1、北師大版高中生物選修3新疆兵團(tuán)第八師一四八團(tuán)中學(xué)張花專題二 細(xì)胞工程 2.2 動(dòng)物細(xì)胞工程動(dòng)物細(xì)胞工程考綱要求1.動(dòng)物的細(xì)胞培養(yǎng)與體細(xì)胞核移植 2.動(dòng)物細(xì)胞融合與單克隆抗體 復(fù)習(xí)重點(diǎn)1.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的過程及條件2.用動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù)克隆動(dòng)物的過程3.單克隆抗體的制備過程及其應(yīng)用1動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞工程技術(shù)的基礎(chǔ)(1)原理：_。一、憶教材溯本源細(xì)胞增殖 動(dòng)物胚胎或出生不久的幼齡動(dòng)物的器官或組織。(2)取材：原因：因?yàn)檫@些組織細(xì)胞分化程度低，增殖能力強(qiáng)，分裂旺盛，容易培養(yǎng)。胰蛋白酶 細(xì)胞懸液 原代培養(yǎng) 細(xì)胞貼壁、接觸抑制 胰蛋白酶 保持正常二倍體核型 獲得不死性 培養(yǎng)液 抗生素 代謝產(chǎn)物 血

2、清、血漿 36.5 0.5 7.27.4 5%CO2 有毒物質(zhì) 動(dòng)物體細(xì)胞核具有全能性 細(xì)胞培養(yǎng) 去核 重組細(xì)胞 供體 (3)結(jié)果：獲得與供體_基本相同的個(gè)體。遺傳物質(zhì) （1）原理：細(xì)胞膜的流動(dòng)性（2）融合方法：物理法化學(xué)法生物法 （3）變異類型：染色體變異突破了_的局限,使_成為可能，也為制造_開辟了新途徑。（4）意義：有性雜交方法遠(yuǎn)緣雜交單克隆抗體3.動(dòng)物細(xì)胞融合離心、振動(dòng)、電激。聚乙二醇 ( PEG )。滅活的病毒?？乖s交體內(nèi)單克隆抗體無(wú)限增殖 單一抗體 靈敏度高 診斷試劑 運(yùn)載藥物 二、研考點(diǎn)破疑難一. 動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)1.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程動(dòng)物胚胎或幼齡動(dòng)物組織、器官制成細(xì)胞懸液剪碎用胰

3、蛋白酶處理10代細(xì)胞轉(zhuǎn)入培養(yǎng)瓶40-50代細(xì)胞傳代培養(yǎng)無(wú)限傳代分散成單個(gè)細(xì)胞加培養(yǎng)液傳代 ，遺傳物質(zhì)不改變，保持正常二倍體核型。傳代10-50代左右，增長(zhǎng)緩慢以至于完全停止，部分細(xì)胞核型可能發(fā)生變化（遺傳物質(zhì)可能改變）為什么用胰蛋白酶處理？分瓶傳代培養(yǎng)原代培養(yǎng)特點(diǎn)：繼續(xù)傳代培養(yǎng)少部分細(xì)胞獲得不死性，細(xì)胞突變，遺傳物質(zhì)已經(jīng)改變，等同于癌細(xì)胞。一般說遺傳物質(zhì)未改變遺傳物質(zhì)已改變?cè)囵B(yǎng)細(xì)胞株細(xì)胞系細(xì)胞貼壁接觸抑制10代以內(nèi)比較項(xiàng)目植物組織培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)原理培養(yǎng)基狀態(tài)培養(yǎng)基特有成分培養(yǎng)結(jié)果培養(yǎng)目的2.植物組織培養(yǎng)和動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的比較細(xì)胞的全能性細(xì)胞增殖固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基蔗糖 植物激素葡萄糖 動(dòng)物

4、血清植物體細(xì)胞株、細(xì)胞系快速繁殖、培育無(wú)病毒植株獲得細(xì)胞或細(xì)胞分泌蛋白例1 某研究小組對(duì)某種動(dòng)物的肝腫瘤細(xì)胞（甲）和正常肝細(xì)胞（乙）進(jìn)行動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)。下列說法正確的是CA 在利用兩種肝組織塊制備肝細(xì)胞懸液時(shí)，也可用胃蛋白酶處理B 細(xì)胞培養(yǎng)應(yīng)在含5%CO2和95%O2的混合氣體的恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行C 為了防止細(xì)胞培養(yǎng)過程中細(xì)菌的污染，可向培養(yǎng)液中加入適量的抗生素D 相同適宜條件下培養(yǎng)等量的甲、乙細(xì)胞，一段時(shí)間后乙細(xì)胞數(shù)量比甲多是將動(dòng)物的一個(gè)細(xì)胞的 _ 移入一個(gè)_中，使其重組并發(fā)育成一個(gè)新的胚胎，這個(gè)新胚胎最終發(fā)育為_。用核移植方法得到的動(dòng)物稱為_ 。 細(xì)胞核去核的卵母細(xì)胞動(dòng)物個(gè)體2.原理動(dòng)物細(xì)胞核

5、具有全能性二.動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù)和克隆動(dòng)物二、動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù)和克隆動(dòng)物1. 動(dòng)物細(xì)胞核移植概念克隆動(dòng)物3.分類胚胎細(xì)胞核移植體細(xì)胞核移植細(xì)胞分化程度低，恢復(fù)全能性容易細(xì)胞分化程度高，恢復(fù)全能性困難 取供體細(xì)胞傳代培養(yǎng)10代以內(nèi)的細(xì)胞.為什么？用的是去核的減數(shù)第二次分裂中期細(xì)胞（M中期）為什么？激活方法：激活目的：促融方法： 電刺激胚胎移植至代孕受體內(nèi) 妊娠、分娩核移植流程供體：優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)奶牛受體：普通奶牛（卵母細(xì)胞的采集與培養(yǎng)） 1.體積大，易操作。2.含有促使細(xì)胞核表達(dá)全能性的物質(zhì)和營(yíng)養(yǎng)條件。核移植過程中供體理論上是提供細(xì)胞核，但操作過程中卻把整個(gè)體細(xì)胞注入去核的卵母細(xì)胞中去， 原因？

6、 體細(xì)胞體積相對(duì)較小，取核難度較大，另外細(xì)胞膜對(duì)核融合的障礙性較小。 【點(diǎn)撥】 例2. 下列對(duì)動(dòng)物核移植技術(shù)的描述不正確的是（ ）A .哺乳動(dòng)物核移植包括胚胎細(xì)胞核移植和體細(xì)胞核移植，動(dòng)物體細(xì)胞核移植的難度明顯高于胚胎細(xì)胞核移植B .體細(xì)胞核移植的過程中可通過顯微操作去核法去除卵母細(xì)胞中的細(xì)胞核C .體細(xì)胞核移植過程中通常采用M期的卵母細(xì)胞作為受體細(xì)胞D .通過體細(xì)胞核移植方法生產(chǎn)的克隆動(dòng)物是對(duì)提供體細(xì)胞核的動(dòng)物進(jìn)行了100%的復(fù)制 D三.動(dòng)物細(xì)胞融合植物、動(dòng)物細(xì)胞融合的比較項(xiàng)目植物體細(xì)胞雜交動(dòng)物細(xì)胞融合原理細(xì)胞膜的流動(dòng)性、細(xì)胞的全能性細(xì)胞膜的流動(dòng)性、_融合前處理除去細(xì)胞壁使細(xì)胞分散開相關(guān)酶纖

7、維素酶和果膠酶_細(xì)胞增殖 胰蛋白酶或膠原蛋白酶 誘導(dǎo)方法物理法：離心、電激、振動(dòng)化學(xué)法：聚乙二醇等試劑誘導(dǎo)物理法：離心、電激、振動(dòng)化學(xué)法：聚乙二醇等試劑誘導(dǎo)生物法：_結(jié)果雜種植株_應(yīng)用培育植物新品種主要用于制備單克隆抗體意義突破_，打破了生殖隔離，擴(kuò)展了雜交的親本組合相同點(diǎn)融合原理相同，融合的方法相似用滅活的病毒誘導(dǎo) 雜交細(xì)胞 遠(yuǎn)緣雜交不親和的障礙 例3動(dòng)物細(xì)胞融合的目的中最重要的是（ ）A克服遠(yuǎn)緣雜交的不親和性 B制備單克隆抗體C培育新品種 D生產(chǎn)雜種細(xì)胞B變式訓(xùn)練（多選）在細(xì)胞工程的細(xì)胞融合過程中，能促使細(xì)胞融合的方法或物質(zhì)有（ ） A滅活的病毒 B聚乙二醇 C乙醇 D丙酮酸AB四.單克隆

8、抗體制備BB 、B瘤 、瘤瘤 （B、瘤）（一選）用特定選擇性培養(yǎng)基，篩選出雜交瘤細(xì)胞獲得能產(chǎn)生相應(yīng)抗體的B淋巴細(xì)胞（二選）：篩選出能產(chǎn)生特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞體外培養(yǎng)小鼠腹腔內(nèi)培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞特點(diǎn)：既能產(chǎn)生特異性抗體，又能大量增殖。B淋巴細(xì)胞 骨髓瘤細(xì)胞 例4 對(duì)于下面制備單克隆抗體過程示意圖，不正確的敘述是（ ）A 中的篩選是通過抗原抗體反應(yīng)進(jìn)行的B 過程均是從小鼠的脾臟中提取的C 促進(jìn)細(xì)胞融合的方法可以利用滅活的病毒作介導(dǎo)D 可以無(wú)限增殖 培養(yǎng)、篩選 細(xì)胞融合B三、練真題明考情2016全國(guó)卷如圖表示通過核移植等技術(shù)獲得某種克隆哺乳動(dòng)物(二倍體)的流程。XX或XY 顯微操作 胚胎移植 遺傳物質(zhì) 卵