1、維生素C的提取及含量測定一、實驗?zāi)康膶W(xué)習(xí)維生素C的重要性質(zhì) 掌握2,6-二氯酚靛酚法測定維生素C的原理和方法二、實驗原理維生素C的結(jié)構(gòu)與性質(zhì)維生素定量測定結(jié)構(gòu)與性質(zhì)維生素C/ L-抗壞血酸(ascorbic acid)多羥基，內(nèi)酯；酸性；易被氧化：中、堿性，熱，光，重金屬破壞 L-抗壞血酸脫氫抗壞血酸*若脫氫維生素C進一步氧化，則失去活性來源 新鮮水果及蔬菜: 橙類 、番茄 、辣椒 富含維生素C量高的食物（毫克/100克食物) 酸 棗830-1170獼猴桃568棗 549辣 椒185山 楂89柿子椒89菜 花88金花菜85苦 瓜84雪里紅83豌豆苗53油 菜51橙 49柚 41檸 檬40柑 橘

2、34水蘿卜34大白菜19西紅柿12芥菜頭80青 蒜77三、實驗內(nèi)容樣品處理：2.0g獼猴桃510ml 2%的草酸研磨成漿狀 50ml的容量瓶定容過濾標(biāo)準(zhǔn)液滴定：5ml 1草酸 + 5ml 0.001molL維生素C (176.13)2,6-D滴定到淺紅色，30s ；3次 （10 x2,6-D)計算1ml 2,6-D相當(dāng)于維生素C的mg數(shù)T C：抗壞血酸的濃度（mg/ml）V1：抗壞血酸的量（ml）V2：消耗染料溶液的量（ml）樣品滴定：50ml 錐形瓶：濾液5ml（移液管）2,6-D滴定到淺紅色，30s ；3次空白滴定：50ml 錐形瓶：5ml l草酸2,6-D滴定到淺紅色，30s ；3次四、

3、操作要點定容過濾滴定管的使用滴定思考題為什么維生素C標(biāo)準(zhǔn)溶液要用新鮮配制的？ 為準(zhǔn)確測得維生素C的含量，實驗時要注意那些操作步驟？多酚氧化酶的制備和性質(zhì)研究一、實驗?zāi)康牧私庵参锝M織褐變和多酚氧化酶的關(guān)系。學(xué)習(xí)多酚氧化酶的提取和活力測定方法了解影響酶促反應(yīng)速度的各種因素二、實驗原理酶的分離純化：材料的選擇（新鮮、目的蛋白含量高）分離過程中避免一切可能引起變性的條件蛋白質(zhì)的純化一般在低溫下進行（4oC）細(xì)胞破碎：機械破碎分離目的蛋白：鹽析法多酚氧化酶催化的反應(yīng)鄰苯二酚鄰苯醌三、實驗內(nèi)容多酚氧化酶的制備：50g小塊土豆 + 50ml氟化鈉（600g/班）搗碎機中研磨30s 3-5層紗布過濾（40-4

4、5ml濾液/組）等體積飽和硫酸銨，4，30min 離心4，4000r/min，20min沉淀 + 15ml檸檬酸緩沖液離心4，4000r/min，15min上清多酚氧化酶粗制品 四、操作要點公用試劑的使用、玻璃器皿清潔、定量、定時離心機及其使用 離心機是利用離心力對混合液（含有固形物）進行分離和沉淀的一種專用儀器。 普通（非冷凍）離心機：轉(zhuǎn)速小于4000rpm(Rotate Per Minute )，臺式高速離心機最大轉(zhuǎn)速可18000rpm。 低速冷凍離心機 ：轉(zhuǎn)速一般不超過4000rpm 高速冷凍離心機 ：轉(zhuǎn)速可達20000rpm，收集微生物、細(xì)胞碎片、細(xì)胞、大的細(xì)胞器、硫酸沉淀物以及免疫沉淀物等。超速離心機 ：轉(zhuǎn)速可達50000rpm，能使亞細(xì)胞器分級分離，并用于蛋白質(zhì)、核酸分子量的測定等。 轉(zhuǎn) 頭50 Ti RotorJA 20.1 Rotor JA-18 RotorJA17 Rotor離心管開啟離心機控制電閘打開離心機電源開關(guān)選擇轉(zhuǎn)頭將轉(zhuǎn)頭放入離心機內(nèi)預(yù)冷平衡離心管離心管放入轉(zhuǎn)頭、擰緊轉(zhuǎn)頭蓋關(guān)閉離心機蓋設(shè)定離心轉(zhuǎn)頭速度、溫度、時間，開始離心離心結(jié)束后 取出離心樣品管 取出轉(zhuǎn)頭，擦干、清潔轉(zhuǎn)頭 關(guān)閉離心機電源開關(guān) 關(guān)閉離心機控制電閘五