1、牛心樸子草中有效成分的純化與表征【關(guān)鍵詞】牛心樸子草；活性成分；大孔吸附樹脂；構(gòu)造表征牛心樸子草ynanhukarviiAlIljinski是我國西北旱沙地帶廣泛分布的草本植物1。研究發(fā)現(xiàn)，牛心樸子提取物有抗炎、抗菌、抗腫瘤及鎮(zhèn)痛等作用，具有較強的生物活性2,3。尤其是其總堿中的7-脫甲氧基娃兒藤堿對煙草花葉病毒(TV)有很強的抑制作用，超過了當今公認的抗植物病毒抑制劑。牛心樸子草作為植物農(nóng)藥屬于生物類天然型抗植物病毒抑制劑，還有促進植物生長的復合作用4，但由于其活性成分難于提取和別離。因此，很難將其提取工藝應用于消費。為了探究工業(yè)化提取牛心樸子草中活性成分的工藝道路，本課題組研究了采用大孔吸

2、附樹脂吸附和別離牛心樸子草提取液中生物堿的方法和條件5。本文利用所選用的AB-8大孔吸附樹脂對牛心樸子草提取液中活性成分進展了提取和別離，同時，對其活性局部利用柱層析、重結(jié)晶等方法進展了進一步的別離和純化，并對別離得到的化合物進展了別離鑒定，鑒定結(jié)果為對煙草花葉病毒(TV)有強抑制作用的活性成分7-脫甲氧基娃兒藤堿。1器材1.1原料及試劑牛心樸子草采自內(nèi)蒙古鄂爾多斯市杭錦旗，曬干粉碎后備用；大孔吸附樹脂AB-8為南開大學化工廠消費；石油醚、氯仿、乙醇等為市售分析純。1.2儀器SHZ-D型循環(huán)水式真空泵河南鞏義市英峪豫華儀器廠；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀RE-52A型，上海亞榮生化儀器廠；手提式紫外分析儀ZF5

3、-上?？等A生化儀器制造廠；質(zhì)譜儀(PlarisQS型，美國Finnigan質(zhì)譜公司)；紫外-可見光譜儀(UV-3101型，日本Shiadzu(島津)公司)；紅外光譜儀(美國NiletFT-IR紅外光譜儀)。2方法2.1大孔吸附樹脂柱層析樣品的制備用酸性乙醇溶液浸泡切碎的牛心樸子草地上局部，浸泡兩天后，別離草渣和浸取液，搜集浸取液，草渣再進展2次浸泡。浸泡兩天后，再別離草渣和浸取液，草渣棄之，合并兩次浸取液，減壓蒸餾回收溶劑后，得黑色粘稠膏狀物。將黑色粘稠膏參加適量酸水溶解，控制pH=2左右。靜置，過濾，得濾液。黑色粘稠膏再參加酸水溶解，靜置，過濾，得濾液。反復幾次，以便可以充分溶出粘稠膏中的生

4、物堿。合并濾液即為生物堿鹽水溶液。2.2牛心樸子草中的活性成分在大孔吸附樹脂柱上的別離將制備的生物堿鹽水溶液參加大孔吸附樹脂層析柱內(nèi)，通過旋塞控制流速為2l/in，使生物堿鹽在大孔吸附樹脂上進展充分吸附。用碘化鉍鉀試劑對吸附后的流出液進展沉淀試驗，假如有桔紅色沉淀生成，那么停頓參加生物堿鹽水溶液。待層析柱上部不再存有生物堿鹽水溶液時，參加70%的乙醇水溶液進展解吸，搜集解吸液。用碘化鉍鉀試劑對解吸液進展檢測，假如無桔紅色沉淀生成，那么停頓參加70%的乙醇水溶液。向?qū)游鲋鶅?nèi)參加蒸餾水進展清洗，直至洗出液無乙醇氣味。合并解吸液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀回收其中的乙醇得生物堿鹽水溶液。滴加氨水調(diào)節(jié)生物堿鹽水溶液

5、的pH=89，使生物堿游離出來。參加氯仿進展萃取，直至生物堿溶液滴加碘化鉍鉀試劑無桔紅色沉淀生成那么停頓萃齲合并氯仿液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀回收局部氯仿得生物堿濃縮液，生物堿濃縮液進展硅膠柱層析。用石油醚進展洗脫，洗脫局部回收溶劑后進展重結(jié)晶得黃色針狀晶體化合物。3結(jié)果黃色針狀晶體p：208210。文獻值6212214。晶體的構(gòu)造由紅外光譜圖、紫外光譜圖、質(zhì)譜圖表征。3.1紅外光譜解析晶體的紅外光譜圖見圖1。晶體的紅外光譜圖解析見表1。圖1化合物的紅外光譜圖3.2紫外光譜解析晶體的紫外光譜圖見圖2。晶體的紫外光譜與稠環(huán)化合物菲的紫外光譜相似。稠環(huán)化合物菲的紫外光譜的三個吸收帶分別為252，295，33

6、0n。晶體由于菲環(huán)上甲氧基的取代和氮原子的取代，因此，晶體吸收波長發(fā)生紅移。晶體在甲醇溶劑中的紫外吸收數(shù)據(jù)為：258，286，311，343，360n。晶體的波長數(shù)據(jù)與文獻值一致。表1化合物的紅外光譜吸收峰3.3質(zhì)譜解析晶體的質(zhì)譜圖見圖3。從Ei-S圖譜得其分子離子峰為363(+)，質(zhì)荷比/z363，基峰為/z294；由EI-S分子離子峰363說明，該晶體化合物含有奇數(shù)個氮。EI-S圖譜中晶體化合物的質(zhì)荷比/z363與碎片峰質(zhì)荷比/z294相差69個單位，說明化合物可以失去吡咯環(huán)，這是由于化合物進展RDA裂解的結(jié)果；EI-S譜中主要碎片峰為：/z294，/z279，/z251,/z263。晶體

7、化合物的裂解方式見圖4。圖3化合物的質(zhì)譜圖圖4化合物的質(zhì)譜裂解方式及主要碎片綜上所述，由紅外光譜、紫外光譜、質(zhì)譜都與文獻6化合物7-脫甲氧基娃兒藤堿的相關(guān)數(shù)據(jù)一致。晶體化合物的化學構(gòu)造式為：4結(jié)論以牛心樸子草為原料，對AB-8大孔吸附樹脂處理的牛心樸子草提取液中活性成分進展了提取和別離。對別離得到的化合物采用質(zhì)譜、紅外光譜和紫外光譜進展了表征，經(jīng)鑒定該成分為牛心樸子草中最具有生物活性的化學成分7-脫甲氧基娃兒藤堿?！緟⒖嘉墨I】1中國科學院中國植物志編輯委員會中國植物志.北京：北京科學出版社，1997：240.2姚宇澄，楊炤，高俊，等牛心樸子草抗植物病毒組分的生物活性研究J.內(nèi)蒙古工業(yè)大學學報，2002，21(1)：1.3AnTY,HuangRQ,YangZ,etal.AlkalidsfrynanhukarviiithinhibitryativityagainstthetbaasaivirusJ.Phytheistry,2001,58：1267.4姚宇澄，楊炤，高俊，等牛心樸子草植物農(nóng)藥的生物學特性研究J.內(nèi)蒙古工業(yè)大學學報，2001，20(1)：1.5李玉美，高俊，楊志杰大孔樹脂吸附和別離牛心樸子草中生物堿的研究J.內(nèi)蒙古工