1、實(shí)驗(yàn)二十四凱氏定氮法測(cè)定生物樣品中有機(jī)氮的含量(精)實(shí)驗(yàn)二十四凱氏定氮法測(cè)定生物樣品中有機(jī)氮的含量(精)5/5實(shí)驗(yàn)二十四凱氏定氮法測(cè)定生物樣品中有機(jī)氮的含量(精)實(shí)驗(yàn)二十五凱氏定氮法測(cè)定生物樣品中有機(jī)氮的含量一實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶W(xué)習(xí)凱氏定氮法的基本源理和操作；用凱氏定氮法測(cè)定生物樣品中氮的含量。二實(shí)驗(yàn)原理凱氏定氮法是使樣品經(jīng)硫酸和催化劑一起加熱消化，使有機(jī)氮分解，此中有機(jī)氮素轉(zhuǎn)變成氮，與硫酸化合為硫酸銨。此后加堿蒸餾，使銨游離出來(lái)，用硼酸汲取，再用標(biāo)準(zhǔn)硫酸或鹽酸滴定，依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)酸的耗費(fèi)量，即可計(jì)算有機(jī)氮的含量。三主要儀器及試劑1.凱氏定氮瓶及蒸餾裝置2.硫酸銅3.硫酸鉀4.硫酸5.2%硼酸溶液6.40%氫

2、氧化鈉溶液7.0.2%甲基紅8.0.2%溴甲酚綠9.0.2%甲基紅及0.2%溴甲酚綠的1+5混淆指示劑的標(biāo)準(zhǔn)鹽酸溶液(或1/2硫酸溶液)：0.1mol/LHCl的配制及標(biāo)定：?汲取9mL濃HCl注入大概1000mL無(wú)二氧化碳蒸餾水中，此溶液濃度約為0.1mol/L，用下述方法進(jìn)行標(biāo)定：正確稱取于180烘2小時(shí)，并于干燥器內(nèi)冷至室溫的無(wú)水碳酸鈉11.5g，置于250mL容量瓶中，定容后搖勻，用移液管汲取25mL放入錐形瓶?jī)?nèi)，加入無(wú)二氧化碳蒸餾水至100mL及4滴甲基橙指示劑，用待標(biāo)的0.1mol/LHCl滴定至淡桔紅色，記錄取量。同時(shí)用無(wú)二氧化碳蒸餾水做空白滴定。計(jì)算鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度。m100

3、0C(HCl)(V1V0)53.00式中：m無(wú)水NaCO的重量，g；23V1滴定無(wú)水NaCO耗費(fèi)HCl溶液體積，mL；23V0滴定無(wú)二氧化碳蒸餾水耗費(fèi)HCl溶液體積，mL；53.00M(1/2Na2CO3),g/mol。四實(shí)驗(yàn)操作步驟精準(zhǔn)稱取固體試樣1g（含氮總量約30-40mg）于500mL凱氏定氮瓶中，加研細(xì)的硫酸銅0.5g，?硫酸鉀10g，濃硫酸20mL，輕輕搖勻。于瓶口裝好小漏斗，將凱氏瓶以45角斜支于石棉網(wǎng)上，小火加熱，使其所有碳化（泡沫消逝）后，增強(qiáng)火，使溶液微沸，至液體變成藍(lán)綠色透明再加熱30min。冷后加200mL水再放冷。連結(jié)蒸餾裝置，冷凝管下端插入接收瓶液面下。?接收瓶?jī)?nèi)盛

4、有2%硼酸溶液50mL及混淆指示劑2-3滴。從漏斗放入40%氫氧化鈉溶液70-80mL，搖動(dòng)，瓶?jī)?nèi)物料變成深藍(lán)色或產(chǎn)生黑色，自漏斗再加水100mL。加熱蒸餾至氨所有蒸餾出來(lái)（250mL），使冷凝管下端走開汲取液，再蒸餾1min，停止加熱。用水沖刷冷凝管下端的外面下端。汲取液用標(biāo)準(zhǔn)鹽酸滴定至灰色為終點(diǎn)。同時(shí)做空白實(shí)驗(yàn)。注意事項(xiàng)1.消化時(shí)若不易呈透明溶液，可將試液放冷后慢慢加入30過(guò)氧化氫23mL，以促使氧化。消化過(guò)程以微火集中于凱氏瓶底部，保持遲緩沸騰，防范試樣濺于瓶壁，難于消化使氨損失。實(shí)驗(yàn)中要保證硫酸足量，不然過(guò)多的硫酸鉀形成硫酸氫鉀，而削弱了硫酸的消化作用。硫酸鉀的作用是增添溶液的沸點(diǎn)，硫

5、酸銅為催化劑，并且可做蒸氨時(shí)加入堿量的指示劑。五實(shí)驗(yàn)結(jié)果計(jì)算有機(jī)氮(%)(V1V2)C0.014100W式中：V1樣品耗費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)酸的體積，mL；V2試劑空白耗費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)酸的體積，mL；標(biāo)準(zhǔn)鹽酸的物質(zhì)的量濃度，mol/L；0.014每毫升1mol/LHCl相當(dāng)于氮的克數(shù)W樣品重量（或體積），g（或mL）。數(shù)據(jù)列表表示以下：鹽酸濃度的標(biāo)定：瓶+NaCO3編瓶+NaCO3重NaCO3重VHClCHCld相對(duì)重m2（g）m（g）（mL）V（0mL）（%）號(hào)（mol/L）m1（g）123均勻值樣品測(cè)定:WVVC有機(jī)氮12HCld（%）(g)(mL)(mL)（mol/L）相對(duì)編號(hào)(%)123均勻值六思慮題蒸氨時(shí)為何蒸餾瓶?jī)?nèi)要加濃堿？汲取液為何要用硼酸溶液？為何要將冷凝管下端插入接