的量化 為了判斷和比較藥物的作用，便于統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，檢測(cè)指標(biāo)應(yīng)有量的概念。但是指標(biāo)本身并不都是有數(shù)量的。量反應(yīng)指標(biāo)有數(shù)量可表示，而質(zhì)反應(yīng)指標(biāo)則沒有。后者只反映現(xiàn)象的出現(xiàn)與否，如死與不死、掠厥與不驚厥等。這類指標(biāo)只能通過累計(jì)現(xiàn)象出現(xiàn)的頻率來達(dá)到數(shù)量化（如陽性反應(yīng)的百分率）。也可采用計(jì)分法，接陽性反應(yīng)的程度人為地區(qū)分為若干級(jí)。例如，S.Irwin介紹的動(dòng)物行為觀察法，把小鼠的行為分解為

49、40多個(gè)指標(biāo)，每個(gè)指標(biāo)都區(qū)分為8級(jí)，以反映給藥后行為變化的程度。形態(tài)學(xué)（如組織、病理）指標(biāo)亦難于定量、常需采用定量組織學(xué)方法，如根據(jù)病理改變的范圍程度等，人為地進(jìn)行定量或半定量。各種指標(biāo)均有其優(yōu)缺點(diǎn)，例如生理、生化指標(biāo)可以定性定量及動(dòng)態(tài)觀察，但有時(shí)定位欠佳，可受多種因素干擾，穩(wěn)定性較差；而形態(tài)學(xué)指標(biāo)可定性、定位，但難于定量及動(dòng)態(tài)觀察。如果一項(xiàng)指標(biāo)難于滿足要求，可綜合選用生理、生化、形態(tài)學(xué)等多方面的指標(biāo)，使試驗(yàn)結(jié)果更為全面和準(zhǔn)確。但若單一指標(biāo)已能達(dá)到要求，則不必為了多和全而勉強(qiáng)采用多指標(biāo)的檢測(cè)。第42頁，共77頁。（五）藥效學(xué)研究中的動(dòng)物選擇 動(dòng)物的選擇，首先應(yīng)根據(jù)試驗(yàn)?zāi)康暮鸵螅约皠?dòng)物本身的

50、特點(diǎn)，再參考是否容易獲得、經(jīng)濟(jì)、飼養(yǎng)和管理等情況。尤其要注意動(dòng)物的種類、品系及質(zhì)量、健康狀態(tài)等。第43頁，共77頁。1.種類 動(dòng)物的類別和種屬不同對(duì)藥物的反應(yīng)存在很大差異，有時(shí)對(duì)藥效試驗(yàn)的成敗起著關(guān)鍵的作用。選擇動(dòng)物既要考虛對(duì)藥效學(xué)設(shè)置檢測(cè)指標(biāo)的敏感性，更要注意與臨床病人反應(yīng)的一致性。在可能條件下，盡量選擇功能、代謝、結(jié)構(gòu)與人類相似的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，使用期對(duì)藥物的反應(yīng)接近人類。靈長類（猴、猩猩等）是最近似于人類的理想動(dòng)物，但價(jià)貴、難得，又需特殊飼養(yǎng)條件，所以選擇動(dòng)物時(shí)亦不能盲目追求。例如，藥理實(shí)驗(yàn)最常用小鼠，因其有易繁殖和飼養(yǎng)，價(jià)廉，消耗藥量少等優(yōu)點(diǎn)。家兔對(duì)體溫變化十分靈敏，常用于觀察藥物解熱作用及

51、檢查熱源。豚鼠易于致敏，適用于做過敏實(shí)驗(yàn)。貓、狗和大鼠血壓穩(wěn)定，適宜觀察藥物對(duì)血壓的影響。狗具有發(fā)達(dá)的血液循環(huán)和神經(jīng)系統(tǒng)，以及與人相似的消化過程，在毒理方面的反應(yīng)與人比較接近，常選用于藥理和毒性學(xué)研究。豬在解剖和生理上與人相似，近年來選用豬做實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的日見增多；尤其是它的皮膚組織結(jié)構(gòu)與人近似，選用小豬作燒傷實(shí)驗(yàn)研究是較理想的動(dòng)物。第44頁，共77頁。2.品系 不同系列的動(dòng)物對(duì)藥物的敏感性不一，這也是普遍存在的現(xiàn)象。例如，C57BL小鼠對(duì)腎上腺皮質(zhì)激素的敏感性比DBA和BALB/C小鼠高12倍。DBA小鼠對(duì)音響刺激非常敏感，電鈴聲可引起性痙攣，甚至死亡，而C57BL小鼠卻根本不會(huì)出現(xiàn)此反應(yīng)。DB

52、A/2與DBA/1小鼠對(duì)同一病毒（如new castle 病毒）的反應(yīng)完全不同，前者引起肺炎，而后者引起腦炎。A、C3H、津白等品系小鼠易致癌，AKR、DBA/2、L615等易致白血病。C3H雌鼠乳腺癌自發(fā)率達(dá)90%，AKR小鼠白血病自發(fā)率達(dá)65%。這些均可選作有關(guān)實(shí)驗(yàn)的動(dòng)物。 目前國內(nèi)外使用的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，以小鼠為例，大部分是近交系和封閉群，而在使用數(shù)量上，封閉群動(dòng)物遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過近交系。這是因?yàn)榻幌祫?dòng)物雖然有遺傳均質(zhì)性、反應(yīng)一致性及實(shí)驗(yàn)結(jié)果精確性等優(yōu)點(diǎn)，但其品系繁多，又不易大量生產(chǎn)，所以限制了其應(yīng)用范圍，往往適用于設(shè)備條件較好的研究機(jī)構(gòu)或有專門科技人員親自保種使用。而封閉群動(dòng)物保持相當(dāng)程度的雜合性

53、，避免了近交衰退的出現(xiàn)，為此其生活力、生育力都比近交系強(qiáng)，具有繁殖率高，可以大量生產(chǎn)等特點(diǎn)，對(duì)各種刺激的平均反應(yīng)，有一定的穩(wěn)定性，可以反映藥物的平均綜合療效，遠(yuǎn)優(yōu)于市售動(dòng)物，故為藥理學(xué)研究廣泛采用。例如，昆明種（瑞士種）小鼠、Wistar大鼠、SD（sprague Dawley）大鼠、青紫藍(lán)兔、新西蘭白兔和日本大耳白兔、豚鼠、ddN小鼠、NIN小鼠、LACA小鼠。第45頁，共77頁。3.動(dòng)物等級(jí)和健康 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物應(yīng)選用符合等級(jí)要求的健康動(dòng)物，并附有供應(yīng)單位的合格證書。目前我國的藥理學(xué)研究大多采用普通動(dòng)物和清潔動(dòng)物。普通動(dòng)物（conwentional ani-mal，CV）是未經(jīng)積極的微生物學(xué)控制

54、，普遍地飼養(yǎng)在開放衛(wèi)生環(huán)境里的動(dòng)物，但要求不帶有人獸共患病的病原體及體外寄生蟲，如結(jié)核、痢疾、沙門菌感染，皮膚真菌等。普通動(dòng)物只能供教學(xué)和一般性實(shí)驗(yàn)。為此，藥理學(xué)研究一般應(yīng)采用清潔動(dòng)物（clean animal，CL），宏觀世界要求在CV的基礎(chǔ)上，還須不帶有動(dòng)物傳染病的病原體，如脫胎換骨腳病（鼠疽）、流行性腹瀉病毒、致死性腸道病毒等。血清病毒抗體檢驗(yàn)（腦脊髓炎病毒、鼠肝炎病毒等）可能檢出一定滴度，但不允許出現(xiàn)臨床癥狀和臟器的病理性變化或自然死亡。安全性評(píng)價(jià)研究中使用的大鼠、小鼠應(yīng)符合無特定病原體（即SPF）動(dòng)物的標(biāo)準(zhǔn)，豚鼠應(yīng)符合清潔級(jí)動(dòng)物標(biāo)準(zhǔn)。并要有動(dòng)物種群的近期健康及病原微生物檢測(cè)結(jié)果。一般

55、情況下，健康動(dòng)物對(duì)藥物和各種刺激的耐受量較大，實(shí)驗(yàn)結(jié)果穩(wěn)定。疾病或處于衰竭、饑餓、寒冷、炎熱等條件下的動(dòng)物，均會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。例如，有病動(dòng)物容易中毒死亡；炎癥組織對(duì)腎上腺素的收縮血管作用極不敏感；有病或營養(yǎng)差的家兔不易制成動(dòng)脈粥樣硬化模型；饑餓、創(chuàng)傷動(dòng)物易于進(jìn)入體克；發(fā)熱動(dòng)物代謝增加，體溫升高1，代謝一般可增加7%左右。動(dòng)物潛在性感染，對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響也很大，如觀察藥物對(duì)肝功能的影響，感染球蟲病的動(dòng)物，肝臟上可能有球蟲囊，其肝功能必然會(huì)有變化。第46頁，共77頁。4.實(shí)驗(yàn)設(shè)施 從事新藥研究的實(shí)驗(yàn)室及其設(shè)施應(yīng)符合國家藥品監(jiān)督管理局的有關(guān)規(guī)定。在藥品非臨床研究階段，評(píng)價(jià)安全性的資料，主要來自動(dòng)物實(shí)

56、驗(yàn)。因此，動(dòng)物的飼料，實(shí)驗(yàn)室及配套設(shè)施等，應(yīng)盡量避免工作人員、實(shí)驗(yàn)器材及實(shí)驗(yàn)動(dòng)物之間發(fā)生交叉污染，盡量降低各種生物、化學(xué)及物理因素干擾實(shí)驗(yàn)動(dòng)物對(duì)藥物的正常反應(yīng)。動(dòng)物飼養(yǎng)條件應(yīng)與所用動(dòng)物的等級(jí)相適應(yīng)，例如，普通動(dòng)物在開放或半開放系統(tǒng)內(nèi)飼養(yǎng)；清潔動(dòng)物在半開放或封閉系統(tǒng)內(nèi)飼養(yǎng)。第47頁，共77頁。5.年齡 動(dòng)物的解剖生理特征和反應(yīng)性隨年齡而有明顯的變化，一般幼年動(dòng)物比成年動(dòng)物的敏感性要高，這可能與抗體發(fā)育不健全，解毒排泄的酶系尚未完全發(fā)育有關(guān)。所以一般認(rèn)為幼年動(dòng)物不能完全取代成年動(dòng)物。老年動(dòng)物的代謝功能低下，反應(yīng)不靈敏，不是特別需要一般選用。有人觀察不同年齡組大鼠和小鼠對(duì)乙醇、汽油、戊烷、苯和二氯乙

57、烷等急性毒性的影響，按LD50及麻醉濃度來看，其敏感性基本上為幼年老年成年。因此，藥理學(xué)研究一般選用成年動(dòng)物，體重為小鼠1822g（或擴(kuò)大到1625g），大鼠200g（150250g），家兔2kg（1.52.5kg），貓23kg，狗810kg，猴815kg。應(yīng)該指出的是，動(dòng)物的年齡與體生一般呈正比關(guān)系，小鼠和大鼠常根據(jù)體重來推算其年齡，但其體重與飼養(yǎng)管理等亦有密切的關(guān)系，動(dòng)物正確年齡應(yīng)以其出生日期為準(zhǔn)，故除標(biāo)明選用動(dòng)物的體重外，還應(yīng)注意其年（月、周）齡。常用動(dòng)物性成熟年齡，小鼠為68星期，大鼠89星期，豚鼠610星期，兔45月，貓68月，狗68月。必要時(shí)，可根據(jù)試驗(yàn)要求，選用特定年齡、性別的動(dòng)

58、物。例如，有些慢性試驗(yàn)，觀察時(shí)間較長，可選擇年幼、體重較小的動(dòng)物；研究性激素對(duì)機(jī)體影響時(shí)，一定要用幼年或新生的動(dòng)物；制備四氧嘧啶（alloxan）糖尿病模型和進(jìn)行一些老年醫(yī)學(xué)的研究，應(yīng)選用老年動(dòng)物。第48頁，共77頁。6.性別 不同性別的動(dòng)物對(duì)同一藥物的敏感性可以差異較大。例如，激肽酶能增加雄性大鼠血清中的蛋白結(jié)合碘，減少膽固醇水平；而對(duì)雌性大鼠，則反使蛋白結(jié)合碘減少。麥角新堿給予56周齡大鼠，雄性有鎮(zhèn)痛效果，雌性則無。大鼠參四氯化碳的敏感性雄性雌性，而對(duì)固醇類激素和巴比妥類則雌性雄性。雌性動(dòng)物性周期不同階段和懷孕、授乳時(shí)，機(jī)體的反應(yīng)性有較大的改變，所以研究工作一般優(yōu)選雄性動(dòng)物或雌雄各半做實(shí)驗(yàn)

59、，雌者慶未孕。特定的實(shí)驗(yàn)，如為了觀察藥物的避孕作用、保胎作用以及對(duì)生殖期或圍產(chǎn)期的毒性等，則應(yīng)選用雌性動(dòng)物。第49頁，共77頁。（六）對(duì)受試藥物的要求 受試藥物是藥效學(xué)研究的對(duì)象和物質(zhì)基礎(chǔ)，所以應(yīng)符合一定要求，否則各項(xiàng)試驗(yàn)等資料不能反映受試藥物的實(shí)際情況。因此，處方、生產(chǎn)工藝、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及劑型等尚未固定者，不宜開展藥理學(xué)研究，其試驗(yàn)結(jié)果也不能用作新藥藥學(xué)或毒性學(xué)的評(píng)價(jià)。對(duì)受試藥的要求如下：1.處方固定 受試藥的處方務(wù)必固定，并應(yīng)符合中醫(yī)藥理論。手忙腳亂 的中藥材要經(jīng)過生藥學(xué)鑒定，確定中藥品種、產(chǎn)地及藥用部位。加工炮制品種，方法應(yīng)合理，明確輔料用量和炮制品質(zhì)量。對(duì)藥典內(nèi)未收載品種，應(yīng)按（新藥審批辦

60、法）規(guī)定，完成并申報(bào)有關(guān)資料。2.制備工藝、藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)基本穩(wěn)定 工藝要經(jīng)過優(yōu)選確定。中藥成分復(fù)雜，藥效各異，組成復(fù)方并非藥物簡單相加，所以對(duì)復(fù)方中藥一般應(yīng)復(fù)方提取。此外，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)基本可控。第50頁，共77頁。3.制劑或提取物作為受試藥的優(yōu)缺點(diǎn) 藥效試驗(yàn)可用成品制劑或提取物。成品制劑與臨床用藥一致，發(fā)揮藥效作用的快慢、強(qiáng)弱、維持時(shí)間，以及生物利用度等更近似于臨床。但成品制劑內(nèi)含有輔料（溶媒、基質(zhì)）等。例如，大量糊精和蔗糖等給藥容積大，水溶后粘稠狀，灌胃不便；揮發(fā)油包裹物及緩釋制劑等顆粒較大，小動(dòng)物難以灌胃給藥。一般說，提取物溶解性好，含藥量高及相對(duì)穩(wěn)定，給藥量容易控制和相對(duì)正確，故多用之。