1、甘草水提液對吸煙小鼠肺組織超氧化物歧化酶和丙二醛的影響【摘要】目的觀察甘草水提液對吸煙小鼠肺組織超氧化物歧化酶SD和丙二醛DA的影響。方法昆明種小鼠，隨機分成3組，即正常對照組、吸煙模型組、甘草水提液組。正常對照組小鼠不吸煙，其余兩組連續(xù)吸煙60d，4次/d，30in/次，甘草水提液組2次/d給予蒸餾水灌胃對照，60d后處死動物，取左上肺固定，石蠟包埋，切片HE染色觀察，其余肺組織做成勻漿，檢測肺組織勻漿中SD活性，DA含量。結(jié)果吸煙組小鼠肺內(nèi)出現(xiàn)程序不等的慢性支氣管炎及肺氣腫，同時肺部SD活性明顯下降，DA含量明顯增加。吸煙后加服甘草水提液組小鼠肺部病理表現(xiàn)明顯減輕，肺部的SD活性增加，DA

2、含量下降。結(jié)論甘草水提液對小鼠長期吸煙所造成的支氣管肺組織病理損害有保護作用，其作用機制可能與甘草在肺部發(fā)揮的抗氧化作用等有關(guān)。【關(guān)鍵詞】甘草水提液；吸煙；肺組織；超氧化物歧化酶；丙二醛ThePrtetiveEffetsfGlyrrhizaenSkinginduedPulnaryInjuryinieAbstrat:bjetiveTinvestigatetheprtetiveeffetsfglyyrrhizaeater-extratinnsking-induedpulnaryinjuryinie.ethdsKuingieererandlydividedint3grups：healthyntrlg

3、rup,delgrupandglyyrrhizaegrup.Exepthealthyntrlgrup,thethersereexpsedtigaretteske,qid,30inute/dayfr60days.Atthesaetie,theusefglyyrrhizaegruperegivenglyyrrhizaeater-extrain,bidfr60days,thetheruseeregivendistilledater,bidfr60days.Thepathlgihangesfairaysandlungtissueseredeterined.ThelevelfDAandtheativit

4、yfSDereeasured.ResultsThereererehrnibrnhitesandephyseainthedelgrupthaninthehealthyntrlgrup.igaretteskingreduedtheativityfSDandinreasedDAlevel.parediththedelgrup,thepathlgiinjuryfairaysandlungtissuesereredued,theativityfSDinreasedandthelevelfDAdereasedinglyyrrhizaegrup.nlusinGlyrrhizaeater-extrathast

5、heprtetiveeffetnsking-induedinjury.Theehanisayduetitsantixidatin.Keyrds:Glyyrrhizaeater-extratin;Sking；Pulnaryinjury;Superxidedisutase；aldialdenhyde吸煙有害安康。眾多資料說明，吸煙可致慢性呼吸道炎癥，如咽炎、氣管及支氣管炎、支氣管擴張及肺氣腫等癥，并可誘發(fā)肺癌及其它癌腫。由于香煙中有多種有害成分，如、尼古盯焦油、苯丙芘、亞硝胺等，因此，吸煙所致的損害是一種多系統(tǒng)的病理變化1。為了預(yù)防吸煙導(dǎo)致的慢性呼吸道炎癥，延緩咽炎、支氣管炎等發(fā)病時間，尋找能預(yù)防

6、吸煙所致的肺損傷的中藥，筆者建立了小鼠主動吸煙的動物模型，挑選和研究了一些中藥對這些動物模型的預(yù)防作用?，F(xiàn)報道如下。1材料與方法1.1材料1.1.1甘草水提液制備方法：取甘草原藥材，粉碎成粗粉，加水10倍，浸漬，加熱提取，提取1h/次，共提取3次，合并3次濾液，濃縮成含生藥100%，4冰箱保存，實驗時按0.1l/10g體重10g/kg)給藥。1.1.2煙絲選用由廣東廉江煙絲廠消費。1.1.3小鼠長期主動吸煙模型吸煙箱由本科室自制，取有機玻璃制成長寬高為505030的密閉吸煙箱，吸煙箱中下部離底部8處安裝一片金屬篩網(wǎng)，實驗時小鼠放在該金屬篩網(wǎng)上，可自由活動，吸煙箱頂部開一小口，上安放一玻璃漏斗，

7、煙絲放置于該玻璃漏斗內(nèi)，在吸煙箱的下部開一小口，連通一小型抽風(fēng)機，實驗時在吸煙箱頂部點燃煙絲，開動底部的小型抽風(fēng)機，煙氣就可以從上而下地透入吸煙箱，小鼠吸入的煙量可由煙絲類主動吸入的香煙的煙氣，不是吸入香煙點燃后被動散發(fā)的煙氣，小鼠吸入的煙量可由煙絲的重量及吸煙時間來確定，由于實驗對照組和藥物預(yù)防組都在同一時間開場實驗，因此全部小鼠吸入的煙量是一致的。1.1.4動物昆明種小鼠，體重1822g，雌雄兼用，由廣東醫(yī)學(xué)院實驗動物中心提供。1.2方法昆明種小鼠45只。雌雄兼用，隨機分成3組，每組15只，即正常對照組，吸煙模型組，甘草預(yù)防組。正常對照組小鼠不吸煙，給予蒸餾水灌胃2次/d，每次0.1l/1

8、0g體重，連續(xù)60d；吸煙模型組和甘草預(yù)防組小鼠置于自制吸煙箱中進展吸煙，4次/d,30in/次，在吸煙過程中同時給予甘草水提液灌胃，2次/d，每次0.1l/10g體重1l含生藥1g，連續(xù)60d。實驗完畢時，處死動物，后取左上肺固定，置多氏液固定，石蠟包埋，切片，HE染色，光鏡觀察；其余肺組織做成勻漿，檢測各組小鼠肺組織勻漿中SD活性和DA含量。2結(jié)果2.1吸煙對小鼠支氣管和肺組織形態(tài)學(xué)的影響吸煙組小鼠與正常組小鼠比擬，經(jīng)光學(xué)顯微鏡觀察，正常對照組的肺組織構(gòu)造明晰、完好、支氣管、黏膜上皮、肺泡壁等均未見異常病理改變，見圖12。吸煙組小鼠肺內(nèi)各級支氣管包括小支氣管、細支氣管，終未細支氣管均出現(xiàn)不

9、同程度的慢性炎細胞和少量中性粒細胞浸潤；黏膜上皮細胞嚴(yán)重受損，杯狀細胞增生；肺邊緣可見支氣管擴張及明顯的肺氣腫，支氣管腔呈擴張狀態(tài)，不但其切面的橫徑明顯增大，而且其黏膜的皺褶亦幾乎完全消失，尤其是大支氣管呈極度擴張狀態(tài)，見圖3；甘草預(yù)防組的支氣管炎癥變化明顯較輕，只有少量炎性細胞浸潤。支氣管腔擴張狀態(tài)明顯減輕，其黏膜的皺褶也接近正常，見圖4；吸煙組小鼠的肺泡及與其相連接的肺泡管和肺泡囊大部分均呈高度擴張狀態(tài)，肺泡膈已不明顯，甚至消失，肺本質(zhì)中的肺泡及肺泡管和肺泡囊腔內(nèi)含有蛋白液體，這種肺泡有的成片狀存在，有的那么散在出現(xiàn)，肺泡壁也明顯擴張，呈現(xiàn)明顯的肺氣腫。此外，肺泡壁的毛細血管普遍呈高度充血

10、狀態(tài)，有少數(shù)肺泡中還含有或多或少的紅細胞，見圖5；甘草預(yù)防組肺泡及與其相連接的肺泡管和肺泡囊大部分均較正常，肺泡膈明顯，肺泡壁的毛細血管充血狀態(tài)明顯減輕，見圖6。圖1正常組小鼠支氣管腔略圖2正常組小鼠肺泡略圖3吸煙組小鼠支氣管腔略圖4甘草預(yù)防組小鼠支氣管腔略圖5吸煙組小鼠肺泡略圖6甘草預(yù)防組小鼠肺泡略2.2甘草水提液對吸煙小鼠肺組織勻漿中SD，DA的影響甘草水提液對吸煙小鼠肺組織勻漿中SD，DA的影響見表1。表1甘草水提液對長期吸煙小鼠肺組織勻漿中SD，DA的影響略與正常對照組比擬，P0.05；n=5與正常對照組小鼠比擬，吸煙模型組SD活性明顯下降，DA含量明顯增加。在熏煙過程中同時給予甘草水

11、提液灌胃，其SD活性升高，DA含量降低。3討論吸煙組小鼠肺內(nèi)各級支氣管均出現(xiàn)不同程度的慢性炎細胞和少量中性粒細胞浸潤；支氣管黏膜上皮的纖毛脫落，肺泡壁也明顯擴張，肺泡壁的毛細血管普遍呈高度充血狀態(tài)，說明了吸煙可致細支氣管周圍炎及肺氣腫。這說明煙霧對支氣管、肺的組織學(xué)損害是非常突出的。吸煙時煙霧中帶刺激性物質(zhì)的作用導(dǎo)致呼吸系統(tǒng)的防御、代謝和免疫功能低下，使其成為慢性支氣管炎，肺氣腫的原因1。在組織學(xué)研究方面已經(jīng)有報道觀察到吸煙可見支氣管纖毛上皮活動減弱、纖毛脫落、黏膜中的黏液腺及杯狀細胞增生。REid指數(shù)增大，且漿細胞與黏液細胞比值下降，呈現(xiàn)黏液分泌增多，黏液毯難以形成2加上肺泡巨噬細胞功能減弱

12、，吞噬與消化活力下降，導(dǎo)致部分去除機制障礙。肺部感染反復(fù)發(fā)作，容易誘發(fā)慢性炎癥，即慢性支氣管炎的發(fā)生3,4。除此，吸煙還可在小氣道及肺泡出現(xiàn)大量中性粒細胞，從而產(chǎn)生多量的蛋白酶，且吸煙者的肺內(nèi)巨噬細胞亦增多，釋放中性粒細胞趨化因子和彈力蛋白酶；加上吸煙使1-抗胰蛋白酶活性減低，這都導(dǎo)致蛋白酶-抗蛋白酶平衡失調(diào)，造成蛋白酶活力增強，使肺彈力纖維被過度破壞。增多的巨噬細胞還產(chǎn)生大量過氧負離子引起肺組織損害；吸煙致肺外表活性物質(zhì)減損，影響肺泡穩(wěn)定性；吸煙可使氣道分泌物中肥大細胞釋放介質(zhì)增多促進肺泡壁破壞5，6。以上綜合因素，都是增加肺氣腫的可能性。筆者的研究證明了長期吸煙的小鼠也有明顯的慢性支氣管炎

13、和肺氣腫的病理表現(xiàn)，說明小鼠長期吸煙也可以發(fā)生與人類一樣的組織學(xué)變化。在吸煙的同時加用筆者制備的甘草水提物，可使小鼠的支氣管和肺氣腫的病理表現(xiàn)明顯減輕，說明了甘草水提物可預(yù)防由吸煙造成支氣管炎和肺氣腫的藥理作用。甘草為豆科植物甘草glyrrhizauralensisfish脹果甘草或光果甘草的枯燥根及根莖，甘草性味甘平，能補脾益氣，清熱解毒，止咳祛痰，緩急定痛，調(diào)和諸藥等成效，藥用歷史悠久，是最常用的中草藥品種。近代研究已證明了甘草具有廣泛的藥理學(xué)作用，如腎上腺皮質(zhì)激素樣類固醇作用、抗?jié)冏饔?、抗炎作用、抗病毒作用、抗菌作用、抗過敏反響作用、抗腫瘤作用、解毒作用、鎮(zhèn)咳祛痰作用、降脂作用及抗動脈

14、粥樣硬化作用、抗腦缺血作用等7但預(yù)防由吸煙造成支氣管炎和肺氣腫的藥理作用至今未見報道。本研究發(fā)現(xiàn)吸煙組小鼠與正常對照組小鼠比擬，吸煙模型組SD活性明顯下降，DA含量明顯增加，在吸煙過程中同時給予甘草水提液灌胃的小鼠，其SD活性升高，DA含量降低，提示了甘草預(yù)防由吸煙造成支氣管炎和肺氣腫的藥理作用與其SD活性有關(guān)。近年來，隨著自由基理論的開展，多數(shù)學(xué)者認為長期吸煙可導(dǎo)致自由基代謝損傷，許多間質(zhì)性肺病的發(fā)生與部分的氧化與抗氧化系統(tǒng)失衡有關(guān)8。自由基是一類具有高度活性的物質(zhì)，氧自由基與其去除劑間保持動態(tài)平衡對于維持組織細胞的正常構(gòu)造及功能極其重要，在下呼吸道上皮層的慢性炎癥過程中，自由基產(chǎn)生增多，可

15、對呼吸道上皮產(chǎn)生嚴(yán)重損傷，SD可有效地去除過氧化氫，吸煙使肺內(nèi)SD含量低，勢必加重肺泡上皮的損傷，導(dǎo)致支氣管炎和肺氣腫。本實驗結(jié)果顯示，在吸煙的同時，灌胃給予甘草水提物，可使吸煙小鼠肺部的SD活性升高，DA含量降低，肺部的支氣管炎和肺氣腫的病理變化明顯減輕。研究提示了甘草是一種良好的肺部自由基的去除劑，可通過促進超氧化物歧化酶活性，發(fā)揮預(yù)防吸煙造成支氣管炎和肺氣腫的作用。結(jié)論：甘草水提液對小鼠長期吸煙所造成的支氣管肺組織病理損害有保護作用，其作用機制可能與甘草在肺部發(fā)揮的抗氧化作用等有關(guān)。【參考文獻】1周漢良，陳季強.呼吸藥理學(xué)與治療學(xué).北京：人民出版社，1998：912.2馬繼霞，馬淑芳.被動吸煙小鼠氣管上皮超微構(gòu)造觀察J.電子顯微學(xué)報，2002，215：541.3吳人亮，李文英，車東煥，等.吸煙對小鼠氣道損傷的形態(tài)學(xué)研究J.同濟醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，1995，245：395.4李慶云，黃紹光，吳華成，等.大鼠吸煙致慢性支氣管炎模型氣道炎癥研究J.上海第二醫(yī)科大學(xué)