1、蘋果輪紋病菌對(duì)多菌靈的敏感性測定蘋果輪紋病 (Botryosphaeria berengriana f.sp.piricola) 是近年來蘋果生產(chǎn)上危害最為嚴(yán)重的一種病害， 不僅可以危害枝 干，造成樹勢衰弱、枝干枯死，還能造成大量爛果，發(fā)病嚴(yán)重時(shí) 田間病果率為70%80%,且貯藏期可持續(xù)發(fā)病。給病發(fā)病率 近年來呈上升趨勢， 給果農(nóng)帶來嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。 施用化學(xué)殺菌 劑是目前防治蘋果輪紋病的有效措施之一。 其中以多菌靈為代表 的苯并咪唑類殺菌劑應(yīng)用最為廣泛。 但由于該類藥劑作用靶標(biāo)單 一，長期單一使用很容易使病原菌產(chǎn)生抗藥性而導(dǎo)致藥劑防效降 低或喪失。 馬志強(qiáng)等監(jiān)測了河北保定郊區(qū)蘋果輪紋病菌對(duì)多

2、菌靈 的敏感性， 發(fā)現(xiàn)所測定的菌株對(duì)多菌靈均已普遍產(chǎn)生不同程度的 抗藥性， 但未發(fā)現(xiàn)高抗菌株。 楊煒華等測定了部分縣市區(qū)蘋果輪 紋病菌對(duì)多菌靈的敏感性，發(fā)現(xiàn)多菌靈在 0.05 mg?L-1 質(zhì)量濃度 下即能明顯抑制菌絲的生長，且測定的菌株均為低水平抗性菌 株。山東省在防治蘋果輪紋病上連續(xù)多年使用多菌靈， 但至今仍 缺乏對(duì)該病菌抗藥性的研究報(bào)道。 作者采用菌絲生長速率法， 測 定了多菌靈對(duì)山東不同地理來源的 83 個(gè)蘋果輪紋病菌 (Botryosphaeria berengriaria f.sp.piricola)菌株的毒力，建立了多菌靈對(duì)蘋果輪紋病菌的敏感性基線， 為開展其抗性檢測 與治理提供

3、依據(jù)。材料和方法材料供試菌株的采集和分離2007 年 810 月，分別在魯東地區(qū)棲霞(Qx)、蓬萊(PL)、招遠(yuǎn)(ZY)、魯中南地區(qū)沂源(YY)、 蒙陰(MY),魯西地區(qū)肥城(FC)、泰山仃s)、冠縣(GX)、東阿(DE), 魯北地區(qū)惠民(HM)、陽信(YX)的不同行政區(qū)域且相距一定距離的 果園內(nèi)，隨機(jī)采集輪紋病果，裝入干凈的小塑料袋中 (每個(gè)袋子 只裝一個(gè)標(biāo)本 ) ，帶回實(shí)驗(yàn)室分離純化后， 共獲得 83 蘋果輪紋病 菌株 (Botryosphaeriaberengriana f.sp.piricola)。供試藥劑97多菌靈 (carbendazim) 原粉由山東華陽科技XX公司提供。方法含藥

4、培養(yǎng)基的配制 先將 97多菌靈原粉溶于 0.1 mol?L-1的鹽酸溶液中，配成10 g?L-1的母液，置4C冰箱中備 用，測定時(shí)，根據(jù)培養(yǎng)基的用量，用移液管吸取一定量的藥劑母 液加入溶化并冷卻至50 C左右的培養(yǎng)基中，充分搖勻，配成含 多菌靈系列濃度的含藥培養(yǎng)基。 每處理重復(fù) 4次，以不加藥劑為 對(duì)照。蘋果輪紋病菌對(duì)多菌靈的敏感性測定在PDA平板上培養(yǎng)(26 C,黑暗)4 d的參試菌株菌落邊緣打出直徑7 mm菌餅，分別移到含有多菌靈 6個(gè)梯度濃度的PDA平板上，置26C 暗培養(yǎng)4d，測定菌落徑向線性生長量，確定藥劑對(duì)菌落生長的 抑制率。 每處理(每菌株每濃度水平 )重復(fù) 4次。通過菌絲生長抑

5、 制概率值和藥劑濃度對(duì)數(shù)值之間的線性回歸分析， 求出各藥劑對(duì) 各供試蘋果輪紋病菌菌株的有效抑制中濃度 (EC50 值)。敏感性基線的確定方法，根據(jù)不同地區(qū)EC50值測定結(jié)果，選擇未曾施用多菌靈的采自泰山南天門的敏感菌株， 進(jìn)行方差分 析，剔除EC50值差異達(dá)顯著水平的菌株，再重復(fù)測定差異未達(dá)顯著水平的系列菌株的 EC50值，以重復(fù)測定敏感菌株的 EC50值 的平均值為敏感性基線。試驗(yàn)數(shù)據(jù)均由Microsoft Excel 2003、DPS數(shù)據(jù)處理工作平 臺(tái)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。抑制生長率 ( )=( 對(duì)照菌落直徑一處理菌落直徑 ) ( 對(duì)照 菌落直徑一菌餅直徑 )x100抗性指數(shù)二參試菌株EC50值/

6、本研究建立的敏感性基線EC50 值結(jié)果與分析蘋果輪紋病菌對(duì)多菌靈的敏感性水平蘋果輪紋病菌對(duì)多菌靈的敏感性總體水平多菌靈對(duì)83個(gè)參試菌株的 EC50值均低于0.50 mg?L-1，分布在0.019 6 0.486 7 mg?L-1 ，均值為 0.108 O0.015 2 mg?L -1 ，變異系數(shù) 為 0.652 7 ;其中，TS8為最敏感菌株(EC50=0.019 6 mg?L-1), MY9最不敏感(EC50=0.486 7 mg?L-1)。從圖1可以看出，除 PL2(EC50=0.328 50 mg?L-1) 、 MY8(EC50=0.322 O mg?L-1)、 MY9(EC50=0.4

7、867 mg?L-1)以外的80個(gè)菌株的EC50值呈單峰曲線，接近正態(tài)分布 (圖 1)蘋果輪紋病菌對(duì)多茵靈的野生敏感基線在 83 個(gè)菌株中選擇對(duì)多菌靈比較敏感的泰山南天門蘋果輪紋病菌進(jìn)行 重復(fù)測定，其EC50值的測定結(jié)果見表1。7個(gè)菌株的ECho值為0.019 6 0.070 3mg?L-1.平均 EC50值為 0.042 8 土 0.008 0 mg?L-1。由于泰山南天門菌系是對(duì)多菌靈最為敏感的菌系，因此可將這個(gè)菌系7次測定的平均 EC50值0.042 8 0.008 0 mg?L-1 作為山東省蘋果輪紋病菌對(duì)多菌靈的敏感性基線。蘋果輪紋病菌不同地理茵株對(duì)多茵靈敏感性的差異 采用 Dunc

8、an 氏新復(fù)極差法檢驗(yàn)了多菌靈對(duì) 8 個(gè)地理菌株系列 EC50值的差異顯著性。結(jié)果(表2)顯示，8個(gè)菌株系列之間EC50 均值無極顯著性差異，最高(PL，0.1607mg?L-1)與最低(TS，0.042 8mg?L-1)相差2.75倍；EC50值的變異系數(shù)，最高(MY, 0.949 0) 與最低(QX，0.274 0)相差2.46倍。不同地理來源菌株對(duì)多茵靈敏感性水平的系統(tǒng)聚類 分析多菌靈對(duì)供試菌株EC50值的離差平方和系統(tǒng)聚類分析結(jié)果 (圖2)表明，83個(gè)菌株EC50值可分為由高到低的5個(gè)聚類組， 第I組包括3個(gè)菌株(MY8MY9PL2)，第2組包括10個(gè)菌株(HM3 HM17 HM20

9、HM22 YY1、YY3 YY6 YY14 PL-1、QX6),第 3 組包括 24 個(gè)菌株 (Qx1 、Qx3、Qx15、YY2、YY4、YY8、YY9,YY10、 YY13、YY15、HM2、HM4、HM11、HM12、HM24、MY1、MY6、YX1、 YX7、GT2 PY7、PL3 ZY3 GX2),第 4 組包括 29 個(gè)菌株(HM8HM9、HM1O、HM13、HM18、HM19，HM21、QX4、QX5、QX7、QX8、 QX10、QX12、QX13、YY18、MY3、MY4、MY10、MY11、P16、PL9、 FC2、FC3 YX4 YX8 TS1、TS6 DE3 DE8),第

10、 5 組包括 16 個(gè) 菌株(YX6、 DE1、 DE2 DE4 DE5 DE6 DE7 DE1O TS2 TS3 TS7 TS8 TS9 MY5 HM26 YY17)。所有聚類組均包括不同的 菌株系列， 表明蘋果輪紋病菌對(duì)多菌靈離體敏感性的地區(qū)性差異 不明顯。其中，HM YY MY系列菌株出現(xiàn)在4個(gè)聚類組中，QX PL、YX系列菌株出現(xiàn)在3個(gè)聚類組中，TS DE系列菌株出現(xiàn)在2 個(gè)聚類組中。由此表明，各系列菌株對(duì)多菌靈敏感性的變化程 度，HM YY MY最大，均大于 QX PL、YX, TS、DE的變化幅度 最小，而這些均與 Duncan新復(fù)極差法的分析結(jié)果相對(duì)應(yīng)。2.2 蘋果輪紋病菌對(duì)多菌

11、靈的敏感性現(xiàn)狀絕大多數(shù)參試菌株(96.39 %)對(duì)多菌靈的EC50值為0.01960.208 5 mg?L-1，相差 9.64 倍，均值為 0.097 8 0.010 1 mg?L-1，呈近正態(tài)的連續(xù)單峰頻次分布，僅有3.61 %參試菌株(PL2、MY8 MY9EC50值分別為 0.328 5 mg?L-1、0.322 Omg?L-1、 0.486 7 mg?L-1) 呈不連續(xù)分布。敏感性差異顯著性檢驗(yàn)結(jié)果及 EC50值離差平方和系統(tǒng)聚類分析結(jié)果均表明，不同地理來源的 蘋果輪紋病菌對(duì)多菌靈的敏感性總體上不存在明顯差異。因此， 目前蘋果輪紋病菌對(duì)內(nèi)吸性殺菌劑多菌靈的敏感性都處在較高 水平，沒有出

12、現(xiàn)敏感性下降的抗藥性亞群體。討論利用化學(xué)農(nóng)藥防治植物病害是植物病害綜合防治措施之一， 具有見效快，防病效果好等優(yōu)點(diǎn)，但如果長期施用單一殺菌劑， 特別是內(nèi)吸性殺菌劑， 易使病原菌產(chǎn)生抗藥性。 國外對(duì)苯并咪唑 類殺菌劑引起植物病原菌產(chǎn)生抗藥性的報(bào)道很多， 在我國河北保 定關(guān)于蘋果輪紋病菌對(duì)多菌靈的抗藥性也有相關(guān)報(bào)道。 山東省在 防治蘋果輪紋病上也是連續(xù)多年使用多菌靈， 但對(duì)是否已出現(xiàn)抗 藥性，迄今尚無研究報(bào)道， 本文研究了多菌靈對(duì)山東省不同地理 區(qū)域的蘋果輪紋病菌離體抗菌活性。 檢測結(jié)果表明， 不同地理來 源蘋果輪紋病菌對(duì)多菌靈離體敏感性存在著廣泛的 （ 不一定達(dá)到 統(tǒng)計(jì)學(xué)意義上的顯著性 ） 差異

13、。這與不同蘋果產(chǎn)區(qū)的蘋果種植年 限、輪紋病的發(fā)生程度，當(dāng)?shù)剞r(nóng)民的用藥水平有關(guān)。對(duì)來自 8 個(gè) 蘋果產(chǎn)區(qū) 77 個(gè)菌株抗性的差異顯著性檢驗(yàn)結(jié)果以及對(duì)來自11個(gè)產(chǎn)區(qū) 83 個(gè)菌株抗性的系統(tǒng)聚類分析結(jié)果均表明，不同地理來源 的蘋果輪紋病菌對(duì)多菌靈離體敏感性總體上不存在顯著差異。 這 可能因?yàn)槎嗑`常與代森錳鋅、 福美雙等保護(hù)劑交替使用而減少 了使用量有關(guān)。 馬志強(qiáng)等測定了河北保定郊區(qū)， 蘋果輪紋病菌對(duì) 多菌靈的抗藥性水平，發(fā)現(xiàn)所測定的低抗、中抗菌株分別占 63.6 、36.4 ，未見高抗和特高抗菌株，而本實(shí)驗(yàn)室測定的菌 株的EC50值均小于 0.400 Omg?L-1，僅有1株MY9菌株EC50值 達(dá)到 O.